本發(fā)明涉及生物
技術(shù)領(lǐng)域：
中，小麥分子標(biāo)記4BL-699-1和4BL-699-2在鑒定小麥株高性狀中的應(yīng)用。
背景技術(shù)：
：小麥?zhǔn)俏覈?guó)主要的糧食作物，其生產(chǎn)能力及供需狀況始終關(guān)系到我國(guó)國(guó)民經(jīng)濟(jì)發(fā)展和糧食安全等重大戰(zhàn)略問(wèn)題。從世界范圍來(lái)看，世界糧食生產(chǎn)狀況始終與各國(guó)政治、經(jīng)濟(jì)發(fā)展?fàn)顩r緊密聯(lián)系，糧食生產(chǎn)量和儲(chǔ)備量一有下降，國(guó)際糧價(jià)就大幅攀升，恐慌情緒就大勢(shì)蔓延，對(duì)各國(guó)的政治經(jīng)濟(jì)形勢(shì)造成重大影響；從國(guó)內(nèi)來(lái)看，隨著我國(guó)人口的增長(zhǎng)，工業(yè)化和城鎮(zhèn)化的快速發(fā)展，對(duì)糧食的需求將持續(xù)加大。同時(shí)，由于我國(guó)糧食作物種植面積不可能大幅度恢復(fù)增長(zhǎng)，因此要保障我國(guó)糧食安全，唯一的出路是持續(xù)提高單產(chǎn)，這就要求在小麥、水稻等主要糧食作物的產(chǎn)量性狀遺傳改良方面獲得跨越性的進(jìn)展。20世紀(jì)60-70年代綠色革命為世界糧食產(chǎn)量做出了非常突出的貢獻(xiàn)，綠色革命興起的主要原因即為發(fā)現(xiàn)并在育種過(guò)程中引入了多個(gè)小麥、水稻矮稈基因，由此引發(fā)了持續(xù)多年的矮化育種。近代世界小麥育種最突出的成就是通過(guò)矮化育種增強(qiáng)了小麥品種的抗倒伏能力，顯著提高了育成品種的增產(chǎn)潛力。其中來(lái)源于日本的兩個(gè)矮源—赤小麥(Akagomugi，具有矮稈基因Rht8和Rht9)和農(nóng)林10號(hào)(Norin10，具有矮稈基因Rht1和Rht2)的廣泛利用起了很大的作用。早在上世紀(jì)初，意大利的Strampelli以從日本引進(jìn)的赤小麥作為早熟矮稈親本，育成了一系列的矮稈品種，不但成為意大利小麥育種的骨干材料，而且在世界許多國(guó)家都得到廣泛的利用。國(guó)際上最典型的事例為前蘇聯(lián)品種無(wú)芒1號(hào)和墨西哥國(guó)際玉米小麥改良中心20世紀(jì)60年代所育成的一系列高產(chǎn)半矮稈品種。無(wú)芒1號(hào)在前蘇聯(lián)及其相鄰的歐洲一些國(guó)家種植面積增達(dá)1100萬(wàn)hm2，在世界上是空前的；墨西哥國(guó)際玉米小麥改良中心20世紀(jì)60年代所育成的一系列高產(chǎn)半矮稈品種，這些優(yōu)良品種在低緯度的許多國(guó)家推廣面積共達(dá)4000萬(wàn)hm2，國(guó)際春小麥產(chǎn)量試驗(yàn)1967—1969年的資料表明，墨西哥的半矮桿小麥品種兼具最高的平均產(chǎn)量和穩(wěn)產(chǎn)性(Martinic，1973)。這些品種引進(jìn)我國(guó)后，在直接和間接利用上都發(fā)揮了巨大的作用，如1956年自阿爾巴尼亞引入的意大利小麥品種阿夫、阿勃等。1935年日本利用達(dá)摩小麥(Daruma)與美國(guó)品種雜交育成了著名的矮稈品種農(nóng)林10號(hào)。以農(nóng)林10號(hào)作為骨干親本，在世界范圍內(nèi)選育出了一系列半矮稈小麥推廣品種，農(nóng)林10號(hào)引入美國(guó)后作為雜交親本，育成了創(chuàng)造世界高產(chǎn)紀(jì)錄(14.06t/hm2)的品種Gaines；國(guó)際玉米小麥改良中心也利用了其原雜交組合的選系，通過(guò)進(jìn)一步改良，育成了一系列半矮稈、適應(yīng)性廣泛的高產(chǎn)品種，推廣到20個(gè)國(guó)家，種植總面積達(dá)4000萬(wàn)hm2，獲得顯著增產(chǎn)，被譽(yù)為“綠色革命”。為此，Borlaug榮獲了1970年的若貝爾和平獎(jiǎng)。我國(guó)小麥矮化育種的成就十分顯著，原西北農(nóng)學(xué)院的趙洪璋院士利用來(lái)自日本的水源86(矮稈基因同于農(nóng)林10號(hào)，賈繼增等1992)于上世紀(jì)70年代初育成了我國(guó)最早實(shí)現(xiàn)大面積生產(chǎn)應(yīng)用的矮稈品種—矮豐3號(hào)。繼后，山東農(nóng)業(yè)大學(xué)的李睛祺教授又利用矮豐3號(hào)等材料于上世紀(jì)80年代初育成了著名種質(zhì)資源材料矮孟牛，利用矮孟牛先后直接培育出了18個(gè)小麥新品種，截止1999年已累計(jì)推廣4.58億畝，阿夫、阿勃、農(nóng)林10號(hào)、矮豐3號(hào)和矮孟牛等對(duì)我國(guó)小麥的矮化育種發(fā)揮了重要的作用。