本發(fā)明涉及一種超臨界二氧化碳提取斑蝥素的方法，屬于中藥開發(fā)技術(shù)領(lǐng)域，應(yīng)用于芫菁科昆蟲南方大斑蝥或黃黑小斑蝥中斑蝥素的提取。

背景技術(shù)：
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斑蝥為節(jié)肢動物門昆蟲綱芫菁科(Meloidae)昆蟲南方大斑蝥Mylabris phalerata Pallas或黃黑小斑蝥Mylabris cichorii L.的干燥蟲體，具有消腫逐瘀、散結(jié)消徵、攻毒蝕瘡等功效。斑蝥中的主要有效成分為斑蝥素，是特異性的絲氨酸(PP1)和蘇氨酸(PP2A)蛋白磷酸酶抑制劑，在癌細(xì)胞增殖和分化等活動中起著重要的調(diào)控作用，具有抗腫瘤，抗病毒，升高白細(xì)胞，免疫增強等多種藥效。

隨著斑蝥素被越來越廣泛地利用，人們對其研究逐步深入，目前斑蝥素提取方法多數(shù)使用乙醇、氯仿、甲苯等直接冷浸提取或濃鹽酸酸化蟲體后用丙酮、二氯甲烷回流提取，以上方法工序復(fù)雜、提取率低、周期長、污染大、危害人體、污染環(huán)境。而超臨界二氧化碳萃取技術(shù)具有提取溫度低，提取效率高，周期短，污染少，成本低等優(yōu)點。

技術(shù)實現(xiàn)要素：
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本發(fā)明目的是針對目前斑蝥素提取方法技術(shù)不足，提供了一種超臨界二氧化碳提取斑蝥素的方法，其包括如下步驟：

(1)原料預(yù)處理：從斑蝥藥材中挑撿出雜質(zhì)、霉變部分，剩余的用自來水洗凈，自然晾干；

(2)粉碎：將上述(1)中晾干的斑蝥藥材進行粉碎、過篩；

(3)浸泡：將上述(2)所得藥材精密稱量放入容量瓶中加入夾帶劑浸泡；藥材與夾帶劑的質(zhì)量體積比為1:5～10。

(4)超臨界二氧化碳萃取：將上述(3)中的樣品投入超臨界二氧化碳萃取釜中，調(diào)節(jié)萃取溫度為30～40℃，萃取壓力為10～20MPa，并加入上述(3)所述的夾帶劑作為助溶劑進行萃取，助溶劑流速為2～10g/min，萃取時間2～3h；在收集釜出口收集提取物；

(5)濃縮、析晶、提純：將上述(4)提取物減壓濃縮蒸去部分溶劑，濃縮液冷卻析晶得到斑蝥素粗品，粗品用石油醚加熱溶解，過濾，除去不溶物，濾液冷卻析晶，即得到斑蝥素；

所述的步驟(3)、(4)所用的夾帶劑或助溶劑是體積比為10～70％的丙酮溶液。

所述的步驟(2)粉碎、過篩所用的篩目次為20～30目。

所述的步驟(5)中，減壓濃縮壓力為4～8MPa、濾液冷卻析晶溫度為40～50℃。

本發(fā)明所述的超臨界二氧化碳提取斑蝥素的方法，與現(xiàn)有技術(shù)相比能夠獲得以下積極效果：

(1)本發(fā)明超臨界二氧化碳提取斑蝥素萃取能力強，提取率高，用超臨界二氧化碳提取中藥有效成分，在最佳工藝條件下，能將所需提取的成分幾乎完全提取，從而大大提高產(chǎn)品收率及資源的利用率。

(2)本發(fā)明超臨界二氧化碳提取斑蝥素萃取的操作溫度低，能較完好地保存中藥有效成分不被破壞，不發(fā)生次生化。

(3)本發(fā)明超臨界二氧化碳提取斑蝥素提取時間快，生產(chǎn)周期短，超臨界CO₂提取循環(huán)一開始，分離便開始進行，一般提取10分鐘就有成分分離析出，2～4小時左右便可完全提取。

(4)本發(fā)明超臨界二氧化碳提取斑蝥素操作參數(shù)容易控制，因此能保證有效成分及產(chǎn)品質(zhì)量的穩(wěn)定性。

(5)本發(fā)明超臨界二氧化碳提取斑蝥素，其中超臨界二氧化碳具有抗氧化、滅菌作用，有利于保證和提高產(chǎn)品的質(zhì)量。

(6)本發(fā)明超臨界二氧化碳提取斑蝥素工藝流程簡單，操作方便，節(jié)省勞動力和大量有機溶劑，減少三廢污染，是一種高效的提取、分離、制備及濃縮的新方法。

