本發(fā)明涉及一種單克隆細(xì)胞株及其抗體，具體的說(shuō)是一種單克隆細(xì)胞株YH3及其產(chǎn)生的單克隆抗體和應(yīng)用。

背景技術(shù)：

戊唑醇（Tebuconazole）又稱富力庫(kù)、立克秀，屬于高效、廣譜、內(nèi)吸性的三唑類殺菌劑，具有保護(hù)、治療和鏟除3大功能，由于戊唑醇的優(yōu)良性能和獨(dú)特的作用機(jī)制，已被廣泛地用于果樹(shù)和蔬菜等大田作物上銹病、白粉病、網(wǎng)斑病、根腐病、赤霉病、黑穗病、紋枯病菌及種傳輪斑病等病害的防治。然而，戊唑醇?xì)⒕鷦┑男再|(zhì)穩(wěn)定、半衰期長(zhǎng)，具有內(nèi)吸性，易殘留在農(nóng)產(chǎn)品和環(huán)境中。同時(shí)研究認(rèn)為，戊唑醇對(duì)肝臟與血液系統(tǒng)有一定的蓄積毒性，對(duì)水生生物有一定的潛在毒性，還是一種非遺傳毒性的動(dòng)物致癌物，故長(zhǎng)期攝入或接觸戊唑醇會(huì)對(duì)人類健康產(chǎn)生威脅。因此，戊唑醇的殘留檢測(cè)越來(lái)越受到廣泛關(guān)注。

現(xiàn)已用于戊唑醇?xì)埩魴z測(cè)的方法有高效液相色譜法、氣相色譜法、氣相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用法和高效液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜法。這些儀器分析方法的靈敏度高，準(zhǔn)確性和重現(xiàn)性好，但這些儀器價(jià)格昂貴、檢測(cè)費(fèi)用高、樣品前處理復(fù)雜、耗時(shí)長(zhǎng)和需要專業(yè)人員操作等缺點(diǎn)，無(wú)法滿足大批量樣品快速篩查的需求，尤其是現(xiàn)場(chǎng)快速檢測(cè)的任務(wù)，迫切需要開(kāi)發(fā)出一種高效快速的檢測(cè)新技術(shù)。近年來(lái)，免疫分析方法在農(nóng)藥殘留分析中得到了廣泛應(yīng)用，其中酶聯(lián)免疫分析法具有操作簡(jiǎn)單、靈敏、低成本和高通量的優(yōu)點(diǎn)。膠體金免疫層析試紙法具有快速、簡(jiǎn)便、廉價(jià)和現(xiàn)場(chǎng)快速篩選的優(yōu)勢(shì)。

目前，國(guó)外已有測(cè)定谷物中戊唑醇?xì)埩舻拿嘎?lián)免疫分析法。2001年 C.Danks，M. Q. Chaudhry , L. Parker , I. Barker andJ. N. Banks 等在《Food and Agricultural Immunology》發(fā)表了“Development and Validation of an Immunoassay for the Determination of Tebuconazole Residues in Creal Crops”（2001, 13, 151-159）, 該研究基于多克隆抗體建立了谷物中戊唑醇?xì)埩魴z測(cè)的競(jìng)爭(zhēng)酶聯(lián)免疫分析法。該方法的檢測(cè)范圍0.02-20 mg/mL。目前，國(guó)內(nèi)外都沒(méi)有關(guān)于戊唑醇單克隆抗體的制備報(bào)道。和多克隆抗體相比，單克隆抗體的制備技術(shù)復(fù)雜，費(fèi)時(shí)費(fèi)工，價(jià)格高；但是產(chǎn)生單克隆抗體的單克隆細(xì)胞株可以在體外“永久”地存活并傳代，可以“無(wú)限量”地生產(chǎn)高特異性、高均一性的抗體；單克隆抗體的靈敏度高、特異性強(qiáng)。

技術(shù)實(shí)現(xiàn)要素：

本發(fā)明目的是為解決上述技術(shù)問(wèn)題的不足，提供一株單克隆細(xì)胞株YH3，分類命名為單克隆細(xì)胞株，保藏編號(hào)為CGMCC No.12031，可用于制備抗戊唑醇單克隆抗體，分泌的戊唑醇單克隆抗體的特征在于靈敏度高，半數(shù)抑制濃度（IC₅₀）為0.21±0.03 ng/mL；特異性強(qiáng)，與其結(jié)構(gòu)類似物的交叉反應(yīng)率低于3%。

