本發(fā)明涉及生物
技術領域：
，尤其涉及一種篩選或輔助篩選不同株高小麥的方法及其專用試劑盒。
背景技術：
：小麥是世界上主要的糧食作物之一，占全球糧食作物種植面積的17％，養(yǎng)活了世界40％的人口，為人類提供了20％的食物能量和蛋白質，全世界35-40％的人口以它為主要的食物來源。因此，小麥產量直接關系到世界的糧食安全。目前，在有限耕地面積的情況下，選育單產突出的小麥新品種是穩(wěn)定和提高小麥產量最經濟有效的途徑。小麥產量受多種因素(如穗數、穗粒數和粒重)的影響，各個因素的協調是小麥高產的關鍵。株高是影響小麥產量的重要因素之一，其表現為：在一定范圍內，隨著株高的增加，小麥產量也相應增加；但超出一定范圍，隨著株高的增加，小麥產量反而下降，主要原因為葉面積系數已達到最佳值、易倒伏、收割困難等等。因此，挖掘控制小麥株高相關性狀的優(yōu)良等位變異，并且開發(fā)相應等位變異的功能標記對高產小麥品種的分子標記輔助育種具有重要的意義。單核甘酸多態(tài)性(Singlenucleotidepolymorphism，SNP)是指在基因組水平上由單個核苷酸變異所引起的DNA序列的多態(tài)性。隨著技術的發(fā)展，SNP檢測方法越來越多，檢測費用也越來越經濟，使它成為繼SSR之后的新一代分子標記。目前在小麥基因組研究過程中，SNP標記已被應用于小麥遺傳圖譜的構建、小麥重要農藝性狀相關基因的定位和基因組關聯分析等方面。酶切擴增多態(tài)性序列標記(Cleavedamplifiedpolymorphismsequence，CAPS)主要是對PCR擴增的DNA片段進行限制性酶切分析。根據基因序列設計特異引物，將特異PCR擴增與限制性酶切兩種方法相結合用來檢測核酸序列多態(tài)性的一種分子標記技術。它的基本原理是利用己知位點的DNA序列設計一對特異的PCR引物,然后用該引物特異擴增DNA片段,之后用特定的限制性內切酶酶切消化所得到的PCR擴增產物,最后通過凝膠電泳分離檢測酶切產物。技術實現要素：本發(fā)明所要解決的技術問題是如何篩選或輔助篩選不同株高的小麥。為解決上述技術問題，本發(fā)明首先提供了篩選或輔助篩選不同株高小麥的方法。本發(fā)明所提供的篩選或輔助篩選不同株高小麥的方法，具體可為方法一，可包括如下步驟：檢測待測小麥基于TaSPL21-6A基因的基因型為基因型HapI、基因型HapII還是基因型HapIII，基因型HapI的小麥的株高>基因型HapIII的小麥的株高>基因型HapII的小麥的株高；所述基因型HapI的小麥為基于T125CSNP位點的基因型為TT純合型、基于T160CSNP位點的基因型為CC純合型且基于C169GSNP位點的基因型為CC純合型的小麥；所述基因型HapII的小麥為基于T125CSNP位點的基因型為CC純合型、基于T160CSNP位點的基因型為TT純合型且基于C169GSNP位點的基因型為GG純合型的小麥；所述基因型HapIII的小麥為基于T125CSNP位點的基因型為CC純合型、基于T160CSNP位點的基因型為TT純合型且基于C169GSNP位點的基因型為CC純合型的小麥；所述“T125CSNP位點”為小麥基因組中序列表中的序列9自5′末端起第125位核苷酸；所述“T160CSNP位點”為小麥基因組中序列表中的序列9自5′末端起第160位核苷酸；所述“C169GSNP位點”為小麥基因組中序列表中的序列9自5′末端起第169位核苷酸。本發(fā)明所提供的篩選或輔助篩選不同株高小麥的方法，具體可為方法二，可包括如下步驟：檢測待測小麥基于TaSPL21-6A基因的基因型為基因型HapI、基因型HapII還是基因型HapIII，基因型HapI的小麥的株高>基因型HapIII的小麥的株高>基因型HapII的小麥的株高；所述基因型HapI的小麥為基于T125CSNP位點的基因型為TT純合型、基于T160CSNP位點的基因型為CC純合型且基于C169GSNP位點的基因型為CC純合型的小麥；所述基因型HapII的小麥為基于T125CSNP位點的基因型為CC純合型、基于T160CSNP位點的基因型為TT純合型且基于C169GSNP位點的基因型為GG純合型的小麥；所述基因型HapIII的小麥為基于T125CSNP位點的基因型為CC純合型、基于T160CSNP位點的基因型為TT純合型且基于C169GSNP位點的基因型為CC純合型的小麥；所述“T125CSNP位點”為小麥基因組中序列表中的序列10自5′末端起第125位核苷酸；所述“T160CSNP位點”為小麥基因組中序列表中的序列10自5′末端起第160位核苷酸；所述“C169GSNP位點”為小麥基因組中序列表中的序列10自5′末端起第169位核苷酸。