在過(guò)去的半個(gè)多世紀(jì)中，我國(guó)小麥品種的植株高度發(fā)生了明顯矮化，在上世紀(jì)50年代—70年代的30年中，植株高度從107.9cm降低到97.1cm；在1983—1993年期間，全國(guó)生產(chǎn)上推廣的小麥品種平均株高降為90.8cm，其中80cm以下的矮稈品種占14.7％，半矮稈和中稈品種占75.6％(董玉琛等，2000)。目前，我國(guó)生產(chǎn)上使用的小麥品種植株高度一般均不超過(guò)85cm，在黃淮麥區(qū)一般為75-80cm。因此，從60年來(lái)小麥品種生產(chǎn)應(yīng)用演進(jìn)歷史看，高產(chǎn)半矮稈小麥仍是當(dāng)前乃至今后較長(zhǎng)時(shí)間內(nèi)的小麥生產(chǎn)的主力品種，控制株高性狀基因作為產(chǎn)量重要相關(guān)性狀，在育種生產(chǎn)中仍具有極高的應(yīng)用價(jià)值，分子標(biāo)記育種技術(shù)近年來(lái)在育種生產(chǎn)中已逐步得到應(yīng)用，可以大幅提高傳統(tǒng)育種效率，有效縮短育種時(shí)間，因此分子標(biāo)記的開(kāi)發(fā)已成為小麥育種技術(shù)的必備技術(shù)。技術(shù)實(shí)現(xiàn)要素：本發(fā)明所要解決的技術(shù)問(wèn)題是如何檢測(cè)小麥的株高性狀。為解決上述技術(shù)問(wèn)題，本發(fā)明首先提供了小麥分子標(biāo)記4BL-699-1或4BL-699-2在鑒定或輔助鑒定小麥株高性狀中的應(yīng)用。本發(fā)明所提供的小麥分子標(biāo)記4BL-699-1或4BL-699-2在鑒定或輔助鑒定小麥株高性狀中的應(yīng)用中，所述4BL-699-1為小麥基因組中對(duì)應(yīng)于序列表中序列1的第108位的核苷酸，所述4BL-699-1為G或A；所述4BL-699-2為小麥基因組中對(duì)應(yīng)于序列表中序列2的第67位的核苷酸，所述4BL-699-2為C或T。為解決上述技術(shù)問(wèn)題，本發(fā)明還提供了鑒定或輔助鑒定小麥株高性狀的引物。本發(fā)明所提供的鑒定或輔助鑒定小麥株高性狀的引物，為能從小麥基因組DNA中擴(kuò)增出所述4BL-699-1或所述4BL-699-2的引物對(duì)或引物對(duì)組合物。上述述引物可為成套引物1或成套引物2；所述成套引物1由699-1-F1、699-1-F2和699-1-R組成；所述699-1-F1為如下a1)至a4)中的任一種：a1)序列表中序列3的第22-40位所示的單鏈DNA；a2)在a1)的5′端和/或3′端添加一個(gè)或幾個(gè)核苷酸得到的單鏈DNA；a3)與a1)或a2)限定的單鏈DNA具有85％以上的同一性的單鏈DNA；a4)在嚴(yán)格條件下與a1)或a2)限定的單鏈DNA雜交的單鏈DNA；所述699-1-F2為如下b1)至b4)中的任一種：b1)序列表中序列4的第22-40位所示的單鏈DNA；b2)在b1)的5′端和/或3′端添加一個(gè)或幾個(gè)核苷酸得到的單鏈DNA；b3)與b1)或b2)限定的單鏈DNA具有85％以上的同一性的單鏈DNA；b4)在嚴(yán)格條件下與b1)或b2)限定的單鏈DNA雜交的單鏈DNA；所述699-1-R為如下c1)至c4)中的任一種：c1)序列表中序列5所示的單鏈DNA；c2)在c1)的5′端和/或3′端添加一個(gè)或幾個(gè)核苷酸得到的單鏈DNA；c3)與c1)或c2)限定的單鏈DNA具有85％以上的同一性的單鏈DNA；c4)在嚴(yán)格條件下與c1)或c2)限定的單鏈DNA雜交的單鏈DNA；所述成套引物2由699-2-F1、699-2-F2和699-2-R組成；所述699-2-F1為如下d1)至d4)中的任一種：d1)序列表中序列6的第22-37位所示的單鏈DNA；d2)在d1)的5′端和/或3′端添加一個(gè)或幾個(gè)核苷酸得到的單鏈DNA；d3)與d1)或d2)限定的單鏈DNA具有85％以上的同一性的單鏈DNA；d4)在嚴(yán)格條件下與d1)或d2)限定的單鏈DNA雜交的單鏈DNA；所述699-2-F2為如下e1)至e4)中的任一種：e1)序列表中序列7的第22-37位所示的單鏈DNA；e2)在e1)的5′端和/或3′端添加一個(gè)或幾個(gè)核苷酸得到的單鏈DNA；e3)與e1)或e2)限定的單鏈DNA具有85％以上的同一性的單鏈DNA；e4)在嚴(yán)格條件下與e1)或e2)限定的單鏈DNA雜交的單鏈DNA；所述699-2-R為如下f1)至f4)中的任一種：f1)序列表中序列8所示的單鏈DNA；f2)在f1)的5′端和/或3′端添加一個(gè)或幾個(gè)核苷酸得到的單鏈DNA；f3)與f1)或f2)限定的單鏈DNA具有85％以上的同一性的單鏈DNA；f4)在嚴(yán)格條件下與f1)或f2)限定的單鏈DNA雜交的單鏈DNA。