本發(fā)明涉及一種從動(dòng)物表皮中提取膠原蛋白的方法，具體涉及一種從牛皮中提取膠原蛋白的方法。
背景技術(shù)：
：膠原蛋白是一種細(xì)胞外蛋白質(zhì)，由3條肽鏈擰成螺旋形的纖維狀蛋白質(zhì)，膠原蛋白含有豐富的氨基酸，其中必需氨基酸占氨基酸總量的15.78％，蛋白質(zhì)營(yíng)養(yǎng)價(jià)值高，膠原蛋白制品已被廣泛應(yīng)用于食品、保健食品、化妝品、醫(yī)藥等領(lǐng)域，市場(chǎng)需求急劇增加，因此膠原蛋白的提取工藝越來(lái)越受到關(guān)注；牛皮中富含膠原蛋白，但是牛皮一般用作皮鞋，皮包，皮帶等各類皮具，其中的膠原蛋白在皮具加工過程中被破壞掉，造成了資源的浪費(fèi)，在膠原蛋白備受關(guān)注的當(dāng)下，提取方法也是多種多樣，但是由于提取方法的不合理，導(dǎo)致后期對(duì)膠原蛋白提純率與純度較低，嚴(yán)重影響其應(yīng)用價(jià)值，也浪費(fèi)了資源，因此如何在傳統(tǒng)提取方法的基礎(chǔ)上進(jìn)行改進(jìn)來(lái)達(dá)到提高膠原蛋白的提取率和純度就顯得尤為重要。技術(shù)實(shí)現(xiàn)要素：本發(fā)明為解決上述技術(shù)問題，提供了一種從牛皮中提取膠原蛋白的方法。具體是通過以下技術(shù)方案來(lái)實(shí)現(xiàn)的：一種從牛皮中提取膠原蛋白的方法，包括以下步驟：(1)牛皮預(yù)處理：將新鮮牛皮刮毛，剔除皮下的肉，用0.15～0.2％的生理鹽水將牛皮浸泡25～30min，用清水沖洗牛皮10～15min，將牛皮剪成碎塊，加入脫脂劑，浸泡35～40min，過濾，加入濾渣質(zhì)量的3～5倍的酒石酸浸泡20～25min，用清水沖洗至濾渣水溶液PH值為6～7，得牛皮濾渣。脫脂劑，是將脫脂酶、三氯甲烷、甲醇和蒸餾水按1∶1.7～2.2∶0.5～0.8∶5.5～6的質(zhì)量比混合，在55～60℃下熬制45～55min，即可。(2)熬合：將步驟(1)處理后的牛皮濾渣，烘干至含水量為5.5～7％，加水，在100℃下攪拌55～65min后，冷卻至40～50℃，采用水浴恒溫加熱，加入檸檬酸調(diào)節(jié)溶液PH值為4.5～5.5，恒溫?cái)嚢?～3h，抽濾。(3)精制：將步驟(2)中抽濾得濾液，加入濾液質(zhì)量的60～70％的乙醇，在40～50℃下水浴浸提50～60min，減壓蒸餾回收乙醇，得殘留液，加入殘留液4～5倍的二氯甲烷，恒溫?cái)嚢?0～100min，減壓蒸餾回收二氯甲烷，將水浴溫度調(diào)至100～120℃，繼續(xù)攪拌10～15min，即可。進(jìn)一步，所述的脫脂酶，是磷酸酯酶、固醇酶、羧酸酯酶和枯草桿菌脂肪水解酶中的一種。綜上所述，本發(fā)明的有益效果在于：工藝簡(jiǎn)單，操作容易，充分利用牛皮資源，避免傳統(tǒng)方法用來(lái)生產(chǎn)皮具的單一做法，經(jīng)過本發(fā)明方法明顯提高膠原蛋白的收率，高達(dá)75.6％，本發(fā)明方法對(duì)膠原蛋白的收率不受原材料的限制。具體實(shí)施方式下面對(duì)本發(fā)明的具體實(shí)施方式作進(jìn)一步詳細(xì)的說(shuō)明，但本發(fā)明并不局限于這些實(shí)施方式，任何在本實(shí)施例基本精神上的改進(jìn)或代替，仍屬于本發(fā)明權(quán)利要求所要求保護(hù)的范圍。