本發(fā)明屬于生物醫(yī)藥技術(shù)領(lǐng)域，涉及一種抗腫瘤的化合物，特別涉及一種具有抗腫瘤活性的二芳基脲類化合物及其制備方法和應(yīng)用。
背景技術(shù)：
惡性腫瘤作為全球較大的公共衛(wèi)生問(wèn)題之一，極大地危害人類的健康，并將成為新世紀(jì)人類的第一殺手。惡性腫瘤已不再只是發(fā)達(dá)工業(yè)國(guó)家的嚴(yán)重疾病，發(fā)展中國(guó)家面臨著更大的疾病負(fù)擔(dān)?；瘜W(xué)藥物治療作為治療腫瘤的重要手段之一，在近三十年已經(jīng)有了巨大的發(fā)展和進(jìn)步，得到了一大批具有不同作用機(jī)制的臨床抗腫瘤藥物。但是抗腫瘤藥也存在許多不良反應(yīng)，比如脫發(fā)，嘔吐，產(chǎn)生骨髓抑制，快速產(chǎn)生耐藥性等等，這些都導(dǎo)致化學(xué)藥物無(wú)法達(dá)到預(yù)期的治療效果。因此新的抗腫瘤藥物的研究與開(kāi)發(fā)是目前藥學(xué)領(lǐng)域的熱點(diǎn)和難點(diǎn)問(wèn)題之一。
技術(shù)實(shí)現(xiàn)要素：
本發(fā)明的目的在于提供一種具有抗腫瘤活性的二芳基脲類化合物及其制備方法和應(yīng)用，該化合物在體外體現(xiàn)出很好的抗腫瘤活性，能夠應(yīng)用于抗腫瘤藥物的制備。
為達(dá)到上述目的，本發(fā)明采用的技術(shù)方案為：
一種具有抗腫瘤活性的二芳基脲類化合物，其化學(xué)結(jié)構(gòu)式如下：
其中，R1為氫或鹵素基團(tuán)，R2為異丁基或鹵素基團(tuán)。
所述的鹵素基團(tuán)為氟原子、氯原子、三氟甲基或三氟甲氧基。
所述的具有抗腫瘤活性的二芳基脲類化合物的制備方法，包括以下步驟：
1)帶有單取代基或雙取代基的苯胺與雙(三氯甲基)碳酸酯反應(yīng)形成異氰酸酯，再與4-氨基苯硼酸頻哪醇酯縮合反應(yīng)得到帶有單取代基或雙取代基的脲類化合物；
2)在四(三苯基膦)鈀反應(yīng)催化下，將帶有單取代基或雙取代基的脲類化合物與2-氨基-6-溴吡啶通過(guò)Suzuki反應(yīng)得到二芳基脲類化合物中間體；
3)二芳基脲類化合物中間體與環(huán)丙甲酰氯通過(guò)酰化反應(yīng)得到具有抗腫瘤活性的二芳基脲類化合物。
所述步驟1)的具體操作為：在冰浴條件下，用重蒸二氯甲烷將雙(三氯甲基)碳酸酯溶解并攪拌均勻，向其中滴加帶有單取代基或雙取代基的苯胺的二氯甲烷溶液，滴加完畢后攪拌均勻，然后向其中繼續(xù)滴加三乙胺的二氯甲烷溶液，滴加完畢后繼續(xù)攪拌均勻，再向其中滴加三乙胺的二氯甲烷溶液和4-氨基苯硼酸頻哪醇酯，滴加完畢后攪拌反應(yīng)，反應(yīng)結(jié)束后，將反應(yīng)液洗滌、干燥后減壓蒸去溶劑得粗品，用層析柱分離粗品得到帶有單取代基或雙取代基的脲類化合物。
所述步驟2)的具體操作為：將帶有單取代基或雙取代基的脲類化合物、2-氨基-6-溴吡啶、無(wú)水碳酸鉀、四(三苯基膦)鈀溶于乙腈和水的混合溶液中，在氮?dú)獗Ｗo(hù)下于90℃反應(yīng)過(guò)夜，反應(yīng)結(jié)束后，冷卻至室溫，用乙酸乙酯萃取，萃取的有機(jī)相經(jīng)洗滌、干燥后減壓蒸去溶劑得粗品，用層析柱分離粗品得到二芳基脲類化合物中間體。