其中，序列1-序列8的第1位均為相應(yīng)序列的5′端。上述引物中，a2)所述單鏈DNA可為在序列3的第22-40位所示的單鏈DNA的5′端和/或3′端添加一至二十一個(gè)核苷酸得到的單鏈DNA。b2)所述單鏈DNA可為在序列4的第22-40位所示的單鏈DNA的5′端和/或3′端添加一至二十一個(gè)核苷酸得到的單鏈DNA。c2)所述單鏈DNA可為在序列5所示的序列的5′端和/或3′端添加一至二十一個(gè)核苷酸得到的單鏈DNA。d2)所述單鏈DNA可為在序列6的第22-37位所示的序列的5′端和/或3′端添加一至二十一個(gè)核苷酸得到的單鏈DNA。e2)所述單鏈DNA可為在序列7的第22-37位所示的序列的5′端和/或3′端添加一至二十一個(gè)核苷酸得到的單鏈DNA。c2)所述可為在序列8所示的序列的5′端和/或3′端添加一至二十一個(gè)核苷酸得到的單鏈DNA。這里使用的術(shù)語(yǔ)“同一性”指與天然核酸序列的序列相似性?！巴恍浴卑ㄅc本發(fā)明的序列3的第22-40位、序列4的第22-40位、序列5、序列6的第22-37位、序列7的第22-37位或序列8所示的核苷酸序列具有85％或更高，或90％或更高，或95％或更高同一性的核苷酸序列。同一性可以用肉眼或計(jì)算機(jī)軟件進(jìn)行評(píng)價(jià)。使用計(jì)算機(jī)軟件，兩個(gè)或多個(gè)序列之間的同一性可以用百分比(％)表示，其可以用來(lái)評(píng)價(jià)相關(guān)序列之間的同一性。上述引物中，所述嚴(yán)格條件是在2×SSC，0.1％SDS的溶液中，在68℃下雜交并洗膜2次，每次5min，又于0.5×SSC，0.1％SDS的溶液中，在68℃下雜交并洗膜2次，每次15min；或，0.1×SSPE(或0.1×SSC)、0.1％SDS的溶液中，65℃條件下雜交并洗膜。上述85％以上同一性，可為85％、90％或95％以上的同一性。上述引物中，所述699-1-F1可為序列表中序列3所示的單鏈DNA；所述699-1-F2可為序列表中序列4所示的單鏈DNA；所述699-2-F1可為序列表中序列5所示的單鏈DNA；所述699-2-F2可為序列表中序列6所示的單鏈DNA。上述引物中，所述699-1-F1、所述699-1-F2、所述699-2-F1和所述699-2-F2均可由熒光物質(zhì)標(biāo)記。所述熒光物質(zhì)可為FAM或HEX。所述699-1-F1和所述699-2-F1均可由FAM標(biāo)記，所述699-1-F2和所述699-2-F2均可由HEX標(biāo)記。在本發(fā)明的一個(gè)實(shí)施例中，F(xiàn)AM標(biāo)記在所述699-1-F1和所述699-2-F1的5′端，HEX標(biāo)記在所述699-1-F2和所述699-2-F2的5′端。所述成套引物1中，所述699-1-F1、所述699-1-F2和所述699-1-R的摩爾比可為1：1：1。所述成套引物1中各單鏈DNA均可獨(dú)立包裝。所述成套引物2中，所述699-2-F1、所述699-2-F2和所述699-2-R的摩爾比可為2：2：5。所述成套引物2中各單鏈DNA均可獨(dú)立包裝。為解決上述技術(shù)問(wèn)題，本發(fā)明還提供了下述A1)或A2)的方法：A1)鑒定或輔助鑒定小麥基因型的方法，所述基因型為GG基因型、GA基因型和AA基因型，所述方法包括：檢測(cè)待測(cè)小麥基因組中對(duì)應(yīng)于序列1的第108位的核苷酸，如所述待測(cè)小麥基因組中兩條染色體對(duì)應(yīng)于序列1的第108位的核苷酸均為G，所述待測(cè)小麥為GG基因型；如所述待測(cè)小麥基因組中兩條染色體對(duì)應(yīng)于序列1的第108位的核苷酸一條為G，另一條為A，所述待測(cè)小麥為GA基因型；如所述待測(cè)小麥基因組中兩條染色體對(duì)應(yīng)于序列1的第108位的核苷酸均為A，所述待測(cè)小麥為AA基因型；A2)鑒定或輔助鑒定小麥基因型的方法，所述基因型為CC基因型、CT基因型和TT基因型，所述方法包括：檢測(cè)待測(cè)小麥基因組中對(duì)應(yīng)于序列2的第67位的核苷酸，如所述待測(cè)小麥基因組中兩條染色體對(duì)應(yīng)于序列2的第67位的核苷酸均為C，所述待測(cè)小麥為CC基因型；如所述待測(cè)小麥基因組中兩條染色體對(duì)應(yīng)于序列2的第67位的核苷酸一條為C，另一條為T(mén)，所述待測(cè)小麥為CT基因型；如所述待測(cè)小麥基因組中兩條染色體對(duì)應(yīng)于序列2的第67位的核苷酸均為T(mén)，所述待測(cè)小麥為T(mén)T基因型。