設(shè)備:高效液相色譜儀、紫外分光光度計(jì)、恒溫恒濕藥品穩(wěn)定性試驗(yàn)箱等。
研究方法:干燥銀杏葉10kg,粉粹。加入75L濃度35%乙醇回流提取兩次,每次2~3小時(shí)。合并提取液,趁熱過濾,真空濃縮,真空度控制在-0.80~-0.96MPa,濃縮后體積控制在原體積的1/3~1/4,加入少量乙醇,調(diào)整濃度3%~5%。然后用15L乙酸乙酯萃取,分三次萃取,分離合并輕相?;厥找宜嵋阴ブ粮?。濃縮后的中間體,先用600ml 50%乙醇加熱溶解,趁熱過濾,放置到室溫,轉(zhuǎn)到冰箱-28℃析晶72小時(shí),將得到的結(jié)晶再用80%~95%乙醇反復(fù)重結(jié)晶三次,得到銀杏內(nèi)酯B無色晶體,含量95%以上。將結(jié)晶后的所有母液收集合并,濃縮至體積是原體積的1/2,加入純水調(diào)醇到30%,得到上柱液。取裝入4L型號PRP512c(粒徑300目)高效色譜樹脂的吸附柱。按照流速33~35mL/min將上柱溶液送入吸附柱。使用32L 35%乙醇洗脫,分段收集色譜柱流出液。取樣,按照《中國藥典》2015版一部銀杏葉提取物項(xiàng)下的萜類內(nèi)酯檢測方法,分析檢測銀杏內(nèi)酯含量,分別收集含銀杏內(nèi)酯C和銀杏內(nèi)酯A洗脫液段。銀杏內(nèi)酯C段濃縮物加入30mL 30%乙醇重結(jié)晶四次,得到銀杏內(nèi)酯C無色針狀晶體,含量95%以上。取銀杏內(nèi)酯A段濃縮物,加入60%乙醇40mL重結(jié)晶四次,得到銀杏內(nèi)酯A無色針狀晶體,含量95%以上。