本發(fā)明涉及一種新型DNA穩(wěn)定溶液，屬于生物技術(shù)領(lǐng)域。

背景技術(shù)：

DNA是染色體的重要組成充分，是真核生物的遺傳基本物質(zhì)，含有物種個(gè)體的遺傳信息，可用于構(gòu)建基因組文庫、分離所需的基因和檢測(cè)相關(guān)的分子標(biāo)記等。由于DNA所含的遺傳信息量大，并且容易獲取，具有極其穩(wěn)定的化學(xué)性質(zhì)，是目前種質(zhì)資源和遺傳資源收集和保存的主要內(nèi)容之一。

DNA分子的序列結(jié)構(gòu)具有三個(gè)重要特性：(1)不同個(gè)體序列不一樣；(2)終生不變；(3)同一人體各不同部位細(xì)胞中的DNA序列相同。因此DNA分子本身具備檔案的特性，即具有長(zhǎng)期穩(wěn)定性、信息屬性、個(gè)體特異性和可以備查的屬性。

實(shí)際上，在疾病基因組學(xué)、藥物基因組學(xué)、群體遺傳學(xué)和進(jìn)化等研究領(lǐng)域，DNA是最可靠的證據(jù)和研究過程的基本材料，被廣泛應(yīng)用。同時(shí)生命科學(xué)研究者日益認(rèn)識(shí)到保存DNA對(duì)于今后系統(tǒng)生物醫(yī)學(xué)的發(fā)展的重要性，各國(guó)紛紛開始保存DNA。

DNA是由許多脫氧核苷酸殘基按一定順序彼此用3’，5’-磷酸二酯鍵相連構(gòu)成的長(zhǎng)鏈，形成鏈的作用力是磷酸二酯鍵，易被酸水解；另外，大多數(shù)DNA含有兩條這樣的長(zhǎng)鏈，兩條鏈間以氫鍵相連接，氫鍵在酸性環(huán)境內(nèi)易開鍵，也會(huì)造成DNA的降解。

為了維持DNA結(jié)構(gòu)的完整性，避免DNA大規(guī)模斷裂和降解，DNA最佳保存方法是干粉-80℃或者液氮低溫保存，但要制成干粉則需要大量的DNA，取材困難，在實(shí)際DNA樣本資源收集中不具有操作性。而用無水乙醇保存DNA，雖然可以事先分裝保存，但也存在反復(fù)凍融問題。而固相DNA保存技術(shù)是最近提出的新概念，適用于永久保存，并且這種方法的保存基質(zhì)是否影響DNA后續(xù)實(shí)驗(yàn)、保存具體效果，目前無這方面的任何數(shù)據(jù)，尚有待時(shí)間考驗(yàn)。并且對(duì)于保存期間需要多次使用的樣本，需要重新提取DNA，操作復(fù)雜，并且容易導(dǎo)致DNA斷裂，將導(dǎo)致一些對(duì)DNA質(zhì)量要求高的檢測(cè)實(shí)驗(yàn)無法進(jìn)行。

現(xiàn)有的許多DNA保存的方法是溶解在TE緩沖液或者雙蒸水中，在-20℃或-80℃下長(zhǎng)期保存，這兩種保存方法隨著時(shí)間的推移，DNA會(huì)有降解。

現(xiàn)有技術(shù)中，中國(guó)專利申請(qǐng)CN 102559654A公開了一種DNA保存溶劑，該DNA保存溶劑的組分包括：甘油、TE緩沖液、1-羧基-N，N，N-三甲基乙內(nèi)酯，其中，甘油的終體積為25％～80％，TE緩沖液的終濃度為1×TE～5×TE，1-羧基-N，N，N-三甲基乙內(nèi)酯的終濃度為1～6mol/L。這種DNA保存溶液，組分較多，溶液配置復(fù)雜，成本較高。