所述的單克隆細(xì)胞株YH3所制備的抗戊唑醇單克隆抗體。

采用單克隆細(xì)胞株YH3制備的抗戊唑醇單克隆抗體的方法，包括以下步驟：

選擇健康的BALB/c小鼠，每只小鼠腹腔注射無(wú)菌液體石蠟油0.6 mL。提前5天，用含10%胎牛血清的RPMI-1640培養(yǎng)基培養(yǎng)單克隆細(xì)胞株YH3。小鼠注射石蠟油10天后，向每只小鼠腹腔注射1×10⁶個(gè)單克隆細(xì)胞株YH3。當(dāng)小鼠的腹部明顯增大，并用手觸摸時(shí)有緊繃感，同時(shí)小鼠還表現(xiàn)出不愿活動(dòng)時(shí)，收集腹水，離心（6000 rpm，12 min），吸上清，分裝，-20°C凍存。

所述的單克隆細(xì)胞株YH3所制備的抗戊唑醇單克隆抗體，半數(shù)抑制濃度為0.21±0.03 ng/mL。

所述單克隆細(xì)胞株YH3所制備抗戊唑醇單克隆抗體在檢測(cè)果蔬中戊唑醇?xì)埩糁械膽?yīng)用。

將所述抗戊唑醇單克隆抗體應(yīng)用于制備檢測(cè)果蔬中戊唑醇?xì)埩舻哪z體金免疫層析試紙條。

將所述抗戊唑醇單克隆抗體應(yīng)用于制備檢測(cè)果蔬中戊唑醇?xì)埩舻拿嘎?lián)免疫試劑盒。

有益效果是：

本發(fā)明提供了一種新的單克隆細(xì)胞株YH3，所產(chǎn)生的單克隆抗體能夠用于建立戊唑醇?xì)埩舻拿嘎?lián)免疫分析法和膠體金免疫層析試紙法，為保障我國(guó)農(nóng)產(chǎn)品的質(zhì)量安全提供了有力的保障。本發(fā)明的優(yōu)點(diǎn)在于由單克隆細(xì)胞株YH3分泌的戊唑醇單克隆抗體的特征在于靈敏度高，半數(shù)抑制濃度（IC₅₀）為0.21±0.03 ng/mL；特異性強(qiáng)，與其結(jié)構(gòu)類似物的交叉反應(yīng)率低于3%。可以用于研制戊唑醇?xì)埩魴z測(cè)的酶聯(lián)免疫試劑盒和膠體金免疫層析試紙條。

生物材料的保藏

一株單克隆細(xì)胞株YH3，保藏日期為2016年1月20日，保藏單位及其簡(jiǎn)稱為中國(guó)微生物菌種保藏管理委員會(huì)普通微生物中心（CGMCC），保藏地址為：北京市朝陽(yáng)區(qū)北辰西路1號(hào)院3號(hào)，保藏編號(hào)CGMCC No.12031。

附圖說(shuō)明

圖1是 戊唑醇單克隆抗體親和常數(shù)的測(cè)定結(jié)果圖；

圖2 是戊唑醇單克隆抗體靈敏度的測(cè)定結(jié)果圖；

圖3是膠體金免疫層析試紙條靈敏度的測(cè)定實(shí)例圖。

具體實(shí)施方式

本發(fā)明提供了一株單克隆細(xì)胞株YH3及其分泌的抗戊唑醇單克隆抗體。實(shí)驗(yàn)動(dòng)物BALB/c小鼠購(gòu)自河南科技大學(xué)醫(yī)學(xué)部動(dòng)物中心。

（一）單克隆細(xì)胞株YH3的制備

1 、抗血清的制備

選擇8周齡的BALB/c小鼠為試驗(yàn)動(dòng)物，將免疫原和快免佐劑按照1:1比例通過(guò)注射器混合后，采用肌肉注射的方式進(jìn)行免疫。免疫劑量為每只小鼠60 mg（以蛋白含量計(jì)），免疫間隔為2周，四免后8天，采用間接競(jìng)爭(zhēng)酶聯(lián)免疫分析法測(cè)定抗血清的效價(jià)和抑制，選出效價(jià)高且抑制好的BALB/c小鼠進(jìn)行融合。