其中，GG基因型小麥的株高分別低于AA基因型小麥和GA基因型小麥，GA基因型小麥的株高低于AA基因型小麥。CC基因型小麥的株高分別低于TT基因型小麥和CT基因型小麥，CT基因型小麥的株高低于TT基因型小麥。在A1)所述鑒定或輔助鑒定小麥基因型的方法中，由于DNA分子由兩條互補(bǔ)的單鏈DNA組成，在檢測(cè)小麥基因組中對(duì)應(yīng)于序列1的第108位的核苷酸時(shí)，需考慮到該位點(diǎn)的側(cè)翼序列，如果該位點(diǎn)的側(cè)翼序列與序列1的第108位核苷酸的側(cè)翼序列在相同的位置是相同而不是互補(bǔ)關(guān)系時(shí)，檢測(cè)得到的該位點(diǎn)的核苷酸即為待測(cè)小麥基因組中對(duì)應(yīng)于序列1的第108位的核苷酸；如果該位點(diǎn)的側(cè)翼序列與序列1的第108位核苷酸的側(cè)翼序列在相同的位置而序列并不相同時(shí)，與檢測(cè)得到的該位點(diǎn)的核苷酸存在配對(duì)關(guān)系的脫氧核苷酸即為待測(cè)小麥基因組中對(duì)應(yīng)于序列1的第108位的核苷酸。所述相同位置是指小麥基因組中距離對(duì)應(yīng)于序列1的第108位核苷酸的長(zhǎng)度與序列1中距離第108位核苷酸的長(zhǎng)度相同的位置，當(dāng)然，由于序列1長(zhǎng)度有限，序列1中距離第108位核苷酸的長(zhǎng)度可延伸至序列1未顯示而小麥基因組中實(shí)際是序列1第108位核苷酸兩側(cè)的序列中。在A2)所述鑒定或輔助鑒定小麥基因型的方法中，由于DNA分子由兩條互補(bǔ)的單鏈DNA組成，在檢測(cè)小麥基因組中對(duì)應(yīng)于序列2的第67位的核苷酸時(shí)，需考慮到該位點(diǎn)的側(cè)翼序列，如果該位點(diǎn)的側(cè)翼序列與序列2的第67位核苷酸的側(cè)翼序列在相同的位置是相同而不是互補(bǔ)關(guān)系時(shí)，檢測(cè)得到的該位點(diǎn)的核苷酸即為待測(cè)小麥基因組中對(duì)應(yīng)于序列2的第67位的核苷酸；如果該位點(diǎn)的側(cè)翼序列與序列2的第67位核苷酸的側(cè)翼序列在相同的位置而序列并不相同時(shí)，與檢測(cè)得到的該位點(diǎn)的核苷酸存在配對(duì)關(guān)系的脫氧核苷酸即為待測(cè)小麥基因組中對(duì)應(yīng)于序列2的第67位的核苷酸。所述相同位置是指小麥基因組中距離對(duì)應(yīng)于序列2的第67位核苷酸的長(zhǎng)度與序列2中距離第67位核苷酸的長(zhǎng)度相同的位置，當(dāng)然，由于序列2長(zhǎng)度有限，序列2中距離第67位核苷酸的長(zhǎng)度可延伸至序列2未顯示而小麥基因組中實(shí)際是序列2第67位核苷酸兩側(cè)的序列中。上述方法中，所述檢測(cè)待測(cè)小麥基因組中對(duì)應(yīng)于序列1的第108位的核苷酸或所述檢測(cè)待測(cè)小麥基因組中對(duì)應(yīng)于序列2的第67位的核苷酸可利用所述引物進(jìn)行。所述檢測(cè)待測(cè)小麥基因組中對(duì)應(yīng)于序列1的第108位的核苷酸具體可利用所述成套引物1進(jìn)行。所述檢測(cè)待測(cè)小麥基因組中對(duì)應(yīng)于序列2的第67位的核苷酸可利用所述成套引物2進(jìn)行。更進(jìn)一步，利用所述成套引物1檢測(cè)待測(cè)小麥基因組中對(duì)應(yīng)于序列1的第108位的核苷酸可包括利用PCR或由PCR衍生的方法(如熒光PCR)檢測(cè)待測(cè)小麥基因組中對(duì)應(yīng)于序列1的第108位的核苷酸。所述檢測(cè)待測(cè)小麥基因組中對(duì)應(yīng)于序列1的第108位的核苷酸所用反應(yīng)體系(將其稱為反應(yīng)體系1)中所述699-1-F1、所述699-1-F2和所述699-1-R的濃度均可為1/3pmol/μl。所述反應(yīng)體系1具體可為：masterPCRMix(2X)3μl，所述待測(cè)小麥基因組DNA(100ng/μl)1μl，所述699-1-F1(20pmol/μl)0.1μl，所述699-1-F2(20pmol/μl)0.1μl，所述699-1-R(20pmol/μl)0.1μl，水1.7μl。masterPCRMix(2X)可為英國(guó)LGC公司產(chǎn)品。