本發(fā)明屬于藥物合成化學技術(shù)領(lǐng)域，涉及一種3-氨基-3-羥甲基氧化吲哚衍生物及其應(yīng)用。
背景技術(shù)：
許多天然產(chǎn)物和活性化合物都含有3-氨基氧化吲哚結(jié)構(gòu)，因此制備3-氨基氧化吲哚衍生物具有重要意義。例如：J.Org.Chem.2012,77,3589-3594指出3-氨基氧化吲哚衍生物AG-041R在體外能刺激軟骨細胞增殖和軟骨特異性細胞外基質(zhì)的合成且不改變細胞分化的特征。世界華人消化雜志2006,14(13)：1262-1266報道了AG-041R能夠抑制MKN-45細胞的增殖活性。J.Org.Chem.2012,77,3589-3594還報道了3-氨基氧化吲哚衍生物SSR-149415能用來治療焦慮和抑郁癥。
因此，高效地合成此類化合物便具有十分重要的理論和經(jīng)濟價值。然而，本發(fā)明所提供的3-氨基-3-羥甲基氧化吲哚衍生物結(jié)構(gòu)特殊，很難通過傳統(tǒng)的方法合成此類化合物，現(xiàn)有方法由于反應(yīng)條件苛刻，操作復雜等缺陷，使得到新的3-氨基-3-羥甲基氧化吲哚衍生物非常困難。
技術(shù)實現(xiàn)要素：
本發(fā)明提出了一種全新的3-氨基-3-羥甲基氧化吲哚衍生物，其結(jié)構(gòu)如式(I)所示，
其中，
R1包括烷基、H、芐基、4-甲基芐基；
R2包括烷基、H、鹵素；
R3包括烷基、鹵素、硝基、三氟甲基、甲酸酯。
優(yōu)選地，R1包括C1-C3的烷基、H、芐基、4-甲基芐基；
R2包括C1-C3烷基、H、鹵素；
R3包括C1-C3烷基、鹵素、硝基、三氟甲基、甲酸酯。
進一步優(yōu)選地，R1包括甲基、芐基、4-甲基芐基；
R2包括H、甲基、溴、氟；
R3包括2,6-二氯、2,4-二氯、2-碘、2-氟、4-氯、4-溴、4-碘、4-硝基、3,5-二三氟甲基、3,4-二氟、2-氯-4-氟、2,6-二氟，2,4-二氟。
進一步優(yōu)選的，式(I)3-氨基-3-羥甲基氧化吲哚衍生物包括：3-((2,6-二氯苯基)氨基)-3-(羥甲基)-1-甲基氧化吲哚、1-芐基-3-((2,6-二氯苯基)氨基)-3-(羥甲基)氧化吲哚、1-芐基-5-溴-3-((2,6-二氯苯基)氨基)-3-(羥甲基)氧化吲哚、1-芐基-3-((2,4-二氯苯基)氨基)-3-(羥甲基)氧化吲哚、1-芐基-3-((2-碘苯基)氨基)-3-(羥甲基)氧化吲哚、1-芐基-3-((4-氯苯基)氨基)-3-(羥甲基)氧化吲哚、1-芐基-3-((4-溴苯基)氨基)-3-(羥甲基)氧化吲哚、1-芐基-3-((4-碘苯基)氨基)-3-(羥甲基)氧化吲哚、1-芐基-3-((4-硝基苯基)氨基)-3-(羥甲基)氧化吲哚、1-芐基-3-((2-氟苯基)氨基)-3-(羥甲基)氧化吲哚、1-芐基-3-((3,5-二(三氟甲基)苯基)氨基)-3-(羥甲基)氧化吲哚、1-芐基-3-((3,4-二氟苯基)氨基)-3-(羥甲基)氧化吲哚、1-芐基-3-((2-氯-4-氟苯基)氨基)-3-(羥甲基)氧化吲哚、1-芐基-3-((2,6-二氯苯基)氨基)-3-(羥甲基)氧化吲哚、3-((2,6-二氟苯基)氨基)-3-(羥甲基)-1-甲基氧化吲哚、3-((2,6-二氟苯基)氨基)-5-氟-3-(羥甲基)-1-甲基氧化吲哚、1-芐基-3-((2,6-二氟苯基)氨基)-3-(羥甲基)-5-甲基氧化吲哚、3-((2,6-二氟苯基)氨基)-3-(羥甲基)-1-(4-甲基芐基)氧化吲哚、3-((2,4-二氟苯基)氨基)-3-(羥甲基)-1-(4-甲基芐基)氧化吲哚、1-芐基-3-((2,4-二氟苯基)氨基)-3-(羥甲基)氧化吲哚、1-芐基-3-((2,4-二氟苯基)氨基)-5-氟-3-(羥甲基)氧化吲哚、1-芐基-3-((2,4-二氟苯基)氨基)-3-羥甲基-5-甲基氧化吲哚。
本發(fā)明式(I)3-氨基-3-羥甲基氧化吲哚衍生物通過以下方法獲得，以式(1)所示的3-重氮氧化吲哚、式(2)所示的苯胺和醛為原料，以醋酸銠為催化劑，以有機溶劑為溶劑，經(jīng)過一步反應(yīng)，得到所述式(I)所示的3-氨基-3-羥甲基氧化吲哚衍生物；除去溶劑得粗產(chǎn)物，經(jīng)柱層析分離純化得產(chǎn)物。
反應(yīng)過程如式(II)所示：
其中，
R1包括烷基、H、芐基、4-甲基芐基；
R2包括烷基、H、鹵素；
R3包括烷基、鹵素、硝基、三氟甲基、甲酸酯。
優(yōu)選地，R1包括C1-C3的烷基、H、芐基、4-甲基芐基；
R2包括C1-C3烷基、H、鹵素；
R3包括C1-C3烷基、鹵素、硝基、三氟甲基、甲酸酯。
