本發(fā)明涉及來(lái)自動(dòng)物的抵抗物質(zhì)，具有涉及源于花狹口蛙的基因及其編碼的多于20個(gè)氨基酸的肽。

背景技術(shù)：
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抗菌肽是一類分子量小于1萬(wàn)，由10-50個(gè)氨基酸組成的、具有殺滅或抑制微生物生長(zhǎng)的活性多肽。它們不但具有廣譜的抗微生物活性，同時(shí)具有“傳統(tǒng)抗生素”無(wú)法比擬的優(yōu)越性：如，很難誘導(dǎo)菌株產(chǎn)生耐藥性，同時(shí)兼有免疫調(diào)節(jié)、促進(jìn)回腸肌收縮、抗氧化、促胰島素分泌、抗腫瘤和抗病毒等多種功能(Nat Rev Microbiol,2012,10(4):243-254)。此外，在嚴(yán)重細(xì)菌感染時(shí)，抗菌肽還能夠中和內(nèi)毒素、減輕膿毒癥，在快速殺滅病原微生物的同時(shí)迅速停止或限制感染擴(kuò)散(Antimicrob Agents Chemother,2014,58(9):5363-5371)。因此，抗菌肽有希望成為新一代抗微生物藥物。其研究與開(kāi)發(fā)則蘊(yùn)含著巨大的臨床治療藥物的制備價(jià)值。

兩棲動(dòng)物一直以來(lái)都是傳統(tǒng)藥物的源泉。中華蟾蜍(Bufo gargarizans)、大蹼鈴蟾(Bombina maxima)、黑斑蛙(pelophylax nigromaculata)、沼蛙(Hylarana guentheri)和澤蛙(Euphlyctis limnocharis)等兩棲類動(dòng)物被作為中國(guó)的傳統(tǒng)中藥材而被廣泛的應(yīng)用?，F(xiàn)代研究表明：這些兩棲動(dòng)物的皮膚和內(nèi)臟具有廣泛的藥理活性，如，廣譜抗菌作用、抗腫瘤、局部麻醉、鎮(zhèn)痛、免疫調(diào)節(jié)、對(duì)心血管系統(tǒng)的作用等(Dongwuxue Yanjiu,2015,36(4):183-222)。傳統(tǒng)中藥藥物成分的復(fù)雜性及其炮制方法的局限性造成藥物活性成分不能更好發(fā)揮作用，從這些傳統(tǒng)藥物中尋找特定的活性單體化合物是中藥現(xiàn)代化的重要內(nèi)容之一。在國(guó)外，兩棲類皮膚特定藥理活性單體化合物的尋找已經(jīng)成為新藥發(fā)明的熱點(diǎn)。截至目前，至少有20種從不同生物分離得到的活性多肽候選藥物進(jìn)入了臨床試驗(yàn)階段(Future Med Chem,2013,5(3):315-337)。如，Xoma公司研發(fā)的用于治療腦膜炎球菌血癥的孤兒藥Neuprex和Cutanea life science公司研發(fā)的用于治療紅斑痤瘡的Omiganan外用乳膏均進(jìn)入三期臨床研究(Curt Protein Pept Sci,2012,13(7):611-619)；另外，Ellceutix公司研發(fā)的用于治療MRSA引起的皮膚感染藥物PMX-30063已經(jīng)進(jìn)入開(kāi)發(fā)臨床前研究(Expert Rev Anti Infect Ther,2014,12(12):1477-1486)。

