本發(fā)明涉及微生物
技術(shù)領(lǐng)域：
，具體的說是涉及一種泛菌屬菌株及其應(yīng)用。
背景技術(shù)：
：植物根際的微生物多而活躍，構(gòu)成了根際特有的微生物區(qū)。細菌是根際微生物區(qū)系的主體，基于對植物的作用不同，根際細菌(rhizobacteria)分為有益(2％～5％)，有害(8％～15％)和中性(80％～90％)3類。其中能夠促進植物生長、防治病害、增加作物產(chǎn)量的微生物被稱為促生根際菌(plantgrowth-promotingrhizobacteria，簡稱pgpr)。長久以來，人們關(guān)于土傳病害生物防治的研究表明，根際微生物是理想的生防因子，而pgpr不僅是生物控制土傳病害的有效方式，還可以刺激植物生長，促進作物增產(chǎn)。磷是植物進行必要生命活動所需的大量營養(yǎng)元素之一，我國有74％的耕地土壤缺磷。土壤中95％以上的磷為無效形式，植物很難直接吸收利用。施入的磷肥當季作物利用率為5％～25％，大部分磷與土壤中的ca2+、fe3+、fe2+、al3+結(jié)合，形成難溶性磷酸鹽。研究發(fā)現(xiàn)，pgpr中具有溶磷作用的細菌可以促進植物的生長，分解土壤中的難溶磷礦物，將植物難以吸收利用的磷轉(zhuǎn)化為可吸收利用的形態(tài)，供植物生長發(fā)育。自然界大氣中的氨氣主要是由有機物分解而產(chǎn)生，由于其濃度低，對人畜和農(nóng)作物不僅不會發(fā)生危害，而且還有利于大多數(shù)植物的生長發(fā)育。pgpr中的固氮菌是關(guān)于生物固氮作用長期研究和開發(fā)的重點。氮素是農(nóng)業(yè)生產(chǎn)中不可缺少的一種化肥，在農(nóng)業(yè)生產(chǎn)中，氮被視為衡量土壤養(yǎng)分狀況乃至土壤肥力的一個重要指標，然而水稻、小麥、玉米等農(nóng)作物自身并無固氮能力，為提高農(nóng)作物的產(chǎn)量，需要額外補充氮素，向土壤施用大量氮肥，這不僅造成了農(nóng)業(yè)成本的上升，還會污染土壤、水體及農(nóng)產(chǎn)品，破壞生態(tài)環(huán)境。基于此，利用固氮微生物和聯(lián)合固氮微生物等生物固氮來提高土壤無機氮含量則成為了土壤氮肥補充的有效途徑，是保證農(nóng)業(yè)綠色可持續(xù)發(fā)展，生態(tài)環(huán)境改善的關(guān)鍵。鉀能調(diào)節(jié)植物細胞原生質(zhì)的膠體狀態(tài)和提高光合作用的強度，促進作物的氮素代謝；能調(diào)節(jié)葉面氣孔數(shù)和大小，加快作物導(dǎo)管和篩管的運輸速率，因此，具有增加根際土壤鉀含量的pgpr可以促進農(nóng)作物的生長。生長素(indole-3-aceticacid，iaa)在植物的形態(tài)建成，器官發(fā)生和多種生理過程中都發(fā)揮著很重要的作用，尤其對植物的生長發(fā)育有著至關(guān)重要的作用。部分pgpr若產(chǎn)生適量的iaa可以直接促進植物生長，篩選具有產(chǎn)iaa能力的微生物可以為促生生物肥料的研發(fā)等提供出發(fā)菌株。目前，在pgpr領(lǐng)域尚未有同時具備產(chǎn)氨氣，產(chǎn)iaa，溶磷，增加作物及其根際土壤氮、磷、鉀含量能力的微生物菌株報道，而篩選出一種多能性pgpr無疑對農(nóng)業(yè)生產(chǎn)有巨大的幫助。