進一步優(yōu)選地，R1包括甲基、芐基、4-甲基芐基；
R2包括H、甲基、溴、氟；
R3包括2,6-二氯、2,4-二氯、2-碘、2-氟、4-氯、4-溴、4-碘、4-硝基、3,5-二三氟甲基、3,4-二氟、2-氯-4-氟、2,6-二氟，2,4-二氟。
進一步優(yōu)選的，式(I)3-氨基-3-羥甲基氧化吲哚衍生物包括：3-((2,6-二氯苯基)氨基)-3-(羥甲基)-1-甲基氧化吲哚、1-芐基-3-((2,6-二氯苯基)氨基)-3-(羥甲基)氧化吲哚、1-芐基-5-溴-3-((2,6-二氯苯基)氨基)-3-(羥甲基)氧化吲哚、1-芐基-3-((2,4-二氯苯基)氨基)-3-(羥甲基)氧化吲哚、1-芐基-3-((2-碘苯基)氨基)-3-(羥甲基)氧化吲哚、1-芐基-3-((4-氯苯基)氨基)-3-(羥甲基)氧化吲哚、1-芐基-3-((4-溴苯基)氨基)-3-(羥甲基)氧化吲哚、1-芐基-3-((4-碘苯基)氨基)-3-(羥甲基)氧化吲哚、1-芐基-3-((4-硝基苯基)氨基)-3-(羥甲基)氧化吲哚、1-芐基-3-((2-氟苯基)氨基)-3-(羥甲基)氧化吲哚、1-芐基-3-((3,5-二(三氟甲基)苯基)氨基)-3-(羥甲基)氧化吲哚、1-芐基-3-((3,4-二氟苯基)氨基)-3-(羥甲基)氧化吲哚、1-芐基-3-((2-氯-4-氟苯基)氨基)-3-(羥甲基)氧化吲哚、1-芐基-3-((2,6-二氯苯基)氨基)-3-(羥甲基)氧化吲哚、3-((2,6-二氟苯基)氨基)-3-(羥甲基)-1-甲基氧化吲哚、3-((2,6-二氟苯基)氨基)-5-氟-3-(羥甲基)-1-甲基氧化吲哚、1-芐基-3-((2,6-二氟苯基)氨基)-3-(羥甲基)-5-甲基氧化吲哚、3-((2,6-二氟苯基)氨基)-3-(羥甲基)-1-(4-甲基芐基)氧化吲哚、3-((2,4-二氟苯基)氨基)-3-(羥甲基)-1-(4-甲基芐基)氧化吲哚、1-芐基-3-((2,4-二氟苯基)氨基)-3-(羥甲基)氧化吲哚、1-芐基-3-((2,4-二氟苯基)氨基)-5-氟-3-(羥甲基)氧化吲哚、1-芐基-3-((2,4-二氟苯基)氨基)-3-羥甲基-5-甲基氧化吲哚。
其中，所述方法中原料及催化劑的摩爾比為3-重氮氧化吲哚：苯胺：甲醛：醋酸銠＝0.1-2.0:1.0:1.0-10.0:0.01-0.10；優(yōu)選地為，1.0:1.0:6.0:0.01。
其中，所述反應(yīng)的溫度為0℃-75℃；優(yōu)選地為，60℃。
其中，所述反應(yīng)的時間為1h-5h；優(yōu)選地為，2h。
其中，所述方法包括：將所述苯胺、甲醛水溶液、醋酸銠分別溶于所述有機溶劑中，在攪拌下，加入所述重氮化合物溶解于所述有機溶劑所得的溶液，經(jīng)反應(yīng)得到3-氨基-3-羥甲基氧化吲哚衍生物。
其中，所述產(chǎn)物3-氨基-3-羥甲基氧化吲哚衍生物經(jīng)柱層析或其他方式進行分離純化。
其中，所述有機溶劑包括四氫呋喃、1,4-二氧六環(huán)、乙二醇二甲醚、甲苯、乙酸乙酯、二氯甲烷等溶劑；優(yōu)選地為乙酸乙酯。
其中，所述3-重氮-2-氧化吲哚包括3-重氮-2-氧化吲哚、各種苯環(huán)上取代的3-重氮-2-氧化吲哚、各種N上取代的3-重氮-2-氧化吲哚。
其中，所述苯胺是包括苯胺及取代苯胺。
其中，所述醛優(yōu)選地為甲醛。
其中，所述3-氨基-3-羥甲基氧化吲哚衍生物中，3位為一個季碳中心且3位連接有一個羥甲基。
本發(fā)明一個具體的實施方式為，將醛和苯胺溶于有機溶劑中，攪拌下，在1小時內(nèi)，將重氮化合物溶解于有機溶劑組成的溶液滴加到反應(yīng)體系中，滴加完畢后再反應(yīng)1小時。反應(yīng)完后減壓除去有機溶劑得粗產(chǎn)物，粗產(chǎn)物經(jīng)柱層析純化得產(chǎn)物。
本發(fā)明的反應(yīng)機理為：
重氮a在金屬銠催化作用下分解生成金屬卡賓中間體b。金屬卡賓中間體b一方面與親核試劑苯胺c反應(yīng)生成高活性的銨基葉立德中間體(e和f)，e和f通過途徑A發(fā)生1，2-H遷移生成N-H插入產(chǎn)物h。當反應(yīng)體系中存在甲醛時，e和f通過途徑B進攻親電試劑甲醛d，發(fā)生親核加成，同時放出催化劑，得到三組分產(chǎn)物g。另一方面，金屬卡賓中間體b與氧氣發(fā)生氧化反應(yīng)，得到靛紅類副產(chǎn)物i；或自身發(fā)生聚合形成聚合物j。
本發(fā)明還提出了如式(I)所示的3-氨基-3-羥甲基氧化吲哚衍生物在制備抗腫瘤藥物中的應(yīng)用。