本發(fā)明所提供的篩選或輔助篩選不同株高小麥的方法，具體可為方法三，依次可包括如下步驟：(1)以待測小麥的基因組DNA為模板，采用引物F和引物R組成的引物對進行PCR擴增，得到PCR擴增產物；(2)將所述PCR擴增產物用限制性內切酶BglI進行酶切，得到酶切產物A；將所述PCR擴增產物用限制性內切酶BseDI或SecI進行酶切，得到酶切產物B；(3)進行如下評判：如果所述酶切產物A為兩條DNA片段且所述酶切產物B為一條DNA片段，則待測小麥基于TaSPL21-6A基因的基因型為基因型HapI；如果所述酶切產物A為一條DNA片段且所述酶切產物B為兩條DNA片段，則待測小麥基于TaSPL21-6A基因的基因型為基因型HapII；如果所述酶切產物A為一條DNA片段且所述酶切產物B為一條DNA片段，則待測小麥基于TaSPL21-6A基因的基因型為基因型HapIII；基因型HapI的小麥的株高>基因型HapIII的小麥的株高>基因型HapII的小麥的株高；所述引物F為如下a1)或a2)：a1)序列表的序列4所示的單鏈DNA分子；a2)將序列4經過一個或幾個核苷酸的取代和/或缺失和/或添加且與序列4具有相同功能的DNA分子；所述引物R為如下a3)或a4)：a3)序列表的序列5所示的單鏈DNA分子；a4)將序列5經過一個或幾個核苷酸的取代和/或缺失和/或添加且與序列5具有相同功能的DNA分子。本發(fā)明所提供的篩選或輔助篩選不同株高小麥的方法，具體可為方法四，依次可包括如下步驟：(1)以待測小麥的基因組DNA為模板，采用引物F和引物R組成的引物對進行PCR擴增，得到PCR擴增產物；(2)將所述PCR擴增產物用限制性內切酶BglI進行酶切，得到酶切產物A；將所述PCR擴增產物用限制性內切酶BseDI或SecI進行酶切，得到酶切產物B；(3)進行如下評判：如果酶切產物A中具有176bp的DNA片段和166bp的DNA片段且所述酶切產物B中具有342bp的DNA片段，則待測小麥基于TaSPL21-6A基因的基因型為基因型HapI；如果所述酶切產物A具有342bp的DNA片段且酶切產物B具有165bp的DNA片段和177bp的DNA片段，則待測小麥基于TaSPL21-6A基因的基因型為基因型HapII；如果所述酶切產物A具有342bp的DNA片段且酶切產物B具有342bp的DNA片段，則待測小麥基于TaSPL21-6A基因的基因型為基因型HapIII；基因型HapI的小麥的株高>基因型HapIII的小麥的株高>基因型HapII的小麥的株高；所述引物F為如下a1)或a2)：a1)序列表的序列4所示的單鏈DNA分子；a2)將序列4經過一個或幾個核苷酸的取代和/或缺失和/或添加且與序列4具有相同功能的DNA分子；所述引物R為如下a3)或a4)：a3)序列表的序列5所示的單鏈DNA分子；a4)將序列5經過一個或幾個核苷酸的取代和/或缺失和/或添加且與序列5具有相同功能的DNA分子。本發(fā)明所提供的篩選或輔助篩選不同株高小麥的方法，具體可為方法五，依次可包括如下步驟：(1)以待測小麥的基因組DNA為模板，采用引物F和引物R組成的引物對進行PCR擴增，得到PCR擴增產物；(2)將所述PCR擴增產物進行測序；(3)進行如下評判：如果所述PCR擴增產物的核苷酸序列如序列表中的序列1自5'末端起第1至342位所示，則待測小麥基于TaSPL21-6A基因的基因型為基因型HapI；如果所述PCR擴增產物的核苷酸序列如序列表中的序列2自5'末端起第1至342位所示，則待測小麥基于TaSPL21-6A基因的基因型為基因型HapII；如果所述PCR擴增產物的核苷酸序列如序列表中的序列3自5'末端起第1至342位所示，則待測小麥基于TaSPL21-6A基因的基因型為基因型HapIII；基因型HapI的小麥的株高>基因型HapIII的小麥的株高>基因型HapII的小麥的株高；所述引物F為如下a1)或a2)：a1)序列表的序列4所示的單鏈DNA分子；a2)將序列4經過一個或幾個核苷酸的取代和/或缺失和/或添加且與序列4具有相同功能的DNA分子；所述引物R為如下a3)或a4)：a3)序列表的序列5所示的單鏈DNA分子；a4)將序列5經過一個或幾個核苷酸的取代和/或缺失和/或添加且與序列5具有相同功能的DNA分子。