本發(fā)明涉及一種6-乙氧基氟氯煙酰氟苯水楊酰胺類化合物及其在制備抗人肺癌藥物中的應(yīng)用。(二)
背景技術(shù)：
：肺癌是最常見的肺原發(fā)性惡性腫瘤，目前是全世界癌癥死因的第一名，絕大多數(shù)肺癌起源于支氣管粘膜上皮，故亦稱支氣管肺癌。1995年全世界有60萬(wàn)人死于肺癌，而且每年人數(shù)都在上升，2003年世界衛(wèi)生組織(WHO)公布的死亡率是110萬(wàn)/年，發(fā)病率是120萬(wàn)/年。近50多年來，世界各國(guó)特別是工業(yè)發(fā)達(dá)國(guó)家，肺癌的發(fā)病率和病死率均迅速上升，死于癌病的男性病人中肺癌已居首位，而女性患肺癌的發(fā)生率尤其有上升的趨勢(shì)。肺癌，已經(jīng)成為嚴(yán)重威脅全世界人民健康和生命的一大殺手，其危險(xiǎn)性不容小視。中國(guó)專利CN102557983A《一種(4-取代苯甲酰)氟苯水楊酰胺類化合物及應(yīng)用》、CN102603559A《一種苯乙酰氟苯水楊酰胺類化合物及應(yīng)用》分別介紹了二氟尼柳為水楊酸母體所制備的O-苯甲酰、O-苯乙酰氟苯水楊酰胺類化合物及其在抗腫瘤藥物中的應(yīng)用。氟氯煙?；c苯甲?；啾容^，具有更大的空間體積、更強(qiáng)的分子極性，使其對(duì)部分細(xì)胞的特定空間結(jié)構(gòu)具有更好的選擇性；與苯乙?；啾容^，具有更為完整的大π鍵電子結(jié)構(gòu)，將適度改變目標(biāo)分子的藥學(xué)性能。人肺癌是一種最為常見的惡性腫瘤。因此，本專利通過對(duì)氟苯水楊酸進(jìn)行結(jié)構(gòu)修飾，制備具有抗人肺癌活性的含氟新藥，具有非常重大的意義。(三)技術(shù)實(shí)現(xiàn)要素：本發(fā)明目的是提供一種6-乙氧基氟氯煙酰氟苯水楊酰胺類化合物，及其在制備抗癌藥物、尤其在制備抗人肺癌藥物中的應(yīng)用。本發(fā)明采用的技術(shù)方案是：一種如式(Ⅰ)所示的6-乙氧基氟氯煙酰氟苯水楊酰胺類化合物：式(Ⅰ)中，R1～R5各自獨(dú)立為H、甲基、氟、氯、硝基、甲氧基、乙氧基。更進(jìn)一步，結(jié)構(gòu)如式(Ⅰ)所示的6-乙氧基氟氯煙酰氟苯水楊酰胺類化合物為表1中化合物之一：表1：本發(fā)明還提供所述如式(Ⅰ)所示6-乙氧基氟氯煙酰氟苯水楊酰胺類化合物的制備方法：如式(Ⅱ)所示的二氟尼柳與式(Ⅲ)所示的氟氯煙酰氯反應(yīng)，得到式(Ⅳ)所示的6-乙氧基氟氯煙酰氟苯水楊酸；然后，與SOCl2經(jīng)酰氯化得到式(Ⅴ)所示的6-乙氧基氟氯煙酰氟苯水楊酰氯；最后，與式(Ⅵ)所示胺類化合物經(jīng)過酰胺化反應(yīng)，制得如(Ⅰ)所示的6-乙氧基氟氯煙酰氟苯水楊酰胺類化合物。所述反應(yīng)的方程式如下式所示。式(Ⅰ)中，R1～R5各自獨(dú)立為H、甲基、氟、氯、硝基、甲氧基、乙氧基。其中，式(Ⅲ)所示的氟氯煙酰氯可由式(Ⅶ)所示的氟氯煙酸經(jīng)SOCl2酰氯化而得。相關(guān)的合成方法，可參照中國(guó)專利CN102010366A、CN102557983A、CN102603559A及在Bioorg.Med.Chem.Lett.19(2),516-519上公開的內(nèi)容。具體的，所述方法推薦按如下步驟進(jìn)行：(1)將式(Ⅶ)所示的氟氯煙酸、SOCl2、甲苯及DMF加入到反應(yīng)瓶中，在70℃下反應(yīng)6h后。冷卻，抽濾，蒸去溶劑，得到反應(yīng)液A，用THF溶解，得到氟氯煙酰氯-THF溶液，待用；(2)將式(Ⅱ)所示的二氟尼柳、THF、吡啶加入到反應(yīng)瓶中，常溫下攪拌0.5h。