本發(fā)明涉及一種抗福莫特羅單克隆抗體、產(chǎn)生該單克隆抗體的雜交瘤細(xì)胞株，以及該抗體在檢測福莫特羅上的應(yīng)用，屬于免疫學(xué)技術(shù)領(lǐng)域和獸藥殘留分析技術(shù)領(lǐng)域。

背景技術(shù)：

福莫特羅(Formoterol)是由日本山之內(nèi)制藥株式會(huì)社中央研究所開發(fā)的第三代β₂-腎上腺素受體激動(dòng)劑平喘藥物，具有支氣管擴(kuò)張作用，還有抗過敏和抑制水腫的作用，可用于治療慢性支氣管哮喘、夜間哮喘、運(yùn)動(dòng)性哮喘、慢性阻塞性肺病以及兒童非哮喘性呼吸道疾病。近年來，隨著我國對食品安全監(jiān)管力度的加強(qiáng)，對違禁使用獸藥的監(jiān)管力度逐漸加大，濫用違禁獸藥的現(xiàn)象有所控制，但是出現(xiàn)了使用生物活性相似的替代品代替重點(diǎn)監(jiān)管獸藥的新現(xiàn)象。新型“瘦肉精”福莫特羅與克倫特羅等三種常用“瘦肉精”物質(zhì)具有同樣的促進(jìn)生長、增加瘦肉率的作用，2002年農(nóng)業(yè)部1519號條例規(guī)定食品動(dòng)物禁止使用β激動(dòng)劑類藥物作為飼料添加劑。福莫特羅檢測手段滯后，尤其是快速檢測產(chǎn)品缺乏，國家及各省市正在加緊建立新型“瘦肉精”物質(zhì)的確證方法，同時(shí)也急需適合批量、快速篩選的檢測產(chǎn)品，滿足政府和企業(yè)的需要。

目前有關(guān)福莫特羅殘留的檢測技術(shù)主要有高效液相色譜法(HPLC)、液相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用法(LC-MS)、液相色譜串聯(lián)質(zhì)譜法(LC-MS/MS)及免疫分析技術(shù)，前三種方法靈敏、準(zhǔn)確，但操作繁瑣，對實(shí)驗(yàn)設(shè)備和技術(shù)要求較高，不適合大批量樣品的快速檢測。免疫分析方法包括酶聯(lián)免疫吸附法(ELISA)和膠體金免疫層析法(GICA)，具有靈敏度高、特異性好、成本低、操作方便等特點(diǎn)，適于大批量樣品篩選。因此，抗福莫特羅單克隆抗體的制備對于動(dòng)物性食品免疫快速檢測方法的建立以及保障人類健康具有重要意義。

技術(shù)實(shí)現(xiàn)要素：

本發(fā)明所要解決的技術(shù)問題是克服現(xiàn)有技術(shù)缺陷，提供一種抗福莫特羅單克隆抗體，所述單克隆抗體對福莫特羅有特異性，所述抗單克隆抗體由保藏編號為CCTCC NO:C2016182的雜交瘤細(xì)胞株Formoterol-3E6產(chǎn)生。進(jìn)一步的，本發(fā)明將該單克隆抗體應(yīng)用于檢測福莫特羅。

本發(fā)明所述技術(shù)問題是由以下技術(shù)方案實(shí)現(xiàn)的。

一種抗福莫特羅單克隆抗體，該單克隆抗體由保藏號為CCTCC NO:C2016182的雜交瘤細(xì)胞株產(chǎn)生。該雜交瘤細(xì)胞株被命名為雜交瘤細(xì)胞株Formoterol-3E6，于2016年10月26日送交中國典型培養(yǎng)物保藏中心(CCTCC)保藏，保藏號為CCTCC NO:C2016182。

上述抗福莫特羅單克隆抗體效價(jià)為1:512000，亞型為IgG₁，親和力常數(shù)Ka＝7.24×10⁸L/mol，對福莫特羅抑制率IC₅₀為1.1μg/L，與福莫特羅的交叉反應(yīng)率為100.00％，與其它幾種相似物(苯乙醇胺A、沙丁胺醇、妥布特羅、鹽酸克倫特羅、萊克多巴胺、西馬特羅)無交叉反應(yīng)；