上述任一所述方法中，所述>具體可為統(tǒng)計學上的>。為解決上述技術問題，本發(fā)明還提供了一種鑒定或輔助鑒定小麥株高的試劑盒。本發(fā)明所提供的鑒定或輔助鑒定小麥株高的試劑盒，包括檢測待測小麥基于TaSPL21-6A基因的基因型為基因型HapI、基因型HapII還是基因型HapIII的物質；所述基因型HapI為基于T125CSNP位點的基因型為TT純合型、基于T160CSNP位點的基因型為CC純合型且基于C169GSNP位點的基因型為CC純合型的TaSPL21-6A基因；所述基因型HapII為基于T125CSNP位點的基因型為CC純合型、基于T160CSNP位點的基因型為TT純合型且基于C169GSNP位點的基因型為GG純合型的TaSPL21-6A基因；所述基因型HapIII為基于T125CSNP位點的基因型為CC純合型、基于T160CSNP位點的基因型為TT純合型且基于C169GSNP位點的基因型為CC純合型的TaSPL21-6A基因；所述“T125CSNP位點”為小麥基因組中序列表中的序列9或序列表中的序列10自5′末端起第125位核苷酸；所述“T160CSNP位點”為小麥基因組中序列表中的序列9或序列表中的序列10自5′末端起第160位核苷酸；所述“C169GSNP位點”為小麥基因組中序列表中的序列9或序列表中的序列10自5′末端起第169位核苷酸。上述試劑盒中，所述“檢測待測小麥基于TaSPL21-6A基因的基因型為基因型HapI、基因型HapII還是基因型HapIII的物質”可為引物F和引物R組成的引物對；所述引物F為如下a1)或a2)：a1)序列表的序列4所示的單鏈DNA分子；a2)將序列4經過一個或幾個核苷酸的取代和/或缺失和/或添加且與序列4具有相同功能的DNA分子；所述引物R為如下a3)或a4)：a3)序列表的序列5所示的單鏈DNA分子；a4)將序列5經過一個或幾個核苷酸的取代和/或缺失和/或添加且與序列5具有相同功能的DNA分子。上述試劑盒，還可包括限制性內切酶BglI和/或限制性內切酶BseDI和/或限制性內切酶SecI。為解決上述技術問題，本發(fā)明還提供了分子標記甲和分子標記乙。本發(fā)明所提供的分子標記甲可如序列表的序列10所示。本發(fā)明所提供的分子標記乙可如序列表的序列9所示。(z1)或(z2)或(z3)或(z4)或(z5)也屬于本發(fā)明的保護范圍；(z1)上述任一所述試劑盒、或、所述分子標記甲、或、所述分子標記乙在篩選或輔助篩選不同株高小麥中的應用；(z2)上述任一所述試劑盒、或、所述分子標記甲、或、所述分子標記乙在制備篩選或輔助篩選不同株高小麥的產品中的應用；(z3)上述任一所述試劑盒、或、所述分子標記甲、或、所述分子標記乙在鑒定小麥TaSPL21-6A基因的基因型中的應用；(z4)上述任一所述試劑盒、或、所述分子標記甲、或、所述分子標記乙在制備鑒定小麥TaSPL21-6A基因的基因型的產品中的應用；(z5)上述任一所述試劑盒、或、所述分子標記甲、或、所述分子標記乙在小麥育種中的應用。上述應用中，當所述分子標記甲的T125CSNP位點的基因型為TT純合型、T160CSNP位點的基因型為CC純合型且C169GSNP位點的基因型為CC純合型，則判定為基因型HapI的小麥；當所述分子標記甲的T125CSNP位點的基因型為CC純合型、T160CSNP位點的基因型為TT純合型且C169GSNP位點的基因型為GG純合型，則判定為基因型HapII的小麥；當所述分子標記甲的T125CSNP位點的基因型為CC純合型、T160CSNP位點的基因型為TT純合型且C169GSNP位點的基因型為CC純合型，則判定為基因型HapIII的小麥；所述“T125CSNP位點”為小麥基因組中序列表中的序列10自5′末端起第125位核苷酸；所述“T160CSNP位點”為小麥基因組中序列表中的序列10自5′末端起第160位核苷酸；所述“C169GSNP位點”為小麥基因組中序列表中的序列10自5′末端起第169位核苷酸；基因型HapI的小麥的株高>基因型HapIII的小麥的株高>基因型HapII的小麥的株高。