冰浴下緩慢滴加步驟(1)所得氟氯煙酰氯-THF溶液，常溫?cái)嚢柽^夜得到反應(yīng)液B，將反應(yīng)液B抽濾，蒸去溶劑，用無(wú)水乙醇攪拌洗滌，抽濾，干燥，得式(Ⅳ)所示的6-乙氧基氟氯煙酰氟苯水楊酸粗品；(3)將步驟(2)所得式(Ⅳ)所示的6-乙氧基氟氯煙酰氟苯水楊酸粗品、二氯亞砜、甲苯和DMF投入反應(yīng)瓶中，于70℃下反應(yīng)6小時(shí)，得到反應(yīng)混合物C，經(jīng)減壓蒸干，加入丙酮溶解，制得式(Ⅴ)所示的6-乙氧基氟氯煙酰氟苯水楊酰氯溶液，備用。(5)在冰浴下，將式(Ⅵ)所示的胺類化合物與丙酮混合，將得到的混合液加入到已制備的式(Ⅴ)所示的6-乙氧基氟氯煙酰氟苯水楊酰氯溶液中，在常溫下反應(yīng)10h，將所得反應(yīng)混合液D過濾，經(jīng)乙醇洗滌，丁酮重結(jié)晶，得式(Ⅰ)所示的N-苯基-6-乙氧基氟氯煙酰氟苯水楊酰胺。本發(fā)明還提供了所述6-乙氧基氟氯煙酰氟苯水楊酰胺類化合物在制備抗腫瘤藥物中的應(yīng)用，尤其是制備抗人肺癌藥物中的應(yīng)用。經(jīng)測(cè)試，本發(fā)明6-乙氧基氟氯煙酰氟苯水楊酰胺類化合物在一定濃度下可明顯抑制人肺癌細(xì)胞的生長(zhǎng)，可作為抗腫瘤藥物應(yīng)用于人肺癌的治療。與現(xiàn)有技術(shù)相比，本發(fā)明的有益效果主要體現(xiàn)在：(1)提供了一種6-乙氧基氟氯煙酰氟苯水楊酰胺類化合物及其制備方法；(2)提供了一種新的、具有明顯抗腫瘤活性的抗人肺癌藥物，為新藥篩選提供研究基礎(chǔ)，具有重大應(yīng)用前景；(3)所述化合物的制備流程簡(jiǎn)單，利于產(chǎn)業(yè)化生產(chǎn)。(四)具體實(shí)施方式下面結(jié)合具體實(shí)施例對(duì)本發(fā)明進(jìn)行進(jìn)一步描述，但本發(fā)明的保護(hù)范圍并不僅限于此：實(shí)施例1：制備6-乙氧基氟氯煙酰氟苯水楊酸(Ⅳ)將10.5g(0.048mol)氟氯煙酸(Ⅶ)、11.4g(0.096mol)SOCl2、100mL甲苯、10滴DMF加入到反應(yīng)瓶中，在70℃下反應(yīng)6h后。冷卻，抽濾，蒸去溶劑，得到油狀液體，用20mLTHF溶解，待用。將10.0g(0.04mol)二氟尼柳、60mLTHF、3.8g(0.048mol)吡啶加入到反應(yīng)瓶中，常溫下攪拌0.5h。冰浴下緩慢滴加氟氯煙酰氯-THF溶液，常溫?cái)嚢柽^夜。抽濾，蒸去溶劑，用無(wú)水乙醇攪拌洗滌，抽濾，干燥，得6-乙氧基氟氯煙酰氟苯水楊酸粗品(Ⅳ)，收率：72.9％，熔點(diǎn)：191-192℃(未校正)。1H核磁共振圖譜分析如下：1HNMR(500MHz,CDCl3,δppm):8.274(s,1H,2-H),8.235(d,1H,J＝9.5Hz,4”-H),7.819(d,1H,J＝12.0Hz,6’-H),7.483(q,1H,J＝8.5Hz,6-H),7.353(d,1H,J＝8.0Hz,5-H),7.026(m,1H,J＝8.0Hz,5’-H),6.965(m,1H,J＝8.5Hz,3’-H),4.607(q,2H,J＝7.0Hz,-OCH2CH3),1.511(t,3H,J＝7.0Hz,-OCH2CH3)。實(shí)施例2：制備N-苯基-6-乙氧基氟氯煙酰氟苯水楊酰胺(Ⅰ-1)將6.8g(0.015mol)6-乙氧基氟氯煙酰氟苯水楊酸粗品(Ⅳ)、3.6g(0.03mol)二氯亞砜、60mL甲苯和10滴DMF投入反應(yīng)瓶中，于70℃(未校正)下反應(yīng)6小時(shí)，減壓蒸干，得白色固體，加入60mL丙酮溶解，制得6-乙氧基氟氯煙酰氟苯水楊酰氯(Ⅴ)溶液，備用。