具體實施方式：

實施例1最佳因素水平下超臨界二氧化碳提取斑蝥素

試驗方法：稱取斑蝥藥材，從斑蝥藥材中挑撿出雜質(zhì)、霉變部分，剩余的用自來水洗凈，自然晾干；將晾干的斑蝥藥材進行粉碎、過篩，篩目次為30目；精密稱取斑蝥藥材粉末100g放入容量瓶中，按樣品與夾帶劑的質(zhì)量體積比為1:6比例加入夾帶劑浸泡3h，夾帶劑是體積比為50％的丙酮溶液，浸泡好的樣品放入超臨界裝置中的萃取釜中，進行萃取前，先將二氧化碳制冷液化，設(shè)置萃取壓力20MPa，溫度30℃，調(diào)節(jié)二氧化碳進入收集釜的入口閥門開度，將收集釜的壓力控制在10MPa，同時溫度控制在30℃，設(shè)置助溶劑的流速為5g/min，二氧化碳流速為20g/min。助溶劑由高壓泵加入到萃取釜中，助溶劑是體積比為50％的丙酮溶液，待萃取壓力和溫度達到預(yù)設(shè)值后，開始計時，萃取2h后，停止萃取，關(guān)閉二氧化碳?xì)馄?，打開手動排氣閥進行泄壓，在收集釜出口收集萃取物，將上述萃取物減壓(壓力為5MPa)濃縮蒸去部分溶劑，濃縮液冷(溫度為40℃)卻析晶得到斑蝥素粗品，粗品用石油醚加熱溶解，過濾，除去不溶物，濾液冷卻析晶，即得到斑蝥素。分析計算得出斑蝥素提取含量達2.8％。

實施例2一般因素水平下超臨界二氧化碳提取斑蝥素

試驗方法：稱取斑蝥藥材，從斑蝥藥材中挑撿出雜質(zhì)、霉變部分，剩余的用自來水洗凈，自然晾干；將晾干的斑蝥藥材進行粉碎、過篩，篩目次為20目；精密稱取斑蝥藥材粉末100g放入容量瓶中，按樣品與夾帶劑的質(zhì)量體積比為1:10比例加入夾帶劑浸泡2h，夾帶劑是體積比為30％的丙酮溶液，浸泡好的樣品放入超臨界裝置中的萃取釜中，進行萃取前，先將二氧化碳制冷液化，設(shè)置萃取壓力15MPa，溫度30℃，調(diào)節(jié)二氧化碳進入收集釜的入口閥門開度，將收集釜的壓力控制在20MPa，同時溫度控制在30℃，設(shè)置助溶劑的流速為2g/min，二氧化碳流速為20g/min。助溶劑由高壓泵加入到萃取釜中，助溶劑是體積比為30％的丙酮溶液，待萃取壓力和溫度達到預(yù)設(shè)值后，開始計時，萃取3h后，停止萃取，關(guān)閉二氧化碳?xì)馄浚蜷_手動排氣閥進行泄壓，在收集釜出口收集萃取物，將上述萃取物減壓(壓力為8MPa)濃縮蒸去部分溶劑，濃縮液冷卻(溫度為50℃)析晶得到斑蝥素粗品，粗品用石油醚加熱溶解，過濾，除去不溶物，濾液冷卻析晶，即得到斑蝥素。分析計算得出斑蝥素提取含量為1.46％。

實施例3較差因素水平下超臨界二氧化碳提取斑蝥素

試驗方法：稱取斑蝥藥材，從斑蝥藥材中挑撿出雜質(zhì)、霉變部分，剩余的用自來水洗凈，自然晾干，將晾干的斑蝥藥材進行粉碎、過篩，篩目次為40目；精密稱取斑蝥藥材粉末100g放入容量瓶中，按樣品與夾帶劑的質(zhì)量體積比為1:3比例加入夾帶劑浸泡3h，夾帶劑是體積比為30％的丙酮溶液，浸泡好的樣品放入超臨界裝置中的萃取釜中，進行萃取前，先將二氧化碳制冷液化，設(shè)置萃取壓力20MPa，溫度30℃，調(diào)節(jié)二氧化碳進入收集釜的入口閥門開度，將收集釜的壓力控制在10MPa，同時溫度控制在30℃，設(shè)置助溶劑的流速為5g/min，二氧化碳流速為20g/min。助溶劑由高壓泵加入到萃取釜中，助溶劑是體積比為50％的丙酮溶液，待萃取壓力和溫度達到預(yù)設(shè)值后，開始計時，萃取2h后，停止萃取，關(guān)閉二氧化碳?xì)馄浚蜷_手動排氣閥進行泄壓，在收集釜出口收集萃取物，將上述萃取物減壓(壓力為5MPa)濃縮蒸去部分溶劑，濃縮液冷(溫度為40℃)卻析晶得到斑蝥素粗品，粗品用石油醚加熱溶解，過濾，除去不溶物，濾液冷卻析晶，即得到斑蝥素。分析計算得出斑蝥素提取含量為0.914％。

實施例4傳統(tǒng)提取方法提取斑蝥素

試驗方法：稱取斑蝥藥材，從斑蝥藥材中挑撿出雜質(zhì)、霉變部分，剩余的用自來水洗凈，自然晾干，將晾干的斑蝥藥材進行粉碎、過篩，篩目次為30目；精密稱取斑蝥藥材粉末100g放入容量瓶中，往容量瓶中加入50％的丙酮溶液，所述斑蝥藥材粉末：丙酮溶液按質(zhì)量比為1:6，在常溫常壓下振搖5-10小時，抽濾獲得濾液，殘渣用丙酮洗3次，每次200ml，抽濾，合并上述幾次濾液，將合并后的濾液于60℃下進行蒸餾濃縮，蒸餾至無液體流出為止，將蒸好的濃縮液冷卻至室溫析晶得到斑蝥素粗品，粗品用石油醚加熱溶解，過濾，除去不溶物，濾液冷卻析晶，即得到斑蝥素。分析計算得出斑蝥素提取含量為0.864％。