腫瘤是危害人類健康的一類主要疾病，統(tǒng)計(jì)資料表明，我國(guó)從上世紀(jì)80年代起，惡性腫瘤的發(fā)病率呈明顯上升趨勢(shì)，常見(jiàn)腫瘤的發(fā)病率的增長(zhǎng)在5-10％之間，年惡性腫瘤發(fā)病人數(shù)為160萬(wàn)，每年死于惡性腫瘤的患者為130萬(wàn)人，目前腫瘤病人的數(shù)目在540萬(wàn)。大中城市中肺癌、乳腺癌發(fā)病率最高；農(nóng)村地區(qū)則以胃癌、食管癌發(fā)病率最高?？梢?jiàn)，我國(guó)抗腫瘤藥的市場(chǎng)潛力巨大。治療惡性腫瘤的相關(guān)研究工作正在不斷取得進(jìn)展，據(jù)了解，目前療效較好的常用抗腫瘤藥物約有50種，WHO公布的常用抗腫瘤藥物為49種，我國(guó)能夠生產(chǎn)其中的40種抗腫瘤藥物。由于抗腫瘤藥物的研發(fā)周期長(zhǎng)，我國(guó)生產(chǎn)企業(yè)大部分只能再單純依靠仿制國(guó)外上市的新型抗腫瘤藥物來(lái)維持本企業(yè)的生存。另外在化療中所使用的藥物，如阿霉素、環(huán)磷酰胺、腫瘤壞死因子等均具有較大的人體毒性，副作用非常大，因而腫瘤治療藥物的開(kāi)發(fā)是藥物研制的熱點(diǎn)。目前從兩棲動(dòng)物皮膚中發(fā)現(xiàn)一些帶有抗腫瘤活性的多肽，這些多肽大部分是抗菌肽，如，magainins、aureins、citropins、brevinin-1、ranatuerin-2、temporin和dermaseptin等(Chem Rev.2015,115(4):1760-1846)。這些多肽是潛在的腫瘤治療藥物。此外，目前也從兩棲動(dòng)物皮膚中鑒定帶抗菌活性的bradykinin、bombesin、tachykinin等親肌肉肽。這些多肽能夠促進(jìn)回腸肌或平滑肌收縮，在動(dòng)物體內(nèi)參與了許多病理反應(yīng)，如血管舒張、血管滲透、血壓控制、疼痛產(chǎn)生和炎癥反應(yīng)等。其中的bradykinin及其受體已被證實(shí)是血管緊張素轉(zhuǎn)化酶抑制劑和血管緊張素AT受體拮抗劑在高血壓、心肌梗死、心力衰竭治療中的作用靶點(diǎn)。因此，從兩棲動(dòng)物皮膚中鑒定的親肌肉肽可以用作心血管系統(tǒng)藥物和促腸道收縮藥物應(yīng)用(Chem Rev.2015,115(4):1760-1846)。

我國(guó)對(duì)兩棲類藥物的應(yīng)用有悠久的歷史，但對(duì)其活性成分和藥理性質(zhì)的研究主要集中于生物堿等有機(jī)小分子，對(duì)其皮膚活性肽類物質(zhì)研究不多?；íM口蛙(Kaloula pulchra)主要分布于我國(guó)分布于福建、廣東、廣西、海南、云南等地，是國(guó)家保護(hù)的有益的或者有重要經(jīng)濟(jì)、科學(xué)研究?jī)r(jià)值的陸生野生動(dòng)物。由于其個(gè)體小，難于捕捉，對(duì)其藥理活性物質(zhì)的研究很少。

技術(shù)實(shí)現(xiàn)要素：
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本發(fā)明所要解決的技術(shù)問(wèn)題是提供一種源于花狹口蛙皮膚的基因，該基因編碼的多肽具有具有多種生物活性。

本發(fā)明解決上述技術(shù)問(wèn)題的方案如下：

一種源于成熟花狹口蛙皮膚的基因，該基因的核酸序列如SEQ ID NO.5所示。

上述基因中第127-216位核苷酸編碼的多肽的氨基酸序列如SEQ ID NO.1所示。

上述多肽為由30個(gè)氨基酸組成的環(huán)肽，其第二十四位半胱氨酸和第三十位半胱氨酸形成分子內(nèi)二硫鍵，分子量為3054.97道爾頓，等電點(diǎn)為9.061。

一種SEQ ID NO.1所示多肽的突變體，該突變體的氨基酸序列如SEQ ID NO.2所示。

上述SEQ ID NO.2所示突變體由SEQ ID NO.1所示序列第5位的丙氨酸和第20位的賴氨酸分別被蘇氨酸和精氨酸替代得到，其分子量為3140.22道爾頓，等電點(diǎn)為9.116。

上述多肽及其突變體具有抗菌、抗腫瘤以及心血管系統(tǒng)疾病和促腸道收縮的活性，可用于制備相關(guān)的藥物。

本發(fā)明所述基因中第127-216位核苷酸編碼的多肽及其突變體具有結(jié)構(gòu)簡(jiǎn)單、人工合成方便、活性強(qiáng)等優(yōu)點(diǎn)。