所述步驟3)的具體操作為：在冰浴條件下，將二芳基脲類化合物中間體溶于無(wú)水四氫呋喃中，向其中滴加無(wú)水三乙胺，攪拌均勻，再向其中滴加環(huán)丙甲酰氯，滴加完畢后，撤去冰浴，室溫下攪拌進(jìn)行反應(yīng)，反應(yīng)結(jié)束后，將反應(yīng)液減壓蒸去溶劑得到粗品，用層析柱分離粗品得到具有抗腫瘤活性的二芳基脲類化合物。
所述的具有抗腫瘤活性的二芳基脲類化合物在制備抑制VEGFR-2激酶活性的藥物中的應(yīng)用。
所述的具有抗腫瘤活性的二芳基脲類化合物在制備以VEGFR-2激酶為靶點(diǎn)的抗腫瘤藥物中的應(yīng)用。
相對(duì)于現(xiàn)有技術(shù)，本發(fā)明的有益效果為：
本發(fā)明提供的具有抗腫瘤活性的二芳基脲類化合物，是一種新型的具有抗腫瘤活性的化合物，其對(duì)VEGFR-2激酶有很好的抑制活性，可用于制備抑制VEGFR-2激酶活性的藥物和以VEGFR-2激酶為靶點(diǎn)的抗腫瘤藥物。具體的，本發(fā)明提供的具有抗腫瘤活性的二芳基脲類化合物，能夠抑制VEGFR-2激酶的活性。而血管生成與腫瘤的發(fā)生、發(fā)展和遷移都有密切關(guān)系，抑制新生血管的形成可以有效的抑制腫瘤的生長(zhǎng)和遷移，許多生長(zhǎng)因子調(diào)控新生血管生成，其中VEGFR-2是已知的最強(qiáng)的正調(diào)控因子。因此本發(fā)明提供的具有抗腫瘤活性的二芳基脲類化合物通過(guò)抑制VEGFR-2激酶的活性，阻斷其誘導(dǎo)的信號(hào)通路，抑制腫瘤細(xì)胞的增生和遷移，從而可應(yīng)用于抗腫瘤藥物的制備。
本發(fā)明提供的具有抗腫瘤活性的二芳基脲類化合物的制備方法，通過(guò)帶有取代基的苯胺與雙(三氯甲基)碳酸酯形成異氰酸酯，再與4-氨基苯硼酸頻哪醇酯縮合反應(yīng)得到帶有取代基的脲類化合物，將苯胺中的取代基引入到脲類化合物上，然后該脲類化合物與2-氨基-6-溴吡啶通過(guò)Suzuki反應(yīng)得到二芳基脲類化合物中間體，再與環(huán)丙甲酰氯通過(guò)?；磻?yīng)即得到具有抗腫瘤活性的二芳基脲類化合物，具有原料易得，反應(yīng)條件溫和，反應(yīng)過(guò)程操作簡(jiǎn)單，所用試劑便宜的優(yōu)點(diǎn)。
附圖說(shuō)明
圖1為本發(fā)明提供的具有抗腫瘤活性的二芳基脲類化合物的合成路線圖；
其中化合物1為4-氨基苯硼酸頻哪醇酯，化合物2為帶有單取代基或雙取代基的脲類化合物，化合物3為2-氨基-6-溴吡啶；化合物為4為二芳基脲類化合物中間體，即1-(4-(6-氨基吡啶-2-基)苯基)二芳基脲，化合物5為目標(biāo)化合物，即具有抗腫瘤活性的二芳基脲類化合物。
圖中標(biāo)注的具體為：
a.R-NH2,BTC,Et3N,DCM,rt；b.Pd(PPh3)4,K2CO3,H2O,CH3CN,90℃；c.Cyclopropanecarbonyl chloride,Et3N,THF,0℃to rt.
