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暗色環(huán)紋炭團(tuán)菌活性代謝產(chǎn)物的制備方法與流程

文檔序號(hào):12412264閱讀:來(lái)源:國(guó)知局

技術(shù)特征:

1.一種暗色環(huán)紋炭團(tuán)菌活性代謝產(chǎn)物的制備方法,其特征在于,包括以下步驟:

步驟一、將暗色環(huán)紋炭團(tuán)菌在PDA培養(yǎng)基上活化培養(yǎng),挑取菌絲塊接入改良的PDB培養(yǎng)基中,于25~28℃,搖床培養(yǎng)8~12d,得初次發(fā)酵液;

其中所述改良的PDB培養(yǎng)基包括PDB和100~150mL三七莖葉原漿;

步驟二、按體積質(zhì)量比為1000mL:0.00004~0.0001g:0.00004~0.0001g向步驟一中得到的初次發(fā)酵液中加入氯化鈣和琥珀酸鈉,于25~28℃,搖床培養(yǎng)3~8d,得二次發(fā)酵液;

步驟三、按體積比為1:1~2向步驟二中得到的二次發(fā)酵液中加入乙酸乙酯,離心處理,濾除沉淀物,取上清液,然后旋蒸蒸發(fā)去除溶劑,旋蒸溫度為50~60℃,即得到暗色環(huán)紋炭團(tuán)菌活性代謝產(chǎn)物。

2.如權(quán)利要求1所述的暗色環(huán)紋炭團(tuán)菌活性代謝產(chǎn)物的制備方法,其特征在于,步驟三中乙酸乙酯可以用氯仿或者乙醚替代,其旋蒸溫度分別為45~55℃和20~30℃。

3.如權(quán)利要求1所述的暗色環(huán)紋炭團(tuán)菌活性代謝產(chǎn)物的制備方法,其特征在于,步驟一中三七莖葉原漿的制備方法:將三七的莖和葉放入研缽中,加入冰水研磨30min,然后加入胱氨酸、蘇氨酸、白氨酸和賴氨酸,置于超聲波中以60kHz超聲頻率處理40min,再用研缽研磨10min,置于超聲波中以60kHz超聲頻率處理20min,過(guò)濾即得,置于4℃環(huán)境中保藏,備用;

其中所述三七的莖、葉、冰水、胱氨酸、蘇氨酸、白氨酸和賴氨酸的質(zhì)量比為1:1:10:0.00005:0.00005:0.00005:0.00005。

4.如權(quán)利要求1所述的暗色環(huán)紋炭團(tuán)菌活性代謝產(chǎn)物的制備方法,其特征在于,步驟一的初次發(fā)酵液進(jìn)行誘導(dǎo)后處理:將1000重量份初次發(fā)酵液放入4℃環(huán)境中培養(yǎng)1d,然后加入1重量份病原菌懸濁液,再移至10℃環(huán)境中培養(yǎng)5d,然后移至搖床,于25~28℃,200r/min條件下繼續(xù)培養(yǎng)3d后即得;

其中,所述病原菌懸濁液的制備方法:挑取0.1~0.5重量份病原菌菌絲塊至100重量份水中,再用電動(dòng)攪拌器以1000r/min的轉(zhuǎn)速條件下攪拌20~30min制成懸濁液;所述病原菌菌絲塊可以為三七灰霉病病原菌和三七圓斑病病原菌的一種或兩種。

5.一種如權(quán)利要求1~4中任一項(xiàng)所述的制備方法獲得的暗色環(huán)紋炭團(tuán)菌活性代謝產(chǎn)物的應(yīng)用,其特征在于,在防治三七灰霉病和三七圓斑病中的應(yīng)用。

6.如權(quán)利要求5所述的暗色環(huán)紋炭團(tuán)菌活性代謝產(chǎn)物的應(yīng)用,其特征在于,還包括在防治苦玄參褐斑病、艾納香條斑病、廣西莪術(shù)葉斑病、草豆蔻葉斑病和羅漢果斑枯病中的應(yīng)用。

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