附圖說(shuō)明：

圖1為本發(fā)明所述多肽的HPLC色譜圖。

圖2為本發(fā)明所述突變體的HPLC色譜圖。

圖3為本發(fā)明所述多肽的質(zhì)譜圖。

圖4為本發(fā)明所述突變體的質(zhì)譜圖。

圖5本發(fā)明所述多肽和突變體促進(jìn)豚鼠離體回腸肌收縮的波形圖。

圖6為本發(fā)明所述多肽及其突變體對(duì)高脂模型SD大鼠體重影響結(jié)果的條形圖。

圖7為本發(fā)明所述多肽及其突變體對(duì)對(duì)高脂模型SD大鼠血清TC、TG、HDL-C影響結(jié)果的條形圖。

具體實(shí)施方式：

為了便于理解，先將下述實(shí)施例中所涉及的基因、肽和突變體名稱作如下說(shuō)明：

下述的花狹口蛙多功能抗菌肽即為SEQ ID NO.5所示序列第127-216位核苷酸編碼的多肽，其氨基酸序列如SEQ ID NO.1所示；下述花狹口蛙多功能抗菌肽的編碼基因即為SEQ ID NO.5所示的源于成熟花狹口蛙皮膚的基因；下述花狹口蛙多功能抗菌肽2即為所述的突變體，其氨基酸序列如SEQ ID NO.2所示。

實(shí)施例1(基因克隆)

I、花狹口蛙皮膚總RNA提?。喝?00mg花狹口蛙的皮膚組織，加入10m1美國(guó)GIBCOBRL公司產(chǎn)品生產(chǎn)的Trizol溶液，于20m1玻璃勻漿器中勻漿30min。加入等體積酚/氯仿溶液，劇烈混勻，室溫放置10min，4℃，12000rpm離心10min，棄除沉淀。向上清中加入等體積的異丙醇，室溫放置10min，4℃，12000rpm離心10min，沉淀用75％乙醇洗一次，晾干，管底的沉淀物即為花狹口蛙皮膚總RNA。

II、花狹口蛙皮膚mRNA的純化：花狹口蛙皮膚mRNA分離純化采用美國(guó)PROMEGA公司的 mRNA Isolation Systems試劑盒。具體如下：取花狹口蛙皮膚總RNA 500μg溶于500μl DEPC水中，放入65℃水浴10min，加人3μl Oligo(dT)探針和13μl 20×SSC溶液，混勻，放置室溫冷卻，稱為A液。將磁珠輕彈混勻，至磁力架吸附30S，棄上清，加0.5×SSC 0.3m1，至磁力架吸附30S，最后加0.1ml 0.5×SSC懸浮，稱之為B液。將A液加入B液中，室溫放置10分鐘，至磁力架吸附30sec，棄上清，用0.1×SSC洗滌4次，最后棄上清，加0.L ml DEPC水懸浮，至磁力架上吸附30sec，將上清移至新的試管，再加入0.15m1 DEPC水重新懸浮，至磁力架吸附30S，移上清至上述試管，則上清中為純化的花狹口蛙皮膚mRNA。加入1/10體積3M乙酸鈉，pH5.2，等體積異丙醇，于-70℃放置30分鐘，4℃，12000rpm離心10min，棄上清，沉淀溶解于10μl DEPC水中得到花狹口蛙皮膚mRNA。

III、花狹口蛙皮膚cDNA文庫(kù)構(gòu)建：采用CLONTECH公司Creator^TM SMART TM cDNA Library Construction Kit質(zhì)粒cDNA文庫(kù)構(gòu)建試劑盒。

A.cDNA第一鏈合成(mRNA反轉(zhuǎn)錄)：在0.5ml無(wú)菌的離心管加入1μl花狹口蛙皮膚mRNA、1μl SMART IV寡聚核苷酸、1μl CDS III/3’PCR引物，加2μl去離子水使總體積達(dá)到5μl。混勻離心管中的試劑并以12000rpm離心15sec，72℃保溫2min。將離心管在冰上孵育2min。在離心管中加入以下試劑2.0μl 5×第一鏈緩沖、1.0μl 20mM二硫蘇糖醇、1.0μl 10mM dNTP混合物、1.0μl PowerScript反轉(zhuǎn)錄酶。混合離心管中試劑并以12000rpm離心15sec，在42℃保溫1h。將離心管置于冰上中止第一鏈的合成。從離心管取2μl所合成的cDNA第一鏈備用。