本發(fā)明還提出了如式(I)所示的3-氨基-3-羥甲基氧化吲哚衍生物在制備抑制腫瘤細胞增殖的藥物中的應(yīng)用。
其中，所述腫瘤是指骨肉瘤、結(jié)直腸癌、肝癌、口腔表皮樣癌和T細胞白血病。
其中，所述腫瘤細胞是指人骨肉瘤細胞(SJSA-1)、人結(jié)直腸癌細胞(HCT-116)、人肝癌細胞(BEL7402)、人口腔表皮樣癌細胞(KB)和人T細胞白血病細胞(Jurkat)。
本發(fā)明還提出了如式(I)所示的3-氨基-3-羥甲基氧化吲哚衍生物對SJSA-1細胞株的體外生長具有抑制作用。
本發(fā)明的有益效果在于，本發(fā)明制備的式(I)所示的3-氨基-3-羥甲基氧化吲哚衍生物可以有效抑制腫瘤細胞的增殖，式(I)化合物的制備方法以3-重氮氧化吲哚、苯胺、醛為原料，以醋酸銠為催化劑，以有機溶劑為溶劑，通過一步反應(yīng)完成，制備方法原料簡單易得，具有高靈活性、高選擇性、高效原子經(jīng)濟性、高收率、操作簡單安全的優(yōu)點。
本發(fā)明設(shè)計合成一類3-氨基-3-羥甲基氧化吲哚衍生物，重氮、苯胺、甲醛為原料，以醋酸銠為催化劑，以有機溶劑為溶劑，經(jīng)過一步反應(yīng)得到產(chǎn)物。一步構(gòu)建一類3-氨基-3-羥甲基氧化吲哚衍生物，采用一步三組分反應(yīng)得到產(chǎn)物。本發(fā)明的多組分反應(yīng)的制備方法具有高靈活性、高選擇性、高效原子經(jīng)濟性、高收率、操作簡單安全等特點，近年來隨著原子經(jīng)濟性概念的日益發(fā)展，多組分反應(yīng)越來越成為研究的熱點。將多組分反應(yīng)應(yīng)用于藥物合成領(lǐng)域具有廣闊前景。本發(fā)明3-氨基-3-羥甲基氧化吲哚衍生物是重要的天然產(chǎn)物骨架或活性藥物中間體，且該類化合物本身也具有抗癌活性，在醫(yī)藥化工領(lǐng)域有廣泛應(yīng)用前景。
具體實施方式
結(jié)合以下具體實施例，對本發(fā)明作進一步的詳細說明，本發(fā)明的保護內(nèi)容不局限于以下實施例。在不背離發(fā)明構(gòu)思的精神和范圍下，本領(lǐng)域技術(shù)人員能夠想到的變化和優(yōu)點都被包括在本發(fā)明中，并且以所附的權(quán)利要求為保護范圍。
本發(fā)明式(I)所示的3-氨基-3-羥甲基氧化吲哚衍生物，是通過一種全新的制備方法得到的，其反應(yīng)路線具體包括：先按摩爾比稱取苯環(huán)上有取代的苯胺：甲醛：醋酸銠＝1.0:6.0:0.01，將苯胺、甲醛、醋酸銠和有機溶劑加入反應(yīng)瓶中，保持溫度在60℃，其中有機溶劑的加入量為5-10mL/mmol苯胺；接著，將靛紅重氮溶解于有機溶劑中，靛紅重氮加入量為1.0mmol/mmol苯胺，得到重氮溶液。其中，用于溶解重氮的有機溶劑的量為2-5mL/mmol靛紅重氮。然后在60℃下，通過蠕動泵將重氮溶液滴加到反應(yīng)瓶中，1小時滴加完畢。進樣結(jié)束，繼續(xù)在60℃攪拌反應(yīng)1小時。減壓旋蒸除去溶劑，得到粗產(chǎn)物，將粗產(chǎn)物進行柱層析純化(石油醚：乙酸乙酯＝10：1-1：1)得到純產(chǎn)物。
實施例1制備本發(fā)明化合物Ia
將2,6-二氯苯胺(0.1mmol)，甲醛(0.6mmol)和醋酸銠(0.001mmol)溶于1mL乙酸乙酯組成反應(yīng)體系，保持溫度在60℃，用自動進樣泵將1-甲基-3-重氮-2-氧化吲哚(0.1mmol)溶于1mL乙酸乙酯中組成的溶液在1小時加入到反應(yīng)體系中。進樣結(jié)束，繼續(xù)在60℃攪拌反應(yīng)1小時。減壓旋蒸除去溶劑，得到粗產(chǎn)物，將粗產(chǎn)物進行柱層析純化(石油醚：乙酸乙酯＝10：1-1：1)得到純產(chǎn)物Ia。收率：78％。見表1。
3-氨基-3-羥甲基氧化吲哚衍生物Ia的表征：
1H NMR(400MHz,CDCl3)δ7.26(d,J＝6.5Hz,1H),7.11(d,J＝8.0Hz,2H),6.86–6.73(m,3H),6.68(d,J＝7.3Hz,1H),5.22(s,1H),3.92(t,J＝10.8Hz,1H),3.83(dd,J＝11.3,3.2Hz,1H),3.24(s,3H),3.15(d,J＝9.0Hz,1H)；
13C NMR(100MHz,CDCl3)δ178.16,143.79,140.04,129.61,129.50,128.18,125.89,124.08,123.68,122.35,108.62,69.49,66.45,26.27.