實(shí)施例1一種從牛皮中提取膠原蛋白的方法，包括以下步驟：(1)牛皮預(yù)處理：將新鮮牛皮刮毛，剔除皮下的肉，用0.15％的生理鹽水將牛皮浸泡25min，用清水沖洗牛皮10min，將牛皮剪成碎塊，加入脫脂劑，浸泡35min，過濾，加入濾渣質(zhì)量的3倍的酒石酸浸泡20min，用清水沖洗至濾渣水溶液PH值為6，得牛皮濾渣。脫脂劑，是將脫脂酶、三氯甲烷、甲醇和蒸餾水按1∶1.7∶0.5∶5.5的質(zhì)量比混合，在55℃下熬制45min，即可。(2)熬合：將步驟(1)處理后的牛皮濾渣，烘干至含水量為5.5％，加水，在100℃下攪拌55min后，冷卻至40℃，采用水浴恒溫加熱，加入檸檬酸調(diào)節(jié)溶液PH值為4.5，恒溫?cái)嚢?h，抽濾。(3)精制：將步驟(2)中抽濾得濾液，加入濾液質(zhì)量的60％的乙醇，在40℃下水浴浸提50min，減壓蒸餾回收乙醇，得殘留液，加入殘留液4倍的二氯甲烷，恒溫?cái)嚢?0min，減壓蒸餾回收二氯甲烷，將水浴溫度調(diào)至100℃，繼續(xù)攪拌10min，即可。所述的脫脂酶，是磷酸酯酶。實(shí)施例2一種從牛皮中提取膠原蛋白的方法，包括以下步驟：(1)牛皮預(yù)處理：將新鮮牛皮刮毛，剔除皮下的肉，用0.2％的生理鹽水將牛皮浸泡30min，用清水沖洗牛皮15min，將牛皮剪成碎塊，加入脫脂劑，浸泡40min，過濾，加入濾渣質(zhì)量的5倍的酒石酸浸泡25min，用清水沖洗至濾渣水溶液PH值為7，得牛皮濾渣。脫脂劑，是將脫脂酶、三氯甲烷、甲醇和蒸餾水按1∶2.2∶0.8∶6的質(zhì)量比混合，在60℃下熬制55min，即可。(2)熬合：將步驟(1)處理后的牛皮濾渣，烘干至含水量為7％，加水，在100℃下攪拌65min后，冷卻至50℃，采用水浴恒溫加熱，加入檸檬酸調(diào)節(jié)溶液PH值為5.5，恒溫?cái)嚢?h，抽濾。(3)精制：將步驟(2)中抽濾得濾液，加入濾液質(zhì)量的70％的乙醇，在50℃下水浴浸提60min，減壓蒸餾回收乙醇，得殘留液，加入殘留液5倍的二氯甲烷，恒溫?cái)嚢?00min，減壓蒸餾回收二氯甲烷，將水浴溫度調(diào)至120℃，繼續(xù)攪拌15min，即可。所述的脫脂酶，是固醇酶。實(shí)施例3一種從牛皮中提取膠原蛋白的方法，包括以下步驟：(1)牛皮預(yù)處理：將新鮮牛皮刮毛，剔除皮下的肉，用0.18％的生理鹽水將牛皮浸泡28min，用清水沖洗牛皮13min，將牛皮剪成碎塊，加入脫脂劑，浸泡38min，過濾，加入濾渣質(zhì)量的4倍的酒石酸浸泡23min，用清水沖洗至濾渣水溶液PH值為6.5，得牛皮濾渣。脫脂劑，是將脫脂酶、三氯甲烷、甲醇和蒸餾水按1∶2∶0.7∶5.8的質(zhì)量比混合，在58℃下熬制50min，即可。(2)熬合：將步驟(1)處理后的牛皮濾渣，烘干至含水量為6％，加水，在100℃下攪拌60min后，冷卻至45℃，采用水浴恒溫加熱，加入檸檬酸調(diào)節(jié)溶液PH值為5，恒溫?cái)嚢?.5h，抽濾。(3)精制：將步驟(2)中抽濾得濾液，加入濾液質(zhì)量的65％的乙醇，在45℃下水浴浸提55min，減壓蒸餾回收乙醇，得殘留液，加入殘留液4.5倍的二氯甲烷，恒溫?cái)嚢?5min，減壓蒸餾回收二氯甲烷，將水浴溫度調(diào)至110℃，繼續(xù)攪拌13min，即可。所述的脫脂酶，是羧酸酯酶。