所述檢測(cè)待測(cè)小麥基因組中對(duì)應(yīng)于序列1的第108位的核苷酸所用退火溫度可為57℃。所述檢測(cè)待測(cè)小麥基因組中對(duì)應(yīng)于序列1的第108位的核苷酸所用反應(yīng)條件可為：step1:94℃,15minstep2:94℃,20secstep3:65℃,1min,-0.8℃/cyclestep4:Gotostep2,9moretimesstep5:94℃,20secstep6:57℃,1minstep7:Gotostep5,39cycles。利用所述成套引物2檢測(cè)待測(cè)小麥基因組中對(duì)應(yīng)于序列2的第67位的核苷酸可包括利用PCR或由PCR衍生的方法(如熒光PCR)檢測(cè)待測(cè)小麥基因組中對(duì)應(yīng)于序列2的第67位的核苷酸。所述檢測(cè)待測(cè)小麥基因組中對(duì)應(yīng)于序列2的第67位的核苷酸所用反應(yīng)體系(將其稱為反應(yīng)體系2)中所述699-2-F1、所述699-2-F2和所述699-2-R的濃度均可為1/3pmol/μl。所述反應(yīng)體系2具體可為：masterPCRMix(2X)3μl，所述待測(cè)小麥基因組DNA(100ng/μl)1μl，所述699-2-F1(12pmol/μl)0.1μl，所述699-2-F2(12pmol/μl)0.1μl，所述699-2-R(30pmol/μl)0.1μl，水1.7μl。masterPCRMix(2X)可為英國(guó)LGC公司產(chǎn)品。所述檢測(cè)待測(cè)小麥基因組中對(duì)應(yīng)于序列2的第67位的核苷酸所用退火溫度可為57℃。所述檢測(cè)待測(cè)小麥基因組中對(duì)應(yīng)于序列2的第67位的核苷酸所用反應(yīng)條件可為：step1:94℃,15minstep2:94℃,20secstep3:65℃,1min,-0.8℃/cyclestep4:Gotostep2,9moretimesstep5:94℃,20secstep6:57℃,1minstep7:Gotostep5,39cycles。上述方法中，所述檢測(cè)待測(cè)小麥基因組中對(duì)應(yīng)于序列1的第108位的核苷酸或所述檢測(cè)待測(cè)小麥基因組中對(duì)應(yīng)于序列2的第67位的核苷酸可利用熒光定量PCR儀(如ABI7500或BioredCFX96)或英國(guó)LGC公司的熒光酶標(biāo)檢測(cè)儀進(jìn)行。為解決上述技術(shù)問(wèn)題，本發(fā)明還提供了下述Y1)或Y2)：Y1)鑒定或輔助鑒定小麥株高性狀的方法，為下述B1)或B2)：B1)鑒定或輔助鑒定小麥株高性狀的方法，包括按照A1)所述鑒定或輔助鑒定小麥基因型的方法鑒定待測(cè)小麥的基因型，根據(jù)待測(cè)小麥的基因型確定所述待測(cè)小麥的株高性狀：GG基因型待測(cè)小麥的株高低于或候選低于AA基因型小麥的株高；GG基因型待測(cè)小麥的株高低于或候選低于GA基因型小麥的株高；GA基因型待測(cè)小麥的株高低于或候選低于AA基因型小麥的株高；B2)鑒定或輔助鑒定小麥株高性狀的方法，包括按照A2)所述鑒定或輔助鑒定小麥基因型的方法鑒定待測(cè)小麥的基因型，根據(jù)待測(cè)小麥的基因型確定所述待測(cè)小麥的株高性狀：CC基因型待測(cè)小麥的株高低于或候選低于TT基因型小麥的株高；CC基因型待測(cè)小麥的株高低于或候選低于CT基因型小麥的株高；CT基因型待測(cè)小麥的株高低于或候選低于TT基因型小麥的株高；Y2)小麥育種方法，按照所述鑒定或輔助鑒定小麥基因型的方法鑒定小麥的基因型，選擇GG基因型、GA基因型、CC基因型或CT基因型的小麥作為親本進(jìn)行育種。為解決上述技術(shù)問(wèn)題，本發(fā)明還提供了小麥分子標(biāo)記。本發(fā)明所提供的小麥分子標(biāo)記，為所述4BL-699-1或所述4BL-699-2。為解決上述技術(shù)問(wèn)題，本發(fā)明還提供了下述Ⅰ-Ⅴ中的任一種：Ⅰ、所述引物在下述Z1-Z5任一種中的應(yīng)用：Z1、鑒定或輔助鑒定小麥基因型；Z2、制備鑒定或輔助鑒定小麥基因型產(chǎn)品；Z3、鑒定或輔助鑒定小麥株高性狀；Z4、制備鑒定或輔助鑒定小麥株高性狀產(chǎn)品；Z5、小麥育種；Ⅱ、所述鑒定或輔助鑒定小麥基因型的方法在上述Z3或Z5中的應(yīng)用；Ⅲ、所述鑒定或輔助鑒定小麥株高性狀的方法在上述Z5中的應(yīng)用；Ⅳ、所述小麥分子標(biāo)記在上述Z5中的應(yīng)用；Ⅴ、檢測(cè)所述小麥分子標(biāo)記的物質(zhì)在上述Z1-Z5任一種中的應(yīng)用。