技術(shù)實現(xiàn)要素：本發(fā)明的目的在于提供一種泛菌屬菌株，該菌株同時具有產(chǎn)氨氣，產(chǎn)iaa，溶磷，增加作物及其根際土壤氮、磷、鉀含量的能力，可應(yīng)用于小麥、玉米、水稻等農(nóng)作物生長過程。為達上述目的，本發(fā)明采用如下技術(shù)方案：一種泛菌屬菌株，其分類命名為泛菌(pantoeasp.)，于2016年7月06日保藏于中國微生物菌種保藏管理委員會普通微生物中心，保藏編號為cgmccno.12737。其中所述菌株菌落性狀不規(guī)則，表面濕潤光滑，易挑起，半透明，無機磷和有機磷平板中具有明顯的溶解圈，固氮平板呈球狀突起。本發(fā)明所述泛菌屬菌株分離自河北省邢臺市玉米根際土壤中，命名為3c。參照《常見細菌系統(tǒng)鑒定手冊》(東秀珠，蔡妙英等)對該泛菌屬菌株進行形態(tài)和生理生化鑒定，結(jié)果顯示，泛菌屬菌株菌落性狀不規(guī)則，表面濕潤光滑，易挑起，半透明，無機磷和有機磷平板中具有明顯的溶解圈，固氮平板呈球狀突起(見圖1)。pcr擴增該泛菌屬菌株的16srdna，最后在上海生物工程有限公司進行測序工作，并在(http://www.ncbi.nlm.nih.gov/)上進行序列比對，構(gòu)建系統(tǒng)發(fā)育樹，如圖1。由圖1可以看到，本發(fā)明所述菌株與pantoeaananatis(cvnf01000066.1)位于同一族群，親緣關(guān)系最近，結(jié)合泛菌屬菌株的形態(tài)特征和生理生化特性，參照《bergey'smanualofsystematicbacteriology》和《常見細菌系統(tǒng)鑒定手冊》將泛菌屬菌株鑒定為泛菌pantoeasp.。所述類芽孢桿菌的生理生化特性如表1：表1本發(fā)明測定了菌株3c產(chǎn)生長素、氨氣及溶磷能力。結(jié)果表明，3c具有產(chǎn)iaa的能力，3c的iaa分泌量為9.795mg/l，同時具產(chǎn)氨氣能力和溶磷能力，3c的溶磷量為1.416mg/l。此外，本發(fā)明通過盆栽試驗檢測菌株3c對苗期玉米及其根際土壤主要礦質(zhì)元素-氮、磷、鉀含量的影響。結(jié)果表明，3c菌株處理顯著增加了玉米植株及其根際土壤的氮、磷、鉀含量?；谏鲜黾夹g(shù)效果，本發(fā)明提出了所述泛菌屬菌株在促進農(nóng)作物生長和制備農(nóng)作物促生長劑中的應(yīng)用，以及在制備溶磷、增加農(nóng)作物及其根際土壤氮磷鉀含量、固氮、產(chǎn)氨氣和/或產(chǎn)iaa生物制劑中的應(yīng)用。其中，所述農(nóng)作物可以是小麥、水稻或玉米。所述農(nóng)作物主要為為小麥、水稻或玉米。本發(fā)明的有益技術(shù)效果：其具備溶磷、固氮作用，可以產(chǎn)氨氣和iaa，增加農(nóng)作物及其根際土壤氮、磷、鉀含量，進而能夠促進農(nóng)作物的生長，可以用于相關(guān)的生物制劑制備中。生物材料保藏信息說明：分類命名：泛菌，pantoeasp.，于2016年7月06日保藏于中國微生物菌種保藏管理委員會普通微生物中心，地址為中國北京市朝陽區(qū)北辰西路1號院3號，中國科學院微生物研究所，保藏編號為cgmccno.12737。附圖說明下面結(jié)合附圖說明對本發(fā)明作進一步說明。圖1所示為菌株的系統(tǒng)發(fā)育樹；圖2所示為菌株的無機磷、有機磷、固氮平板菌落形態(tài)圖；其中，2-a為無機磷平板、2-b為有機磷平板、2-c為固氮平板。具體實施方式本發(fā)明實施例公開了一種泛菌屬菌株及其應(yīng)用，本領(lǐng)域技術(shù)人員可以借鑒本文內(nèi)容，適當改進工藝參數(shù)實現(xiàn)。特別需要指出的是，所有類似的替換和改動對本領(lǐng)域技術(shù)人員來說是顯而易見的，它們都被視為包括在本發(fā)明內(nèi)。本發(fā)明所述菌株和應(yīng)用已通過較佳實施例進行了描述，相關(guān)人員明顯能在不脫離本
