本發(fā)明涉及生物技術(shù)領(lǐng)域，尤其是涉及一種全血基因組DNA高通量板式提取試劑盒及提取方法。

背景技術(shù)：

公知的，自1990年起，國際人類基因組計劃正式啟動，社會各界對人類基因組的研究進(jìn)入了飛速發(fā)展階段，人類全血基因組DNA提取對于人類基因組遺傳連鎖圖譜的構(gòu)建、測序和基因識別是最為重要的基礎(chǔ)性工作，DNA提取的質(zhì)量與產(chǎn)量直接影響下游實驗?zāi)芊耥樌M(jìn)行。

目前，全血基因組DNA提取試劑盒種類繁多，但大部分試劑盒都需要沉淀、離心等操作，提取過程復(fù)雜、耗時長、效率低，并且無法實現(xiàn)高通量、自動化操作；即使少數(shù)試劑盒可以實現(xiàn)高通量、自動化操作，也需要搭配昂貴的自動化儀器，無法實現(xiàn)高通量提取方案的良好普及，因此提供一種高通量、方便快捷、結(jié)果穩(wěn)定的全血基因組DNA提取試劑盒成為本領(lǐng)域技術(shù)人員的基本訴求。

技術(shù)實現(xiàn)要素：

為了克服背景技術(shù)中的不足，本發(fā)明公開了一種全血基因組DNA高通量板式提取試劑盒及提取方法，實現(xiàn)了無需離心或搭配自動化儀器，可在50分鐘內(nèi)實現(xiàn)96個樣本同時提取的目的。

為了實現(xiàn)所述發(fā)明目的，本發(fā)明采用如下技術(shù)方案：

一種全血基因組DNA高通量板式提取試劑盒，包括裂解液1、裂解液2、結(jié)合液和磁珠，其中裂解液1包括以下組分：鹽酸胍2~8mol/L，1%~10%的曲拉通-100（V/V），1%~10%的吐溫-20（V/V）, 1%~10%的chelex-100 (m/V)，2~10mmol/L的乙二胺四乙酸二鈉，20~100mmol/L的三羥甲基氨基甲烷，鹽酸調(diào)節(jié)溶液pH至4.5，溶劑為去離子水；裂解液2包括以下組分：20mg/ml的蛋白酶K，50mmol/L的三甲基氨基甲烷，鹽酸調(diào)節(jié)溶液pH至8.0；結(jié)合液包括以下組分：1~3mol/L的氯化鈉，40%~90%的異丙醇 (V/V)，溶劑為去離子水。

所述的全血基因組DNA高通量板式提取試劑盒，還包括洗滌液I，洗滌液I包括以下組分：2~8mol/L的鹽酸胍，1~3mol/L的氯化鈉，20%~30%的異丙醇（V/V），20%~30%的乙醇（V/V），1~4mol/L的PEG-6000，2~10mmol/L的乙二胺四乙酸二鈉，20~100mmol/L的三羥甲基氨基甲烷，溶劑為去離子水，鹽酸調(diào)節(jié)溶液pH至4.5。

所述的全血基因組DNA高通量板式提取試劑盒，還包括洗滌液II，洗滌液II為60%~80%的乙醇 (V/V)。

所述的全血基因組DNA高通量板式提取試劑盒，還包括洗脫液，洗脫液包括以下組分：1~20mmol/L的乙二胺四乙酸二鈉，1~20mmol/L的三羥甲基氨基甲烷，溶劑為去離子水，鹽酸調(diào)節(jié)pH至8.0。

所述的全血基因組DNA高通量板式提取試劑盒，所述磁珠為洛陽吉恩特生物科技有限公司生產(chǎn)的DNA提取磁珠，固含量為50~100mg/ml。

所述的全血基因組DNA高通量板式提取試劑盒，還包括耗材，所述耗材包括96孔深孔板、96針攪拌套和磁力板，所述96孔深孔板分離的設(shè)置在磁力板上，所述96針攪拌套設(shè)置在96孔深孔板內(nèi)。

所述的全血基因組DNA高通量板式提取試劑盒，所述去離子水的用量根據(jù)所需體積而定量。

一種全血基因組DNA高通量板式提取試劑盒及提取方法，具體包括以下步驟：

（1）、將全血樣本送至96孔深孔板內(nèi)，加入裂解液1和裂解液2，金屬浴37度，30min后取下；

（2）、接上一步驟，加入結(jié)合液與磁珠，利用96針攪拌套進(jìn)行攪拌，將96孔深孔板置于磁力板上，等待磁分離完全后，吸棄廢液；

（3）、接上一步驟，加入洗滌液I，利用96針攪拌套進(jìn)行攪拌，將96孔深孔板置于磁力板上，等待磁分離完全后，吸棄廢液；

（4）、接上一步驟，加入洗滌液II，利用96針攪拌套進(jìn)行攪拌，將96孔深孔板置于磁力板上，等待磁分離完全后，吸棄廢液；

（5）、接上一步驟，將96孔深孔板置于37度金屬浴，5min后取下，加入洗脫液，利用96針攪拌套進(jìn)行攪拌，將96孔深孔板置于37度金屬浴，10min后取下；將96孔深孔板置于磁力板上，磁分離完全后，將上清轉(zhuǎn)移至新板中，進(jìn)行下游實驗。