B.采用長(zhǎng)末端聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)(LD-PCR)方法擴(kuò)增第二鏈：95℃預(yù)熱PCR儀。將2μl cDNA第一鏈(mRNA反轉(zhuǎn)錄)、80μl去離子水、10μl 10×Advantage 2PCR緩沖、2μl 50×dNTP混合物、2μl 5’PCR引物、2μl CDS III/3’PCR引物以及2μl大腸桿菌聚合酶離心管進(jìn)行反應(yīng)。在PCR儀中按以下程序擴(kuò)增：95℃20sec，95℃5sec，68℃6min，22個(gè)循環(huán)。循環(huán)結(jié)束后，將離心管中合成的cDNA雙鏈進(jìn)行抽提。

C.PCR產(chǎn)物用PROMEGA公司的 SV Gel and PCR Clean-Up System試劑盒進(jìn)行抽提回收，步驟如下：將通過(guò)PCR得到的cDNA雙鏈加入等體積的膜結(jié)合緩沖顛倒混勻，然后將混和液轉(zhuǎn)入離心純化柱，室溫靜置5分鐘，使DNA充分與硅膠膜結(jié)合。以12000rpm離心30sec，倒掉收集管中的廢液。加入700μl的洗脫液(含乙醇)于離心純化柱中，以12000rpm離心30sec，倒掉收集管中的廢液。重復(fù)步驟上述步驟。12000rpm離心5min。將離心純化柱置于新的離心管中。加入30μl超純水，在室溫下靜置5min。以12000rpm離心30sec，管底溶液即為所純化過(guò)的cDNA雙鏈。

D.酶切、連接以及連接產(chǎn)物的轉(zhuǎn)化：在微量離心管中加入1μl Takara pMD18-T載體、4μl花狹口蛙cDNA雙鏈溶液，全量為5μl。加入5μl的連接酶緩沖混合物。16℃反應(yīng)2h。全量(10μl)加入至100μl DH5α感受態(tài)細(xì)胞中，冰中放置30min。42℃加熱90Sec后，再在冰中放置1分鐘。加入37℃孵育過(guò)的LB培養(yǎng)基890μl，37℃緩慢振蕩培養(yǎng)60min。取200μl涂布于含有X-Gal、IPTG、Amp的LB培養(yǎng)基上37℃培養(yǎng)16h，形成單菌落。每個(gè)LB平皿用5m1LB液體培養(yǎng)基洗滌菌落，加30％甘油凍存。構(gòu)建的cDNA大約含1×10⁶個(gè)單獨(dú)克隆。

Ⅳ、花狹口蛙多功能抗菌肽基因克隆篩選：擴(kuò)增引物長(zhǎng)度為25個(gè)核苷酸，其序列為5’ATGTTCACCATGAAGAAATCCCTG3’(SEQ ID NO.3)，PCR另一擴(kuò)增引物為CLONTECH公司SMART^TMcDNA Library Construction Kit中的3’PCR Primer引物，其序列為5’ATTCTAGAGGCCGAGGCGGCCGACATG 3’(SEQ ID NO.4)。PCR反應(yīng)在如下條件下進(jìn)行：94℃30sec，50℃45sec和72℃2.5min，35個(gè)循環(huán)。

首先滴定構(gòu)建的細(xì)菌cDNA文庫(kù)，然后用含100μg/ml氨芐青霉素的LB培養(yǎng)基稀釋至適當(dāng)?shù)募?xì)菌濃度(大約5000個(gè)細(xì)菌/毫升和30個(gè)細(xì)菌/毫升分別用于首輪篩選第二輪篩選)，在96孔培養(yǎng)板上按8×8矩陣鋪板(共64孔，每孔100μ1),37℃過(guò)夜培養(yǎng)。按行、列分別合并細(xì)菌培養(yǎng)液，有16個(gè)樣品進(jìn)行PCR鑒定，交叉陽(yáng)性孔細(xì)菌樣品進(jìn)入第二輪篩選。

Ⅴ、花狹口蛙多功能抗菌肽基因序列測(cè)定和結(jié)果：提取質(zhì)粒DNA用雙脫氧法測(cè)定核苷酸序列，使用儀器為美國(guó)Applied Biosystems 373A全自動(dòng)核苷酸序列測(cè)定儀，測(cè)序引物為BcaBESTTM Sequencing Primer RV-M和BcaBESTTM Sequencing Primer M13-47，BcaBESTTM Sequencing Primer RV-M序列：5`GAGCGGATAACAATTTCACACAGG 3’(SEQ ID NO.5)，BcaBESTTM Sequencing Primer M13-47：5’CGCCAGGGTTTTCCCAGTCACGAC 3’(SEQ ID NO.7)?；驕y(cè)序結(jié)果自5’端至3’端序列為如SEQ ID NO.5所示。

