本發(fā)明涉及生物活性肽的制備技術(shù)領(lǐng)域，具體為一種辣椒籽抗菌肽的制備方法。

背景技術(shù)：

抗菌肽也稱為宿主防御肽，是機體抵御外來微生物威脅的第一道防線，屬于抗生素的家族，它們對細菌、真菌、原生動物、腫瘤細胞、病毒等都具有毒性，抗菌肽在體內(nèi)最終酶解為氨基酸，無殘留毒性。因此，抗菌肽添加到食品中以維護食品的安全性、提高食品質(zhì)量和改善人類健康方面的作用和潛力逐漸被認識，以抗菌肽為基礎(chǔ)的解決食品防腐劑問題具有重要意義，辣椒原產(chǎn)于中美洲和南美洲，現(xiàn)種植遍布全球，隨著人們對齊研究的日益深入，辣椒中有價值的成分不斷被發(fā)現(xiàn)并相繼開發(fā)利用，占辣椒果實干重30～60％以上的辣椒籽的利用價值常被忽視，造成資源浪費，辣椒籽除了不包含脂肪酸和酚類物質(zhì)外，還含有約10％～29％的粗蛋白，是一種亟待開發(fā)的天然植物蛋白質(zhì)資源?，F(xiàn)有的抗菌肽的制備方法操作流程比較復雜，成本較高，制備效率低，為此，我們提出一種辣椒籽抗菌肽的制備方法。

技術(shù)實現(xiàn)要素：

本發(fā)明的目的在于提供一種辣椒籽抗菌肽的制備方法，以解決上述背景技術(shù)中提出的現(xiàn)有的抗菌肽的制備方法操作流程比較復雜，成本較高，制備效率低的問題。

為實現(xiàn)上述目的，本發(fā)明提供如下技術(shù)方案：一種辣椒籽抗菌肽的制備方法，該辣椒籽抗菌肽的制備方法包括如下步驟：

S1：制備脫脂辣椒籽粉：以辣椒籽為原材料，將其粉碎過50目篩，將辣椒籽放置于濾紙紙筒內(nèi)，放入提取器的抽提筒內(nèi)，加入溫度為25-55℃的石油醚，40-50℃加熱回流提取6-9小時，取出濾紙紙筒，脫去溶劑后得到脫脂辣椒籽粉，將脫脂辣椒籽粉過50目篩；

S2：提取辣椒籽粗蛋白質(zhì)：采用加堿溶解加酸沉淀法：控制溫度在25-35℃PH值控制在8.0-9.0，混合時間20-30min，料液比為20:1v/w，充分溶解后的提取液采用離心機進行離心，離心機轉(zhuǎn)速控制在4000r/min-4500r/min，離心時間15-25min，收集上清液，上清液用0.1mol/L的HCL和0.1mol/L的NaOH調(diào)節(jié)PH值至3.5-4.5，使得蛋白質(zhì)沉淀，再使用離心機進行離心，離心機轉(zhuǎn)速控制在4000r/min-4500r/min，離心時間15-25min，去除清液，收集沉淀，經(jīng)過水洗、中和、冷凍和干燥得到辣椒籽粗蛋白質(zhì)；

S3：辣椒籽粗蛋白酶解液的制備：制備質(zhì)量百分比為8％-12％的辣椒籽粗蛋白水溶液，加入1.5％-2.5％的復合蛋白酶，在溫度45-55℃下調(diào)節(jié)PH值6-7，酶解時間為3-5小時；

S4：制備辣椒籽抗菌肽粉末：將步驟S3中所得到的辣椒籽粗蛋白酶解液采用沸水加熱分解復合蛋白酶，加熱時間為10-15min，冷凍干燥得到辣椒籽抗菌肽粉末；

S5：制備辣椒籽抗菌肽：將步驟S4中得到的辣椒籽抗菌肽粉末溶于去離子水中，過0.22微米鋁膜，配置成濃度為15-20mg/ml的溶液，取1ml溶液于凝膠過濾柱，用流速為0.2-0.6ml/min的去離子水洗脫，采用收集器收集，用220nm波長檢測，收集各峰冷凍干燥，得到辣椒籽抗菌肽。

優(yōu)選的，所述步驟S1中的提取器為索氏提取器。

優(yōu)選的，所述步驟S2中的離心機為TDZ5-WS型離心機。

優(yōu)選的，所述步驟S4中的冷凍干燥的具體方法為：使用冷凍干燥機溫度在-50℃，壓強控制在10Pa，凍干時間為12小時。

與現(xiàn)有技術(shù)相比，本發(fā)明的有益效果是：該發(fā)明提出的一種辣椒籽抗菌肽的制備方法，采用辣椒作為原材料，成本低廉，資源豐富，辣椒籽的蛋白質(zhì)提取量高，資源利用率高，采用復合蛋白酶對辣椒籽蛋白質(zhì)進行分解，水解度和肽得率達到最大，辣椒籽抗菌體的制備采用凝膠層析和去離子水洗脫，成本低廉，效率高，制備速度快。