實施例2-22制備化合物(Ib～Iv)
實施例2-22制備過程同實施例1。反應(yīng)中取代基的變化、化合物編號、產(chǎn)率等，見表1。
表1
產(chǎn)物3-氨基-3-羥甲基氧化吲哚衍生物Ib～Iv的表征，見以下：
Ib的表征：
1H NMR(400MHz,CDCl3)δ7.40–7.27(m,5H),7.15(td,J＝7.8,1.0Hz,1H),7.09(d,J＝8.0Hz,2H),6.78(dt,J＝12.4,4.1Hz,3H),6.69–6.59(m,1H),5.27(s,1H),5.04(d,J＝15.4Hz,1H),4.82(d,J＝15.4Hz,1H),3.97(t,J＝10.9Hz,1H),3.87(dd,J＝11.3,3.0Hz,1H),3.15(dd,J＝10.4,3.1Hz,1H).
13C NMR(100MHz,CDCl3)δ178.1,143.0,140.0,135.5,129.7,129.4,128.8,128.1,127.9,127.8,125.8,124.1,123.7,122.3,109.6,69.8,66.5,44.1.
Ic的表征：
1H NMR(400MHz,CDCl3)δ7.39–7.27(m,6H),7.14(d,J＝8.0Hz,2H),6.83(t,J＝8.0Hz,1H),6.78(d,J＝1.8Hz,1H),6.64(d,J＝8.3Hz,1H),5.18(s,1H),5.01(d,J＝15.4Hz,1H),4.79(d,J＝15.5Hz,1H),3.91(dd,J＝24.3,11.0Hz,2H),3.08(s,1H).
13C NMR(100MHz,CDCl3)δ177.3,142.0,139.4,135.0,132.2,129.7,128.90 128.3,128.0,127.7,127.4,124.2,115.1,111.0,69.4,66.6,44.2.
Id的表征：
1H NMR(400MHz,CDCl3)δ7.19(dd,J＝17.6,10.1Hz,8H),6.98(t,J＝7.4Hz,1H),6.83(d,J＝7.9Hz,1H),6.51(d,J＝8.7Hz,1H),5.77(s,1H),5.50(d,J＝8.7Hz,1H),5.04(d,J＝15.3Hz,1H),4.70(d,J＝15.3Hz,1H),3.88(t,J＝10.6Hz,1H),3.66(d,J＝11.4Hz,1H),3.11(s,1H).
13C NMR(100MHz,CDCl3)δ177.1,141.7,140.5,135.3,130.0,129.1,128.9,128.2,127.9,127.5,126.7,124.0,123.8,123.3,121.4,113.8,110.2,68.0,64.6,44.3.
Ie的表征：
1H NMR(400MHz,CDCl3)δ7.66(dd,J＝7.8,1.3Hz,1H),7.34–7.27(m,7H),7.07(t,J＝7.4Hz,1H),6.90(d,J＝7.8Hz,1H),6.72(dd,J＝11.3,4.2Hz,1H),6.45–6.34(m,1H),5.72(s,1H),5.64(dd,J＝8.1,1.1Hz,1H),5.13(d,J＝15.3Hz,1H),4.81(d,J＝15.3Hz,1H),4.00(t,J＝11.4Hz,1H),3.72(dd,J＝11.5,2.5Hz,1H),2.95(dd,J＝11.3,2.5Hz,1H)；
13C NMR(100MHz,CDCl3)δ177.26,145.04,141.79,139.39,135.39,129.74,129.14,128.89,128.03,127.84,126.92,123.94,123.69,120.44,112.51,110.10,87.14,68.26,65.01,44.24。
If的表征：
1H NMR(400MHz,CDCl3)δ7.30(dd,J＝8.7,4.9Hz,4H),7.26–7.22(m,1H),7.22–7.16(m,2H),7.06(t,J＝7.5Hz,1H),6.88(t,J＝6.0Hz,2H),6.84(d,J＝7.9Hz,1H),6.24–6.12(m,2H),5.24(s,1H),5.09(d,J＝15.4Hz,1H),4.73(d,J＝15.4Hz,1H),3.97–3.82(m,1H),3.75–3.66(m,1H),3.46(d,J＝6.8Hz,1H).
