本發(fā)明屬于生物技術領域，具體來說涉及一種伯頓絲孢畢赤酵母FBKL2.0089，同時涉及該伯頓絲孢畢赤酵母FBKL2.0089菌種在產阿拉伯糖醇中的用途。
背景技術：
醬香型白酒生產中，酵母從功能上主要分為兩大類。一類是產酒酵母；另一類是產脂酵母。研究表明，酵母除了具有產酒和產香的作用外，一部分酵母還具有產多元醇類物質的作用，如：阿拉伯糖醇、丙三醇、木糖醇、麥芽糖醇等，以增加白酒的醇甜味，提升白酒的品質。
隨著人們消費口味的轉變，大眾從重香型轉為香氣及口味并重，因此，對白酒中呈味物質的研究顯得尤為重要。甜味是一種讓人感覺比較愉悅的口感，尤其在酒精度較高的白酒中，微甜味能使酒體顯得綿柔醇厚。多元醇是大曲中的酵母菌在生成酒精的同時發(fā)酵糖所產生的，由于糖不能進入白酒中，因此，多元醇是形成白酒中甜味的主要來源。通過對大曲中酵母產多元醇情況的研究發(fā)現(xiàn)：阿拉伯糖醇的產量最高。阿拉伯糖醇作為糖醇的一員,鑒于其熱值低、抗齲齒、以及在人體內代謝不影響胰島素水平的特性，可作為高檔甜味劑廣泛添加于保健食品中，此外，阿拉伯糖醇還可以用于改善酒精飲料的品質。
目前用于產阿拉伯糖醇的菌株主要為曲霉菌屬、德巴利氏酵母屬、漢遜酵母屬等等，而伯頓絲孢畢赤酵母產阿拉伯糖醇類物質的研究較少，沒有相關的報道。
技術實現(xiàn)要素：
本發(fā)明的目的在于提供一株產阿拉伯糖醇的伯頓絲孢畢赤酵母。
本發(fā)明的另一目的在于提供該伯頓絲孢畢赤酵母在產阿拉伯糖醇中的用途。
一種伯頓絲孢畢赤酵母FBKL2.0089，其形態(tài)特征：將菌種劃線接種于PDA培養(yǎng)基上，28℃培養(yǎng)2d，菌落直徑5～8 mm，菌落圓形埑狀，顏色乳白色，質地呈奶油狀，不透明，菌落邊緣呈毯狀。
該菌種已2016年6月13 日保藏到中國典型培養(yǎng)物保藏中心（地址：中國武漢武漢大學），保藏號：CCTCC NO：M 2016323，名稱：伯頓絲孢畢赤酵母FBKL2.0089(Hyphopichia burtonii srain FBKL2.0089)。
本發(fā)明的一種伯頓絲孢畢赤酵母FBKL2.0089(Hyphopichia burtonii srain FBKL2.0089)的分離，包括以下步驟：
（一）對伯頓絲孢畢赤酵母FBKL2.0089(Hyphopichia burtonii srain FBKL2.0089)的分離：
從貴州中心釀酒集團有限公司醬香型白酒大曲中，取粉碎的大曲樣品10g,加入裝有90ml無菌生理鹽水和玻璃珠的三角瓶中，28℃搖床振蕩30 min，混勻。在超凈工作臺中吸取1 mL菌懸液注入裝有9 mL無菌生理鹽水的試管中，進行梯度稀釋，取 10-1，,10-2，10-3、10-4,10-5梯度分別進行傾注和涂布平板。28 ℃倒置培養(yǎng)2d后計數(shù), 并選擇具有典型酵母菌落形態(tài)的單菌落，接種劃線到PDA瓊脂培養(yǎng)基上，重復3～4次，直至獲得純種菌種，然后將各菌株分別編號，最后斜面劃線低溫保藏。
（二）培養(yǎng)基：
鑒定培養(yǎng)基：孟加拉紅培養(yǎng)基，蛋白胨5g，葡萄糖10g，磷酸二氫鉀1g，硫酸鎂(MgSO4·7H2O)0.5g，瓊脂20g，氯霉素0.1g，1/3000孟加拉紅溶液100mL，蒸餾水1000mL。
保藏培養(yǎng)基：麥芽汁瓊脂培養(yǎng)基，麥芽膏粉130g/L,氯霉素0.1g/L,瓊脂15/L,PH5.8—6.2。
種子培養(yǎng)基：葡萄糖1g，酵母膏0.5g，蛋白胨1g, 蒸餾水50mL ,121℃滅菌20min。