由于采用了上述技術(shù)方案，本發(fā)明所述的全血基因組DNA高通量板式提取試劑盒及提取方法具有如下有益效果：

1、通過裂解液1和裂解液2的配合使用，整個操作過程無需離心，操作更加簡便；通過結(jié)合液、磁珠和96針攪拌套的配合使用，可實現(xiàn)高通量的全血DNA提取；通過96孔深孔板和96針攪拌套的配合使用，本方案可在50分鐘內(nèi)完成96個樣本的同時提取，大大提高了工作效率；

2、通過結(jié)合液和磁珠的配合使用，本方案的靈敏度明顯提高，可從200ul全血中提取5ug以上的DNA，現(xiàn)有技術(shù)為3ug以上，且無需使用昂貴的自動化儀器，成本較低，能夠普及與各種類型的實驗室；

3、本方案不使用氯仿、酚等有毒物質(zhì)；

4、本方案的提取過程均在37度下進(jìn)行，相比于現(xiàn)有技術(shù)的55度-70度的提取過程，本方案有效避免了高溫對人體的潛在燙傷風(fēng)險。

具體實施方式

通過下面的實施例可以詳細(xì)的解釋本發(fā)明，公開本發(fā)明的目的旨在保護(hù)本發(fā)明范圍內(nèi)的一切技術(shù)改進(jìn)。

本發(fā)明所述的全血基因組DNA高通量板式提取試劑盒，包括裂解液1、裂解液2、結(jié)合液和磁珠，其中裂解液1包括以下組分：鹽酸胍2~8mol/L，1%~10%的曲拉通-100（V/V），1%~10%的吐溫-20（V/V）, 1%~10%的chelex-100 (m/V)，2~10mmol/L的乙二胺四乙酸二鈉，20~100mmol/L的三羥甲基氨基甲烷，鹽酸調(diào)節(jié)溶液pH至4.5，溶劑為去離子水；裂解液2包括以下組分：20mg/ml的蛋白酶K，50mmol/L的三甲基氨基甲烷，鹽酸調(diào)節(jié)溶液pH至8.0；結(jié)合液包括以下組分：1~3mol/L的氯化鈉，40%~90%的異丙醇 (V/V)，溶劑為去離子水。

所述的全血基因組DNA高通量板式提取試劑盒，還包括洗滌液I，洗滌液I包括以下組分：2~8mol/L的鹽酸胍，1~3mol/L的氯化鈉，20%~30%的異丙醇（V/V），20%~30%的乙醇（V/V），1~4mol/L的PEG-6000，2~10mmol/L的乙二胺四乙酸二鈉，20~100mmol/L的三羥甲基氨基甲烷，溶劑為去離子水，鹽酸調(diào)節(jié)溶液pH至4.5。

所述的全血基因組DNA高通量板式提取試劑盒，還包括洗滌液II，洗滌液II為60%~80%的乙醇 (V/V)。

所述的全血基因組DNA高通量板式提取試劑盒，還包括洗脫液，洗脫液包括以下組分：1~20mmol/L的乙二胺四乙酸二鈉，1~20mmol/L的三羥甲基氨基甲烷，溶劑為去離子水，鹽酸調(diào)節(jié)pH至8.0，。

所述的全血基因組DNA高通量板式提取試劑盒，所述磁珠為洛陽吉恩特生物科技有限公司生產(chǎn)的DNA提取磁珠，固含量為50~100mg/ml。

所述的全血基因組DNA高通量板式提取試劑盒，還包括耗材，所述耗材包括96孔深孔板、96針攪拌套和磁力板，所述96孔深孔板分離的設(shè)置在磁力板上，所述96針攪拌套設(shè)置在96孔深孔板內(nèi)。