冰浴下，將2.8g(0.03mol)苯胺/10mL丙酮的混合液加入到已制備的Ⅴ溶液中，常溫反應(yīng)10h；過濾，乙醇洗滌，丁酮重結(jié)晶，得白色N-苯基-6-乙氧基氟氯煙酰氟苯水楊酰胺(Ⅰ-1)，熔點(diǎn)：187-190℃(未校正)，收率：70.9％。1H核磁共振圖譜分析如下：1HNMR(500MHz,CDCl3,δppm):8.143(d,1H,J＝9.5Hz,4”-H),8.051(s,1H,-NH-),7.948(s,1H,2-H),7.715(d,1H,J＝8.5Hz,6’-H),7.568(d,2H,J＝8.0Hz,2”’,6”’-H),7.482(m,1H,J＝6.5Hz,6-H),7.379(d,1H,J＝8.5Hz,5-H),7.334(t,2H,J＝7.5Hz,3”’,5”’-H),7.150(t,1H,J＝7.5Hz,4”’-H),7.020(m,1H,J＝8.5Hz,5’-H),6.961(m,1H,J＝8.5Hz,3’-H),4.579(q,2H,J＝7.0Hz,-OCH2CH3),1.487(t,3H,J＝7.0Hz,-OCH2CH3)。實(shí)施例3：制備N-(2-甲基苯基)-6-乙氧基氟氯煙酰氟苯水楊酰胺(Ⅰ-2)以0.03mol2-甲基苯胺代替實(shí)施例2中的苯胺，其他操作同實(shí)施例2，得到N-(2-甲基苯基)-6-乙氧基氟氯煙酰氟苯水楊酰胺(Ⅰ-2)，熔點(diǎn)：183-186℃(未校正)，收率：72.2％。1H核磁共振圖譜分析如下：1HNMR(500MHz,CDCl3,δppm):8.153(d,1H,J＝9.5Hz,4”-H),7.974(s,1H,2-H),7.835(s,1H,-NH-),7.727(d,1H,J＝8.0Hz,3”’-H),7.711(d,1H,J＝8.0Hz,6’-H),7.483(d,1H,J＝6.0Hz,6-H),7.384(d,1H,J＝8.5Hz,5-H),7.249(d,1H,J＝7.0Hz,6”’-H),7.211(t,1H,J＝7.5Hz,5”’-H),7.131(t,1H,J＝7.5Hz,4”’-H),7.034(m,1H,J＝8.0Hz,5’-H),6.974(m,1H,J＝9.0Hz,3’-H),4.583(q,2H,J＝7.0Hz,-OCH2CH3),1.493(t,3H,J＝7.0Hz,-OCH2CH3)。實(shí)施例4：制備N-(3-甲基苯基)-6-乙氧基氟氯煙酰氟苯水楊酰胺(Ⅰ-3)以0.03mol3-甲基苯胺代替實(shí)施例2中的苯胺，其他操作同實(shí)施例2，得到N-(3-甲基苯基)-6-乙氧基氟氯煙酰氟苯水楊酰胺(Ⅰ-3)，熔點(diǎn)：157-160℃(未校正)，收率：59.8％。1H核磁共振圖譜分析如下：1HNMR(500MHz,CDCl3,δppm):8.144(d,1H,J＝9.5Hz,4”-H),7.953(s,1H,2-H),7.911(s,1H,-NH-),7.718(d,1H,J＝8.5Hz,6’-H),7.488(m,1H,J＝7.5Hz,6-H),7.399(s,1H,2”’-H),7.382(d,1H,J＝8.5Hz,5-H),7.343(d,1H,J＝7.5Hz,6”-H),7.234(t,1H,J＝7.5Hz,5”’-H),4.590(q,2H,J＝7.5Hz,-OCH2CH3),2.341(s,3H,3”’-CH3),1.497(t,3H,J＝7.0Hz,-OCH2CH3)。