2、 細(xì)胞融合前的準(zhǔn)備

融合前7天，采用含20%胎牛血清的RPMI 1640培養(yǎng)基對(duì)SP2/0骨髓瘤細(xì)胞進(jìn)行復(fù)蘇，換液時(shí)，改為用含10%胎牛血清的RPMI 1640培養(yǎng)基進(jìn)行擴(kuò)大培養(yǎng)。

融合前3天，戊唑醇免疫原通過(guò)腹腔注射的方式對(duì)融合小鼠進(jìn)行沖免，要求免疫劑量減半且不含快免佐劑。

3、收集SP2/0骨髓瘤細(xì)胞

用含10%胎牛血清RPMI 1640培養(yǎng)基在6孔板（或細(xì)胞培養(yǎng)瓶）中培養(yǎng)SP2/0骨髓瘤細(xì)胞，期間需要不斷擴(kuò)大培養(yǎng)。在融合前1天，必須對(duì)SP2/0骨髓瘤細(xì)胞換液，以保證大部分SP2/0骨髓瘤細(xì)胞在融合時(shí)處于對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期，這一點(diǎn)對(duì)整個(gè)融合過(guò)程的成敗至關(guān)重要。同時(shí)要求SP2/0骨髓瘤細(xì)胞的總數(shù)要達(dá)到1.0-5.0×10⁷。否則，瘤細(xì)胞過(guò)少，將會(huì)降低融合率。融合前，將SP2/0骨髓瘤細(xì)胞收集到50 mL無(wú)菌離心管中，離心（1200 rpm，6 min），棄上清，取沉淀，再用RPMI 1640培養(yǎng)基進(jìn)行重懸，計(jì)數(shù)，備用。

4、收集脾細(xì)胞

對(duì)融合使用的各種器械先采用濕熱滅菌法滅菌，然后在60°C下烘干，備用。事先在超凈工作臺(tái)上準(zhǔn)備好融合器具，再處死融合小鼠，迅速放入裝有75% 酒精的燒杯中消毒，再小心放到超凈工作臺(tái)上，嚴(yán)格采用無(wú)菌操作技術(shù)取出BALB/c小鼠的脾臟，研磨，得到小鼠脾細(xì)胞懸液，用RPMI-1640培養(yǎng)基離心洗滌脾細(xì)胞3次，最后一次離心后，棄上清，用RPMI-1640培養(yǎng)基重懸脾細(xì)胞，體積約10 mL，計(jì)數(shù)，備用。

5 、融合

按照常規(guī)融合方法將脾細(xì)胞和SP2/0 骨髓瘤細(xì)胞按照8:1比例混合，離心（1200 rpm，6 min），棄上清。用聚乙二醇1500（PEG1500）對(duì)小鼠脾細(xì)胞和SP2/0骨髓瘤細(xì)胞進(jìn)行融合。采用預(yù)熱的HAT培養(yǎng)基稀釋融合后的細(xì)胞，按照200 mL/孔注入到96孔細(xì)胞板。置于37°C，5% CO₂培養(yǎng)箱中培養(yǎng)。

6、 單克隆細(xì)胞的亞克隆和篩選

融合后5天采用HAT培養(yǎng)基進(jìn)行半換液，融合后第8天采用HAT培養(yǎng)基全換液，第12天取細(xì)胞上清，采用間接競(jìng)爭(zhēng)酶聯(lián)免疫法篩選分泌戊唑醇抗體的單克隆細(xì)胞株，對(duì)所有陽(yáng)性孔均采用有限稀釋法進(jìn)行亞克隆，每個(gè)陽(yáng)性孔亞克1塊96孔板。

重復(fù)4次亞克隆過(guò)程和間接競(jìng)爭(zhēng)酶聯(lián)免疫分析法，得到一株能穩(wěn)定分泌戊唑醇單克隆抗體的單克隆細(xì)胞株YH3。

7 、單克隆細(xì)胞株YH3的凍存。

用10%胎牛血清的RPMI-1640培養(yǎng)基在6孔細(xì)胞板中培養(yǎng)單克隆細(xì)胞株YH3，隔天換液，估計(jì)細(xì)胞密度達(dá)到0.5-1.0×10⁵個(gè)/mL時(shí)，收集細(xì)胞，用RPMI-1640培養(yǎng)基離心洗滌1次，向離心管中加入凍存液重懸，再將其轉(zhuǎn)移到凍存管，放入凍存盒，置于超低溫冰箱（-80°C）中，1天后，將凍存管轉(zhuǎn)到液氮罐中長(zhǎng)期保存。