所述的全血基因組DNA高通量板式提取試劑盒，所述去離子水的用量根據(jù)所需體積而定量。

一種全血基因組DNA高通量板式提取試劑盒及提取方法，具體包括以下步驟：

（1）、將全血樣本送至96孔深孔板內(nèi)，加入裂解液1和裂解液2，金屬浴37度，30min后取下；

（2）、接上一步驟，加入結(jié)合液與磁珠，利用96針攪拌套進(jìn)行攪拌，將96孔深孔板置于磁力板上，等待磁分離完全后，吸棄廢液；

（3）、接上一步驟，加入洗滌液I，利用96針攪拌套進(jìn)行攪拌，將96孔深孔板置于磁力板上，等待磁分離完全后，吸棄廢液；

（4）、接上一步驟，加入洗滌液II，利用96針攪拌套進(jìn)行攪拌，將96孔深孔板置于磁力板上，等待磁分離完全后，吸棄廢液；

（5）、接上一步驟，將96孔深孔板置于37度金屬浴，5min后取下，加入洗脫液，利用96針攪拌套進(jìn)行攪拌，將96孔深孔板置于37度金屬浴，10min后取下；將96孔深孔板置于磁力板上，磁分離完全后，將上清轉(zhuǎn)移至新板中，進(jìn)行下游實驗。

實施例1

1）、裂解液1的配置：先在容量瓶中加入去離子水，加入濃度為4mol/L的鹽酸胍，3%的曲拉通-100（V/V），5%的吐溫-20（V/V），3%的Chelex-100（m/V）,6mmol/L的乙二胺四乙酸二鈉，40mmol/L的三羥甲基氨基甲烷，用去離子水定容至所需體積，用鹽酸調(diào)節(jié)PH值至4.5；

2）、裂解液2的配置：20mg/ml的蛋白酶K，50mmol/L的三甲基氨基甲烷，鹽酸調(diào)節(jié)溶液pH至8.0；

3）、結(jié)合液的配置：先在容量瓶中加入去離子水，加入濃度為1.5mol/L的氯化鈉，50%的異丙醇（V/V），用去離子水定容至所需體積；

4）、洗滌液I的配置：先在容量瓶中加入去離子水，加入濃度為3 mol/L的鹽酸胍，1.5 mol/L的氯化鈉，25%的異丙醇（V/V），20%的乙醇（V/V），2 mol/L的PEG-6000，2mmol/L的乙二胺四乙酸二鈉，30mmol/L的三羥甲基氨基甲烷，用去離子水定容至所需體積，用鹽酸調(diào)節(jié)PH值至4.5；

5）、洗滌液II的配置：75%的乙醇（V/V）；

6）、洗脫液的配置：先在容量瓶中加入少量去離子水，加入濃度為10mmol/L的乙二胺四乙酸二鈉，5mmol/L的三羥甲基氨基甲烷，用去離子水定容至所需體積，用鹽酸調(diào)節(jié)PH值至8.0；

提取方法：

（1）、將100ul全血樣本送至96孔深孔板內(nèi)，加入300ul裂解液1和10ul裂解液2，金屬浴37度，30min后取下；

（2）、接上一步驟，加入300ul結(jié)合液與10ul磁珠，利用96針攪拌套進(jìn)行攪拌，將96孔深孔板置于磁力板上，等待磁分離完全后，吸棄廢液；

（3）、接上一步驟，加入600ul洗滌液I，利用96針攪拌套進(jìn)行攪拌，將96孔深孔板置于磁力板上，等待磁分離完全后，吸棄廢液；

（4）、接上一步驟，加入400ul洗滌液II，利用96針攪拌套進(jìn)行攪拌，將96孔深孔板置于磁力板上，等待磁分離完全后，吸棄廢液；

（5）、接上一步驟，將96孔深孔板置于37度金屬浴，5min后取下，加入100ul洗脫液，利用96針攪拌套進(jìn)行攪拌，將96孔深孔板置于37度金屬浴，10min后取下；將96孔深孔板置于磁力板上，磁分離完全后，將上清轉(zhuǎn)移至新板中，進(jìn)行下游實驗。

實施例2

1）、裂解液1的配置：先在容量瓶中加入去離子水，加入濃度為6mol/L的鹽酸胍，7%的曲拉通-100（V/V），3%的吐溫-20（V/V），6%的Chelex-100（m/V）,3mmol/L的乙二胺四乙酸二鈉，70mmol/L的三羥甲基氨基甲烷，用去離子水定容至所需體積，用鹽酸調(diào)節(jié)PH值至4.5；

2）、裂解液2的配置：20mg/ml的蛋白酶K，50mmol/L的三甲基氨基甲烷，鹽酸調(diào)節(jié)溶液pH至8.0；

3）、結(jié)合液的配置：先在容量瓶中加入去離子水，加入濃度為2mol/L的氯化鈉，70%的異丙醇（V/V），用去離子水定容至所需體積；

4）、洗滌液I的配置：先在容量瓶中加入去離子水，加入濃度為6 mol/L的鹽酸胍，2 mol/L的氯化鈉，20%的異丙醇（V/V），25%的乙醇（V/V），3 mol/L的PEG-6000，6mmol/L的乙二胺四乙酸二鈉，70mmol/L的三羥甲基氨基甲烷，用去離子水定容至所需體積，用鹽酸調(diào)節(jié)PH值至4.5；