實(shí)驗(yàn)證明，小麥分子標(biāo)記4BL-699-1及其對(duì)應(yīng)的三個(gè)基因型(GG基因型、GA基因型和AA基因型)與小麥株高性狀相關(guān)：GG基因型小麥的株高為42-61cm，平均為48.9cm；GA基因型小麥的株高為78-93cm，平均為85.8cm；AA基因型小麥的株高為108-131cm，平均為122.2cm。GG基因型小麥的株高分別顯著低于GA基因型小麥和AA基因型小麥，GA基因型小麥的株高低于AA基因型小麥。小麥分子標(biāo)記4BL-699-2及其對(duì)應(yīng)的三個(gè)基因型(CC基因型、CT基因型和TT基因型)與小麥株高性狀相關(guān)：CC基因型小麥的株高為42-61cm，平均為48.9cm；CT基因型小麥的株高為78-93cm，平均為85.8cm；TT基因型小麥的株高為108-131cm，平均為122.2cm。CC基因型小麥的株高分別顯著低于CT基因型小麥和TT基因型小麥，CT基因型小麥的株高低于TT基因型小麥。表明，可以利用小麥分子標(biāo)記4BL-699-1及其對(duì)應(yīng)的三個(gè)基因型或小麥分子標(biāo)記4BL-699-2及其對(duì)應(yīng)的三個(gè)基因型鑒定小麥的株高性狀。附圖說(shuō)明圖1為4BL-699-1位點(diǎn)小麥基因型的分型結(jié)果。其中，SNP699-1-G表示4BL-699-1-G，SNP699-1-A表示4BL-699-1-A，CK表示無(wú)模板對(duì)照，即用超純水替代樣本DNA，檢測(cè)是否實(shí)驗(yàn)出現(xiàn)樣本污染。具體實(shí)施方式下面結(jié)合具體實(shí)施方式對(duì)本發(fā)明進(jìn)行進(jìn)一步的詳細(xì)描述，給出的實(shí)施例僅為了闡明本發(fā)明，而不是為了限制本發(fā)明的范圍。下述實(shí)施例中的實(shí)驗(yàn)方法，如無(wú)特殊說(shuō)明，均為常規(guī)方法。下述實(shí)施例中所用的材料、試劑等，如無(wú)特殊說(shuō)明，均可從商業(yè)途徑得到。實(shí)施例1、4BL-699-1與4BL-699-2為與小麥株高性狀相關(guān)的小麥分子標(biāo)記本發(fā)明的發(fā)明人發(fā)現(xiàn)了兩個(gè)與小麥株高相關(guān)的分子標(biāo)記，將這兩個(gè)分子標(biāo)記分別命名為4BL-699-1與4BL-699-2。4BL-699-1為小麥基因組中對(duì)應(yīng)于序列表中序列1的第108位的核苷酸，4BL-699-1為G或A；4BL-699-2為小麥基因組中對(duì)應(yīng)于序列表中序列2的第67位的核苷酸，4BL-699-2為C或T。一、4BL-699-1與小麥株高性狀相關(guān)1、依據(jù)4BL-699-1確定小麥的基因型將基因組中兩條染色體對(duì)應(yīng)于序列表中序列1的第108位核苷酸均為G的小麥的基因型定義為GG基因型，將基因組中兩條染色體對(duì)應(yīng)于序列表中序列1的第108位核苷酸均為A的小麥的基因型定義為AA基因型，將基因組中兩條染色體中一條染色體對(duì)應(yīng)于序列1的第108位核苷酸為G、另一條染色體對(duì)應(yīng)于序列1的第108位核苷酸為A的小麥的基因型定義為GA基因型。選取42份小麥材料(表1)，分別提取各小麥品種的基因組DNA，按照如下方法利用成套引物1與熒光定量PCR儀ABI7500檢測(cè)各小麥基因組中對(duì)應(yīng)于序列表中序列1的第108位核苷酸，確定小麥的基因型。這42份小麥材料為矮稈突變體材料07H508(河南省農(nóng)業(yè)科學(xué)院農(nóng)作物種質(zhì)資源庫(kù)，編號(hào)：豫選930；國(guó)家種質(zhì)資源庫(kù)，編號(hào)：ZM27696)與中國(guó)春(劉登才等，小麥中國(guó)春遺傳背景的育種改良，中國(guó)農(nóng)業(yè)科學(xué)，2003,36(11)：1383-1389)的雜交F3代。成套引物1中各引物的序列如下：699-1-F1：GAAGGTGACCAAGTTCATGCTAATAATTCTAATTGTTGTG-FAM(序列3)699-1-F2：GAAGGTCGGAGTCAACGGATTAATAATTCTAATTGTTGTA-HEX(序列4)699-1-R：TACAGACCCGCTCGTGAACCG(序列5)其中，699-1-F1的5′端由FAM標(biāo)記，699-1-F2的5′端由HEX標(biāo)記。成套引物1中，699-1-F1、699-1-F2和699-1-R均獨(dú)立包裝，699-1-F1、699-1-F2和699-1-R的摩爾比為1：1：1。