發(fā)明內(nèi)容、精神和范圍內(nèi)對本文所述的產(chǎn)品、方法和應(yīng)用進行改動或適當變更與組合，來實現(xiàn)和應(yīng)用本發(fā)明技術(shù)。以下就本發(fā)明所提供的一種泛菌屬菌株及其應(yīng)用做進一步說明。一、菌株的16srdna序列測定通過16srdna的通用引物，27f和1492r對3c菌株的16srdna序列擴增。采用上海生物工程有限公司的即用pcr擴增試劑盒，建立pcr擴增反應(yīng)體系，進行pcr擴增，95℃預(yù)變性5min，然后95℃變性30s、55℃退火lmin、72℃延伸2min共30個循環(huán)，最后72℃再延伸10min，4℃保存。將pcr擴增產(chǎn)物用瓊脂糖凝膠電泳檢測，在凝膠成像系統(tǒng)下觀察并拍照，最后在上海生物工程有限公司進行測序工作，并在(http://www.ncbi.nlm.nih.gov/)上進行序列比對，構(gòu)建系統(tǒng)發(fā)育樹，如圖1。由圖1可以看到，本發(fā)明所述3c菌株與pantoeaananatis(cvnf01000066.1)位于同一族群，親緣關(guān)系最僅，結(jié)合菌株3c的形態(tài)特征和生理生化特性，參照《bergey'smanualofsystematicbacteriology》和《常見細菌系統(tǒng)鑒定手冊》將菌株3c鑒定為泛菌pantoeasp.。二、產(chǎn)生長素、氨氣及溶磷能力試驗1、試驗菌株本發(fā)明所述泛菌屬菌株3c；與3c在相同時間、環(huán)境以及土壤中分離得到的經(jīng)鑒定同樣是泛菌屬的2c菌株(如pantoeaananatis)；2、產(chǎn)iaa能力測定(1)定性測定取50ml的三角瓶裝入r2a液體培養(yǎng)基(酵母粉0.5g；胰蛋白胨0.5g；酪蛋白氨基酸0.5g；葡萄糖0.5g；可溶性淀粉0.5g；磷酸氫二鉀0.3g；水合硫酸鎂0.05g；丙酮酸鈉0.3g；蒸餾水1000ml；調(diào)ph7.2)，將3c和2c菌株分別接種于該三角瓶中，每個菌株5個重復(fù)，將三角瓶置于28℃搖床，轉(zhuǎn)速為180r/min，培養(yǎng)6d，取50μl菌懸液滴置于用來比色的白色陶瓷板上，同時要加入50μl的salkowski比色液。只在比色液中加入50μl的50mg/l的植物生長激素(iaa)作為對照。在室溫下將白色陶瓷板避光靜置處理30min后觀察其顏色變化。若為陽性顏色會變粉紅，表示能夠分泌iaa，顏色越深代表其產(chǎn)iaa的能力越強，反之，則表示其不具有產(chǎn)iaa的能力。(2)定量測定培養(yǎng)條件同上，用分光光度計法測定菌懸液的od530值。將菌懸液10000r/min離心10min，取上清液加入等體積sallkowski比色液，避光靜置30min，測定其od530值。標準曲線的繪制采用分析純的iaa梯度稀釋制備。(3)結(jié)果產(chǎn)iaa能力定性及定量測定結(jié)果見表2和表3。