花狹口蛙多功能抗菌肽基因核苷酸的序列表為：序列長(zhǎng)度為219個(gè)堿基；序列類型：核酸；鏈數(shù)：?jiǎn)捂?；拓?fù)鋵W(xué)：直鏈狀；序列種類：cDNA；來(lái)源：花狹口蛙皮膚。

根據(jù)花狹口蛙多功能抗菌肽的基因推斷編碼由功能的成熟活分泌肽為第127-216位核苷酸，氨基酸序列為：GVITDALKGAAKTVAAELLKKAHCKLTNSC(見(jiàn)序列SEQ ID NO.1)

實(shí)施例2(所述多肽及其突變體的制備)

Ⅰ、花狹口蛙多功能抗菌肽及其突變體的制備方法：根據(jù)花狹口蛙分泌肽的基因推斷編碼有功能的成熟分泌肽氨基酸序列，利用蛋白組學(xué)方法設(shè)計(jì)狹口蛙多功能抗菌肽的突變體，用自動(dòng)多肽合成儀合成多肽。通過(guò)HPLC反相C18柱層析脫鹽、純化。純化時(shí)A液體為0.05％TFA+2％CH₃CN，B液為0.05％TFA+90％CH₃CN，B液濃度梯度為25min內(nèi)25-50％，檢測(cè)波長(zhǎng)為220nm?；íM口蛙多功能抗菌肽1出現(xiàn)在16.876分鐘，花狹口蛙多功能抗菌肽2出現(xiàn)在18.036分鐘。

Ⅱ、分子量測(cè)定采用快原子轟擊質(zhì)譜法(Fast atom bombardment mass spectrometry,FAB-MS)，以甘油:間硝基芐醇:二甲亞砜(1:1:l，V:V:V，體積比)為底物，Cs+作為轟擊粒子，電流為1μA，發(fā)射電壓為25Kv。

Ⅲ、純化的花狹口蛙多功能抗菌肽及其突變體用高效液相色譜(HPLC)方法鑒定其純度，等電聚焦電泳測(cè)定等電點(diǎn)，用自動(dòng)氨基酸測(cè)序儀測(cè)定氨基酸序列結(jié)構(gòu)。

花狹口蛙多功能抗菌肽是中國(guó)兩棲類動(dòng)物花狹口蛙多功能抗菌肽基因編碼的一種環(huán)狀多肽，分子量3054.97道爾頓，等電點(diǎn)9.061，其氨基酸序列為：Gly Val Ile Thr Asp Ala Leu Lys Gly Ala Ala Lys Thr Val Ala Ala Glu Leu Leu Lys Lys Ala His Cys Lys Leu Thr Asn Ser Cys(GVITDALKGAAKTVAAELLKKAHCKLTNSC)(SEQ ID NO.1)，上述多肽的其第二十四位半胱氨酸和第三十位半胱氨酸形成分子內(nèi)二硫鍵。

花狹口蛙多功能抗菌肽突變體是通過(guò)蛋白組學(xué)的方法設(shè)計(jì)的一組具有改良的抗菌、抗腫瘤和促回腸肌收縮活性的環(huán)狀多肽.無(wú)酶活性，它的全序列如下：

Gly Val Ile Thr Asp Thr Leu Lys Gly Val Ala Lys Thr Val Ala Ala Glu Leu Leu Arg Lys Ala His Cys Lys Leu Thr Asn Ser Cys(GVITDTLKGVAKTVAAELLRKAHCKLTNSC)

實(shí)施例3(所述多肽及其突變體的活性實(shí)驗(yàn))

Ⅰ、抗菌能力測(cè)定

抗菌活性檢測(cè)采用杯碟法，細(xì)菌培養(yǎng)采用普通瓊脂培養(yǎng)基，真菌培養(yǎng)采用培養(yǎng)基為改良沙保氏(Sabousand)培養(yǎng)基。分別注入加熱融化的培養(yǎng)基20ml于平皿中作為底層，使其在皿底內(nèi)均勻攤布，凝固后，另取培養(yǎng)基適量加熱融化后，分別在每皿中加入5ml菌懸液，搖勻，使其在底層上均勻攤布，作為菌層。冷卻后，在平皿中等距離均勻放入已消毒的不銹鋼杯6個(gè)。第一個(gè)鋼杯加入0.3mg/ml濃度的待測(cè)樣品溶液0.l ml，其余鋼杯采用二倍稀釋法加入樣品液，37℃培養(yǎng)，24h-48h后觀察抑菌圈大小。抑菌圈l0mm以上的作為最小抑菌濃度(Minimal inhibitory concentration,MIC)。所有測(cè)試菌株均來(lái)源于廣東微生物研究所，試驗(yàn)重復(fù)四次，取平均值，結(jié)果如表1所示，合成的花狹口蛙多功能抗菌肽及其突變體都能顯著的抑制細(xì)菌生長(zhǎng)。