上述應用中，當所述分子標記乙的T125CSNP位點的基因型為TT純合型、T160CSNP位點的基因型為CC純合型且C169GSNP位點的基因型為CC純合型，則判定為基因型HapI的小麥；當所述分子標記乙的T125CSNP位點的基因型為CC純合型、T160CSNP位點的基因型為TT純合型且C169GSNP位點的基因型為GG純合型，則判定為基因型HapII的小麥；當所述分子標記乙的T125CSNP位點的基因型為CC純合型、T160CSNP位點的基因型為TT純合型且C169GSNP位點的基因型為CC純合型，則判定為基因型HapIII的小麥；所述“T125CSNP位點”為小麥基因組中序列表中的序列9自5′末端起第125位核苷酸；所述“T160CSNP位點”為小麥基因組中序列表中的序列9自5′末端起第160位核苷酸；所述“C169GSNP位點”為小麥基因組中序列表中的序列9自5′末端起第169位核苷酸；基因型HapI的小麥的株高>基因型HapIII的小麥的株高>基因型HapII的小麥的株高。上述應用中，所述>具體可為統(tǒng)計學上的>。實驗證明，本發(fā)明所提供的方法通過檢測待測小麥基于TaSPL21-6A基因的基因型，可以篩選或輔助篩選小麥株高性狀，在小麥分子育種具有重要的應用價值。附圖說明圖1為三個基因型在T125CSNP、T160CSNP和C169GSNP處的核苷酸。圖2為實施例2步驟二中3)的電泳結果。圖3為實施例2步驟二中4)的電泳結果。圖4為不同種植條件下三種基因型的小麥與株高的關聯分析。E1為2009年北京昌平旱地，E2為2009年北京昌平水地，E3為2009年北京順義旱地，E4為2009年北京順義水地，E5為2009年北京順義旱地并進行熱脅迫，E6為2009年北京順義水地并進行熱脅迫，E7為2010年北京昌平旱地，E8為2010年北京昌平水地，E9為2010年北京順義旱地，E10為2010年北京順義水地，E11為2010年北京順義旱地并進行熱脅迫，E12為2010年北京順義水地并進行熱脅迫，E13為2011年北京順義旱地，E14為2011年北京順義水地，E15為2011年北京順義旱地并進行熱脅迫，E16為2011年北京順義水地并進行熱脅迫，E17為2012年北京昌平旱地，E18為2012年北京昌平水地，E19為2012年北京順義旱地，E20為2012年北京順義水地；*為P＜0.5，**為P＜0.01，***為P＜0.001。具體實施方式下面結合具體實施方式對本發(fā)明進行進一步的詳細描述，給出的實施例僅為了闡明本發(fā)明，而不是為了限制本發(fā)明的范圍。下述實施例中的實驗方法，如無特殊說明，均為常規(guī)方法。下述實施例中所用的材料、試劑等，如無特殊說明，均可從商業(yè)途徑得到。下述實施例中所用的小麥材料均來自國家種質資源庫(網址為：http://www.cgris.net/)，公眾可以從國家種質資源庫獲得。5×PCRbuffer和TransStartFastPfuDNAPolymerase均為北京全式金生物技術有限公司產品，產品目錄號均為AP221。dNTPs為Roche公司產品，產品貨號為#316K5S。實施例1、小麥TaSPL21-6A基因多態(tài)性位點的獲得和單倍型的獲得一、小麥TaSPL21-6A基因多態(tài)性位點的獲得分別提取表1所示的37個小麥品種的基因組DNA并以其作為模板，以人工合成的5'-GGATAGTGCAGTGAAGCGGT-3'和5'-CCGTGTAAGAGGGTAACACTGA-3'為引物，進行PCR擴增，得到PCR擴增產物。將各個PCR擴增產物進行測序，然后比對。表1編號小麥品種編號小麥品種1TAM-11020豫麥482安85中124-121淮麥183單R810822雙豐收4原冬84723魯麥145北京10號24山農優(yōu)麥2號6京核892225長63597中優(yōu)950726晉麥168滄麥600527晉麥259衡麥2號28晉麥3910邯鄲605029旱選10號11衡722830晉麥5112衡觀3531臨豐61513石418532太原63314石麥12號33運旱2041015百農321734PANDAS16偃展一號35Opata8517偃展411036W798418豫麥29號37內鄉(xiāng)18819豫麥38比對結果顯示，在小麥的TaSPL21-6A基因中發(fā)現3個SNP位點，分別命名為T125CSNP、T160CSNP和C169GSNP。T125CSNP位于序列表中序列1自5’末端起的第125位，T160CSNP位于序列表中序列1自5’末端起的第160位，T169CSNP位于序列表中序列1自5’末端起的第169位。