實(shí)施例4一種從牛皮中提取膠原蛋白的方法，包括以下步驟：(1)牛皮預(yù)處理：將新鮮牛皮刮毛，剔除皮下的肉，用0.2％的生理鹽水將牛皮浸泡25min，用清水沖洗牛皮15min，將牛皮剪成碎塊，加入脫脂劑，浸泡35min，過濾，加入濾渣質(zhì)量的3倍的酒石酸浸泡25min，用清水沖洗至濾渣水溶液PH值為6，得牛皮濾渣。脫脂劑，是將脫脂酶、三氯甲烷、甲醇和蒸餾水按1∶2.2∶0.5∶5.5的質(zhì)量比混合，在55℃下熬制55min，即可。(2)熬合：將步驟(1)處理后的牛皮濾渣，烘干至含水量為7％，加水，在100℃下攪拌55min后，冷卻至50℃，采用水浴恒溫加熱，加入檸檬酸調(diào)節(jié)溶液PH值為5.5，恒溫?cái)嚢?h，抽濾。(3)精制：將步驟(2)中抽濾得濾液，加入濾液質(zhì)量的60％的乙醇，在40℃下水浴浸提60min，減壓蒸餾回收乙醇，得殘留液，加入殘留液4倍的二氯甲烷，恒溫?cái)嚢?0min，減壓蒸餾回收二氯甲烷，將水浴溫度調(diào)至120℃，繼續(xù)攪拌15min，即可。所述的脫脂酶，是枯草桿菌脂肪水解酶。實(shí)施例5一種從牛皮中提取膠原蛋白的方法，包括以下步驟：(1)牛皮預(yù)處理：將新鮮牛皮刮毛，剔除皮下的肉，用0.2％的生理鹽水將牛皮浸泡25min，用清水沖洗牛皮10min，將牛皮剪成碎塊，加入脫脂劑，浸泡35min，過濾，加入濾渣質(zhì)量的3倍的酒石酸浸泡25min，用清水沖洗至濾渣水溶液PH值為7，得牛皮濾渣。脫脂劑，是將脫脂酶、三氯甲烷、甲醇和蒸餾水按1∶2.2∶0.5∶6的質(zhì)量比混合，在55℃下熬制45min，即可。(2)熬合：將步驟(1)處理后的牛皮濾渣，烘干至含水量為7％，加水，在100℃下攪拌55min后，冷卻至40℃，采用水浴恒溫加熱，加入檸檬酸調(diào)節(jié)溶液PH值為5.5，恒溫?cái)嚢?h，抽濾。(3)精制：將步驟(2)中抽濾得濾液，加入濾液質(zhì)量的70％的乙醇，在50℃下水浴浸提50min，減壓蒸餾回收乙醇，得殘留液，加入殘留液5倍的二氯甲烷，恒溫?cái)嚢?0min，減壓蒸餾回收二氯甲烷，將水浴溫度調(diào)至120℃，繼續(xù)攪拌10min，即可。所述的脫脂酶，是羧酸酯酶。實(shí)施例6操作方法同實(shí)施例1，不同之處在于將新鮮牛皮更換為保存3個(gè)月的干牛皮。實(shí)施例7操作方法同實(shí)施例1，不同之處在于在步驟(1)中不添加脫脂劑。實(shí)施例8操作方法同實(shí)施例1，不同之處在于在步驟(3)的精制步驟取消。實(shí)驗(yàn)例對(duì)本發(fā)明的實(shí)施例1～8的膠原蛋白的收率進(jìn)行統(tǒng)計(jì)，結(jié)果如表1所示：表1對(duì)比項(xiàng)膠原蛋白(％)實(shí)施例174.8實(shí)施例275.1實(shí)施例375.6實(shí)施例475.2實(shí)施例574.9實(shí)施例675.1實(shí)施例741.3實(shí)施例855.6說(shuō)明：實(shí)施例1～5為本發(fā)明的膠原蛋白的收率，高達(dá)75.6％，實(shí)施例6不是新鮮的牛皮，收率和新鮮的牛皮的膠原蛋白的收率接近，說(shuō)明本發(fā)明方法對(duì)膠原蛋白的收率不受原材料的限制，實(shí)施例7不添加脫脂劑，極大的減少了膠原蛋白的收率，實(shí)施例8沒有精制的步驟，減少了膠原蛋白的收率。實(shí)施例6～8均以實(shí)施例1為對(duì)照，若以實(shí)施2～5作為對(duì)照進(jìn)行比較，結(jié)論不變。當(dāng)前第1頁(yè)1 2 3