5）、洗滌液II的配置：70%的乙醇（V/V）；

6）、洗脫液的配置：先在容量瓶中加入少量去離子水，加入濃度為15mmol/L的乙二胺四乙酸二鈉，10mmol/L的三羥甲基氨基甲烷，用去離子水定容至所需體積，用鹽酸調(diào)節(jié)PH值至8.0；

提取方法：

（1）、將100ul全血樣本送至96孔深孔板內(nèi)，加入300ul裂解液1和10ul裂解液2，金屬浴37度，30min后取下；

（2）、接上一步驟，加入300ul結(jié)合液與10ul磁珠，利用96針攪拌套進(jìn)行攪拌，將96孔深孔板置于磁力板上，等待磁分離完全后，吸棄廢液；

（3）、接上一步驟，加入600ul洗滌液I，利用96針攪拌套進(jìn)行攪拌，將96孔深孔板置于磁力板上，等待磁分離完全后，吸棄廢液；

（4）、接上一步驟，加入400ul洗滌液II，利用96針攪拌套進(jìn)行攪拌，將96孔深孔板置于磁力板上，等待磁分離完全后，吸棄廢液；

（5）、接上一步驟，將96孔深孔板置于37度金屬浴，5min后取下，加入100ul洗脫液，利用96針攪拌套進(jìn)行攪拌，將96孔深孔板置于37度金屬浴，10min后取下；將96孔深孔板置于磁力板上，磁分離完全后，將上清轉(zhuǎn)移至新板中，進(jìn)行下游實驗。

實施例3

1）、裂解液1的配置：先在容量瓶中加入去離子水，加入濃度為8mol/L的鹽酸胍，9%的曲拉通-100（V/V），10%的吐溫-20（V/V），10%的Chelex-100（m/V）,9mmol/L的乙二胺四乙酸二鈉，100mmol/L的三羥甲基氨基甲烷，用去離子水定容至所需體積，用鹽酸調(diào)節(jié)PH值至4.5；

2）、裂解液2的配置：20mg/ml的蛋白酶K，50mmol/L的三甲基氨基甲烷，鹽酸調(diào)節(jié)溶液pH至8.0；

3）、結(jié)合液的配置：先在容量瓶中加入去離子水，加入濃度為3mol/L的氯化鈉，90%的異丙醇（V/V），用去離子水定容至所需體積；

4）、洗滌液I的配置：先在容量瓶中加入去離子水，加入濃度為8 mol/L的鹽酸胍，3mol/L的氯化鈉，30%的異丙醇（V/V），30%的乙醇（V/V），4 mol/L的PEG-6000，10mmol/L的乙二胺四乙酸二鈉，100mmol/L的三羥甲基氨基甲烷，用去離子水定容至所需體積，用鹽酸調(diào)節(jié)PH值至4.5；

5）、洗滌液II的配置：70%的乙醇（V/V）；

6）、洗脫液的配置：先在容量瓶中加入少量去離子水，加入濃度為15mmol/L的乙二胺四乙酸二鈉，10mmol/L的三羥甲基氨基甲烷，用去離子水定容至所需體積，用鹽酸調(diào)節(jié)PH值至8.0；

提取方法：

（1）、將300ul全血樣本送至96孔深孔板內(nèi)，加入500ul裂解液1和20ul裂解液2，金屬浴37度，30min后取下；

（2）、接上一步驟，加入500ul結(jié)合液與15ul磁珠，利用96針攪拌套進(jìn)行攪拌，將96孔深孔板置于磁力板上，等待磁分離完全后，吸棄廢液；

（3）、接上一步驟，加入800ul洗滌液I，利用96針攪拌套進(jìn)行攪拌，將96孔深孔板置于磁力板上，等待磁分離完全后，吸棄廢液；

（4）、接上一步驟，加入500ul洗滌液II，利用96針攪拌套進(jìn)行攪拌，將96孔深孔板置于磁力板上，等待磁分離完全后，吸棄廢液；

（5）、接上一步驟，將96孔深孔板置于37度金屬浴，5min后取下，加入100ul洗脫液，利用96針攪拌套進(jìn)行攪拌，將96孔深孔板置于37度金屬浴，10min后取下；將96孔深孔板置于磁力板上，磁分離完全后，將上清轉(zhuǎn)移至新板中，進(jìn)行下游實驗。

本發(fā)明所述的本發(fā)明未詳述部分為現(xiàn)有的技術(shù)。

為了公開本發(fā)明的發(fā)明目的而在本文中選用的實施例，當(dāng)前認(rèn)為是適宜的，但是，應(yīng)了解的是，本發(fā)明旨在包括一切屬于本構(gòu)思和發(fā)明范圍內(nèi)的實施例的所有變化和改進(jìn)。