附圖說明

圖1為本發(fā)明工藝流程圖。

具體實施方式

下面將結(jié)合本發(fā)明實施例中的附圖，對本發(fā)明實施例中的技術(shù)方案進行清楚、完整地描述，顯然，所描述的實施例僅僅是本發(fā)明一部分實施例，而不是全部的實施例。基于本發(fā)明中的實施例，本領(lǐng)域普通技術(shù)人員在沒有做出創(chuàng)造性勞動前提下所獲得的所有其他實施例，都屬于本發(fā)明保護的范圍。

實施例1

一種辣椒籽抗菌肽的制備方法，該辣椒籽抗菌肽的制備方法包括如下步驟：

S1：制備脫脂辣椒籽粉：以辣椒籽為原材料，將其粉碎過50目篩，將辣椒籽放置于濾紙紙筒內(nèi)，放入提取器的抽提筒內(nèi)，加入溫度為55℃的石油醚，50℃加熱回流提取9小時，取出濾紙紙筒，脫去溶劑后得到脫脂辣椒籽粉，將脫脂辣椒籽粉過50目篩；

S2：提取辣椒籽粗蛋白質(zhì)：采用加堿溶解加酸沉淀法：控制溫度在25-35℃PH值控制在9.0，混合時間30min，料液比為20:1v/w，充分溶解后的提取液采用離心機進行離心，離心機轉(zhuǎn)速控制在4500r/min，離心時間25min，收集上清液，上清液用0.1mol/L的HCL和0.1mol/L的NaOH調(diào)節(jié)PH值至4.5，使得蛋白質(zhì)沉淀，再使用離心機進行離心，離心機轉(zhuǎn)速控制在4500r/min，離心時間25min，去除清液，收集沉淀，經(jīng)過水洗、中和、冷凍和干燥得到辣椒籽粗蛋白質(zhì)；

S3：辣椒籽粗蛋白酶解液的制備：制備質(zhì)量百分比為12％的辣椒籽粗蛋白水溶液，加入2.5％的復合蛋白酶，在溫度55℃下調(diào)節(jié)PH值7，酶解時間為5小時；

S4：制備辣椒籽抗菌肽粉末：將步驟S3中所得到的辣椒籽粗蛋白酶解液采用沸水加熱分解復合蛋白酶，加熱時間為15min，冷凍干燥得到辣椒籽抗菌肽粉末；

S5：制備辣椒籽抗菌肽：將步驟S4中得到的辣椒籽抗菌肽粉末溶于去離子水中，過0.22微米鋁膜，配置成濃度為20mg/ml的溶液，取1ml溶液于凝膠過濾柱，用流速為0.6ml/min的去離子水洗脫，采用收集器收集，用220nm波長檢測，收集各峰冷凍干燥，得到辣椒籽抗菌肽。

實施例2

一種辣椒籽抗菌肽的制備方法，該辣椒籽抗菌肽的制備方法包括如下步驟：

S1：制備脫脂辣椒籽粉：以辣椒籽為原材料，將其粉碎過50目篩，將辣椒籽放置于濾紙紙筒內(nèi)，放入提取器的抽提筒內(nèi)，加入溫度為30℃的石油醚，45℃加熱回流提取7.5小時，取出濾紙紙筒，脫去溶劑后得到脫脂辣椒籽粉，將脫脂辣椒籽粉過50目篩；

S2：提取辣椒籽粗蛋白質(zhì)：采用加堿溶解加酸沉淀法：控制溫度在30℃PH值控制在8.5，混合時間25min，料液比為20:1v/w，充分溶解后的提取液采用離心機進行離心，離心機轉(zhuǎn)速控制在4250r/min，離心時間20min，收集上清液，上清液用0.1mol/L的HCL和0.1mol/L的NaOH調(diào)節(jié)PH值至4，使得蛋白質(zhì)沉淀，再使用離心機進行離心，離心機轉(zhuǎn)速控制在4250r/min，離心時間20min，去除清液，收集沉淀，經(jīng)過水洗、中和、冷凍和干燥得到辣椒籽粗蛋白質(zhì)；

S3：辣椒籽粗蛋白酶解液的制備：制備質(zhì)量百分比為10％的辣椒籽粗蛋白水溶液，加入2％的復合蛋白酶，在溫度50℃下調(diào)節(jié)PH值6.5，酶解時間為4小時；

S4：制備辣椒籽抗菌肽粉末：將步驟S3中所得到的辣椒籽粗蛋白酶解液采用沸水加熱分解復合蛋白酶，加熱時間為12min，冷凍干燥得到辣椒籽抗菌肽粉末；

S5：制備辣椒籽抗菌肽：將步驟S4中得到的辣椒籽抗菌肽粉末溶于去離子水中，過0.22微米鋁膜，配置成濃度為18mg/ml的溶液，取1ml溶液于凝膠過濾柱，用流速為0.4ml/min的去離子水洗脫，采用收集器收集，用220nm波長檢測，收集各峰冷凍干燥，得到辣椒籽抗菌肽。