（二）由單克隆細(xì)胞株YH3分泌的抗戊唑醇單克隆抗體的制備和亞型鑒定

1. 戊唑醇單克隆抗體的制備

選擇健康的BALB/c小鼠，每只小鼠腹腔注射無(wú)菌液體石蠟油0.6 mL。提前5天，用含10%胎牛血清的RPMI-1640培養(yǎng)基培養(yǎng)單克隆細(xì)胞株YH3。小鼠注射石蠟油10天后，向每只小鼠腹腔注射1×10⁶個(gè)單克隆細(xì)胞株YH3。當(dāng)小鼠的腹部明顯增大，并用手觸摸時(shí)有緊繃感，同時(shí)小鼠還表現(xiàn)出不愿活動(dòng)時(shí)，收集腹水，離心（6000 rpm，12 min），吸上清，分裝，-20°C凍存。

2.單克隆抗體的純化

采用辛酸-硫酸銨沉淀法純化腹水。

3.亞型鑒定

采用洛陽(yáng)佰奧通公司的單抗亞型鑒定試劑盒測(cè)定戊唑醇單克隆抗體的亞型，測(cè)定結(jié)果表明戊唑醇單克隆抗體的亞型為IgG。

實(shí)施例1單克隆細(xì)胞株YH3的制備

（一） 單克隆細(xì)胞株YH3的制備

1、 抗血清的制備

選擇8周齡的BALB/c小鼠為試驗(yàn)動(dòng)物，將免疫原和快免佐劑按照1:1比例通過(guò)注射器混合后，采用肌肉注射的方式進(jìn)行免疫。免疫劑量為每只小鼠60 mg（以蛋白含量計(jì)），免疫間隔為2周，四免后8天，采用間接競(jìng)爭(zhēng)酶聯(lián)免疫分析法測(cè)定抗血清的效價(jià)和抑制，選出效價(jià)高且抑制好的BALB/c小鼠進(jìn)行融合。

2 、細(xì)胞融合前的準(zhǔn)備

融合前7天，采用含20%胎牛血清的RPMI 1640培養(yǎng)基對(duì)SP2/0骨髓瘤細(xì)胞進(jìn)行復(fù)蘇，換液時(shí)，改為用含10%胎牛血清的RPMI 1640培養(yǎng)基進(jìn)行擴(kuò)大培養(yǎng)。

融合前3天，戊唑醇免疫原通過(guò)腹腔注射的方式對(duì)融合小鼠進(jìn)行沖免，要求免疫劑量減半且不含快免佐劑。

3、收集SP2/0骨髓瘤細(xì)胞 用含10%胎牛血清RPMI 1640培養(yǎng)基在6孔板（或細(xì)胞培養(yǎng)瓶）中培養(yǎng)瘤細(xì)胞，期間需要不斷地?cái)U(kuò)大培養(yǎng)。在融合前1天，必須對(duì)SP2/0骨髓瘤細(xì)胞進(jìn)行換液，以保證大部分SP2/0骨髓瘤細(xì)胞處于對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期，這一點(diǎn)對(duì)整個(gè)融合過(guò)程的成敗至關(guān)重要。同時(shí)要求SP2/0骨髓瘤細(xì)胞的總數(shù)要達(dá)到1.0-5.0×10⁷。否則，瘤細(xì)胞過(guò)少，會(huì)降低融合率。融合前，將SP2/0骨髓瘤細(xì)胞收集到的50 mL無(wú)菌離心管中，離心（1200 rpm，6 min），棄上清，取沉淀，再用RPMI 1640培養(yǎng)基重懸，計(jì)數(shù)，備用。

4、收集脾細(xì)胞 對(duì)融合使用的各種器械先采用濕熱滅菌法滅菌，然后在60°C下烘干，備用。事先在超凈工作臺(tái)上準(zhǔn)備好融合器具，然后處死融合小鼠，迅速放入裝有75% 酒精的燒杯中消毒，再小心放到超凈工作臺(tái)上，嚴(yán)格采用無(wú)菌操作技術(shù)取出BALB/c小鼠的脾臟，研磨，得到小鼠脾細(xì)胞懸液，用RPMI-1640培養(yǎng)基離心洗滌脾細(xì)胞三次，最后一次離心后，棄上清，用RPMI-1640培養(yǎng)基重懸脾細(xì)胞，體積約10 mL，計(jì)數(shù)，備用。