實(shí)施例5：制備N-(4-甲基苯基)-6-乙氧基氟氯煙酰氟苯水楊酰胺(Ⅰ-4)以0.03mol4-甲基苯胺代替實(shí)施例2中的苯胺，其他操作同實(shí)施例2，得到N-(4-甲基苯基)-6-乙氧基氟氯煙酰氟苯水楊酰胺(Ⅰ-4)，熔點(diǎn)：170-172℃(未校正)，收率：70.4％。1H核磁共振圖譜分析如下：1HNMR(500MHz,CDCl3,δppm):8.137(d,1H,J＝9.0Hz,4”-H),7.942(s,1H,-NH-),7.916(s,1H,2-H),7.706(d,1H,J＝8.5Hz,6’-H),7.482(m,1H,J＝8.0Hz,6-H),7.438(d,2H,J＝7.5Hz,2”’,6”’-H),7.368(d,1H,J＝8.5Hz,5-H),7.141(d,2H,J＝8.0Hz,3”’,5”’-H),7.018(m,1H,J＝8.0Hz,5’-H),6.960(m,1H,J＝8.5Hz,3’-H),4.586(q,2H,J＝7.0Hz,-OCH2CH3),2.322(s,3H,4”’-CH3),1.496(t,3H,J＝7.0Hz,-OCH2CH3)。實(shí)施例6：制備N-(2-氯苯基)-6-乙氧基氟氯煙酰氟苯水楊酰胺(Ⅰ-5)以0.03mol2-氯氟苯胺代替實(shí)施例2中的苯胺，其他操作同實(shí)施例2，得到N-(2-氯苯基)-6-乙氧基氟氯煙酰氟苯水楊酰胺(Ⅰ-5)，熔點(diǎn)：167-170℃(未校正)，收率：89.9％。1H核磁共振圖譜分析如下：1HNMR(500MHz,CDCl3,δppm):8.466(d,1H,J＝8.5Hz,6”’-H),8.449(s,1H,-NH-),8.147(d,1H,J＝9.5Hz,4”-H),8.049(s,1H,2-H),7.749(d,1H,J＝8.5Hz,6’-H),7.500(m,1H,J＝8.5Hz,6-H),7.403(d,1H,J＝8.5Hz,5-H),7.366(d,1H,J＝8.0Hz,3”’-H),7.320(t,1H,J＝8.5Hz,5”’-H),7.095(t,1H,J＝8.0Hz,4”’-H),7.033(m,1H,J＝7.5Hz,5’-H),6.970(m,1H,J＝8.5Hz,3’-H),4.587(q,2H,J＝7.0Hz,-OCH2CH3),1.494(t,3H,J＝7.5Hz,-OCH2CH3)。實(shí)施例7：制備N-(3-氯苯基)-6-乙氧基氟氯煙酰氟苯水楊酰胺(Ⅰ-6)以0.03mol3-氯苯胺代替實(shí)施例2中的苯胺，其他操作同實(shí)施例2，得到N-(3-氯苯基)-6-乙氧基氟氯煙酰氟苯水楊酰胺(Ⅰ-6)，熔點(diǎn)：196-200℃(未校正)，收率：87.1％。1H核磁共振圖譜分析如下：1HNMR(500MHz,CDCl3,δppm):8.139(d,1H,J＝9.5Hz,4”-H),8.006(s,1H,-NH-),7.941(s,1H,2-H),7.730(d,1H,J＝8.5Hz,6’-H),7.676(s,1H,2”’-H),7.484(q,1H,J＝8.0Hz,6-H),7.379(t,2H,J＝8.5Hz,5-H,6”’-H),7.253(t,1H,J＝8.0Hz,5”’-H),7.125(d,1H,J＝8.0Hz,4”’-H),7.029(m,1H,J＝8.0Hz,5’-H),6.971(m,1H,J＝8.5Hz,3’-H),4.598(q,2H,J＝7.0Hz,-OCH2CH3),1.502(t,3H,J＝7.0Hz,-OCH2CH3)。實(shí)施例8：制備N-(4-氯苯基)-6-乙氧基氟氯煙酰氟苯水楊酰胺(Ⅰ-7)以0.03mol4-氯苯胺代替實(shí)施例2中的苯胺，其他操作同實(shí)施例2，得到N-(4-氯苯基)-6-乙氧基氟氯煙酰氟苯水楊酰胺(Ⅰ-7)，熔點(diǎn)：189-192℃(未校正)，收率：95.1％。