本發(fā)明涉及藥物領(lǐng)域，具體涉及一種環(huán)多肽的制備方法。

背景技術(shù)：

Gymnopeptide A和Gymnopeptide B是一種高度N-甲基化的天然環(huán)十八肽對子宮癌(Hela)，皮膚表皮癌(A431)胸腺癌(T47D，MCF7，MDA-MB-231)等細(xì)胞系都具有低nM的細(xì)胞毒性，并且，Gymnopeptide A和Gymnopeptide B與環(huán)孢菌素具有相似的結(jié)構(gòu)，具有免疫抑制活性。然而由于自然界中存在的Gymnopeptides A和Gymnopeptides B十分有限，并且分離提純具有較大的難度，無法開展相關(guān)的藥效學(xué)評估。因此開發(fā)一種高效、快速合成Gymnopeptide A和Gymnopeptide B類似物的方法，得到一系列具有優(yōu)良生物活性的Gymnopeptide A和Gymnopeptide B的結(jié)構(gòu)類似物是本發(fā)明要解決的技術(shù)問題。

在現(xiàn)有技術(shù)1中，Gymnopeptide A和Gymnopeptide B是由Zoltan Beni研究組從蘑菇Gymnopus fusipes中分離、純化得到的。

現(xiàn)有技術(shù)1中，天然產(chǎn)物的純化工藝復(fù)雜，需要耗費(fèi)大量的溶劑和較長的時間，并且不能用于放大生產(chǎn)；

技術(shù)實現(xiàn)要素：

本發(fā)明為了解決上述問題，提供了一種Gymnopeptide A或Gymnopeptide B的制備方法，其包括以下步驟：

1)以固相合成方法合成直鏈多肽-固相合成樹脂；

2)從固相合成樹脂上裂解直鏈多肽，并將直鏈多肽進(jìn)行環(huán)合；

其中，步驟1)所得的直鏈多肽-固相合成樹脂選自

Ser(OtBu)-MeVal-Val-MeVal-Val-MeVal-Ala-MeVal-Val-Sar-MeVal-MeAla-Val-Sar-Ala-MeVal-Ala-MeVal-Resin或

Thr(OtBu)-MeVal-Val-MeVal-Val-MeVal-Ala-MeVal-Val-Sar-MeVal-MeAla-Val-Sar-Ala-MeVal-Ala-MeVal-Resin；

優(yōu)選地，多肽中的氨基酸均為L型氨基酸；

步驟1)中固相合成方法為以固相合成樹脂起始依次偶聯(lián)氨基酸，偶聯(lián)N-甲基化氨基酸的偶聯(lián)方法為：

氨基保護(hù)基保護(hù)的N-甲基化氨基酸和三光氣溶于有機(jī)溶劑，滴加三甲基吡啶，至羧基活化完全并與氨基裸露組分在堿性條件下偶聯(lián)；

偶聯(lián)非N-甲基化氨基酸的偶聯(lián)方法為：

羧基活化劑在堿性條件下活化氨基保護(hù)基的非N-甲基化氨基酸，至羧基活化完全，與氨基裸露組分在堿性條件下偶聯(lián)；

其中所述羧基活化劑選自DCC、DIC、HATU、HBTU、HOAt、HOBt、PyBOP、PyAOP中的一種或多種組合；

在本發(fā)明的技術(shù)方案中，步驟1)中自偶聯(lián)第10個氨基酸起，以DCC作為羧基活化劑。

其中，步驟1)中偶聯(lián)氨基酸的堿性條件是通過加入DIEA、NMM、三甲基吡啶獲得。

在本發(fā)明的技術(shù)方案中，步驟1)中氨基裸露組分為氨基裸露的固相合成樹脂或者末端氨基裸露的多肽段-固相合成樹脂偶聯(lián)物。

氨基裸露組分是通過脫除氨基保護(hù)基獲得，其中，本發(fā)明的氨基保護(hù)基選自Fmoc；氨基保護(hù)基脫除的條件選自20％哌啶/DMF溶液。

在本發(fā)明的實施方案中，步驟2)所述的從固相合成樹脂上裂解直鏈多肽的條件為：在酸性條件下裂解，優(yōu)選地，以1％TFA在有機(jī)溶劑中進(jìn)行裂解。