5 、融合 按照常規(guī)方法將脾細(xì)胞和SP2/0 骨髓瘤細(xì)胞按照8:1比例混合，離心（1200 rpm，6 min），棄上清；用聚乙二醇1500（PEG 1500）對(duì)脾細(xì)胞和SP2/0 瘤細(xì)胞進(jìn)行融合。采用預(yù)熱的HAT培養(yǎng)基稀釋融合后的細(xì)胞，按照200 mL/孔注入到96孔細(xì)胞板。置于37°C，5% CO₂培養(yǎng)箱中培養(yǎng)。

6 、單克隆細(xì)胞的亞克隆和篩選

融合后5天采用HAT培養(yǎng)基進(jìn)行半換液，第8天第二次采用HAT培養(yǎng)基全換液，第12天取細(xì)胞上清，采用間接競(jìng)爭(zhēng)酶聯(lián)免疫法篩選分泌戊唑醇抗體的單克隆細(xì)胞株。對(duì)所有陽(yáng)性孔均采用有限稀釋法進(jìn)行亞克隆。每個(gè)陽(yáng)性孔亞克1塊96孔板。

重復(fù)4次亞克隆過(guò)程和間接競(jìng)爭(zhēng)酶聯(lián)免疫法，得到一株能穩(wěn)定分泌戊唑醇單克隆抗體的單克隆細(xì)胞株YH3。

7 、單克隆細(xì)胞株YH3的凍存。

采用10%胎牛血清的RPMI-1640培養(yǎng)基在6孔板中培養(yǎng)單克隆細(xì)胞YH3，隔天換液，估計(jì)細(xì)胞密度達(dá)到0.5-1.0×10⁵個(gè)/mL時(shí)，收集細(xì)胞，用RPMI-1640培養(yǎng)基離心洗滌1次，向離心管中加入凍存液重懸，再將其轉(zhuǎn)移到凍存管，放入凍存盒，置于超低溫冰箱（-80°C）中，1天后，將凍存管轉(zhuǎn)到液氮罐中長(zhǎng)期保存。

實(shí)施例2 由單克隆細(xì)胞株YH3分泌的戊唑醇單克隆抗體的制備和亞型鑒定。

1、戊唑醇單克隆抗體的制備

選擇健康的BALB/c小鼠，每只小鼠腹腔注射無(wú)菌石蠟油0.6 mL。提前5天，采用含10%胎牛血清的RPMI-1640培養(yǎng)基培養(yǎng)單克隆細(xì)胞株YH3。小鼠注射石蠟油10天后，每只小鼠腹腔注射1′10⁶個(gè)單克隆細(xì)胞。每天觀察每只小鼠的活動(dòng)狀態(tài)，當(dāng)小鼠的腹部明顯增大時(shí)，并用手觸摸有緊繃感，同時(shí)小鼠還表現(xiàn)出不愿活動(dòng)時(shí)，收集腹水，離心（6000 rpm，12 min），吸上清，分裝，-20°C凍存。

2、單克隆抗體的純化

采用辛酸-硫酸銨沉淀法純化腹水。

3、亞型鑒定

采用洛陽(yáng)佰奧通公司的單抗亞型鑒定試劑盒測(cè)定戊唑醇單克隆抗體的亞型，測(cè)定結(jié)果表明戊唑醇單克隆抗體的亞型為IgG。

4、親和常數(shù)的測(cè)定

采用倍比稀釋法稀釋戊唑醇的包被原和多克隆抗體，包被原稀釋4個(gè)濃度，抗體稀釋8個(gè)濃度，每個(gè)濃度做5個(gè)平行，采用間接競(jìng)爭(zhēng)酶聯(lián)免疫法測(cè)定單克隆抗體（mAb）的效價(jià)。然后以單克隆抗體濃度（mAb濃度，μg/mL）對(duì)數(shù)值為橫坐標(biāo)，以吸光值（450nm）為縱坐標(biāo)用origin 8.5軟件繪制出4條曲線，然后兩兩一組，根據(jù)下式計(jì)算單克隆抗體的親和常數(shù)（Ka）：