3個SNP位點的基本信息見表2(由于基因組DNA為由反向互補的兩條單鏈DNA分子組成雙鏈DNA分子，因此一般將編碼蛋白質的DNA分子，也就是具有起始密碼子至終止密碼子的DNA分子，命名為正義DNA分子；將與正義DNA分子的反向互補的DNA分子命名為反義DNA分子。需要指明的是T125CSNP、T160CSNP和C169GSNP處的等位基因的基因型均為正義DNA的基因型)。表2SNP位點名稱等位基因的基因型T125CSNPTT純合型、CC純合型T160CSNPTT純合型、CC純合型C169GSNPCC純合型、GG純合型二、小麥TaSPL21-6A基因的單倍型的獲得根據步驟一的比對結果發(fā)現，在小麥自然變異群體中，T125CSNP、T160CSNP和C169GSNP僅存在三種單倍型，因此，根據小麥TaSPL21-6A基因將小麥分為三種基因型：TaSPL21-6A-HapI(以下簡稱基因型HapI)、TaSPL21-6A-HapII(以下簡稱基因型HapII)和TaSPL21-6A-HapIII(以下簡稱基因型HapIII)。各個基因型在T125CSNP、T160CSNP和C169GSNP處的核苷酸詳見圖1。各個基因型在T125CSNP、T160CSNP和C169GSNP處的等位基因的基因型見表3?；蛐虷apI的小麥的TaSPL21-6A基因的核苷酸序列如序列表中的序列1所示。基因型HapII的小麥的TaSPL21-6A基因的核苷酸序列如序列表中的序列2所示?；蛐虷apIII的小麥的TaSPL21-6A基因的核苷酸序列如序列表中的序列3所示。表3實施例2、基于小麥TaSPL21-6A基因的基因型進行TaSPL21-6A基因分型方法的建立一、特異引物對的制備設計用于擴增包括T125CSNP、T160CSNP和C169GSNP的靶序列的特異引物對如下：引物F：5'-GGATAGTGCAGTGAAGCGGT-3'(序列表中序列4)；引物R：5'-TGGCATCTCTTGGGCTCTT-3'(序列表中的序列5)；二、基于小麥TaSPL21-6A基因的基因型進行TaSPL21-6A基因分型方法的建立1、方法甲1)提取待測小麥的基因組DNA；2)以步驟1)的基因組DNA為模板，用步驟一所述引物F和引物R組成的引物對進行PCR擴增，得到PCR擴增產物。PCR擴增反應體系(15μL)：ddH2O8.0μL、5×PCRbuffer3.0μL、引物F(5μmol/L)和引物R(5μmol/L)各0.6μL、dNTPs(2.5μmol/L)0.4μL、TransStartFastPfuDNAPolymerase0.3μL(含TransStartFastPfuDNAPolymerase0.75U)、基因組DNA(20ng/μL)2.1μL。PCR擴增反應條件為:95℃5min；95℃1min，59℃45s，72℃1min，35次循環(huán)；72℃10min；4℃保存。3)將步驟2)得到的PCR擴增產物用限制性內切酶BglI進行酶切消化，得到酶切產物A，然后進行瓊脂糖凝膠電泳檢測。4)將步驟2)得到的PCR擴增產物用限制性內切酶BseDI或SecI進行酶切消化，得到酶切產物B，然后進行瓊脂糖凝膠電泳檢測。如果酶切產物A顯示帶型A1(顯示兩條帶，分別為176bp和166bp)且酶切產物B顯示帶型B2(顯示一條帶，為342bp)，則待測小麥基于TaSPL21-6A基因的基因型為基因型HapI；如果酶切產物A顯示帶型A2(顯示一條帶，為342bp)且酶切產物B顯示帶型B1(顯示兩條帶，分別為165bp和177bp)，則待測小麥基于TaSPL21-6A基因的基因型為基因型HapII；如果酶切產物A顯示帶型A2(顯示一條帶，為342bp)且酶切產物B顯示帶型B2(顯示一條帶，為342bp)，則待測小麥基于TaSPL21-6A基因的基因型為基因型HapIII。2、方法乙1)提取待測小麥的基因組DNA；2)以步驟1)的基因組DNA為模板，用步驟一所述引物F和引物R組成的引物對進行PCR擴增，得到PCR擴增產物。PCR擴增反應體系(15μL)：ddH2O8.0μL、5×PCRbuffer3.0μL、引物F(5μmol/L)和引物R(5μmol/L)各0.6μL、dNTPs(2.5μmol/L)0.4μL、TransStartFastPfuDNAPolymerase0.3μL(含TransStartFastPfuDNAPolymerase0.75U)、基因組DNA(20ng/μL)2.1μL。