技術(shù)實(shí)現(xiàn)要素：

本發(fā)明的目的在于克服現(xiàn)有技術(shù)中存在的上述不足，而提供一種轉(zhuǎn)染融合度高，成分簡(jiǎn)單，DNA結(jié)構(gòu)保持穩(wěn)定，不易降解的新型DNA穩(wěn)定溶液。

本發(fā)明解決上述問題所采用的技術(shù)方案是：該新型DNA穩(wěn)定溶液，其特征在于，由以下成分配比組成：

磷酸鉀 0.1M，

葡萄糖 10mM，

乙二胺四乙酸二鈉 10mM，

其溶劑為水。

本發(fā)明所述DNA保存溫度為-20℃或-80℃。

一所述新型DNA穩(wěn)定溶液的制備方法，其特征在于，包括以下步驟：將磷酸鉀、葡萄糖、乙二胺四乙酸二鈉按比例加入水中，并混合均勻。

本發(fā)明的優(yōu)點(diǎn)為：溶解在這種新型溶液中的血液基因組、質(zhì)粒DNA以及植物基因組，在-20℃或-80℃下保存三年不降解。但是同樣的DNA溶解在TE緩沖液中會(huì)部分降解，本發(fā)明可以很好的使DNA保持穩(wěn)定，解決了被降解的弊端。具體優(yōu)點(diǎn)為：

1、磷酸鉀用于緩沖系統(tǒng)符合細(xì)胞內(nèi)環(huán)境的生理范圍(pKa＝7.2)，可以保持DNA的穩(wěn)定；

2、葡萄糖可以增加溶液的粘度，維持滲透壓，防止DNA受機(jī)械剪切力作用而降解；

3、乙二胺四乙酸二鈉又叫做EDTA-2Na，是化學(xué)中一種良好的配合劑，它有六個(gè)配位原子，形成的配合物叫做鰲合物，在本體系中它與DNA水解酶的激活因子(Mg²⁺)結(jié)合，從而阻止DNA分子的降解。

附圖說明

為了更清楚地說明本發(fā)明實(shí)施例或現(xiàn)有技術(shù)中的技術(shù)方案，下面將對(duì)實(shí)施例或現(xiàn)有技術(shù)描述中所需要使用的附圖作簡(jiǎn)單地介紹，顯而易見地，下面描述中的附圖僅僅是本發(fā)明的一些實(shí)施例，對(duì)于本領(lǐng)域普通技術(shù)人員來講，在不付出創(chuàng)造性勞動(dòng)性的前提下，還可以根據(jù)這些附圖獲得其他的附圖。

圖1是對(duì)比實(shí)驗(yàn)1的瓊脂糖凝膠檢測(cè)圖。

圖2是對(duì)比實(shí)驗(yàn)2的瓊脂糖凝膠檢測(cè)圖。

圖3是對(duì)比實(shí)驗(yàn)3的瓊脂糖凝膠檢測(cè)圖。

圖4是對(duì)比實(shí)驗(yàn)4的瓊脂糖凝膠檢測(cè)圖。

具體實(shí)施方式

下面結(jié)合附圖并通過實(shí)施例對(duì)本發(fā)明作進(jìn)一步的詳細(xì)說明，以下實(shí)施例是對(duì)本發(fā)明的解釋而本發(fā)明并不局限于以下實(shí)施例。

實(shí)施例1。

本實(shí)施例的新型DNA穩(wěn)定溶液由以下成分配比組成：

磷酸鉀 0.1M，

葡萄糖 10mM，

乙二胺四乙酸二鈉 10mM，

其溶劑為水。

本處的0.1M指的是1升溶液含0.1摩爾溶質(zhì)，10mM指的是1升溶液含10毫摩爾溶質(zhì)。

DNA保存溫度為-20℃或-80℃。

參見圖1，比較實(shí)驗(yàn)1：

將本實(shí)施例中的新型DNA穩(wěn)定溶液與TE溶液分別在-20℃下保存DNA一年后的對(duì)比。

1％瓊脂糖凝膠上樣5ul如下表

序號(hào)1-3為-20℃TE溶液保存DNA一年。

序號(hào)4-6為-20℃新型DNA穩(wěn)定溶液保存DNA一年。

通過比較實(shí)驗(yàn)1可看出，-20℃新型DNA穩(wěn)定溶液保存DNA一年后和-20℃TE溶液保存DNA一年后，前者的濃度明顯高于后者，-20℃新型DNA穩(wěn)定溶液保存DNA一年后，基本無降解。