1H核磁共振圖譜分析如下：1HNMR(500MHz,CDCl3,δppm):8.135(d,1H,J＝9.5Hz,4”-H),8.031(s,1H,-NH-),7.934(s,1H,2-H),7.720(d,1H,J＝8.5Hz,6’-H),7.522(d,2H,J＝8.5Hz,2”’,6”’-H),7.463(m,1H,J＝8.5Hz,6-H),7.371(d,1H,J＝8.5Hz,5-H),7.302(d,2H,J＝8.5Hz,3”’,5”’-H),7.027(m,1H,J＝8.0Hz,5’-H),6.964(m,1H,J＝8.5Hz,3’-H),4.592(q,2H,J＝7.0Hz,-OCH2CH3),1.500(t,3H,J＝7.0Hz,-OCH2CH3)。實(shí)施例9：制備N-(2-甲氧基苯基)-6-乙氧基氟氯煙酰氟苯水楊酰胺(Ⅰ-8)以0.03mol2-甲氧基苯胺代替實(shí)施例2中的苯胺，其他操作同實(shí)施例2，得到N-(2-甲氧基苯基)-6-乙氧基氟氯煙酰氟苯水楊酰胺(Ⅰ-8)，熔點(diǎn)：146-149℃(未校正)，收率：70.2％。1H核磁共振圖譜分析如下：1HNMR(500MHz,CDCl3,δppm):8.585(s,1H,-NH-),8.497(d,1H,J＝7.5Hz,6”’-H),8.177(d,1H,J＝9.5Hz,4”-H),8.032(s,1H,2-H),7.728(d,1H,J＝8.5Hz,6’-H),7.505(m,1H,J＝8.5Hz,6-H),7.389(d,1H,J＝8.5Hz,5-H),7.097(t,1H,J＝7.5Hz,4”’-H),7.029(m,1H,J＝8.0Hz,5’-H),6.999(m,1H,J＝7.0Hz,3’-H),6.970(t,1H,J＝9.0Hz,5”’-H),6.881(d,1H,J＝8.0Hz,3”’-H),4.586(q,2H,J＝7.0Hz,-OCH2CH3),3.793(s,3H,2”’-OCH3),1.496(t,3H,J＝7.0Hz,-OCH2CH3)。實(shí)施例10：制備N-(4-甲氧基苯基)-6-乙氧基氟氯煙酰氟苯水楊酰胺(Ⅰ-9)以0.03mol4-甲氧基苯胺代替實(shí)施例2中的苯胺，其他操作同實(shí)施例2，得到N-(4-甲氧基苯基)-6-乙氧基氟氯煙酰氟苯水楊酰胺(Ⅰ-9)，熔點(diǎn)：165-168℃(未校正)，收率：72.0％。1H核磁共振圖譜分析如下：1HNMR(500MHz,CDCl3,δppm):8.150(d,1H,J＝9.5Hz,4”-H),7.959(s,1H,2-H),7.857(s,1H,-NH-),7.712(d,1H,J＝8.0Hz,6’-H),7.463(d,3H,6-H,2”’,6”’-H),7.376(d,1H,J＝8.5Hz,5-H),7.024(m,1H,J＝7.0Hz,5’-H),6.967(m,1H,J＝9.0Hz,3’-H),6.882(d,2H,J＝7.0Hz,3”’,5”’-H),4.591(q,2H,J＝7.0Hz,-OCH2CH3),3.804(s,3H,4”’-OCH3),1.500(t,3H,J＝7.5Hz,-OCH2CH3)。實(shí)施例11：制備N-(2-乙氧基苯基)-6-乙氧基氟氯煙酰氟苯水楊酰胺(Ⅰ-10)以0.03mol2-乙氧基苯胺代替實(shí)施例2中的苯胺，其他操作同實(shí)施例2，得到N-(2-乙氧基苯基)-6-乙氧基氟氯煙酰氟苯水楊酰胺(Ⅰ-10)，熔點(diǎn)：163-166℃(未校正)，收率：52.4％。