在本發(fā)明的實施方案中，步驟2)所述直鏈多肽進(jìn)行環(huán)合的條件為以縮合劑在堿性條件下進(jìn)行縮合。

其中所述羧基活化劑選自DCC、DIC、HATU、HBTU、HOAt、HOBt、PyBOP、PyAOP中的一種或多種組合。

堿性條件是通過加入DIEA、NMM、三甲基吡啶獲得。

在一個具體實施方案中，步驟2)所述脫除保護(hù)基為通過酸性條件將Ser或Thr側(cè)鏈羥基上的保護(hù)基脫除，優(yōu)選地，酸性條件為三氟乙酸。

在本發(fā)明的技術(shù)方案中，采用的固相合成樹脂選自TPC樹脂、Crown樹酯、Rink Amide樹酯、Rink MBHA Amide樹脂、Wang樹脂、以及其他裂解后產(chǎn)生羧基或酰胺基的樹酯。

在本發(fā)明一個具體技術(shù)方案中，制備方法包括如下步驟：

1)以固相合成方法依次偶聯(lián)氨基酸：

以TPC固相合成樹脂與的Fmoc-N-Me-Val-OH在DIEA和酸酐作用下反應(yīng)至完全，獲得Fmoc-N-Me-Val-固相合成樹脂；以20％吡啶/DMF脫除Fmoc保護(hù)基，在DIC和HOAT條件下偶聯(lián)8當(dāng)量Fmoc-Ala-OH，脫除Fmoc保護(hù)基；在BTC、三甲基吡啶和DIEA條件下偶聯(lián)Fmoc-N-Me-Val-OH，脫除Fmoc保護(hù)基；在DIC和HOAT條件下偶聯(lián)Fmoc-Ala-OH，脫除Fmoc保護(hù)基；在BTC、三甲基吡啶和DIEA條件下偶聯(lián)Fmoc-Sar-OH，脫除Fmoc保護(hù)基；在PyAOP和2-肟氰乙酸乙酯條件下偶聯(lián)Fmoc-Val-OH，脫除Fmoc保護(hù)基；在BTC、三甲基吡啶和DIEA條件下偶聯(lián)Fmoc-N-Me-Ala-OH，脫除Fmoc保護(hù)基；在BTC、三甲基吡啶和DIEA條件下偶聯(lián)Fmoc-N-Me-Val-OH，脫除Fmoc保護(hù)基；在BTC、三甲基吡啶和DIEA條件下偶聯(lián)Fmoc-Sar-OH，脫除Fmoc保護(hù)基；在DCC條件下偶聯(lián)Fmoc-Val-OH，脫除Fmoc保護(hù)基；在BTC、三甲基吡啶和DIEA條件下偶聯(lián)Fmoc-N-Me-Val-OH，脫除Fmoc保護(hù)基；在DCC條件下偶聯(lián)Fmoc-Ala-OH，脫除Fmoc保護(hù)基；在BTC、三甲基吡啶和DIEA條件下偶聯(lián)Fmoc-N-Me-Val-OH，脫除Fmoc保護(hù)基；在DCC條件下偶聯(lián)Fmoc-Val-OH，脫除Fmoc保護(hù)基；在BTC、三甲基吡啶和DIEA條件下偶聯(lián)Fmoc-N-Me-Val-OH，脫除Fmoc保護(hù)基；在DCC條件下偶聯(lián)Fmoc-Val-OH，脫除Fmoc保護(hù)基；在BTC、三甲基吡啶和DIEA條件下偶聯(lián)Fmoc-N-Me-Val-OH，脫除Fmoc保護(hù)基；在DCC條件下偶聯(lián)Fmoc-Ser(OtBu)-OH或偶聯(lián)Fmoc-Thr(OtBu)-OH，脫除Fmoc保護(hù)基；

2)以1％TFA/CH₂Cl₂裂解固相合成樹脂，獲得直鏈肽；在HATU和三甲基吡啶條件下環(huán)合獲得環(huán)狀多肽；在TFA條件下脫除OtBu保護(hù)基，獲得Gymnopeptides A或Gymnopeptides B。