表2產(chǎn)iaa能力定性測定結(jié)果菌種現(xiàn)象結(jié)果3c深粉色+2c無-對照粉紅色+表3產(chǎn)iaa能力定性測定結(jié)果菌種12345平均值濃度(mg/l)3c0.1030.1140.1070.1080.1160.1109.795結(jié)合表2和表3的結(jié)果可知，3c菌懸液經(jīng)此反應(yīng)后均呈現(xiàn)粉紅色，所以3c具有產(chǎn)iaa的能力，濃度為9.795mg/l，而2c菌懸液經(jīng)此反應(yīng)后無變色，不具備產(chǎn)iaa能力。3、產(chǎn)氨氣能力測定方法一：將nessler’s試紙分別封在裝有菌液的三角瓶口，然后放在搖床培養(yǎng)，最后觀察試紙顏色，若變黃色則表示該菌具有產(chǎn)氨氣的能力，反之則無。方法二：分別將3c，2c菌株各轉(zhuǎn)接到2支含10ml蛋白胨水(10g/l)試管中，28℃培養(yǎng)72h。只加10ml蛋白胨水的試管作為對照品，即共5個試管。5支試管分別加入0.5mlnessler’s試劑。若顏色轉(zhuǎn)為褐色并產(chǎn)生沉淀表明有nh3產(chǎn)生。檢測結(jié)果見表4。表4產(chǎn)氨氣能力檢測結(jié)果由表4可知，用濾紙檢測和用試劑檢測的實驗結(jié)果是一致的，3c均出現(xiàn)了陽性實驗結(jié)果，證明3c可產(chǎn)生氨氣，產(chǎn)生大量褐色沉淀表明3c產(chǎn)氨氣的量較多，而2c產(chǎn)生氨氣的能力明顯弱于3c，對照是陰性結(jié)果。4、溶磷能力測定(1)50mlpko無機磷液體培養(yǎng)基(蔗糖10g；硫酸銨0.5g；氯化鈉0.1g；水合硫酸鎂0.1g；氯化鉀0.2g；硫酸錳0.03g；水合硫酸鐵0.03g；酵母膏0.5g；蒸餾水1000ml；調(diào)ph7.0～7.2)，加入500μl各待測菌株菌懸液。每個菌株分別設(shè)置3個重復(fù)，不接種菌株的基礎(chǔ)培養(yǎng)基為對照品，將上述三角瓶全部置于溫度28℃、轉(zhuǎn)速160r/min的搖床培養(yǎng)，培養(yǎng)7d后，將培養(yǎng)液在4℃條件下10000r/min、離心15min，保留上清液進行測定，測定溶磷量(mg/l)時采用鉬銻抗比色法。(2)超聲波處理測定吸光度之前先考查超聲波處理對試驗結(jié)果的影響[21]，本試驗考查的是超聲波處理20min對測定結(jié)果的影響。取5ml上清液于50ml容量瓶中定容，靜置，在之后的測定之前，均采用超聲波處理。將分別裝有3c、2c液體培養(yǎng)基的三角瓶置于搖床28℃培養(yǎng)3d，轉(zhuǎn)速為150r/min，對照品的三角瓶中裝等量的1％無菌水。培養(yǎng)3d后，將培養(yǎng)物轉(zhuǎn)入無菌的50ml離心管中，sb-3200dtdn超聲波清洗器進行超聲波細胞破碎20min，使細胞內(nèi)的有效磷釋放出來。然后再以轉(zhuǎn)速為4000r/min離心20min，離心完畢后備測。(3)鉬銻抗比色法鉬銻抗比色法測上清液中的有效磷含量。繪制標準曲線，在50ml容量瓶中分別加入0、2、4、6、8、10ml的5mg/l標準磷溶液，加2滴2，6-二硝基酚做指示劑，用50ml/l硫酸溶液和10％氫氧化鈉調(diào)節(jié)ph為3，使溶液剛呈微黃色。準確加鉬銻抗顯色劑5ml，搖勻，定容至刻度。從而配制成標準磷濃度分別為0.0、0.2、0.4、0.6、0.8、1.0mg/l梯度濃度的磷標準溶液。