Ka=(n-1)/2(n[Ab’]t-[Ab]t)

其中，n為2個(gè)包被原濃度的比值（大于1）；[Ab’]t 和[Ab]t分別為對(duì)應(yīng)最大吸光值（450nm）抑制一半時(shí)所對(duì)應(yīng)的抗體濃度（mol/L）。

根據(jù)圖1的測(cè)定結(jié)果，計(jì)算出抗體的親和常數(shù)為4.25×10⁸ L/mol。

5、戊唑醇單克隆抗體靈敏度的測(cè)定

采用間接競(jìng)爭(zhēng)酶聯(lián)免疫法（ic-ELISA）測(cè)定單克隆抗體對(duì)戊唑醇?xì)⒕鷦┑囊种菩Ч?，選擇包被原-BSA濃度為0.5mg/mL，抗體的蛋白濃度為0.125mg/mL，測(cè)定結(jié)果用origin 8.5軟件進(jìn)行四參數(shù)回歸擬合，結(jié)果見(jiàn)圖2。根據(jù)擬合的回歸方程，計(jì)算抗體的半數(shù)抑制濃度（IC₅₀）為0.21±0.03 ng/mL；標(biāo)準(zhǔn)曲線的線性范圍在1-10 ng/mL之間；檢測(cè)限達(dá)到了0.004 ng/mL。

實(shí)施例3 膠體金免疫層析試紙條檢測(cè)果蔬中戊唑醇?xì)埩舻膽?yīng)用

1、膠體金免疫層析試紙條靈敏度的測(cè)定

先用甲醇溶劑配制戊唑醇的標(biāo)準(zhǔn)品母液 1mg/mL，通過(guò)稀釋獲得一系列戊唑醇標(biāo)準(zhǔn)溶液：0 ng/mL, 1.0 ng/mL，2.0 ng/mL，5 ng/mL，10 ng/ mL。測(cè)定戊唑醇膠體金免疫層析試紙條的消線值。試紙條插入樣液中10分鐘后，裸眼觀察膠體金免疫層析試紙條的測(cè)定結(jié)果，見(jiàn)圖3。該試紙條檢測(cè)戊唑醇的裸眼消線值（靈敏度）達(dá)到了2 ng/mL；由此可見(jiàn)，單克隆細(xì)胞株YH3分泌單克隆抗體可以用于農(nóng)產(chǎn)品中戊唑醇?xì)埩舻暮Y選。

2、樣品預(yù)處理

稱取蘋(píng)果小塊樣品20.0 g，放入100 mL的離心管中，加入50 mL的乙腈，用勻漿機(jī)高速勻漿2分鐘，震蕩3分鐘，離心（4000 rpm, 5 min），取上清液，將其分成兩份，分別減壓旋蒸至干，一份用于氣相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用法的測(cè)定，用乙酸乙酯定容至5 mL。另一份用于膠體金免疫層析試紙條的測(cè)定，測(cè)定前用甲醇定容后，再用10%甲醇-磷酸鹽緩沖溶液稀釋后進(jìn)行測(cè)定。

3、樣品的測(cè)定

采用膠體金免疫層析試紙條對(duì)20份蘋(píng)果樣品中戊唑醇含量進(jìn)行測(cè)定。將試紙條插入樣液中，10-15分鐘后，肉眼觀察結(jié)果，30分鐘內(nèi)的觀察結(jié)果有效。試紙條的測(cè)定結(jié)果如下：測(cè)定5號(hào)樣品的試紙條出現(xiàn)了測(cè)試線（T線）和控制線（C 線）2條紅色，且T線比C線的顏色淺，說(shuō)明5號(hào)樣品中戊唑醇的含量低于2 ng/mL。測(cè)定其他蘋(píng)果樣品的試紙條僅在C線出現(xiàn)了一條紅線，說(shuō)明這些樣品中的戊唑醇含量均超過(guò)了2 ng/mL。同時(shí)用氣相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用法對(duì)這20份蘋(píng)果樣品進(jìn)行測(cè)定，測(cè)定結(jié)果如下：5號(hào)樣品中戊唑醇濃度為1.05 ng/mL；其他19份樣品中戊唑醇含量均遠(yuǎn)高于2 ng/mL。由此可見(jiàn)，膠體金免疫層析試紙條和氣相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用法的測(cè)定結(jié)果相吻合。