PCR擴增反應條件為:95℃5min；95℃1min，59℃45s，72℃1min，35次循環(huán)；72℃10min；4℃保存。3)將步驟2)得到的PCR擴增產物進行測序。如果PCR擴增產物的核苷酸序列如序列表中的序列1自5'末端起第1至342位所示，則待測小麥基于TaSPL21-6A基因的基因型為基因型HapI；如果PCR擴增產物的核苷酸序列如序列表中的序列2自5'末端起第1至342位所示，則待測小麥基于TaSPL21-6A基因的基因型為基因型HapII；如果PCR擴增產物的核苷酸序列如序列表中的序列3自5'末端起第1至342位所示，則待測小麥基于TaSPL21-6A基因的基因型為基因型HapIII。實施例3、小麥TaSPL21-6A基因的基因型與小麥株高的關聯分析待測小麥為262個小麥品種(均為六倍體小麥)，具體的小麥品種名稱詳見表4中第2列。一、待測小麥的基因分型采用實施例2步驟二中的方法甲對各個待測小麥進行基因分型。采用限制性內切酶BglI酶切的部分實驗結果見圖2(M為DNAMarker，C為帶型A1，T為帶型A2)。采用限制性內切酶BseDI或SecI酶切的部分實驗結果見圖3(M為DNAMarker，C為帶型B2，G為帶型B1)各個待測小麥基于小麥TaSPL21-6A基因的基因型的基因分型結果見表4中第3列。上述結果表明，基于T125CSNP、T160CSNP和C169GSNP，待測小麥基于TaSPL21-6A基因的基因型為基因型HapI、基因型HapII或基因型HapIII。由于小麥品種均為栽培種，因此通常被默認為是高度純合的植物材料，所以T125CSNP、T160CSNP和C169GSNP的基因型均為純合型。二、株高性狀檢測將各個待測小麥品種(均為六倍體小麥)分別種植于2009年北京昌平旱地(以下簡稱E1)、2009年北京昌平水地(以下簡稱E2)、2009年北京順義旱地(以下簡稱E3)、2009年北京順義水地(以下簡稱E4)、2009年北京順義旱地并進行熱脅迫(以下簡稱E5)、2009年北京順義水地并進行熱脅迫(以下簡稱E6)、2010年北京昌平旱地(以下簡稱E7)、2010年北京昌平水地(以下簡稱E8)、2010年北京順義旱地(以下簡稱E9)、2010年北京順義水地(以下簡稱E10)、2010年北京順義旱地并進行熱脅迫(以下簡稱E11)、2010年北京順義水地并進行熱脅迫(以下簡稱E12)、2011年北京順義旱地(以下簡稱E13)、2011年北京順義水地(以下簡稱E14)、2011年北京順義旱地并進行熱脅迫(以下簡稱E15)、2011年北京順義水地并進行熱脅迫(以下簡稱E16)、2012年北京昌平旱地(以下簡稱E17)、2012年北京昌平水地(以下簡稱E18)、2012年北京順義旱地(以下簡稱E19)或2012年北京順義水地(以下簡稱E20)，成熟后，統(tǒng)計小麥株高，部分統(tǒng)計結果見表4中第4至8列。需要指明的是，北京昌平旱地、北京昌平水地、北京順義旱地和北京順義水地均為中國農業(yè)科學院作物科學研究所的實驗基地。所述旱地指的是待測小麥的整個生長期僅有自然的雨水灌溉，人為不灌溉任何水分。所述水地指的是待測小麥的整個生長期不僅有自然的雨水灌溉，還人為灌溉水分(人為灌溉的具體操作為：分別在越冬期之前、抽穗期、開花期和灌漿期灌溉，每次灌溉的水量為750m3/公頃水地)。所述熱脅迫為當待測小麥品種處于開花期，開始覆蓋塑料大棚，直至待測小麥品種成熟。在旱地進行熱脅迫，塑料大棚外溫度平均為33℃，塑料大棚內溫度為43℃。在水地進行熱脅迫，塑料大棚外溫度平均為33℃，塑料大棚內溫度為41℃。三、小麥TaSPL21-6A基因的基因型與小麥株高的關聯分析分別統(tǒng)計不同種植條件下三種基因型的小麥的平均株高，將基因型與株高進行關聯分析，結果見表5和圖4。表4注：“-”表示未得到數據。表5注：Pvalue為關聯分析的顯著性水平；PVE為表型變異的解釋率。結果表明，檢測待測小麥基于TaSPL21-6A基因的基因型，“基因型HapI的小麥”的株高>“基因型HapIII的小麥”的株高>“基因型HapII的小麥”的株高；所述“>”為在統(tǒng)計學上的>。四、測序采用實施例2步驟二中的方法乙對步驟一檢測為“基因型HapI的小麥”、“基因型HapII的小麥”和“基因型HapIII的小麥”分別進行測序。