搖勻后，在室溫下放置30min使之進行反應(yīng)。30min后，利用紫外-可見分光光度計測量該系列磷標準液的吸光度，每一梯度測量三個平行，取平均值，計數(shù)后，繪制標準曲線。其次，分別對上述已經(jīng)超聲波處理后的兩種備測菌液進行同樣處理，測量吸光度后，帶入標準曲線方程進行定量計算。(4)溶磷能力結(jié)果在測定吸光度之前，進行了超聲波處理考查，經(jīng)處理過的反應(yīng)液吸光值為1.159，未經(jīng)超聲波處理的吸光值為0.505，超聲波處理對測定結(jié)果影響較大。所以，在定量測定時，提前進行超聲波處理。溶磷能力測定結(jié)果見表5。表5溶磷能力測定結(jié)果由上表數(shù)據(jù)得出，3c的od720為0.703，溶磷量為1.416mg/l，而對照的2c菌株溶磷效果幾乎不存在。三、盆栽苗期玉米及其根際土壤氮、磷、鉀含量的檢測1、試驗材料試驗土壤為河北省保定市淶源縣。試驗所用種子：玉米品種為金秋963，種子均勻的鋪在覆有潔凈濾紙的培養(yǎng)皿中，用蒸餾水在28℃下浸泡2天，選擇出芽良好整齊的種子播種。2、試驗方法以花盆(上口直徑5cm、下底直徑3cm、高5cm)為培養(yǎng)容器，接種母液濃度為9.6×108cfu/ml，處理設(shè)置為：無菌液(a)、稀釋兩倍的3c菌液(b)、稀釋兩倍的2c菌液(c)。播種前，分別用上述菌液浸泡經(jīng)催芽的玉米種子。每盆放入土壤距離上沿1cm，將浸泡后的種子播種到盆里，再覆蓋一層浮土，玉米每盆播種一粒種子，小麥每盆播種三粒種子，每種處理種植25盆。播種后試將花盆置于人工氣候箱中(白天30℃，夜晚25℃。光照時間為16小時)。所有處理在相同條件下隨機排列，在同一時間進行浸盆澆水。3、樣品收獲植株在種植三周后進行收獲，土表上植株作為地上部分，將根系和地上部分用去離子水洗凈，將洗凈的植物樣品放于烘箱中，在105℃下殺青30min，然后在70℃下烘干24小時至恒重，將相同處理的樣品放入同一封口袋帶中備用。同時取每種處理的土樣50g備用。4、植物n含量的測定稱取樣品0.1g于消煮管中，倒入8ml硫酸-高氯酸混合溶液。混合溶液按硫酸：高氯酸(v：v)＝10:1配置。先將消煮溫度設(shè)置為110℃，當溫度達到110℃后，每隔5min升溫20℃，待溫度達到150℃后，等待5min，直接升溫至280℃。保持20min，待消煮液顏色變?yōu)橥该骱蠹纯梢匀〕鱿蠊埽谑覝叵吕鋮s降溫。如溶液不透明，則需滴入少許雙氧水直至溶液透明。待溶液冷卻后，用超純水定容至100ml，然后過濾于小白瓶中，儲存待測。同時，對空白做相同處理，作為對照試驗。用凱氏定氮儀進行測定，操作步驟：取10ml消煮液用凱氏定氮儀進行蒸餾，后用標準酸滴定，記錄消耗標準酸體積，計算土壤全n量。氮素含量按以下公式計算：氮素含量(g/mg)＝(v1-v0)×c×0.014/m×n×103公式中字母代表：v1：滴定待測液時所用酸標定的體積(ml)；v0：滴定空白時所用酸標定的體積(ml)；c：硫酸的當量濃度；0.014：每毫克當量氮的重量％；m：烘干土樣的質(zhì)量(g)；n：分取倍數(shù)；5、植物p含量的測定采用鉬銻抗比色法。量取消煮液10ml，注入50ml容量瓶中，用水稀釋至約20ml，加入二硝基酚指示劑一滴，滴加4nnaoh直至溶液變?yōu)辄S色，再加入1nh2so4一滴，使溶液顏色剛剛退去，此時ph＝3。然后加鉬銻抗指示劑5ml，再加超純水定容至50ml，搖勻，30min后用880nm波長在分光光度計上比色，以空白試驗的顯色液的透光度為100，讀出吸光度。