1H核磁共振圖譜分析如下：1HNMR(500MHz,CDCl3,δppm):8.533(s,1H,-NH-),8.485(d,1H,J＝7.0Hz,6”’-H),8.171(d,1H,J＝9.5Hz,4”-H),7.984(s,1H,2-H),7.723(d,1H,J＝8.0Hz,6’-H),7.502(m,1H,J＝8.5Hz,6-H),7.413(d,1H,J＝8.5Hz,5-H),7.073(t,1H,J＝8.0Hz,4”’-H),7.030(t,1H,J＝8.0Hz,5”’-H),6.984(m,1H,J＝8.5Hz,5’-H),6.956(m,1H,J＝8.5Hz,3’-H),6.887(d,1H,J＝8.0Hz,3”’-H),4.582(q,2H,J＝7.0Hz,-OCH2CH3),4.107(q,2H,J＝7.0Hz,2”’-OCH2CH3),1.493(t,3H,J＝7.0Hz,-OCH2CH3),1.431(t,3H,J＝7.0Hz,2”’-OCH2CH3)。實(shí)施例12：制備N-(2,4-二氟苯基)-6-乙氧基氟氯煙酰氟苯水楊酰胺(Ⅰ-11)以0.03mol2,4-二氟苯胺代替實(shí)施例2中的苯胺，其他操作同實(shí)施例2，得到N-(2,4-二氟苯基)-6-乙氧基氟氯煙酰氟苯水楊酰胺(Ⅰ-1)，熔點(diǎn)：203-205℃(未校正)，收率：52.4％。1H核磁共振圖譜分析如下：1HNMR(500MHz,CDCl3,δppm):8.356(q,1H,J＝8.5Hz,6”’-H),8.195(s,1H,-NH-),8.161(d,1H,J＝9.0Hz,4”-H),8.056(s,1H,2-H),7.754(d,1H,J＝8.5Hz,6’-H),7.502(m,1H,J＝9.0Hz,6-H),7.398(d,1H,J＝8.5Hz,5-H),7.039(m,1H,J＝8.0Hz,5’-H),6.975(m,1H,J＝8.5Hz,5”’-H),6.924(m,1H,J＝9.0Hz,3’-H),6.862(m,1H,J＝8.5Hz,3”’-H),4.607(q,2H,J＝7.0Hz,-OCH2CH3),1.511(t,3H,J＝7.0Hz,-OCH2CH3)。實(shí)施例13：制備N-(2,4-二氯苯基)-6-乙氧基氟氯煙酰氟苯水楊酰胺(Ⅰ-12)以0.03mol2,4-二氯苯胺代替實(shí)施例2中的苯胺，其他操作同實(shí)施例2，得到N-(2,4-二氯苯基)-6-乙氧基氟氯煙酰氟苯水楊酰胺(Ⅰ-12)，熔點(diǎn)：147-150℃(未校正)，收率：71.0％。1H核磁共振圖譜分析如下：1HNMR(500MHz,CDCl3,δppm):8.453(s,1H,-NH-),8.429(s,1H,3”’-H),8.141(d,1H,J＝9.5Hz,4”-H),8.044(s,1H,2-H),7.761(d,1H,J＝8.0Hz,6’-H),7.501(m,1H,J＝8.5Hz,6-H),7.406(d,1H,J＝8.5Hz,6”’-H),7.379(d,1H,J＝7.5Hz,5-H),7.283(d,1H,J＝8.5Hz,5”’-H),7.038(m,1H,J＝8.0Hz,5’-H),6.979(m,1H,J＝8.0Hz,3’-H),4.600(q,2H,J＝7.0Hz,-OCH2CH3),1.507(t,3H,J＝7.0Hz,-OCH2CH3)。實(shí)施例14：制備N-(3,4-二氯苯基)-6-乙氧基氟氯煙酰氟苯水楊酰胺(Ⅰ-13)以0.03mol3,4-二氯苯胺代替實(shí)施例2中的苯胺，其他操作同實(shí)施例2，得到N-(3,4-二氯苯基)-6-乙氧基氟氯煙酰氟苯水楊酰胺(Ⅰ-13)，熔點(diǎn)：207-211℃(未校正)，收率：88.1％。