1.一種用于檢測D型流感病毒的熒光PCR引物和探針,其特征在于,包括一組用于檢測D型流感病毒的檢測引物和探針,具體如下:
F-primer:GAGAAACCAGCTTACTGCC(SEQ NO.1),
R-primer:CTCATCTCTAGATTCCGCAT(SEQ NO.2),
Probe:FAM-ATGACCCAGAGAAGTCAGTACGA-BHQ1(SEQ NO.3)。
2.一種用于檢測D型流感病毒的熒光RT-PCR試劑盒,其特征在于,包括權(quán)利要求1所述的引物和探針。
3.一種D型流感病毒的熒光RT-PCR檢測方法,其特征在于,它包括以下步驟:
S1.提取待檢測樣品的RNA,并以此為模板RNA;
S2.以權(quán)利要求1所述的引物和探針進(jìn)行RT-PCR反應(yīng);
S3.根據(jù)擴(kuò)增曲線,對照陽性標(biāo)準(zhǔn)品和陰性標(biāo)準(zhǔn)品的擴(kuò)增結(jié)果,判斷樣品是否為D型流感病毒。
4.根據(jù)權(quán)利要求3所述的一種D型流感病毒的熒光RT-PCR檢測方法,其特征在于,所述RT-PCR反應(yīng)體系為總體積為25μL,其中上游、下游引物10μmol/L各1.0μL,探針10μmol/L 0.5μL,模板RNA 5.0μL,最后補水至25μL;將加入反應(yīng)液的PCR管5000r/min離心30s后放入檢測儀器,反應(yīng)程序設(shè)置:第一階段:42℃10min,95℃3min;第二階段:95℃30s,45℃30s,72℃30s,5個循環(huán);第三階段:95℃15s,55℃40s,40個循環(huán),在55℃40s收集熒光信號。