鉬銻抗試劑的配制:稱取酒石酸氧銻鉀0.5g溶解100ml水中，制成0.5％的溶液。另稱取鉬酸銨10g溶于450ml水中，徐徐加入153ml濃硫酸，邊加邊攪動。再將0.5％的酒石酸氧銻鉀溶液100ml加入到鉬酸銨溶液中，最后加水至1l充分搖勻，貯于棕色瓶中，此為鉬銻混合液。稱取1.5g左旋抗壞血酸(即維生素c，化學純)，溶于100ml鉬銻混合液中，混勻，此即為鉬銻抗試劑。試劑現(xiàn)用先配。制作p標準曲線。準確吸取5μg/mlp標準溶液0、1、2、4、6、8ml，分別放入50ml容量瓶中，加水至約30ml，加空白消煮液5ml，調(diào)節(jié)ph值到3，加鉬銻抗試劑5ml，最后用超純水定容至50ml。30min之后在波長880nm下進行比色。各瓶比色液磷濃度分別為0、0.1、0.2、0.4、0.6、0.8μg/mlp。磷含量按下面公式進行計算：磷含量(％)＝(ρ×v/m)×(v2/v1)×10-4公式中字母表示含義:ρ：通過吸光度和磷標曲線計算出的待測液磷質(zhì)量濃度(μg/ml)；m：待測樣品消煮時稱取的重量(g)；v：消煮液定容時體積(ml)；v1：測定時吸取的消煮液體積(ml)；v2：配置測定溶液時定容體積(ml)；6、植物k含量的測定稱取樣品1g于消煮管中，并在消煮管中倒入15ml硝酸-高氯酸混合溶液?；旌先芤喊聪跛幔焊呗人?v：v)＝5:1配置。消煮過程中，先將消煮溫度設(shè)置為100℃，當溫度達到100℃后，每隔15min升溫20℃，待溫度達到200℃后，等待20min，直接升溫至280℃。保持20min，當消煮液顏色變?yōu)橥该骱蠹纯梢匀〕鱿蠊埽谑覝叵吕鋮s降溫。如溶液不透明，則需滴入少許雙氧水直至溶液透明。待溶液冷卻后，用超純水定容至50ml，然后過濾于小白瓶中，儲存待測。同時，對空白做相同處理，作為對照試驗。用火焰光度法。測定步驟按火焰光度計的說明書上的使用方法調(diào)整好儀器，然后先用最濃的標準溶液噴霧燃燒，調(diào)節(jié)光柵，使檢流計的標尺上有最大讀數(shù)，然后依次測定各級標準溶液，記下檢流計的讀數(shù)。在方格紙上以標準溶液的ppm數(shù)為橫坐標，以檢流計讀數(shù)為縱坐標，繪出標準曲線。吸取土壤待測液5ml于50ml容量瓶中，用去離子水稀釋至刻度，搖勻，在火焰光度計上測定，記下檢流計上的讀數(shù)，然后從標準曲線上查得待測液的濃度。鉀含量按下面公式進行計算：鉀含量(mg/g)＝(ρ×v/w)×n×10-3公式中字母表示含義：ρ：通過吸光度和鉀標曲線計算出的待測液鉀質(zhì)量濃度(μg/ml)；v：待測液定容體積(ml)；w：待測樣品消煮時稱取的重量(g)；n：分取倍數(shù)；7、土樣全n、p、k含量的測定稱取烘干土樣0.5g，將土樣送入干燥的消煮管中加少量蒸餾水濕潤土樣后，再加入2g加速劑(naso4:cuso4＝9:1)和5ml濃硫酸搖勻。在管口放上一小漏斗。在遠紅外消煮爐中加熱，待測液和土樣全部變?yōu)辄S綠色，再繼續(xù)消煮1h，冷卻后加蒸餾水50ml，再放入消煮爐中，利用余溫加熱，冷卻后用超純水定容至100ml。利用消煮液測定全n、p、k含量，與測定植物n、p、k含量的方法相同。8、土樣堿解n含量的測定堿解n測定采用擴散法。稱取烘干樣品2.00g并均勻鋪在擴散皿外室，水平地輕輕旋轉(zhuǎn)擴散皿，使樣品鋪平。