具體實(shí)施方式
下面結(jié)合具體的實(shí)施例對(duì)本發(fā)明做進(jìn)一步的詳細(xì)說(shuō)明，所述是對(duì)本發(fā)明的解釋而不是限定。
本發(fā)明提供了一種具有抗腫瘤活性的二芳基脲類化合物，該二芳基脲類化合物在體外具有抗腫瘤活性，可應(yīng)用于抗腫瘤藥物的制備，其化學(xué)結(jié)構(gòu)式為：
其中，R1為氫或鹵素基團(tuán)，R2為異丁基或鹵素基團(tuán)。所述的鹵素基團(tuán)為氟原子，氯原子，三氟甲基，三氟甲氧基。而且本發(fā)明提供的具有抗腫瘤活性的二芳基脲類化合物的吡啶環(huán)上連接有環(huán)丙甲酰胺結(jié)構(gòu)。
下面結(jié)合圖1中所示的合成路線和具體的合成實(shí)施例來(lái)詳細(xì)說(shuō)明具有本發(fā)明的抗腫瘤候選藥物二芳基脲類化合物的制備和活性篩選方法。
實(shí)施例1
該具有抗腫瘤活性的二芳基脲類化合物的結(jié)構(gòu)式中，R1為Cl，R2為CF3，通過(guò)以下步驟制備(參見(jiàn)圖1)：
1)4-氨基苯硼酸頻哪醇酯(化合物1)與4-氯-3-三氟甲基苯胺制備化合物1-(4-氯-3-三氟甲基)苯基)-3-(4-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧硼戊環(huán)-2-基)苯基)脲(化合物2)
在冰浴條件下，用20mL重蒸二氯甲烷將0.80g(2.74mmol)雙(三氯甲基)碳酸酯(BTC)溶解并攪拌5min，再緩慢滴加1.10g(6.85.mmol)4-氯-3-三氟甲基苯胺的二氯甲烷溶液，滴加完畢后攪拌15min，向渾濁液中繼續(xù)滴加1.1mL(8.22mmol)三乙胺的二氯甲烷溶液10mL，滴加完畢后繼續(xù)攪拌15min，然后向反應(yīng)溶液中滴加1.50g(6.85mmol)4-氨基苯硼酸頻哪醇酯(化合物1)和1.1mL(8.22mmol)三乙胺的二氯甲烷溶液10mL，滴加完畢后繼續(xù)攪拌20min，將反應(yīng)液依次用飽和碳酸氫鈉溶液，飽和食鹽水洗滌，無(wú)水硫酸鈉干燥，旋干得到紅色殘留物，用層析柱分離得到白色固體1-(4-氯-3-三氟甲基)苯基)-3-(4-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧硼戊環(huán)-2-基)苯基)脲(化合物2)1.77g，產(chǎn)率63.7％；
2)1-(4-氯-3-三氟甲基)苯基)-3-(4-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧硼戊環(huán)-2-基)苯基)脲(化合物2)與2-氨基-6-溴吡啶(化合物3)通過(guò)Suzuki偶聯(lián)反應(yīng)制備1-(4-(6-氨基吡啶-3-基)苯基)-2-(4-氯-3-三氟甲基)苯基)脲(化合物4)
