技術(shù)特征：

1.用于檢測轉(zhuǎn)基因水稻TT51-1的LAMP引物組合，其特征在于，所述引物組合根據(jù)TT51-1的外源基因3’端設(shè)計，包括：

外側(cè)正向引物TT51-1-F3：5’-CTGGGAGGGAGGGAGGGCCGGCGTCAATACGGGATA-3’；

外側(cè)反向引物TT51-1-B3：5’-CTGGGAGGGAGGGAGGGTCGTAGCCCCACCACTAC-3；’以及

內(nèi)側(cè)正向引物TT51-1-FIP：5’-CGGTCATTGACTGGAGCGAGGCTGGGAGGGAGGGAGGGATACCGCGCCACATAGCA-3’；

內(nèi)側(cè)反向引物TT51-1-BIP：5’-AGAGACTGGTGATTTCAGCGGGCTGGGAGGGAGGGAGGGCTTATCTGCCCCAGCACTC-3’。

2.含有權(quán)利要求1所述LAMP引物組合用于檢測轉(zhuǎn)基因水稻TT51-1的試劑盒。

3.根據(jù)權(quán)利要求2所述的試劑盒，其特征在于，所述試劑盒還包括dNTPs、Bst DNA聚合酶、甜菜堿、ABTS顯色液、hemin工作液、H₂O₂溶液、Thermopol緩沖液、標(biāo)準(zhǔn)陽性模板中的至少一種。

4.根據(jù)權(quán)利要求3所述的試劑盒，其特征在于，所述ABTS顯色液的濃度為36mM，配制溶劑為1×DMSO；

所述hemin工作液的組成如下：50μM hemin、10mM NaH₂PO₄、100mM KCl、2mM MgCl₂和0.003％Triton X-100。

5.權(quán)利要求1所述LAMP引物組合或權(quán)利要求2-4任一項所述試劑盒在檢測轉(zhuǎn)基因水稻TT51-1中的應(yīng)用。

6.基于環(huán)介導(dǎo)等溫擴增消光技術(shù)的轉(zhuǎn)基因水稻TT51-1檢測方法，其特征在于，包括以下步驟：

1)將樣品磨成粉末，稱100mg±10mg樣品，用CTAB法提取基因組DNA；

2)顯色反應(yīng)，并通過肉眼觀察反應(yīng)混合液的顏色，或利用紫外分光光度計測定反應(yīng)混合液在419nm處的OD值：

3)以步驟1)中提取的DNA為模板，利用權(quán)利要求1所述LAMP引物組合，進(jìn)行環(huán)介導(dǎo)等溫擴增消光反應(yīng)：

4)分析擴增產(chǎn)物。

7.根據(jù)權(quán)利要求6所述的方法，其特征在于，步驟2)具體為：將hemin工作液與權(quán)利要求1所述LAMP引物組合混合，35-45℃孵育20-30min，然后添加ABTS顯色液和H₂O₂，立即用肉眼觀察顏色或利用紫外分光光度計測定OD_419nm值；

顯色反應(yīng)的反應(yīng)體系為：40-60μM hemin工作液90μL，10μM引物TT51-1-F3和TT51-1-B3各0.5μL，10μM引物TT51-1-FIP和TT51-1-BIP各3-4μL，30-40mM ABTS顯色液30μL，30％H₂O₂1μL，用dd H₂O補足至總體系130μL。

8.根據(jù)權(quán)利要求6或7所述的方法，其特征在于，步驟3)具體為：向步驟2)顯色反應(yīng)所得混合液中添加16μL擴增試劑，所述擴增試劑包括1.8-3.0mM dNTP、6-9mM MgSO₄、1-2M甜菜堿、3.6-10.0U Bst DNA聚合酶、1×Thermopol緩沖液和2μL DNA模板，配制反應(yīng)體系，然后60-65℃孵育40-60min，80-85℃放置2-3分鐘，最后冰上終止反應(yīng)。

9.根據(jù)權(quán)利要求6-8任一項所述的方法，其特征在于，步驟4)具體為：目測判定反應(yīng)前后反應(yīng)混合液顏色變化，或利用紫外分光光度計測定步驟3)所得反應(yīng)混合液在419nm處的OD值；若顏色由反應(yīng)前的藍(lán)色變成淺藍(lán)色或無色，或者反應(yīng)后OD_419nm值變小，表明待測樣品中含有轉(zhuǎn)基因水稻TT51-1成分。

10.根據(jù)權(quán)利要求6-9任一項所述的方法，其特征在于，包括以下步驟：

①將樣品磨成粉末，稱100mg±10mg樣品，用CTAB法提取基因組，作為DNA模板；

②顯色反應(yīng)：將hemin工作液與LAMP引物組合混合，40℃孵育30min，然后添加ABTS顯色液和H₂O₂，立即用肉眼觀察顏色或利用紫外分光光度計測定OD_419nm值；

顯色反應(yīng)的反應(yīng)體系為：50μM hemin工作液90μL，10μM引物TT51-1-F3和TT51-1-B3各0.5μL，10μM引物TT51-1-FIP和TT51-1-BIP各4μL，36mM ABTS顯色液30μL，30％H₂O₂ 1μL，用dd H₂O補足至總體系130μL；

③環(huán)介導(dǎo)等溫擴增消光反應(yīng)：向步驟②顯色反應(yīng)所得混合液中添加16μL擴增試劑，所述擴增試劑包括2.5mM dNTP、7.8mM MgSO₄、1.6M甜菜堿、8.0U Bst DNA聚合酶、1×Thermopol緩沖液和2μL DNA模板，配制反應(yīng)體系，然后65℃孵育40min，85℃放置3分鐘，最后冰上終止反應(yīng)；

④目測判定反應(yīng)前后反應(yīng)混合液顏色變化，或利用紫外分光光度計測定步驟③所得反應(yīng)混合液在419nm處的OD值；若顏色由反應(yīng)前的藍(lán)色變成淺藍(lán)色或無色，或者反應(yīng)后OD_419nm值變小，表明待測樣品中含有轉(zhuǎn)基因水稻TT51-1成分。