上述福莫特羅單克隆抗體在用于配制檢測生物樣品中的福莫特羅的非診斷目的檢測產(chǎn)品中的應(yīng)用。

上述應(yīng)用，所述非診斷目的檢測產(chǎn)品為酶聯(lián)免疫試劑盒或膠體金層析試紙條。

進(jìn)一步的，一種檢測福莫特羅的酶聯(lián)免疫試劑盒，該試劑盒中含有所述的抗福莫特羅的單克隆抗體。

一種檢測福莫特羅的膠體金層析試紙條，該試紙條中含有所述的抗福莫特羅的單克隆抗體。

一種制備上述福莫特羅單克隆抗體的方法，包括如下步驟：

(1)制備福莫特羅抗原工作液：

(a)活化對氨基苯甲酸的制備：稱取6mg亞硝酸鈉，溶在0.35mL蒸餾水中，然后稱取10mg對氨基苯甲酸，溶入1.1mL 1mol/L的鹽酸中，冰浴攪拌，將上述亞硝酸鈉溶液逐滴加入到對氨基苯甲酸溶液中，避光反應(yīng)1h，得到活化對氨基苯甲酸；

(b)帶有羧基的福莫特羅活性中間體的制備：稱取福莫特羅30mg溶在5mL、0.05mol/L冰冷的硼砂緩沖溶液中(pH＝9，含0.15mol/L的氯化鈉)，冰浴攪拌，將此溶液逐滴加入到活化對氨基苯甲酸溶液中，4℃避光反應(yīng)3h，得到帶有羧基的福莫特羅活性中間體溶液；

(c)免疫原的合成：在上述帶有羧基的福莫特羅活性中間體溶液中加入0.1mol/LNaOH調(diào)pH至7.4，將EDC 140mg、NHS 60mg溶解在2mL PBS中，少量多次加到溶液中室溫?cái)嚢?h。稱取BSA 200mg溶解在1mL 0.01mol/L的PBS中，邊攪拌邊加入上述溶液中，反應(yīng)過夜后，將偶聯(lián)物溶液轉(zhuǎn)移至透析袋，在PBS緩沖液中4℃透析72h，然后改用蒸餾水4℃透析48h，每天換液2次。透析后的溶液于6000rmp離心30min，取上清-20℃保存。標(biāo)記為Formoterol-BSA；

(d)檢測原的合成：在上述帶有羧基的福莫特羅活性中間體溶液中加入0.1mol/LNaOH調(diào)pH至7.4，將EDC 140mg、NHS 60mg溶解在2mL PBS中，少量多次加到溶液中室溫?cái)嚢?h。稱取OVA 150mg溶解在1mL 0.01mol/L的PBS中，邊攪拌邊加入上述溶液中，反應(yīng)過夜后，將偶聯(lián)物溶液轉(zhuǎn)移至透析袋，在PBS緩沖液中4℃透析72h，然后改用蒸餾水4℃透析48h，每天換液2次。透析后的溶液于6000rmp離心30min，取上清-20℃保存。標(biāo)記為Formoterol-OVA。

(2)制備福莫特羅單克隆抗體：

(a)動(dòng)物免疫：選擇載體蛋白為牛血清白蛋白的免疫原，免疫6-8周齡的雌性Balb/c小鼠，間隔2周免疫1次，3次免疫后斷尾取血測定效價(jià)和抑制率，選擇結(jié)果最佳的小鼠準(zhǔn)備融合；

(b)細(xì)胞融合：取步驟(a)選定的小鼠的脾細(xì)胞和小鼠骨髓瘤SP2/0細(xì)胞進(jìn)行融合，間接ELISA法測定上清液選取陽性高的孔，通過有限稀釋法對陽性孔進(jìn)行亞克隆，直至建立產(chǎn)生單一抗福莫特羅的單克隆抗體的雜交瘤細(xì)胞株；