13C NMR(100MHz,CDCl3)δ177.7,144.2,141.9,135.2,129.8,129.0,128.9,128.0,127.6,127.3,124.4,124.1,123.7,117.0,110.1,67.9,65.2,44.1。
Ig的表征：
1H NMR(400MHz,CDCl3)δ7.23(d,J＝6.2Hz,4H),7.18(d,J＝6.3Hz,1H),7.14(d,J＝6.0Hz,2H),6.99(t,J＝7.5Hz,1H),6.94(d,J＝7.8Hz,2H),6.78(d,J＝7.7Hz,1H),6.05(d,J＝7.9Hz,2H),5.18(s,1H),5.02(d,J＝15.4Hz,1H),4.67(d,J＝15.4Hz,1H),3.83(s,1H),3.63(d,J＝11.5Hz,1H),3.25(s,1H).
13C NMR(100MHz,CDCl3)δ177.7,144.6,141.8,135.2,131.9,129.8,128.9,128.0,127.6,127.2,124.0,123.7,117.3,111.6,110.2,67.9,65.0,44.1。
Ih的表征：
1H NMR(400MHz,CDCl3)δ7.21(d,J＝7.1Hz,4H),7.17(dd,J＝10.7,4.9Hz,3H),7.11(d,J＝7.7Hz,2H),6.98(t,J＝7.4Hz,1H),6.78(d,J＝7.7Hz,1H),5.94(d,J＝7.6Hz,2H),5.18(s,1H),5.02(d,J＝15.4Hz,1H),4.68(d,J＝15.4Hz,1H),3.82(s,1H),3.63(d,J＝11.5Hz,1H),3.25(d,J＝43.4Hz,1H).
13C NMR(100MHz,CDCl3)δ177.7,145.3,141.8,137.8,135.2,129.8,128.9,128.1,127.7,127.1,124.0,123.7,117.6,110.2,81.0,68.0,64.9,44.2.
Ii的表征：
1H NMR(400MHz,CDCl3)δ7.80(d,J＝9.0Hz,2H),7.40–7.28(m,6H),7.26(s,1H),7.07(t,J＝7.5Hz,1H),6.97(d,J＝7.9Hz,1H),6.14(d,J＝9.0Hz,2H),6.03(s,1H),5.11(d,J＝15.3Hz,1H),4.85(d,J＝15.3Hz,1H),3.92(d,J＝11.5Hz,1H),3.78(d,J＝11.6Hz,1H),3.51(s,1H)；
13C NMR(100MHz,CDCl3)δ176.51,151.05,141.62,139.55,135.09,160.25,129.03,128.92,128.35,127.84,127.12,125.95,125.89,123.96,123.84,113.22,110.48,67.90,64.20,44.41。
Ij的表征：
1H NMR(400MHz,CDCl3)δ7.30(qd,J＝6.6,3.3Hz,7H),7.08(t,J＝7.5Hz,1H),6.96(ddd,J＝11.6,8.0,1.4Hz,1H),6.88(d,J＝7.8Hz,1H),6.65–6.58(m,1H),6.53(t,J＝7.6Hz,1H),5.78–5.71(m,1H),5.47(d,J＝3.2Hz,1H),5.12(d,J＝15.4Hz,1H),4.80(d,J＝15.4Hz,1H),3.97(t,J＝11.4Hz,1H),3.73(dd,J＝11.5,2.5Hz,1H),2.91(dd,J＝11.3,2.6Hz,1H).
13C NMR(100MHz,CDCl3)δ177.58,153.55,151.17,141.86,135.32,134.03(d,J＝11.2Hz),129.77,128.87,127.98,127.72,127.25,124.23(d,J＝3.7Hz),124.03,123.64,118.96(d,J＝7.2Hz),114.91,114.73,114.30(d,J＝2.4Hz),110.11,99.99,68.07,64.38,44.18.
Ik的表征：
1H NMR(400MHz,CDCl3)δ7.38–7.26(m,7H),7.12(dd,J＝14.3,6.4Hz,2H),6.91(d,J＝7.8Hz,1H),6.61(s,2H),5.63(s,1H),5.06–4.88(m,2H),3.95(t,J＝11.6Hz,1H),3.75(dd,J＝11.6,1.8Hz,1H),2.90(dd,J＝11.1,1.8Hz,1H).
13C NMR(100MHz,CDCl3)δ176.90,146.36,141.92,134.95,132.34(d,J＝32.9Hz),130.40,129.06,128.03,127.15,125.60,124.52,123.94(d,J＝8.6Hz),121.81,114.03(q,J＝3.8,2.3Hz),112.26,110.51,67.95,64.27,44.36.
Il的表征：
1H NMR(400MHz,CDCl3)δ7.40–7.27(m,5H),7.21(d,J＝7.0Hz,2H),7.10(t,J＝7.4Hz,1H),6.86(d,J＝7.8Hz,1H),6.74(dd,J＝18.6,9.2Hz,1H),6.13–5.93(m,2H),5.12(d,J＝15.2Hz,2H),4.75(d,J＝15.4Hz,1H),3.91(t,J＝11.4Hz,1H),3.69(d,J＝11.3Hz,1H),2.94(d,J＝11.1Hz,1H).