液態(tài)發(fā)酵培養(yǎng)基：葡萄糖10g，酵母膏0.5g，蛋白胨1g, 蒸餾水50mL,115℃滅菌20min。
（三）菌種的保種和傳代：
1.菌種保藏培養(yǎng)基：
（1）麥芽汁瓊脂培養(yǎng)基：麥芽膏粉130g/L,氯霉素0.1g/L,瓊脂15g/L,PH5.8—6.2，115℃滅菌20min。
（2）YEPD（YPD）培養(yǎng)基：酵母膏10g，蛋白胨20g，葡萄糖20g，瓊脂20g,蒸餾水1000ml，pH6.0,115℃滅菌20min。
2.保存方法有4種：
（1）傳代培養(yǎng)酵母菌種保存法：將酵母接種于麥芽汁瓊脂斜面培養(yǎng)基上，置溫箱28℃培養(yǎng)2d后，將橡膠塞用滅菌固體石蠟熔封，移至4℃冰箱保存，一般酵母在4℃冰箱內可以保存一個月,需定期移植。（2）砂土管酵母菌種保存法：取清潔的海沙，用1mol/L的氫氧化鈉溶液清洗，然后再用1mol/L的鹽酸溶液清洗，在后用流水沖洗。分裝試管，約2-3厘米深，干熱滅菌，加入酵母培養(yǎng)液1mL左右與砂土混勻，置真空干燥管內干燥，待完全干燥后熔封保存。
（3）真空冷凍干燥酵母菌種保存法：將待保存的微生物細胞或者孢子懸浮在合適的保護劑中，預先將細胞冷凍，使水凍結，然后在真空條件下，使冰升華以除去大部分水，殘留的一些不凍結的水分，再通過蒸發(fā)從細胞中除去。
（4）液體石蠟法：亦稱礦物油保藏法，將酵母菌種接種在適宜的斜面培養(yǎng)基上，最適條件下培養(yǎng)至待得到健壯的菌體后注入滅菌的液體石蠟，使其覆蓋整個斜面，再直立放置于低溫（4～6℃）干燥處進行保存的一種菌種保藏方法，是定期移植保藏法的輔助方法。
（四）菌種的生態(tài)特征：
該菌形成的菌落在PDA培養(yǎng)基上，28℃培養(yǎng)2d，菌落直徑mm，菌落圓形埑狀，顏色乳白色，質地呈奶油狀，不透明，菌落邊緣呈毯狀。菌落易挑起。細胞為卵圓形，細胞2.59～4.19μm，長3.95～6.03μm，能形成假菌絲及產子囊孢子。
（五）菌種的培養(yǎng)特性
（1）培養(yǎng)溫度20℃～30℃，最適溫度28℃～30℃；
（2）培養(yǎng)pH 3～7.5，最佳范圍為4.5～5.0。
細胞為卵圓形，細胞2.59～4.19μm，長3.95～6.03μm，有假菌絲及產子囊孢子，芽殖，根據(jù)《酵母菌的特征及鑒定手冊》，從樣品中經篩菌、分離、純化、鏡檢、生理生化以及采用16S rDNA測序，將測得序列在DNAMAN軟件中進行序列反轉，在NCBI中進行BLAST比對，再用MEGA5軟件建立所分離菌株的系統(tǒng)發(fā)育樹，確定所分離的菌株為伯頓絲孢畢赤酵母FBKL2.0089(Hyphopichia burtonii srain FBKL2.0089)。
本發(fā)明的一種伯頓絲孢畢赤酵母FBKL2.0089在產阿拉伯糖醇中的用途。
本發(fā)明與現(xiàn)有技術相比,具有明顯的有益效果,從以上技術方案可知:本發(fā)明的伯頓絲孢畢赤酵母FBKL2.0089(Hyphopichia burtonii srain FBKL2.0089)對溫度、pH等自然環(huán)境條件的適應范圍廣，對不良環(huán)境的耐受力強，容易培養(yǎng)和保存及工業(yè)化生產，生產成本低，不污染環(huán)境，不破壞生態(tài)平衡。
具體實施方式
一種伯頓絲孢畢赤酵母FBKL2.0089(Hyphopichia burtonii srain FBKL2.0089)的分離方法，包括以下步驟：