(c)單克隆抗體的大量制備：選取個(gè)體較大的雌性Balb/c小鼠，采用體內(nèi)誘生腹水法，大量制備腹水，并通過辛酸-硫酸銨沉淀純化腹水，分成小管，-20℃保存，獲得福莫特羅單克隆抗體。

一種鑒定上述福莫特羅單克隆抗體特性的方法，包括如下步驟：

(a)效價(jià)測定

以1：40000稀釋包被原包被檢測板，將純化后的單克隆抗體進(jìn)行1:2000，1:4000，1:8000，……1:1024000稀釋，加入到酶標(biāo)板孔內(nèi)，反應(yīng)后加入HRP標(biāo)記的羊抗鼠二抗，最后用TMB顯色，結(jié)果顯示純化后的福莫特羅單克隆抗體濃度為1mg/mL時(shí)的效價(jià)達(dá)1：512000。

(b)亞型測定

采用購自Sigma公司的鼠源單抗亞型鑒定試劑盒進(jìn)行亞型測定，結(jié)果顯示福莫特羅單克隆抗體亞型為IgG1。

(c)親和力測定

采用非競爭酶聯(lián)免疫法測定福莫特羅單克隆抗體的親和常數(shù)，結(jié)果顯示親和常數(shù)Ka＝7.24×10⁸L/mol。

(d)抑制率測定

采用間接競爭ELISA測定抑制率，以吸光度百分比B/B0％(B代表不同濃度標(biāo)準(zhǔn)液的A450，B0代表零濃度標(biāo)準(zhǔn)液的A450)為縱坐標(biāo)，以不同濃度標(biāo)準(zhǔn)液的對數(shù)[Lg(formoterol)]為橫坐標(biāo)，繪制抗體的抑制曲線。結(jié)果顯示該抗體對福莫特羅抑制率IC₅₀為1.1μg/L。

(f)特異性測定

用競爭ELISA法測定該抗體與福莫特羅及其類似物(苯乙醇胺A、沙丁胺醇、妥布特羅、鹽酸克倫特羅、萊克多巴胺、西馬特羅)的交叉反應(yīng)率，結(jié)果該抗體與福莫特羅CR(％)為100％，與其類似物CR(％)均小于0.1％。

本發(fā)明提供的單克隆抗體可應(yīng)用于檢測樣品中福莫特羅，主要是將其應(yīng)用于制備福莫特 羅檢測的酶聯(lián)免疫試劑盒和膠體金試條紙。本發(fā)明提供的抗福莫特羅單克隆抗體的質(zhì)量具有很強(qiáng)的可控性和可重復(fù)性，并通過對所得抗體特性的初步分析及鑒定，為特異、靈敏的免疫測定方法的進(jìn)一步建立和應(yīng)用提供了實(shí)驗(yàn)依據(jù)。

附圖說明

圖1本發(fā)明所述福莫特羅單克隆抗體效價(jià)測定圖

圖2本發(fā)明所述福莫特羅單克隆抗體亞型測定圖

圖3本發(fā)明所述福莫特羅單克隆抗體親和力測定圖

圖4本發(fā)明所述福莫特羅單克隆抗體抑制率測定圖

本發(fā)明所述的抗福莫特羅單克隆抗體的雜交瘤細(xì)胞株Formoterol-3E6，已于2016年10月26日送交中國典型培養(yǎng)物保藏中心(簡稱CCTCC，地址：武漢大學(xué)，中國典型培養(yǎng)物保藏中心，郵編：430072)保藏，保藏編號CCTCC NO:C2016182。

具體實(shí)施方式

下面結(jié)合具體實(shí)施方式對本發(fā)明作進(jìn)一步詳細(xì)說明，所列舉的實(shí)施例不對本發(fā)明的內(nèi)容和保護(hù)范圍構(gòu)成任何限制。