1H核磁共振圖譜分析如下：1HNMR(500MHz,CDCl3,δppm):8.138(d,1H,J＝9.5Hz,4”-H),8.030(s,1H,-NH-),7.937(s,1H,2-H),7.800(s,1H,2”’-H),7.738(d,1H,J＝8.5Hz,6’-H),7.483(m,1H,J＝8.0Hz,6-H),7.380(d,2H,J＝8.5Hz,6”’,5”’-H),7.363(d,1H,J＝8.5Hz,5-H),7.031(m,1H,J＝8.0Hz,5’-H),6.968(m,1H,J＝8.5Hz,3’-H),4.603(q,2H,J＝7.0Hz,-OCH2CH3),1.506(t,3H,J＝7.0Hz,-OCH2CH3)。實(shí)施例15：制備N-(2-氯-4-硝基苯基)-6-乙氧基氟氯煙酰氟苯水楊酰胺(Ⅰ-14)以0.03mol2-氯-4-硝基苯胺代替實(shí)施例2中的苯胺，其他操作同實(shí)施例2，得到N-(2-氯-4-硝基苯基)-6-乙氧基氟氯煙酰氟苯水楊酰胺(Ⅰ-13)，熔點(diǎn)：177-181℃(未校正)，收率：56.0％。1H核磁共振圖譜分析如下：1HNMR(500MHz,CDCl3,δppm):8.415(s,1H,2-H),8.207(d,1H,J＝9.5Hz,4”-H),7.886(d,1H,J＝8.0Hz,6’-H),7.496(m,1H,J＝8.5Hz,6-H),7.410(d,1H,J＝8.5Hz,5-H),7.063(m,1H,J＝8.0Hz,5’-H),6.998(m,1H,J＝8.5Hz,3’-H),4.615(q,2H,J＝7.0Hz,-OCH2CH3),1.515(t,3H,J＝7.5Hz,-OCH2CH3)。實(shí)施例16：制備N-(4-氯-2-硝基苯基)-6-乙氧基氟氯煙酰氟苯水楊酰胺(Ⅰ-15)以0.03mol4-氯-2-硝基苯胺代替實(shí)施例2中的苯胺，其他操作同實(shí)施例2，得到N-(4-氯-2-硝基苯基)-6-乙氧基氟氯煙酰氟苯水楊酰胺(Ⅰ-13)，熔點(diǎn)：193-197℃(未校正)，收率：36.4％。1H核磁共振圖譜分析如下：1HNMR(500MHz,CDCl3,δppm):10.990(s,1H,-NH-),8.870(d,1H,J＝9.5Hz,6”’-H),8.231(s,1H,3”’-H),8.194(d,1H,J＝10.0Hz,4”-H),8.030(s,1H,2-H),7.795(d,1H,J＝8.5Hz,5”’-H),7.653(d,1H,J＝9.5Hz,6’-H),7.511(m,1H,J＝8.5Hz,6-H),7.436(d,1H,J＝8.5Hz,5-H),7.049(m,1H,J＝8.0Hz,5’-H),6.990(m,1H,J＝8.5Hz,3’-H),4.595(q,2H,J＝7.0Hz,-OCH2CH3),1.504(t,3H,J＝7.0Hz,-OCH2CH3)。實(shí)施例17～31：抗腫瘤活性測(cè)試體外抗腫瘤活性測(cè)試(注：本測(cè)試方法，稱為MTT法，為一成熟的方法。)A.原理：活細(xì)胞線粒體中的琥珀酸脫氫酶能使外源性噻唑蘭(MTT)還原為水不溶性的藍(lán)紫色結(jié)晶甲瓚(Formazan)并沉積在細(xì)胞中，而死細(xì)胞無(wú)此功能。二甲基亞砜(DMSO)能溶解細(xì)胞中的甲瓚，用酶聯(lián)免疫檢測(cè)儀在490nm波長(zhǎng)處測(cè)定甲瓚吸光值，可間接反映細(xì)胞的增殖情況和數(shù)量變化。