a、菌種的分離：從貴州中心釀酒集團有限公司的酒曲中, 稱取10g大曲樣品放入盛90ml無菌水并帶有玻璃珠的三角燒瓶中,振蕩約30min。取1ml樣品懸液進行10倍梯度稀釋分別由10-4、10-5、10-6和10-7稀釋度的樣品懸液中各取0.2ml涂布于分離培養(yǎng)基上,28℃靜止培養(yǎng)2d, 挑取單菌落進一步篩選,斜面培養(yǎng)基上保藏。b、菌種的保種和傳代：
b、菌種的保種和傳代：
1.菌種保藏培養(yǎng)基：
（1）麥芽汁瓊脂培養(yǎng)基：麥芽膏粉130g/L,氯霉素0.1g/L,瓊脂15g/L,PH5.8—6.2，115℃滅菌20min。
（2）YEPD（YPD）培養(yǎng)基：酵母膏10g，蛋白胨20g，葡萄糖20g，瓊脂20g,蒸餾水1000ml，pH6.0,115℃滅菌20min。
2.保存方法：
（1）傳代培養(yǎng)酵母菌種保存法：將酵母接種于麥芽汁瓊脂斜面培養(yǎng)基上，置溫箱28℃培養(yǎng)2d后，將橡膠塞用滅菌固體石蠟熔封，移至4℃冰箱保存，一般酵母在4℃冰箱內可以保存一個月,需定期移植。（2）砂土管酵母菌種保存法：取清潔的海沙，用1mol/L的氫氧化鈉溶液清洗，然后再用1mol/L的鹽酸溶液清洗，在后用流水沖洗。分裝試管，約2-3厘米深，干熱滅菌，加入酵母培養(yǎng)液1mL左右與砂土混勻，置真空干燥管內干燥，待完全干燥后熔封保存。
（3）真空冷凍干燥酵母菌種保存法：將待保存的微生物細胞或者孢子懸浮在合適的保護劑中，預先將細胞冷凍，使水凍結，然后在真空條件下，使冰升華以除去大部分水，殘留的一些不凍結的水分，再通過蒸發(fā)從細胞中除去。
（4）液體石蠟法：亦稱礦物油保藏法，將酵母菌種接種在適宜的斜面培養(yǎng)基上，最適條件下培養(yǎng)至待得到健壯的菌體后注入滅菌的液體石蠟，使其覆蓋整個斜面，再直立放置于低溫（4～6℃）干燥處進行保存的一種菌種保藏方法，是定期移植保藏法的輔助方法。
產多元醇能力測定：
（1）活化菌種：將篩選出的酵母先活化，28 ℃培養(yǎng)48h。
（2）種子培養(yǎng)：將活化好的菌株挑一環(huán)分別接入含有50ml種子培養(yǎng)基的250 mL 三角瓶中，28℃，160 r/min，搖瓶培養(yǎng)24 h。
（3）發(fā)酵液制備：將上種子培養(yǎng)液按5%的接種比例接入含有50ml發(fā)酵培養(yǎng)基的250ml三角瓶中，28℃，160r/min，搖瓶培養(yǎng)5 d，4℃儲存?zhèn)溆谩?/p>
（4）產多元醇分析：通過薄層層析法對發(fā)酵液中的多元醇產物進行初步定性和粗定量檢測。依據(jù)發(fā)酵液中產物斑點的比移值(Rf)與阿拉伯糖醇標準品比移值(Rf)之間的關系來對發(fā)酵液中產物進行定性，并依據(jù)發(fā)酵液斑點的大小和顏色深淺來對酵母多元醇產物進行定量分析。取發(fā)酵液1 mL，10 000r / min離心 10 min，用毛細吸管將上清點樣于微晶纖維素板上，放入配比為: 正丁醇:冰乙酸:水＝5:1:2（V/V）的展開劑中層析4h,層析圖譜的顯色采用飽和硝酸銀丙酮溶液(A)-氫氧化鈉酒精溶液(B)。展層后將板取出，自然干燥，先將溶液A噴于層析紙上，干燥后再噴溶液B于層析濾紙，待形成黑色或棕色顯色點后，再用6mol/L的氨水溶解多余的硝酸銀，然后在流水下沖洗 2min，吹干后即得到清晰的層析譜圖 ( 見表 1) 。
由表1 可以明顯看到，標品阿拉伯糖醇的遷移率Ｒf值和發(fā)酵液樣品的遷移率一致。
以上所述，僅是本發(fā)明的較佳實施例而已，并非對本發(fā)明作任何形式上的限制，任何未脫離本發(fā)明技術方案內容，依據(jù)本發(fā)明的技術實質對以上實施例所作的任何簡單修改、等同變化與修飾，均仍屬于本發(fā)明技術方案的范圍內。