下述實(shí)施例中所用的材料、試劑等，如無特殊說明，均可從商業(yè)途徑得到。

實(shí)施例一 本發(fā)明所述福莫特羅抗原的制備

(1)活化對氨基苯甲酸的制備：稱取6mg亞硝酸鈉，溶在0.35mL蒸餾水中，然后稱取10mg對氨基苯甲酸，溶入1.1mL 1mol/L的鹽酸中，冰浴攪拌，將上述亞硝酸鈉溶液逐滴加入到對氨基苯甲酸溶液中，避光反應(yīng)1h，得到活化對氨基苯甲酸；

(2)帶有羧基的福莫特羅活性中間體的制備：稱取福莫特羅30mg溶在5mL、0.05mol/L冰冷的硼砂緩沖溶液中(pH＝9，含0.15mol/L的氯化鈉)，冰浴攪拌，將此溶液逐滴加入到活化對氨基苯甲酸溶液中，4℃避光反應(yīng)3h，得到帶有羧基的福莫特羅活性中間體溶液；

(3)免疫原的合成：在上述帶有羧基的福莫特羅活性中間體溶液中加入0.1mol/LNaOH調(diào)pH至7.4，將EDC 140mg、NHS 60mg溶解在2mL PBS中，少量多次加到溶液中室溫?cái)嚢?h。稱取BSA 200mg溶解在1mL 0.01mol/L的PBS中，邊攪拌邊加入上述溶液中，反應(yīng)過夜后，將偶聯(lián)物溶液轉(zhuǎn)移至透析袋，在PBS緩沖液中4℃透析72h，然后改用蒸餾水4℃透析48h，每天換液2次。透析后的溶液于6000rmp離心30min，取上清-20℃保存。標(biāo)記為Formoterol-BSA；

(4)檢測原的合成：在上述帶有羧基的福莫特羅活性中間體溶液中加入0.1mol/LNaOH調(diào)pH至7.4，將EDC 140mg、NHS 60mg溶解在2mL PBS中，少量多次加到溶液中室溫?cái)嚢?h。稱取OVA 150mg溶解在1mL 0.01mol/L的PBS中，邊攪拌邊加入上述溶液中，反應(yīng) 過夜后，將偶聯(lián)物溶液轉(zhuǎn)移至透析袋，在PBS緩沖液中4℃透析72h，然后改用蒸餾水4℃透析48h，每天換液2次。透析后的溶液于6000rmp離心30min，取上清-20℃保存。標(biāo)記為Formoterol-OVA。

實(shí)施例二 本發(fā)明所述福莫特羅單克隆抗體的制備

(1)動(dòng)物免疫：載體蛋白為牛血清白蛋白的免疫原免疫6-8周齡的雌性Balb/c小鼠，間隔2周免疫1次，免疫流程見表1，三免后斷尾取血測定效價(jià)和抑制率，選擇結(jié)果最佳的小鼠準(zhǔn)備融合；

表1免疫流程圖

(2)細(xì)胞融合：融合小鼠摘眼球放血，將血清作為陽性對照，脫頸處死后無菌條件下取出脾臟，制備脾細(xì)胞，與SP2/0細(xì)胞按5:1的比例通過PEG融合，將融合后的細(xì)胞懸液加入已鋪有飼養(yǎng)細(xì)胞的96孔板，放入37℃、5％CO₂的培養(yǎng)箱中培養(yǎng)；

(3)陽性雜交瘤細(xì)胞株的篩選：融合后的細(xì)胞，次日檢查有無污染，融合后第10天換用HT培養(yǎng)基。換液后2-3d用間接ELISA和間接競爭ELISA進(jìn)行陽性孔篩選，盡量挑選出強(qiáng)陽性、抑制率高、單個(gè)克隆、細(xì)胞狀態(tài)好的孔，通過有限稀釋法進(jìn)行亞克隆，同時(shí)進(jìn)行擴(kuò)大培養(yǎng)、凍存，直至建立單一分泌抗體的單克隆細(xì)胞株。