13C NMR(100MHz,CDCl3)δ177.51,142.46(dd,J＝8.2,2.0Hz),141.90,135.12,129.97,128.93,128.02,127.45,126.87,123.86(d,J＝24.2Hz),117.35(d,J＝18.5Hz),111.31(dd,J＝5.6,3.3Hz),110.30,104.74(d,J＝20.6Hz),67.88,65.13,44.13.
Im的表征：
1H NMR(400MHz,CDCl3)δ7.37–7.27(m,7H),7.09(t,J＝7.5Hz,1H),7.03(dd,J＝8.2,2.5Hz,1H),6.91(d,J＝7.7Hz,1H),6.37(td,J＝8.6,2.6Hz,1H),5.72(s,1H),5.64(dd,J＝8.9,5.1Hz,1H),5.13(d,J＝15.3Hz,1H),4.77(d,J＝15.3Hz,1H),3.98(t,J＝11.4Hz,1H),3.73(dd,J＝11.5,1.7Hz,1H),2.88(dd,J＝11.3,1.8Hz,1H).
13C NMR(100MHz,CDCl3)δ177.27,141.82,138.47(d,J＝2.5Hz),135.29,129.90,128.89,128.10,127.80,126.94,123.98,123.75,116.76(d,J＝25.7Hz),113.93(dd,J＝20.8,14.9Hz),110.16,68.05,64.78,44.20.
In的表征：
1H NMR(400MHz,CDCl3)δ7.30(dd,J＝12.0,4.8Hz,3H),7.25–7.12(m,4H),6.97(t,J＝7.5Hz,1H),6.82–6.57(m,4H),5.02–4.82(m,3H),3.95–3.82(m,2H),2.82(dd,J＝9.5,4.0Hz,1H).
13C NMR(100MHz,CDCl3)δ177.34,154.81(dd,J＝242.9,6.7Hz),142.62,135.56,129.36,128.77,127.70,127.59,127.31,123.74,122.75,120.58(t,J＝9.5Hz),111.28(dd,J＝17.2,7.0Hz),109.58,68.35,65.92,44.04.
Io的表征：
1H NMR(400MHz,CDCl3)δ7.41(t,J＝7.7Hz,1H),7.33(d,J＝7.3Hz,1H),7.14(t,J＝7.5Hz,1H),6.97(d,J＝7.8Hz,1H),6.75(ddd,J＝11.2,8.5,2.8Hz,1H),6.43–6.33(m,1H),5.73(td,J＝9.3,5.4Hz,1H),5.30(s,1H),5.27(d,J＝1.8Hz,1H),3.92(t,J＝11.3Hz,1H),3.68(dd,J＝11.5,2.5Hz,1H),3.28(s,3H),2.82(dd,J＝11.2,2.5Hz,1H).
13C NMR(100MHz,CDCl3)δ177.31,156.80,142.77,130.57,130.00,127.12,124.00,123.70,114.29(dd,J＝8.9,3.6Hz),110.49(dd,J＝21.8,3.9Hz),109.08,103.76(dd,J＝26.6,23.3Hz),67.84,64.65,53.50,26.46.
Ip的表征：
1H NMR(400MHz,CDCl3)δ7.00(td,J＝8.9,2.6Hz,1H),6.92(dd,J＝7.5,2.6Hz,1H),6.79(dd,J＝8.5,4.0Hz,1H),6.72–6.62(m,3H),4.95(s,1H),3.88–3.75(m,2H),3.22(s,3H),2.93(dd,J＝8.6,4.7Hz,1H).
13C NMR(100MHz,CDCl3)δ177.13(d,J＝0.9Hz),160.38,157.98,155.48(d,J＝6.8Hz),153.07(d,J＝6.6Hz),139.34,129.85–129.57(m),122.06(t,J＝15.0Hz),120.25(t,J＝9.6Hz),115.71,115.47,112.06,111.81,111.45,111.38,111.28,111.20(d,J＝1.7Hz),109.06(d,J＝8.0Hz),68.02,66.01,26.55.
Iq的表征：
1H NMR(400MHz,CDCl3)δ7.32–7.27(m,2H),7.26–7.19(m,3H),7.05–6.94(m,2H),6.80–6.64(m,3H),6.62(d,J＝7.9Hz,1H),5.01–4.80(m,3H),3.93–3.79(m,2H),2.86(dd,J＝9.9,3.7Hz,1H),2.24(s,3H).
13C NMR(100MHz,CDCl3)δ177.23,155.91(d,J＝6.7Hz),153.50(d,J＝6.7Hz),140.14,135.66,132.44,129.59,128.73,127.79,127.64,127.30,124.46,122.40(t,J＝15.3Hz),120.39(t,J＝9.5Hz),111.30(dd,J＝17.1,7.0Hz),109.32,68.40,65.88,44.04,21.01.