實施例3

一種辣椒籽抗菌肽的制備方法，該辣椒籽抗菌肽的制備方法包括如下步驟：

S1：制備脫脂辣椒籽粉：以辣椒籽為原材料，將其粉碎過50目篩，將辣椒籽放置于濾紙紙筒內(nèi)，放入提取器的抽提筒內(nèi)，加入溫度為25℃的石油醚，40℃加熱回流提取6小時，取出濾紙紙筒，脫去溶劑后得到脫脂辣椒籽粉，將脫脂辣椒籽粉過50目篩；

S2：提取辣椒籽粗蛋白質(zhì)：采用加堿溶解加酸沉淀法：控制溫度在25-35℃PH值控制在8.0，混合時間20min，料液比為20:1v/w，充分溶解后的提取液采用離心機進行離心，離心機轉(zhuǎn)速控制在4000r/min，離心時間15min，收集上清液，上清液用0.1mol/L的HCL和0.1mol/L的NaOH調(diào)節(jié)PH值至3.5，使得蛋白質(zhì)沉淀，再使用離心機進行離心，離心機轉(zhuǎn)速控制在4000r/min，離心時間15min，去除清液，收集沉淀，經(jīng)過水洗、中和、冷凍和干燥得到辣椒籽粗蛋白質(zhì)；

S3：辣椒籽粗蛋白酶解液的制備：制備質(zhì)量百分比為8％的辣椒籽粗蛋白水溶液，加入1.5％的復合蛋白酶，在溫度45℃下調(diào)節(jié)PH值6，酶解時間為3小時；

S4：制備辣椒籽抗菌肽粉末：將步驟S3中所得到的辣椒籽粗蛋白酶解液采用沸水加熱分解復合蛋白酶，加熱時間為10min，冷凍干燥得到辣椒籽抗菌肽粉末；

S5：制備辣椒籽抗菌肽：將步驟S4中得到的辣椒籽抗菌肽粉末溶于去離子水中，過0.22微米鋁膜，配置成濃度為15mg/ml的溶液，取1ml溶液于凝膠過濾柱，用流速為0.2ml/min的去離子水洗脫，采用收集器收集，用220nm波長檢測，收集各峰冷凍干燥，得到辣椒籽抗菌肽。

綜合以上所述，該辣椒籽抗菌肽的制備方法的最佳實施例為：

一種辣椒籽抗菌肽的制備方法，該辣椒籽抗菌肽的制備方法包括如下步驟：

S1：制備脫脂辣椒籽粉：以辣椒籽為原材料，將其粉碎過50目篩，將辣椒籽放置于濾紙紙筒內(nèi)，放入提取器的抽提筒內(nèi)，加入溫度為30℃的石油醚，45℃加熱回流提取7.5小時，取出濾紙紙筒，脫去溶劑后得到脫脂辣椒籽粉，將脫脂辣椒籽粉過50目篩；

S2：提取辣椒籽粗蛋白質(zhì)：采用加堿溶解加酸沉淀法：控制溫度在30℃PH值控制在8.5，混合時間25min，料液比為20:1v/w，充分溶解后的提取液采用離心機進行離心，離心機轉(zhuǎn)速控制在4250r/min，離心時間20min，收集上清液，上清液用0.1mol/L的HCL和0.1mol/L的NaOH調(diào)節(jié)PH值至4，使得蛋白質(zhì)沉淀，再使用離心機進行離心，離心機轉(zhuǎn)速控制在4250r/min，離心時間20min，去除清液，收集沉淀，經(jīng)過水洗、中和、冷凍和干燥得到辣椒籽粗蛋白質(zhì)；

S3：辣椒籽粗蛋白酶解液的制備：制備質(zhì)量百分比為10％的辣椒籽粗蛋白水溶液，加入2％的復合蛋白酶，在溫度50℃下調(diào)節(jié)PH值6.5，酶解時間為4小時；

S4：制備辣椒籽抗菌肽粉末：將步驟S3中所得到的辣椒籽粗蛋白酶解液采用沸水加熱分解復合蛋白酶，加熱時間為12min，冷凍干燥得到辣椒籽抗菌肽粉末；

S5：制備辣椒籽抗菌肽：將步驟S4中得到的辣椒籽抗菌肽粉末溶于去離子水中，過0.22微米鋁膜，配置成濃度為18mg/ml的溶液，取1ml溶液于凝膠過濾柱，用流速為0.4ml/min的去離子水洗脫，采用收集器收集，用220nm波長檢測，收集各峰冷凍干燥，得到辣椒籽抗菌肽。

盡管已經(jīng)示出和描述了本發(fā)明的實施例，對于本領(lǐng)域的普通技術(shù)人員而言，可以理解在不脫離本發(fā)明的原理和精神的情況下可以對這些實施例進行多種變化、修改、替換和變型，本發(fā)明的范圍由所附權(quán)利要求及其等同物限定。