反應(yīng)體系：反應(yīng)條件：step1:94℃,15minstep2:94℃,20secstep3:65℃,1min,-0.8℃/cyclestep4:Gotostep2,9moretimesstep5:94℃,20secstep6:57℃,1minstep7:Gotostep5,39cycles結(jié)果如圖1和表1所示。2、小麥基因型與株高的相關(guān)性分析統(tǒng)計(jì)在河南新鄉(xiāng)(原陽(yáng)，河南省農(nóng)業(yè)科學(xué)院實(shí)驗(yàn)基地)生長(zhǎng)至成熟期的各小麥的株高(表1)，分析小麥基因型與株高的相關(guān)性。表1、小麥品種基因型與株高的相關(guān)性品系名稱基因型株高/cm品系名稱基因型株高/cm07H-276AA127L1GG4807H-278AA118L2GG4207H-295AA121L5GG5107H-297AA120L6GG4307H-306AA121L7GG5507H-307AA121L9GG4607H-311AA120L10GG6107H-318AA124L11GG4607H-331AA131L67GG5107H-332AA117L16GG4907H-333AA120L17GG5307H-335AA118L24GG4307H-337AA125L32GG4207H-338AA108L25GG5607H-342AA123L26GG5107H-343AA131L28GG4507H-344AA125L30GG4507H-345AA130L31GG54L-40GA83L-51GA91L-27GA80L-76GA90L-91GA93L-78GA78結(jié)果顯示，GG基因型小麥的株高為42-61cm，平均為48.9cm；GA基因型小麥的株高為78-93cm，平均為85.8cm；AA基因型小麥的株高為108-131cm，平均為122.2cm。GG基因型小麥的株高分別顯著低于GA基因型小麥和AA基因型小麥，GA基因型小麥的株高低于AA基因型小麥。表明，小麥的GG基因型、GA基因型和AA基因型與株高相關(guān)，可以利用分子標(biāo)記4BL-699-1與這三個(gè)基因型鑒定小麥的株高性狀。二、4BL-699-2與小麥株高性狀相關(guān)1、依據(jù)4BL-699-2確定小麥的基因型將基因組中兩條染色體對(duì)應(yīng)于序列表中序列2的第67位核苷酸均為C的小麥的基因型定義為CC基因型，將基因組中兩條染色體對(duì)應(yīng)于序列表中序列2的第67位核苷酸均為T(mén)的小麥的基因型定義為T(mén)T基因型，將基因組中兩條染色體中一條染色體對(duì)應(yīng)于序列2的第67位核苷酸為C、另一條染色體對(duì)應(yīng)于序列2的第67位核苷酸為T(mén)的小麥的基因型定義為CT基因型。選取42份小麥品種(表2)，分別提取各小麥品種的基因組DNA，按照如下方法利用成套引物2與熒光定量PCR儀ABI7500檢測(cè)各小麥基因組中對(duì)應(yīng)于序列表中序列2的第67位核苷酸，確定小麥的基因型。這42份小麥材料為矮稈突變體材料07H508與中國(guó)春的雜交F3代。成套引物2中各引物的序列如下：699-2-F1：GAAGGTGACCAAGTTCATGCTTGTTGCTCAGTTTTCC-FAM(序列6)699-2-F2：GAAGGTCGGAGTCAACGGATTTGTTGCTCAGTTTTCT-HEX(序列7)699-2-R：TGAATTGAATCATCCATGTTG(序列8)其中，699-2-F1的5′端由FAM標(biāo)記，699-2-F2的5′端由HEX標(biāo)記。成套引物1中，699-2-F1、699-2-F2和699-2-R均獨(dú)立包裝，699-2-F1、699-2-F2和699-2-R的摩爾比為2：2：5。反應(yīng)體系：反應(yīng)條件：step1:94℃,15minstep2:94℃,20secstep3:65℃,1min,-0.8℃/cyclestep4:Gotostep2,9moretimesstep5:94℃,20secstep6:57℃,1minstep7:Gotostep5,39cycles結(jié)果如表2所示。2、小麥基因型與株高的相關(guān)性分析統(tǒng)計(jì)在河南新鄉(xiāng)(原陽(yáng)，河南省農(nóng)業(yè)科學(xué)院實(shí)驗(yàn)基地)生長(zhǎng)至成熟期的各小麥的株高(表2)，分析小麥基因型與株高的相關(guān)性。