表1.花狹口蛙多功能抗菌肽及其突變體的抗菌活性

Ⅱ、抑制腫瘤生長(zhǎng)的作用

在96孔細(xì)胞培養(yǎng)板上，將待測(cè)樣品用完全培養(yǎng)基進(jìn)行5倍或2倍倍比稀釋，共六個(gè)稀釋度，每個(gè)稀釋度設(shè)3個(gè)重復(fù)孔，每孔100μl，同時(shí)設(shè)置正常細(xì)胞對(duì)照。每孔滴加3×10⁵個(gè)/ml的NCI-h460、MCF-7和MDA-MB-231細(xì)胞100μl。置37℃，5％CO₂培養(yǎng)箱內(nèi)培養(yǎng)。48小時(shí)后用MTT法測(cè)定待測(cè)化合物對(duì)細(xì)胞的毒性作用。EC₅₀是對(duì)50％宿主細(xì)胞產(chǎn)生細(xì)胞毒性作用時(shí)的濃度。

表2花狹口蛙多功能抗菌肽及其突變體的抑制腫瘤細(xì)胞生長(zhǎng)的作用

由表1可見(jiàn)，花狹口蛙多功能抗菌肽能顯著抑制肺癌細(xì)胞系(NCI-h460)和兩種乳腺癌細(xì)胞系(MCF-7和MDA-MB-231)的生長(zhǎng)，這表明花狹口蛙多功能抗菌肽及其突變體具有很強(qiáng)的抑制腫瘤細(xì)胞生長(zhǎng)作用，同時(shí)還具有序列簡(jiǎn)單、合成方便等優(yōu)點(diǎn)?？勺鳛橹苽渲委熌[瘤、胃炎、胰腺炎藥物的應(yīng)用。

Ⅲ、促回腸肌收縮活性

A、對(duì)離體回腸肌的作用

豚鼠斷頸處死，取其離體回腸肌標(biāo)本測(cè)定生物活性，大鼠離體回腸肌標(biāo)本2cm長(zhǎng)于37℃臺(tái)氏液中保溫，通氧氣，帶肌肉收縮舒張穩(wěn)定后加入不同濃度的樣品，圖像的采集與處理采用成都泰盟科技有限公司生產(chǎn)的BL-420生物機(jī)能實(shí)驗(yàn)系統(tǒng)。實(shí)驗(yàn)過(guò)程以沒(méi)有加樣品的正常收縮為對(duì)照。圖5顯示花狹口蛙多功能抗菌肽及其突變體能顯著增加豚鼠離體回腸收縮幅度。

B、對(duì)高脂模型SD大鼠的作用

選用清潔級(jí)的健康成年SD雄性大鼠，50只體重200克左右，按照體重隨機(jī)分成3組，每組10只，空白組給予維持飼料，實(shí)驗(yàn)組給予高脂肪飼料(在維持飼料中添加20％蔗糖、1.2％膽固醇、0.2％膽酸鈉、1.5％豬油)，實(shí)驗(yàn)組每天經(jīng)口給予花狹口蛙多功能抗菌肽及其突變體(200mg/kg)，空白組和模型對(duì)照組給予等體積的生理鹽水，大鼠自由進(jìn)食和飲水，連續(xù)觀察30，記錄每周體重變化，第31天不禁食采血，采血后分離血清，測(cè)定血清TC、TG、HDL-C水平才有GLAMOUR3000全自動(dòng)生化記錄儀進(jìn)行測(cè)定。數(shù)據(jù)處理采用統(tǒng)計(jì)學(xué)分析，結(jié)果圖6顯示開(kāi)始時(shí)實(shí)驗(yàn)組與對(duì)照組相比均無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P>0.05)，圖7顯示飼喂30天后，實(shí)驗(yàn)組大鼠血清TG和HDL-C水平顯著低于高脂肪對(duì)照組(P<0.01)。