(4)單克隆抗體的大量制備：采用小鼠體內(nèi)誘生腹水的方法，取健康的Balb/c雌性小鼠，每只小鼠體內(nèi)注射石蠟油0.5mL，7d后調(diào)整克隆化陽性雜交瘤細(xì)胞10⁶/mL，每只小鼠腹腔注射1mL，7-9天取腹水，離心棄脂肪，經(jīng)辛酸-硫酸銨純化，凍干后-20℃保存，獲得福莫特羅單克隆抗體。

實(shí)施例三 本發(fā)明所述福莫特羅單克隆抗體特性鑒定

(1)效價(jià)測定

采用間接ELISA法，具體步驟如下：包被：用碳酸鹽緩沖液稀釋包被原至濃度為2μg/mL，96孔酶標(biāo)板100μL/孔，4℃過夜；洗滌：包被板恢復(fù)至室溫，傾去包被液，每孔加洗液300μL，每次靜置l min，洗滌3次，最后一次拍干；封閉：每孔加200μL含10％小牛血清的洗液，37℃1h；傾去封閉液，洗滌3次，拍干；加一抗：用洗液將單抗以1:2000倍開始倍比稀釋，每孔加入100μL，并設(shè)置空白對照孔(PBS)和陰性對照(陰性血清)，37℃放置45min；傾 去一抗，洗滌3次，拍干；加酶標(biāo)二抗：每孔加入100μL的l:10000倍稀釋的HRP酶標(biāo)記的山羊抗鼠IgG，37℃放置30min；傾去二抗，洗滌3次，拍干；顯色：每孔加底物顯色液100μL，37℃避光反應(yīng)15min；終止：每孔加入50μL終止液，終止反應(yīng)；檢測：測定波長為450nm處的吸光度值(A450nm)。

結(jié)果判定：(A樣品孔－A空白對照)/(A陰性對照－A空白對照)≧2.1，且陰性對照的A450nm小于0.2時(shí)，此時(shí)抗體的稀釋倍數(shù)即為抗體效價(jià)。結(jié)果見圖1，抗福莫特羅單克隆抗體3E6濃度為1mg/ml時(shí)的效價(jià)達(dá)1：512000。

(2)亞型測定

采用購自Sigma公司的鼠源單抗亞型鑒定試劑盒進(jìn)行亞型測定。雜交瘤細(xì)胞分泌的單克隆抗體與不同亞類的二抗顯色有明顯差異，其中與IgG1二抗的A450nm值最高，與IgM的二抗顯色微弱，而與IgG2a、IgG2b、IgG3和IgA二抗幾乎不顯色，該細(xì)胞分泌的抗體類型以IgG1為主。結(jié)果見圖2所示，福莫特羅單克隆抗體亞型為IgG1。

(3)親和力測定

采用非競爭ELISA法測定親和常數(shù)(Ka)。具體步驟如下：包被：用碳酸鹽緩沖液稀釋包被原至濃度為1、0.5、0.1、0.05μg/mL，96孔酶標(biāo)板100μL/孔分別包被，4℃過夜；傾去包被液，洗滌3次，拍干；封閉：每孔加200μL含10％小牛血清的洗液，37℃1h；傾去封閉液，洗滌3次，拍干；加單抗：用洗液將單抗以100μg/mL開始倍比稀釋，每孔加入100μL，37℃保溫保濕45min；傾去一抗，洗滌3次，拍干；加酶標(biāo)二抗：每孔加入100uL的l:10000倍稀釋的HRP酶標(biāo)記的山羊抗鼠IgG，37℃放置30min；傾去二抗，洗滌3次，拍干；顯色：每孔加底物顯色液100μL，37℃避光反應(yīng)15min；終止：每孔加入50μL終止液，終止反應(yīng)；檢測：測定波長為450nm處的吸光度值(A450nm)。按下列公式計(jì)算Ka

Ka＝(n-1)/2(n Ab’-Ab)

式中：Ab為抗原濃度為Ag時(shí)，產(chǎn)生半數(shù)吸光度值的抗體濃度；Ab’為抗原濃度為Ag’時(shí)，產(chǎn)生半數(shù)吸光度值的抗體濃度；n為Ag和Ag’之間的稀釋倍數(shù)采用非競爭酶聯(lián)免疫法測定福莫特羅單克隆抗體的親和常數(shù)，結(jié)果如圖3所示，親和常數(shù)Ka＝7.24×10⁸L/mol。