將1-(4-氯-3-三氟甲基)苯基)-3-(4-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧硼戊環(huán)-2-基)苯基)脲(化合物2)1.20g(2.72mmol)，2-氨基-6-溴吡啶(化合物3)0.71g(4.08mmol)，無(wú)水碳酸鉀1.12g(8.16mmol)，四(三苯基膦)鈀0.31g(0.27mmol)溶于60mL乙腈和40mL水的混合溶液中，在氮?dú)獗Ｗo(hù)下于90℃反應(yīng)過(guò)夜。反應(yīng)結(jié)束后，冷卻至室溫，用乙酸乙酯萃取3-4次，萃取的有機(jī)相依次用飽和碳酸氫鈉溶液，飽和食鹽水洗滌，無(wú)水硫酸鈉干燥，旋干，經(jīng)過(guò)層析柱分離得到白色固體1-(4-(6-氨基吡啶-3-基)苯基)-2-(4-氯-3-三氟甲基)苯基)脲(化合物4)0.50g，產(chǎn)率45.5％。
3)1-(4-(6-氨基吡啶-3-基)苯基)-2-(4-氯-3-三氟甲基)苯基)脲(化合物4)與環(huán)丙甲酰氯通過(guò)酰化反應(yīng)制備目標(biāo)化合物
在冰浴條件下，將1-(4-(6-氨基吡啶-3-基)苯基)-2-(4-氯-3-三氟甲基)苯基)脲(化合物4)0.20g(0.57mmol)溶于20mL無(wú)水四氫呋喃中，緩慢滴加0.32mL(2.28mmol)無(wú)水三乙胺，攪拌反應(yīng)30min，再緩慢滴加0.12mL(1.36mmol)環(huán)丙甲酰氯，滴加完畢后，撤去冰浴，室溫反應(yīng)45min，反應(yīng)結(jié)束后，將反應(yīng)液減壓蒸干得到粗品，經(jīng)柱層次分離得到白色目標(biāo)化合物0.09g，產(chǎn)率33.3％；
所得目標(biāo)化合物結(jié)構(gòu)如下：
理化性質(zhì)：mp:207～209℃。
氫譜核磁共振數(shù)據(jù)為：1H NMR(400MHz,DMSO)δ10.74(s,1H),9.23(s,1H),9.05(s,1H),8.15(d,J＝2.2Hz,1H),8.04(d,J＝8.8Hz,2H),7.98(d,J＝8.2Hz,1H),7.80(t,J＝7.9Hz,1H),7.65(d,J＝3.2Hz,2H),7.61(d,J＝5.4Hz,2H),7.59(d,J＝4.1Hz,1H),2.09(m,J＝7.4,5.1Hz,1H),0.83(m,J＝9.0,3.2Hz,4H).
碳譜核磁共振數(shù)據(jù)為：13C NMR(101MHz,DMSO)δ176.02,173.17,154.82,152.76,152.19,140.69,139.73,139.49,132.62,132.49,132.00,129.17,127.63,123.63,118.81,117.27,115.19,112.04,25.42,14.68,8.10.