測序結果表明，“基因型HapI的小麥”的PCR擴增產物的核苷酸序列均如序列表中的序列1自5'末端起第1至342位所示，“基因型HapII的小麥”的PCR擴增產物的核苷酸序列均如序列表中的序列2自5'末端起第1至342位所示，“基因型HapIII的小麥”的PCR擴增產物的核苷酸序列均如序列表中的序列3自5'末端起第1至342位所示。可見，方法甲和方法乙的檢測結果完全一致。上述結果表明，通過檢測待測小麥基于TaSPL21-6A基因的基因型可以篩選或輔助篩選小麥株高性狀，在小麥分子育種具有重要的應用價值。<110>中國農業(yè)科學院作物科學研究所<120>一種篩選或輔助篩選不同株高小麥的方法及其專用試劑盒<160>10<170>PatentInversion3.5<210>1<211>3463<212>DNA<213>人工序列<220><223><400>1ggatagtgcagtgaagcggttagggtttggtccgacgaatggatgaaaaggaatagacgt60ggggtcgggtgggctagcgtggaccgggtccgacgtggcggacacgcccgagcgtcccct120tatctgccccagatttgggctagatataagagatgtcggccagcctggcgtttgagatcc180gtttaagacgttcgtgtgggttgaatttttgtgaccaggtcgttcgtccgcacatttaga240acgggttcgaggcgtcccagcgtggatgctggagttgagatttaggtggggtcgtttgcg300cagataaaggacgggagaaggccaagagcccaagagatgccatcattgcctctctccttc360tccggcctccacgacctttttagcctgaaggcacgcacaaccgttcctgctgcacagaca420catactccggcggtccggcctctttctttcttacccatcagtcaggccgcgcgtcaccac480ctttctcatccgcgctcggaatagccggccatgatgagcagcaggctaagcggcggcacg540atggcaccggttagcgacatggccgacttcggttgcgctcccatgcagtcctaccccaac600tttgagccggccggcatggtcatgcccggggaccggcagccgcccttccagcaccaccac660ctctacgacagcctcgacttcaacgccgctgcattctcgttccaagacccggtcgcgctc720ttctccagcggctcggcgttcagtaaccagctccagcagccgttcctccagacgcaggtc780accacgccgacgatggcgtcgtcgtcgctgctgcaggcgccgatgatgacccttccgggt840atgctgacgtcttcctcggcgtcgccggtggacgcatgcaccttcggtggcggcggcagt900gctgggttcctgaagcaggaggagggcggccccttctcagacgtcggcggtggggggagg960atcgggctgaacctcggccgcaggacatacttttccccggcggacgtgctggccgtggac1020cgcctgctgatgcgctcccgcttcggcggagccggcgcaatgggcatgctggggctgggg1080ctcggcgccgccgcccaccaccaccagaccccgcggtgccaggctgagggctgcaaggcc1140gacctctccgccgccaagcactaccaccgccgccacaaggtctgcgagtaccacgccaag1200gccaccacagtcgccgcctctggcaagcagcagcgcttctgccaacaatgcagccggtat1260gtacgtttatcctctgccatgggtggatcgttgatgcatgcgaagctttgctagcagacg1320aaaaaatcagcagtagaaaggctgcgagctttcgatctagtggcattgacgctagcagct1380atatgcactgatcatatcattcatgtcaacatgtcatatatcagaaatggcgcacatcag1440atcagatcttgttcctctgagcgtatcggcatctgcatccctttgtccaatgtactacta1500gcacgcccatcatggcattgcagtggagttcgatcagatacctaaacctagtctgtgtag1560atacatcatacatggcgtgtattacttacaacggtagacatgtatatacccaagatccgg1620ttgtgtgaatataactggttcttgtttgggtacgtttgttgggctaggtttcatgtgctc1680gctgagtttgacgaggccaagaggagctgccggaagcggctcacggagcacaaccggcgc1740cgccgaaagcctgccggcgcgcagggcaaggattcgccgccgccttccaagaaggcagac1800gctagcatcaccagctcatacaccggcgatcacaagagtaagaccactcctctgatacat1860gtatagacttaaacactggatatatgcttattattggcttttttaaagcttgatcacttt1920aagaagttgtgttttgattttcggccgcaaaatgtggatttcggccgaatttcggtcatc1980tcggcttgaggcgaaaagtatatgtaggccgaaattactcaaatttggtaaattttggtc2040aaatttaagtcaaattgcagtcaaaatttgatcaaatttcagccgaaaattttgaaaatg2100gccgaaattcggccatctcggcctagggcgaaaaaaagctcaaaccgaaaatcaaaacac2160agccagtaagctagctagctacctagaaactcctgaaactttgttagagcttagtgggta2220atttgaactaaaagcatgacacttcttttgcaacaagggaacatttcaataacgtatacc2280aagtaaagaacacaacaaaaacagtttgcctaattcttaattgtccgaaaatttagtaaa2340tctattttgtcttgaaatggcacatcactgggctaacctaataatgtactccgtagcatc2400ttaagtgtgtaactgaagtaagatataactgtagttttgacggtgcacttcagcacttgg2460ctgcagtacacaccggtaattctatgtgccagcaagcacgttacaacgttcggttggata2520gaaactagtagtacacgacatgacatgcctagatgctacttctacattttggtcggtcga2580tctgacgtacgtacctactaggagtactactcagctcaattaacatgatgttcatacgat2640ggcgccaaaacatcttatacgtacatacgtaggtgtaccatcgtactatacactagacgg2700taggtgcaactcctgctacatacatgtggcagtcacatcttgccgtcttgtctgacgccg2760cgacgtgtatatgatcagccaacaagtcgacgacgggggcggccttctcgccgagcgccg2820gtggcttcagctgccttcagcagcagcagcagcagcatgagatcgacaacggcggccagt2880cgagcaacgccacgccgactaacctgtccctggcggcgccaccgccaccgccgccgcctc2940aagacgacgccggcttcggcgccggccttgacaccatgctgctgattcagcagcaagggc3000ccgatgaacaggaggaggaggaggagcagcatttcatgatgacctctctcgtgcagtcgc3060atcgccagcagcagcagcacggcgacagcggcaacatcttatcgtgctcgacgacgtcgc3120cgtcggatcagcgtcgccatcag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