在擴散皿的內(nèi)室中加入2％硼酸指示劑溶液2ml，然后在皿的外室邊緣涂上凡士林，蓋上毛玻璃，并旋轉(zhuǎn)數(shù)次，以使毛玻璃與皿邊完全粘合，再慢慢轉(zhuǎn)開毛玻璃的一邊，使擴散皿露出一條狹縫，迅速在擴散皿的外室加入10ml1n氫氧化鈉溶液，立即用毛玻璃蓋嚴。水平地輕輕旋轉(zhuǎn)擴散皿，使溶液與土壤充分混勻，用橡皮筋固定。然后小心地將擴散皿放入40℃的恒溫箱中24h后取出，以0.01n硫酸標準溶液滴定擴散皿內(nèi)室硼酸溶液吸收的氨量，終點由藍綠色轉(zhuǎn)變成紫紅色，記下所用去的標準酸量。2％硼酸-定氮指示劑的配制：稱取硼酸20g，溶解于1l蒸餾水中，每升加混合指示劑10ml并用稀氫氧化鈉或稀鹽酸調(diào)至從藍色轉(zhuǎn)為紫紅色(ph4.5)。結(jié)果計算：堿解氮(mg/100g)＝n×v×14/w×100公式中字母表示含義:w—烘干土壤重；n—標準酸當量濃度；v：消耗酸量；9、土樣速效p含量的測定速效p測定鉬銻抗比色法。稱取烘干土樣5.00g于200ml三角瓶中，加100ml0.5mol碳酸氫鈉溶液，再加一小勺無磷活性炭，塞緊瓶塞，在20～25℃下振蕩30min，立即用無磷濾紙過濾。濾液接于100ml于三角瓶中。吸取濾液10ml于50ml容量瓶中，加硫酸鉬銻抗混合顯色劑5ml，充分搖勻，排出二氧化碳后加水定容至刻度，再充分搖勻。30min后在波長880nm分光光度計上比色，讀透光率，比色時須同時做空白測定。結(jié)果計算:磷含量(mg/kg)＝ρ×v/w公式中字母表示含義:ρ：通過吸光度和磷標曲線計算出的待測液磷質(zhì)量濃度(μg/ml)；v：顯色定容體積；w：土壤質(zhì)量；10、土樣速效k含量的測定。速效k測定火焰光度計。測定步驟按火焰光度計的說明書上的使用方法調(diào)整好儀器，然后先用最濃的標準溶液噴霧燃燒，調(diào)節(jié)光柵，使檢流計的標尺上有最大讀數(shù)，然后依次測定各級標準溶液，記下檢流計的讀數(shù)。在方格紙上以標準溶液的ppm數(shù)為橫坐標，以檢流計讀數(shù)為縱坐標，繪出標準曲線。稱取烘干土樣5g于200ml錐形瓶中，加50ml1mol/l的中性乙酸銨溶液，在20-25℃下振蕩30分鐘，過濾，將濾液直接在火焰光度計上測定鉀，同時進行空白試驗。結(jié)果計算：鉀含量(mg/kg)＝ρ×v/m公式中字母表示含義：ρ：鉀標曲線計算出的待測液鉀質(zhì)量濃度(μg/ml)；v：加入浸提劑ml數(shù)；m：烘干土壤質(zhì)量(g)；11、數(shù)據(jù)處理利用microsoftexcel2010軟件進行數(shù)據(jù)整理、作圖，用spss17.0軟件按照單因素方差分析法進行差異顯著性分析。12、對玉米根部氮磷鉀含量的檢測結(jié)果表6對玉米根部氮磷鉀含量的檢測結(jié)果注：同列數(shù)據(jù)后不同字母表示同一品種不同處理間差異達5％顯著水平。由表6可知，本發(fā)明所提供的3c菌株可顯著增加玉米根部氮磷鉀的含量，相比對照和同屬其他菌株效果較好且具有顯著差異。13、對玉米葉片氮磷鉀含量的檢測結(jié)果表7對玉米葉片氮磷鉀含量的檢測結(jié)果注：同列數(shù)據(jù)后不同字母表示同一品種不同處理間差異達5％顯著水平。由表7可知，本發(fā)明所提供的3c菌株可顯著增加玉米葉片氮磷鉀的含量，相比對照和同屬其他菌株效果較好且具有顯著差異。14、對玉米根際土壤氮磷鉀含量的檢測結(jié)果表8對玉米根際土壤氮磷鉀含量的檢測結(jié)果注：同列數(shù)據(jù)后不同字母表示同一品種不同處理間差異達5％顯著水平。