實(shí)施例2
該具有抗腫瘤活性的二芳基脲類化合物的結(jié)構(gòu)式中，R1為氫、R2為氯。
步驟1)～2)與實(shí)施例1中步驟1)～2)相同，即由起始化合物4-氨基苯硼酸頻哪醇酯(化合物1)與間氯苯胺制備化合物1-(3-氯苯基)-3-(4-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧硼戊環(huán)-2-基)苯基)脲(化合物2)，再與2-氨基-6-溴吡啶(化合物3)通過(guò)Suzuki偶聯(lián)反應(yīng)制備1-(4-(6-氨基吡啶-3-基)苯基)-2-(3-氯苯基)脲(化合物4)。
3)1-(4-(6-氨基吡啶-3-基)苯基)-2-(3-(三氯苯基)脲(化合物4)與環(huán)丙甲酰氯通過(guò)?；磻?yīng)制備目標(biāo)化合物，具體的操作步驟為：
在冰浴條件下，將1-(4-(6-氨基吡啶-3-基)苯基)-2-(3-(三氯苯基)脲(化合物4)0.28g(0.83mmol)溶于20mL無(wú)水四氫呋喃中，緩慢滴加0.46mL(3.32mmol)無(wú)水三乙胺，攪拌反應(yīng)30min，再緩慢滴加0.18mL(1.98mmol)環(huán)丙甲酰氯，滴加完畢后，撤去冰浴，室溫反應(yīng)45min，反應(yīng)結(jié)束后，將反應(yīng)液減壓蒸干得到粗品，經(jīng)柱層次分離得到乳白色目標(biāo)化合物0.27g，產(chǎn)率79.4％；
所得目標(biāo)化合物結(jié)構(gòu)如下：
理化性質(zhì)：mp:216～218℃。
氫譜核磁共振數(shù)據(jù)為：1H NMR(400MHz,DMSO)δ10.74(s,1H),8.96(s,2H),8.04(d,J＝8.7Hz,2H),7.98(d,J＝8.2Hz,1H),7.80(t,J＝7.9Hz,1H),7.76(d,J＝1.8Hz,1H),7.60(d,J＝5.0Hz,2H),7.58(d,J＝3.5Hz,1H),7.35–7.30(m,1H),7.30–7.27(m,1H),7.04(m,J＝7.3,1.8Hz,1H),2.15–2.06(m,1H),0.88–0.80(m,4H).
碳譜核磁共振數(shù)據(jù)為：13C NMR(101MHz,DMSO)δ173.16,154.85,152.73,152.19,141.62,140.90,139.47,133.70,132.42,130.88,127.64,122.05,118.60,118.12,117.19,115.14,111.99,14.69,8.10.
實(shí)施例3
該具有抗腫瘤活性的二芳基脲類化合物的結(jié)構(gòu)式中，R1為氫、R2為氟。
步驟1)～2)與實(shí)施例1中步驟1)～2)相同，即由起始化合物4-氨基苯硼酸頻哪醇酯(化合物1)與鄰氟苯胺制備化合物1-(2-氟苯基)-3-(4-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧硼戊環(huán)-2-基)苯基)脲(化合物2)，再與2-氨基-6-溴吡啶(化合物3)通過(guò)Suzuki偶聯(lián)反應(yīng)制備1-(4-(6-氨基吡啶-3-基)苯基)-2-(2-氟苯基)脲(化合物4)。
3)1-(4-(6-氨基吡啶-3-基)苯基)-2-(2-氟苯基)脲(化合物4)與環(huán)丙甲酰氯通過(guò)?；磻?yīng)制備目標(biāo)化合物，具體的操作步驟為：
在冰浴條件下，將1-(4-(6-氨基吡啶-3-基)苯基)-2-(2-氟苯基)脲(化合物4)0.30g(0.93mmol)溶于20mL無(wú)水四氫呋喃中，緩慢滴加0.52mL(3.72mmol)無(wú)水三乙胺，攪拌反應(yīng)30min，再緩慢滴加0.18mL(2.23mmol)環(huán)丙甲酰氯，滴加完畢后，撤去冰浴，室溫反應(yīng)45min，反應(yīng)結(jié)束后，將反應(yīng)液減壓蒸干得到粗品，經(jīng)柱層次分離得到白色目標(biāo)化合物0.35g，產(chǎn)率97.2％；
所得目標(biāo)化合物結(jié)構(gòu)如下：
理化性質(zhì)：mp:239～241℃。
氫譜核磁共振數(shù)據(jù)為：1H NMR(400MHz,DMSO)δ10.74(s,1H),9.27(s,1H),8.63(s,1H),8.18(t,J＝7.9Hz,1H),8.05(d,J＝8.4Hz,2H),7.98(d,J＝8.0Hz,1H),7.80(t,J＝7.8Hz,1H),7.60(d,J＝3.8Hz,2H),7.59(s,1H),7.31–7.21(m,1H),7.16(t,J＝7.5Hz,1H),7.03(d,J＝5.5Hz,1H),2.10(s,1H),0.83(d,J＝8.0Hz,4H).