Ir的表征：
1H NMR(400MHz,CDCl3)δ7.32(dd,J＝15.1,7.6Hz,2H),7.18–7.04(m,5H),6.88(d,J＝7.8Hz,1H),6.77(ddd,J＝11.1,8.6,2.7Hz,1H),6.28(t,J＝8.5Hz,1H),5.70(td,J＝9.3,5.5Hz,1H),5.32(d,J＝2.8Hz,1H),5.09(d,J＝15.3Hz,1H),4.70(d,J＝15.3Hz,1H),3.96(t,J＝11.5Hz,1H),3.72(dd,J＝11.5,2.2Hz,1H),2.90(dd,J＝11.4,2.2Hz,1H),2.33(s,3H).
13C NMR(100MHz,CDCl3)δ177.47,141.92,137.82,132.17,130.46(dd,J＝11.5,2.6Hz),129.88,129.52,127.67,127.13,124.05,123.64,115.10(dd,J＝8.8,3.5Hz),110.41(dd,J＝21.9,3.8Hz),110.23,103.80(dd,J＝26.5,23.5Hz),67.86,64.80,43.89,21.14.
Is的表征：
1H NMR(400MHz,CDCl3)δ7.31(dd,J＝15.6,7.2Hz,2H),7.21–6.98(m,5H),6.88(d,J＝7.8Hz,1H),6.76(ddd,J＝11.2,8.5,2.8Hz,1H),6.28(ddd,J＝10.6,3.2,1.9Hz,1H),5.71(td,J＝9.3,5.5Hz,1H),5.31(d,J＝2.1Hz,1H),5.08(d,J＝15.3Hz,1H),4.70(d,J＝15.3Hz,1H),3.96(t,J＝11.4Hz,1H),3.72(dd,J＝11.5,2.4Hz,1H),2.89(dd,J＝11.3,2.4Hz,1H),2.33(s,3H).
13C NMR(100MHz,CDCl3)δ177.45,141.97,137.81,132.18,130.46(dd,J＝11.3,4.1Hz),129.96,129.81,129.64,129.39,127.78,127.53,127.14,124.11,123.97,123.75,123.51,110.22(d,J＝32.0Hz),64.77,43.90(dd,J＝20.6,13.2Hz),21.12(d,J＝18.8Hz).
It的表征：
1H NMR(400MHz,CDCl3)δ7.39–7.27(m,5H),7.24–7.17(m,2H),7.10(t,J＝7.5Hz,1H),6.87(d,J＝7.8Hz,1H),6.82–6.70(m,1H),6.27(t,J＝8.4Hz,1H),5.72(td,J＝9.2,5.8Hz,1H),5.31(s,1H),5.11(d,J＝15.4Hz,1H),4.75(d,J＝15.4Hz,1H),3.97(t,J＝11.4Hz,1H),3.74(d,J＝11.5Hz,1H),2.89(d,J＝11.1Hz,1H).
13C NMR(100MHz,CDCl3)δ177.48,141.95,135.24,130.42(dd,J＝11.6,3.2Hz),129.89,128.86,128.03,127.66,127.18,124.11,123.68,115.31(dd,J＝8.8,3.5Hz),110.41(dd,J＝21.6,3.9Hz),110.14,103.80(dd,J＝26.5,23.4Hz),67.91,64.87,44.12.
Iu的表征：
1H NMR(400MHz,CDCl3)δ7.35–7.27(m,3H),7.24–7.16(m,2H),7.10(dd,J＝7.4,2.5Hz,1H),6.98(td,J＝8.8,2.6Hz,1H),6.85–6.71(m,2H),6.36–6.26(m,1H),5.72(td,J＝9.2,5.4Hz,1H),5.28(s,1H),5.11(d,J＝15.4Hz,1H),4.73(d,J＝15.4Hz,1H),3.94(t,J＝11.3Hz,1H),3.75(dd,J＝11.4,2.4Hz,1H),2.88(dd,J＝11.1,2.4Hz,1H).
13C NMR(100MHz,CDCl3)δ177.20,137.77,134.91,129.09,129.02(d,J＝1.0Hz),128.94(d,J＝3.0Hz),128.88,128.26,127.75,127.54,115.39(d,J＝3.5Hz),115.18,112.59(d,J＝6.7Hz),112.34,112.06,111.07,110.72(dd,J＝5.0,1.9Hz),104.14(d,J＝2.0Hz),65.15(d,J＝1.8Hz),44.31,17.99.
Iv的表征：
1H NMR(400MHz,CDCl3)δ7.35–7.26(m,3H),7.22(dd,J＝7.0,2.3Hz,2H),7.15(s,1H),7.08(d,J＝8.0Hz,1H),6.83–6.68(m,2H),6.38–6.19(m,1H),5.72(td,J＝9.3,5.5Hz,1H),5.30(d,J＝6.6Hz,1H),5.09(d,J＝15.4Hz,1H),4.72(d,J＝15.4Hz,1H),4.72(d,J＝15.4Hz,1H),3.95(t,J＝11.4Hz,1H),3.71(dd,J＝11.5,1.8Hz,1H),2.96(d,J＝11.3Hz,1H),2.29(s,3H).
13C NMR(100MHz,CDCl3)δ177.39,156.78(d,J＝11.1Hz),154.40(d,J＝11.0Hz),153.31(d,J＝11.6Hz),150.89(d,J＝11.7Hz),139.47,135.36,133.48,130.54(dd,J＝11.5,3.2Hz),130.19,128.82,127.98,127.70,127.13,115.08(dd,J＝8.8,3.6Hz),110.41(dd,J＝21.7,3.9Hz),109.94,103.77(dd,J＝26.6,23.4Hz),67.93,64.76,44.14,21.05.