由表8可知，本發(fā)明所提供的3c菌株可顯著增加玉米根際土壤氮磷鉀的含量，相比對照和同屬其他菌株效果較好且具有顯著差異。以上所述的實施例僅是對本發(fā)明的優(yōu)選方式進行描述，并非對本發(fā)明的范圍進行限定，在不脫離本發(fā)明設(shè)計精神的前提下，本領(lǐng)域普通技術(shù)人員對本發(fā)明的技術(shù)方案做出的各種變形和改進，均應(yīng)落入本發(fā)明權(quán)利要求書確定的保護范圍內(nèi)。sequencelisting<110>河北農(nóng)業(yè)大學<120>一種泛菌屬菌株<130>2016<160>1<170>patentinversion3.3<210>1<211>1102<212>dna<213>pantoea<400>1accattattcaaaagttggtagcgccctcccgaaggttaagctacctacttcttttgcaa60cccactcccatggtgtgacgggcggtgtgtacaaggcccgggaacgtattcaccgtggca120ttctgatccacgattactagcgattccgacttcacggagtcgagttgcagactccgatcc180ggactacgacgcactttatgaggtccgcttgctctcgcgaggtcgcttctctttgtatgc240gccattgtagcacgtgtgtagccctactcgtaagggccatgatgacttgacgtcatcccc300accttcctccggtttatcaccggcagtctcctttgagttcccgaccgaatcgctggcaac360aaaggataagggttgcgctcgttgcgggacttaacccaacatttcacaacacgagctgac420gacagccatgcagcacctgtctcagagttcccgaaggcaccaagccatctctggcaagtt480ctctggatgtcaagagtaggtaaggttcttcgcgttgcatcgaattaaaccacatgctcc540accgcttgtgcgggcccccgtcaattcatttgagttttaaccttgcggccgtactcccca600ggcggtcgacttaacgcgttagctccggaagccactcctcaggggaacagcctccaagtc660gacatcgtttacggcgtggactaccagggtatctaatcctgtttgctccccacgctttcg720cacctgagcgtcagtctttgtccagggggccgccttcgccaccggtattcctccagatct780ctacgcatttcaccgctacacctggaattctacccccctctacaagactctagcctgcca840gtttcgaatgcagttcccaggttaagcccggggatttcacatccgacttgacagaccgcc900tgcgtgcgctttacgcccagtaattccgattaacgcttgcaccctccgtattaccgcggc960tgctggcacggagttagccggtgcttcttctgcgggtaacgtcaatcgacccggttatta1020accgcgtcgctttcctccccgctgaaagtactttacaacccgaaggccttcttcatacac1080ggcggcatggctgcatcaggct1102當前第1頁12