在一定細(xì)胞數(shù)范圍內(nèi)，MTT結(jié)晶形成的量與細(xì)胞數(shù)成正比。B.細(xì)胞：人肺癌細(xì)胞株(H446，購(gòu)自中國(guó)科學(xué)院上海生命科學(xué)研究院)C.實(shí)驗(yàn)步驟1)樣品的制備：取實(shí)施例2～16所制備的化合物I-1～I(xiàn)-15，每1mg樣品用20μLDMSO溶解，再取2μL用1000μL培養(yǎng)液(見下面步驟(2)細(xì)胞的培育中培養(yǎng)液的配制)稀釋，配成100μg/mL的樣品液，再用培養(yǎng)液連續(xù)稀釋至使用濃度10μg/mL和1μg/mL。5mg/mLMTT的配制：用生理鹽水配置MTT溶液，濃度為5mg/mL。2)細(xì)胞的培養(yǎng)培養(yǎng)液的配制：每1000mLDMEM培養(yǎng)液(Gibco公司)中含80萬(wàn)單位青霉素、1.0g鏈霉素、10％滅活小牛血清。細(xì)胞的培養(yǎng)：將腫瘤細(xì)胞SGC-7901、HGC227接種于培養(yǎng)液中，置37℃(未校正)、5％CO2培養(yǎng)箱中培養(yǎng)，3～5d傳代。3)測(cè)定樣品對(duì)腫瘤細(xì)胞生長(zhǎng)的抑制作用將細(xì)胞用乙二胺四乙酸(EDTA)-胰酶消化液(0.25％胰酶，0.02％EDTA，用Hank’s緩沖液配置)消化，并用培養(yǎng)液稀釋成細(xì)胞濃度為1×106/mL，加到96孔細(xì)胞培養(yǎng)板中，每孔100μL，置37℃(未校正)、5％CO2培養(yǎng)箱中培養(yǎng)24h后，傾去培養(yǎng)液，加入用培養(yǎng)液稀釋的樣品，每孔200μL，每個(gè)濃度加3孔，置37℃(未校正)、5％CO2培養(yǎng)箱中培養(yǎng)，72h后在細(xì)胞培養(yǎng)孔中加入5mg/mL的MTT，每孔10μL，置37℃(未校正)孵育3h，加入DMSO，每孔150μL，用振蕩器(海門麒麟醫(yī)療儀器廠，QL-9001)振蕩，使甲瓚完全溶解，用酶聯(lián)免疫檢測(cè)儀(美國(guó)BIO-RAD公司，680型)在490nm波長(zhǎng)處檢測(cè)吸光值。以同樣條件下含順鉑對(duì)照樣品及同樣濃度DMSO的培養(yǎng)液培養(yǎng)的細(xì)胞作為空白對(duì)照，按照公式(1)計(jì)算樣品對(duì)腫瘤細(xì)胞生長(zhǎng)的抑制率，以及各個(gè)濃度下化合物對(duì)細(xì)胞生長(zhǎng)的抑制率，用SPSS軟件(購(gòu)自美國(guó)SPSS公司)計(jì)算各樣品的半數(shù)抑制濃度(IC50)，結(jié)果如表1所示：計(jì)算公式：抑制率(％)＝(OD空白-OD樣品)/OD空白×100％公式(1)表2：各化合物對(duì)H446的IC50(mg/L)實(shí)施例化合物IC50mg/L評(píng)價(jià)17Ⅰ-127.11弱效18Ⅰ-226.48弱效19Ⅰ-39.69有效20Ⅰ-423.96弱效21Ⅰ-513.17弱效22Ⅰ-625.50弱效23Ⅰ-731.83弱效24Ⅰ-828.95弱效25Ⅰ-98.17有效26Ⅰ-1071.67微效27Ⅰ-1116.29弱效28Ⅰ-125.30有效29Ⅰ-1327.84弱效30Ⅰ-1437.66弱效31Ⅰ-1553.22微效從表1可以看出，按照抗癌活性的評(píng)價(jià)標(biāo)準(zhǔn)，式Ⅰ-3、Ⅰ-9及Ⅰ-12所示的化合物具有較好的抗H446人肺癌細(xì)胞。當(dāng)前第1頁(yè)1 2 3