表2、小麥品種基因型與株高的相關(guān)性品系名稱基因型株高/cm品系名稱基因型株高/cm07H-276TT127L1CC4807H-278TT118L2CC4207H-295TT121L5CC5107H-297TT120L6CC4307H-306TT121L7CC5507H-307TT121L9CC4607H-311TT120L10CC6107H-318TT124L11CC4607H-331TT131L67CC5107H-332TT117L16CC4907H-333TT120L17CC5307H-335TT118L24CC4307H-337TT125L32CC4207H-338TT108L25CC5607H-342TT123L26CC5107H-343TT131L28CC4507H-344TT125L30CC4507H-345TT130L31CC54L-40CT83L-51CT91L-27CT80L-76CT90L-91CT93L-78CT78結(jié)果顯示，CC基因型小麥的株高為42-61cm，平均為48.9cm；CT基因型小麥的株高為78-93cm，平均為85.8cm；TT基因型小麥的株高為108-131cm，平均為122.2cm。CC基因型小麥的株高分別顯著低于CT基因型小麥和TT基因型小麥，CT基因型小麥的株高低于TT基因型小麥。表明，小麥的CC基因型、CT基因型和TT基因型與株高相關(guān)，可以利用分子標(biāo)記4BL-699-2與這三個(gè)基因型鑒定小麥的株高性狀。<110>河南省農(nóng)業(yè)科學(xué)院小麥研究所<120>小麥分子標(biāo)記4BL-699-1和4BL-699-2在鑒定小麥株高性狀中的應(yīng)用<160>8<170>PatentInversion3.5<210>1<211>401<212>DNA<213>小麥（Triticumaestivum.）<400>1ggacaacaaccataacaaacagttcaaacttggtagtattatctttgtgaaagtgcgaca60aatgtgctgatcgtgtgcgtcctaagaataataattctaattgttgtgcatgttgatact120gtggcactgatagaacgagcgaatgcattgcttgttttaagtataaatttctattaaaac180taattaaatttaagtaaactgacaactaactcctgttattacagtaccaatacagacccg240ctcgtgaaccgacgtgtggccggagtaggtttcgtaatggaggcgtttgaatgtgccgag300ggtgcatcttctgccgggcgtgcagcagacgatggaggggtagtaactgttgtcgcctgt360aaacactcagcttaatgttgaatccagttccccaagagctg401<210>2<211>401<212>DNA<213>小麥（Triticumaestivum.）<400>2ttatatccaaattatacttgaacattccatgagcttcacaaccgaccttgatgttgctca60gttttcccattgcaactaatgaagaagaagttgctagctaatgggacattgcttcatttt120gggtgaactgcacaaaaaggtaccatgaattgaatcatccatgttggtgactggtgtcat180ttctatgatggcgttgactacagatatggttcccatcacgaggtatgttcctttttggtc240cgaccgtttgctatcgtgcatgttgagtctgctcttgtgctactgtttgggcactaccat300gataaagcagtaatgttattattttgcaccttaatctagtggccctattaatttgaagca360atgttttggcaccgctagtgccactgatattttatatattg401<210>3<211>40<212>DNA<213>人工序列<220><223><400>3gaaggtgaccaagttcatgctaataattctaattgttgtg40<210>4<211>40<212>DNA<213>人工序列<220><223><400>4gaaggtcggagtcaacggattaataattctaattgttgta40<210>5<211>21<212>DNA<213>人工序列<220><223><400>5tacagacccgctcgtgaaccg21<210>6<211>37<212>DNA<213>人工序列<220><223><400>6gaaggtgaccaagttcatgcttgttgctcagttttcc37<210>7<211>37<212>DNA<213>人工序列<220><223><400>7gaaggtcggagtcaacggatttgttgctcagttttct37<210>8<211>21<212>DNA<213>人工序列<220><223><400>8tgaattgaatcatccatgttg21當(dāng)前第1頁(yè)1 2 3