參見圖2，比較實(shí)驗(yàn)2：

將本實(shí)施例中的新型DNA穩(wěn)定溶液與TE溶液分別在-20℃下保存DNA兩年后的對(duì)比。

1％瓊脂糖凝膠上樣5ul如下表

序號(hào)1-3為-20℃TE溶液保存DNA兩年。

序號(hào)4-6為-20℃新型DNA穩(wěn)定溶液保存DNA兩年。

通過比較實(shí)驗(yàn)2可看出，-20℃新型DNA穩(wěn)定溶液保存DNA兩年后和-20℃TE溶液保存DNA兩年后，前者的濃度明顯高于后者，-20℃新型DNA穩(wěn)定溶液保存DNA兩年后，基本無降解。

參見圖3，比較實(shí)驗(yàn)3：

將本實(shí)施例中的新型DNA穩(wěn)定溶液與TE溶液在-80℃下分別保存DNA三年后的對(duì)比。

1％瓊脂糖凝膠上樣5ul

序號(hào)1-3為-80℃TE溶液保存DNA三年。

序號(hào)4-6為-280℃新型DNA穩(wěn)定溶液保存DNA三年。

通過比較實(shí)驗(yàn)3可看出，-80℃新型DNA穩(wěn)定溶液保存DNA三年后和-80℃TE溶液保存DNA三年后，前者的濃度明顯高于后者，-80℃新型DNA穩(wěn)定溶液保存DNA三年后，基本無降解。

參見圖4，比較實(shí)驗(yàn)4：

序號(hào)1-2為-80℃新型DNA穩(wěn)定溶液保存DNA一年。

序號(hào)3-4為-20℃新型DNA穩(wěn)定溶液保存DNA一年。

序號(hào)5-6為-20℃TE溶液保存一年。

通過比較實(shí)驗(yàn)4可看出，-80℃新型DNA穩(wěn)定溶液保存DNA一年后相比-20℃新型DNA穩(wěn)定溶液保存DNA一年后，前者的核酸濃度稍高，在-80℃下，DNA更穩(wěn)定，但是差別也不大。而-20℃TE溶液保存一年，則濃度明顯降低，發(fā)生了降解。

通過上述比較實(shí)驗(yàn)，本發(fā)明的新型DNA穩(wěn)定溶液，配比簡(jiǎn)單，制作方便，DNA在該溶液中保存，使其更加穩(wěn)定，不易降解。

本實(shí)施例中比較實(shí)驗(yàn)的表格中，OD260指的是核酸的吸光度，用于反應(yīng)溶液中核酸的濃度。260/280代表核酸的吸光度與蛋白質(zhì)的吸光度的比值，即核酸純度，用于估算核酸的純度。260/230代表核酸的吸光度與樣品中純?cè)诘奈廴疚锏谋戎担慈}程度。

實(shí)施例2。

本實(shí)施例的新型DNA穩(wěn)定溶液的制備方法，包括以下步驟：將磷酸鉀、葡萄糖、乙二胺四乙酸二鈉按比例加入水中，并混合均勻。

本說明書中所描述的以上內(nèi)容僅僅是對(duì)本發(fā)明所作的舉例說明。本發(fā)明所屬技術(shù)領(lǐng)域的技術(shù)人員可以對(duì)所描述的具體實(shí)施例做各種各樣的修改或補(bǔ)充或采用類似的方式替代，只要不偏離本發(fā)明說明書的內(nèi)容或者超越本權(quán)利要求書所定義的范圍，均應(yīng)屬于本發(fā)明的保護(hù)范圍。