實施例23 3-氨基-3-羥甲基氧化吲哚衍生物對人骨肉瘤細胞(SJSA-1)、人結(jié)直腸癌細胞(HCT-116)、人肝癌細胞(BEL7402)、人口腔表皮樣癌細胞(KB)和人T細胞白血病細胞(Jurkat)五種腫瘤細胞的增殖的抑制效果。
本發(fā)明采用CCK-8法測定了實施例1-22(Ia-Iv)中所述3-氨基-3-羥甲基氧化吲哚衍生物對人骨肉瘤細胞(SJSA-1)、人結(jié)直腸癌細胞(HCT-116)、人肝癌細胞(BEL7402)、人口腔表皮樣癌細胞(KB)和人T細胞白血病細胞(Jurkat)五種腫瘤細胞的增殖抑制效果。
首先測定了22個化合物抗SJSA-1細胞增殖的活性，然后優(yōu)選增殖活性最好的化合物，考察了其對HCT-116細胞、BEL7402細胞、KB細胞、Jurkat四種腫瘤細胞的抑制活性。
(1)將SJSA-1、HCT116、BEL7402、KB、Jurkat制成單細胞懸液，180μL接種于96孔培養(yǎng)板中，CO2培養(yǎng)箱(37℃,5％CO2，95％空氣)過夜培養(yǎng)；
(2)3-氨基-3-羥甲基氧化吲哚衍生物用有機溶劑DMSO溶解，用相應(yīng)的細胞培養(yǎng)基配制成終濃度為30μM的藥物溶液，分別加入到上述細胞(20μL/孔)中，對照組加入1‰DMSO，CO2培養(yǎng)箱中培養(yǎng)72小時；
(3)培養(yǎng)72h后傾去培養(yǎng)液，加入100μL 1:10稀釋的CCK-8溶液，37℃孵育2小時后，使用酶標儀SpectraMax M5測450nm處吸光度A，參考波長620nm，計算對腫瘤細胞生長的抑制率。
(4)選擇抑制率較高的化合物Ii，Ir，Is，Iv，進一步測試其抑制腫瘤細胞增殖的半效應(yīng)濃度(IC50值)，方法如下：稱取適量化合物，用DMSO配制成終濃度為10mM的母液，而后梯度依次稀釋至10mM，5mM，2.5mM，1.25mM，0.63mM，0.31mM，0.16mM，0.08Mm，再用完全培養(yǎng)基將梯度母液稀釋至終濃度25μM、12.5μM、6.3μM、3.1μM、1.6μM、0.8μM、0.4μM、0.2μM，每孔200μL作用于細胞，每組濃度設(shè)置三個復孔。培養(yǎng)72h后，同(3)測定各濃度對應(yīng)的抑制率，用Graphpad Prism軟件計算IC50值。
其中，步驟(1)中，所述單細胞懸液的濃度為2000～4000細胞/孔(根據(jù)不同細增殖速度確定)；
其中，步驟(2)中，SJSA-1細胞、BEL-7402細胞、KB細胞和Jurkat細胞均采用1640培養(yǎng)基(10％含新生牛血清、1％雙抗)，HCT-116細胞采用McCoy’s 5A培養(yǎng)基(10％含新生牛血清、1％雙抗)；
步驟(3)中所述抑制率的計算方法為1-(A藥物處理組-A空白對照)/(A無藥物處理組-A空白對照)，A為吸光度。
表2為化合物Ia-Iv對人骨肉瘤細胞(SJSA-1)的生長抑制率和抑制人骨肉瘤細胞(SJSA-1)增殖的半效應(yīng)濃度(IC50值)。10μM化合物Ic、If、Ih、Ii、Ir、Is和Iv對SJSA-1細胞生長的抑制率達到50％，表現(xiàn)出良好的抗腫瘤活性。進一步對其中一些化合物的IC50進行測定，發(fā)現(xiàn)IC50在3～10μM范圍；其中化合物Ir和Iv活性最好，Ir的IC50≈3.87μM。Iv的IC50≈3.9μM
表2化合物Ia-Iv對SJSA-1細胞增殖的抑制率和IC50。
表3為化合物Iv對SJSA-1細胞、HCT-116細胞、BEL7402細胞、KB細胞、Jurkat細胞增殖的IC50。該化合物對這幾種腫瘤細胞都有抑制活性，其中Iv對SJSA-1、HCT116和Jurkat細胞的抑制生長作用較好，對KB和Bel7402的抗增殖效果稍差，表現(xiàn)出一定選擇性。
表3化合物Iv對5種不同腫瘤細胞的增殖抑制活性
由此可見，本發(fā)明中3-氨基-3-羥甲基氧化吲哚衍生物Ii，Ir，Is，Iv，對人骨肉瘤細胞(SJSA-1)的增殖具有一定的抑制作用，其中化合物Iv對人骨肉瘤細胞(SJSA-1)、人結(jié)直腸癌細胞(HCT-116)、人肝癌細胞(BEL7402)、人口腔表皮樣癌細胞(KB)和人T細胞白血病細胞(Jurkat)五種腫瘤細胞的增殖都具有相應(yīng)的抑制作用，適用于抗腫瘤藥物的制備應(yīng)用。