碳譜核磁共振數(shù)據(jù)為：13C NMR(101MHz,DMSO)δ173.16,154.86,153.73,152.54,152.19,140.90,139.48,132.41,127.72,125.03,123.11,121.09,118.35,115.56,115.37,115.14,111.99,14.69,8.10.
下面對(duì)本發(fā)明制得的具有抗腫瘤活性的二芳基脲類化合物的藥用活性進(jìn)行篩選并予以說(shuō)明。
具有抗腫瘤活性的二芳基脲類化合物對(duì)VEGFR-2激酶的抑制活性篩選：
用HTRF KinEASE試劑盒測(cè)定具有抗腫瘤活性的二芳基脲類化合物對(duì)VEGFR-2的抑制活性：采用Lance實(shí)驗(yàn)檢測(cè)具有抗腫瘤活性的二芳基脲類化合物對(duì)VEGFR-2的抑制活性，操作方法按照試劑盒說(shuō)明進(jìn)行。將2μL激酶和2μL的底物加入384孔板中，VEGFR-2濃度為0.09ng/μL，底物濃度為180nM。然后加入不同濃度的底物多肽和4μL待測(cè)化合物，加入2μLATP啟動(dòng)反應(yīng)，在37℃下反應(yīng)30min后，加入EDTA終止反應(yīng)。反應(yīng)結(jié)束后向反應(yīng)液中分別加入Eu3+-穴狀化合物標(biāo)記的抗體和抗生蛋白鏈菌素-XL665，在室溫下孵育1h，采用Perkin-Elmer Victor 5在665nm和615nm波長(zhǎng)下分別測(cè)定吸光度，激酶活性用A665/A615×104表征，計(jì)算本發(fā)明制得的具有抗腫瘤活性的二芳基脲類化合物對(duì)VEGFR-2的抑制率和IC50。
本發(fā)明制備的具有抗腫瘤活性的二芳基脲類化合物對(duì)VEGFR-2激酶抑制劑活性的結(jié)果，如表1所示：
表1 二芳基脲類化合物的VEGFR-2抑制活性
其中N1～N5是本發(fā)明制備的具有抗腫瘤活性的二芳基脲類化合物，由表1可以看出，本發(fā)明制備的具有抗腫瘤活性的二芳基脲類化合物對(duì)VEGFR-2激酶具有抑制活性，其中N1、N2和N4對(duì)VEGFR-2激酶的抑制活性遠(yuǎn)遠(yuǎn)高于陽(yáng)性對(duì)照藥Soranifib，說(shuō)明本發(fā)明制備的具有抗腫瘤活性的二芳基脲類化合物可用于制備抑制VEGFR-2激酶活性的藥物。
另外，由于而血管生成與腫瘤的發(fā)生、發(fā)展和遷移都有密切關(guān)系，抑制新生血管的形成可以有效的抑制腫瘤的生長(zhǎng)和遷移，許多生長(zhǎng)因子調(diào)控新生血管生成，其中VEGFR-2是已知的最強(qiáng)的正調(diào)控因子。因此本發(fā)明提供的具有抗腫瘤活性的二芳基脲類化合物通過(guò)抑制VEGFR-2激酶的活性，阻斷其誘導(dǎo)的信號(hào)通路，抑制腫瘤細(xì)胞的增生和遷移，從而可應(yīng)用于以VEGFR-2激酶為靶點(diǎn)的抗腫瘤藥物的制備。
以上所述，僅是本發(fā)明的較佳實(shí)施例，并非對(duì)本發(fā)明作任何限制，凡是根據(jù)本發(fā)明技術(shù)實(shí)質(zhì)對(duì)以上實(shí)施例所作的任何簡(jiǎn)單修改、變更以及等效結(jié)構(gòu)變換，均仍屬于本發(fā)明技術(shù)方案的保護(hù)范圍內(nèi)。