(4)抑制率測定

采用間接競爭ELISA法，具體步驟如下：包被：用碳酸鹽緩沖液稀釋包被原至濃度為2μg/mL，96孔酶標(biāo)板100μL/孔，4℃過夜；傾去包被液，洗滌3次，拍干；封閉：每孔加200μL含10％小牛血清的洗液，37℃1h；傾去封閉液，洗滌3次，拍干；加單抗和標(biāo)準(zhǔn)品：將標(biāo)準(zhǔn)品母液用PBS稀釋成8.1、2.7、0.9、0.3、0.1、0μg/L，每孔加入50μL，再加入一定稀釋倍數(shù)的單抗，每孔50μL，同時(shí)設(shè)置空白對照孔(PBS)和陰性對照(50μL單抗+50μL洗液)，37℃ 保溫保濕45min；傾去一抗，洗滌3次，拍干；加酶標(biāo)二抗：每孔加入100uL的l:10000稀釋的HRP酶標(biāo)記的山羊抗鼠IgG，37℃放置30min；傾去二抗，洗滌3次，拍干；顯色：每孔加底物顯色液100μL，37℃避光反應(yīng)15min；終止：每孔加入50μL終止液，終止反應(yīng)；檢測：測定波長為450nm處的吸光度值(A450nm)。

以吸光度百分比B/B0％(B代表不同濃度標(biāo)準(zhǔn)液的A450，B0代表零濃度標(biāo)準(zhǔn)液的A450)為縱坐標(biāo)，以不同濃度標(biāo)準(zhǔn)液的對數(shù)[Lg(formoterol)]為橫坐標(biāo)，繪制抗體的抑制曲線。結(jié)果見圖4，該抗體對福莫特羅抑制率IC₅₀為1.1μg/L。

(5)特異性測定

用競爭ELISA法測定該抗體與福莫特羅及其類似物(苯乙醇胺A、沙丁胺醇、妥布特羅、鹽酸克倫特羅、萊克多巴胺、西馬特羅)的交叉反應(yīng)率，結(jié)果見表2，該抗體與福莫特羅CR(％)為100％，與其類似物CR(％)均小于0.01％。

表2抗福莫特羅單克隆抗體與類似物交叉反應(yīng)結(jié)果

實(shí)施例四 本發(fā)明所述福莫特羅單克隆抗體的應(yīng)用

本實(shí)施例是本發(fā)明福莫特羅單克隆抗體在建立檢測福莫特羅殘留的酶聯(lián)免疫檢測試劑盒或膠體金層析試紙條方法后的應(yīng)用舉例，可以用于動(dòng)物組織、尿液和飼料中福莫特羅的檢測。

(1)樣品前處理

(a)尿樣：取尿樣室溫5000rpm離心5min，取上清100μL用樣品稀釋液稀釋4倍，取上清進(jìn)行檢測；

(b)(肉類、腎臟、肝臟等)組織：稱取肉樣組織2.0g±0.05g，加入5mL乙酸乙酯，振蕩1min，5000rpm離心10min；移取上層乙酸乙酯層溶液于另一離心管中，水相再用5mL乙酸乙酯重復(fù)萃取，合并有機(jī)相氮?dú)獯蹈桑患尤?mL復(fù)溶工作液溶解，取50μL用于分析；

(c)飼料：稱取飼料2.0g±0.05g，加入5mL乙酸乙酯，振蕩1min，5000rpm離心10min；移取上層乙酸乙酯層溶液于另一離心管中，水相再用5mL乙酸乙酯重復(fù)萃取，合并有機(jī)相氮?dú)獯蹈?；加?mL復(fù)溶工作液溶解，取50μL用于分析。

(2)該抗體應(yīng)用于酶聯(lián)免疫檢測試劑盒方法檢測

本發(fā)明中試劑盒的檢測原理是間接競爭ELISA方法。

檢測：將福莫特羅包被原包被于微孔板上，按需要取出板條，放置在酶標(biāo)板上；按需要的量將福莫特羅單克隆抗體工作液和酶標(biāo)記抗抗體工作液按5:1比例混合；向孔內(nèi)依次加入標(biāo)準(zhǔn)品或待測樣品50μL、福莫特羅單克隆抗體工作液和酶標(biāo)記抗抗體工作液的混合液50μL，輕輕振蕩混勻，25℃避光孵育30min；將孔內(nèi)液體甩干，用洗滌工作液(用去離子水將20×濃縮洗滌液20倍稀釋)250μL/孔，洗滌4次，拍干；將顯色液A和顯色液B按1:1比例混合，100μL/孔加入顯色，25℃避光孵育15min；加終止液50μL終止反應(yīng)，酶標(biāo)儀450nm下采用雙波長450nm/630nm測定，根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)曲線進(jìn)行定量或定性。

結(jié)果判定：(a)定量分析：分別計(jì)算標(biāo)準(zhǔn)品和待測樣品的平均吸光度值，標(biāo)準(zhǔn)品或樣品的吸光度值(B)除以0標(biāo)準(zhǔn)品的吸光度值再乘以100％，即為百分吸光度值，百分吸光度值＝(B/B₀)×100％。以百分吸光度值為縱坐標(biāo)，標(biāo)準(zhǔn)濃度的對數(shù)為橫坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線。將待測樣本的百分吸光度值代入標(biāo)準(zhǔn)曲線，即可求出對應(yīng)的濃度，再乘以稀釋倍數(shù)即為樣本的實(shí)際含量。(b)定性分析：用待測樣本的平均吸光度值和標(biāo)準(zhǔn)品的吸光度值相比較，即可得出待測樣本的濃度范圍，測試范圍為0.1μg/ml-8.1μg/ml。

(3)該抗體應(yīng)用于膠體金層析試紙條方法檢測

反應(yīng)原理采用競爭法對福莫特羅進(jìn)行半定量檢測，樣品中存在的福莫特羅在沿試紙條上移過程中先與金顆粒標(biāo)記的抗體結(jié)合，固定在NC膜上的包被原與福莫特羅同時(shí)競爭結(jié)合金標(biāo)抗體，T位置(檢測線)的顯色強(qiáng)弱與樣品中殘留福莫特羅的含量成反比，若樣品中無福莫特羅殘留，則金標(biāo)抗體全部與包被原反應(yīng)，試紙條的T線顯色。

檢測：取出福莫特羅膠體金層析試紙條，將樣品端插入待測樣品液中，插入深度不超過標(biāo)記線，約10-20秒鐘取出檢測試紙條，水平放置，3-5分鐘觀察判定檢測結(jié)果，10分鐘以后結(jié)果無效。

結(jié)果判定：包被膜上對應(yīng)的質(zhì)控區(qū)C位置(質(zhì)控線)顯示一條棕紅色線，檢測區(qū)T位置不顯示棕紅色線，表示檢測結(jié)果為陽性，說明在待測樣品中含有福莫特羅；在包被膜上T、C位置顯示有兩條棕紅色線，表示結(jié)果為陰性，說明在待測樣品中不含福莫特羅；當(dāng)質(zhì)控區(qū)C不顯示出棕紅色條帶，則無論檢測區(qū)T顯示出棕紅色條帶與否該試紙均判為無效。

上述實(shí)施例只為說明本發(fā)明的技術(shù)構(gòu)思和優(yōu)點(diǎn)，本發(fā)明也可以具有其它的形式變化，如本領(lǐng)域技術(shù)人員所熟知，上述實(shí)施例僅僅起到對上述發(fā)明保護(hù)范圍內(nèi)的示范作用，對本領(lǐng)域普通技術(shù)人員來說，在本發(fā)明所限定的保護(hù)范圍內(nèi)還有很多常規(guī)變形和其它實(shí)施例，這些變形和實(shí)施例都將在本發(fā)明待批的保護(hù)范圍之內(nèi)。