其中，在偶聯(lián)氨基酸中，以摩爾量計，F(xiàn)moc保護(hù)氨基酸:DIC:HOAT＝1:0.5～1.5:0.5～1.5(1:1:1)，F(xiàn)moc保護(hù)N甲基氨基酸：BTC：三甲基吡啶：DIEA＝1:0.1～1:2～4:3～7(1:0.3～0.5:3:5)；Fmoc保護(hù)氨基酸:PyAOP:2-肟氰乙酸乙酯＝1:0.5～1.5:0.5～1.5(1:1:1)；Fmoc保護(hù)氨基酸:DCC＝1:0.1～1(1:0.5)。

本發(fā)明步驟1)制備直鏈肽的過程中，發(fā)明人發(fā)現(xiàn)雖然以本領(lǐng)域常規(guī)的縮合劑均可以活化羧基獲得酰胺鍵偶聯(lián)的直鏈多肽，但是，偶聯(lián)不同的氨基酸時采用特定的縮合條件，效率更好副產(chǎn)物相應(yīng)的也有明顯降低。

本申請步驟1)以三光氣與三甲基吡啶能夠高效地活化甲基化氮氨基酸，同時以普通縮合劑縮合非N甲基化氨基酸有效降低了副反應(yīng)的產(chǎn)生。同時發(fā)明人還發(fā)現(xiàn)在合成直鏈多肽的過程中，隨著鏈段的加長，偶聯(lián)氨基酸的難度逐漸加大，當(dāng)偶聯(lián)至第10個氨基酸起，以DCC作為縮合劑能夠增加縮合效率，同時在前10位氨基酸縮合過程中采用DCC縮合劑會導(dǎo)致產(chǎn)品的消旋，因此，本發(fā)明在偶連前10位氨基酸時不采用DCC作為縮合劑，自第十位氨基酸起以DCC作為縮合劑增加了合成效率，同時降低降低產(chǎn)物的消旋。

本發(fā)明另一個方面驗證了天然化合物Gymnopeptides A或Gymnopeptides B中Ser或Thr的構(gòu)型為L型。

有益效果

本發(fā)明以簡單廉價的氨基酸為原料，以TCP樹脂為固相載體，應(yīng)用Fmoc-策略先完成了直鏈?zhǔn)穗墓滔嗪铣?，切除樹脂后進(jìn)行溶液中的?；磻?yīng)進(jìn)行關(guān)環(huán)，能夠高效、快速、經(jīng)濟(jì)地制備多種該天然產(chǎn)物。

附圖說明

圖1：Gymnopeptides A結(jié)構(gòu)的HRMS圖。

圖2：Gymnopeptides A結(jié)構(gòu)的HNMR圖。

圖3：Gymnopeptides A結(jié)構(gòu)的CNMR圖。

圖4：Gymnopeptides B結(jié)構(gòu)的HRMS圖。

圖5：Gymnopeptides B結(jié)構(gòu)的HNMR圖。

圖6：Gymnopeptides B結(jié)構(gòu)的CNMR圖。

具體實施方式

實施例1Gymnopeptides A的制備

(1)直鏈肽的制備：

于一個250mL的固相反應(yīng)器中加入TCP樹脂(0.98mmol/g，4g，3.92mmol)及CH₂Cl₂(30ml)，溶脹樹脂30min。抽除CH₂Cl₂，用DMF(4x 30mL)洗滌樹脂，再用無水THF(2x 30mL)洗滌樹脂，備用。為了使得每步充分反應(yīng)，因而降低樹脂取代度為0.6mmol/g，因此將Fmoc-N-Me-Val(848mg,2.4mmol)溶解于15mL無水DMF當(dāng)中，再加入DIEA(3.5mL,20mmol)，N₂鼓泡混勻，縮合反應(yīng)2h。抽除反應(yīng)液，用DMF(4x 30mL)洗滌樹脂，再用無水DMF(30mL)洗滌樹脂。向樹脂中加入乙酸酐(9mL,15.68mmol)和DIEA(3.5mL,20mmol)的DMF(2mL)溶液，反應(yīng)1h，抽除反應(yīng)液，用DMF(4x 30mL)洗滌樹脂，得到樹脂的取代度為0.60mmol/g(4g，2.4mmol，1eq)得到直鏈肽1(MeVal-Resin)。

用20％哌啶/DMF溶液(15ml)脫除Fmoc保護(hù)基，10min后，用DMF(4x30mL)洗滌樹脂，再用無水DMF(2x 30mL)洗滌樹脂，備用。同時將Fmoc保護(hù)氨基酸(4.0eq)和DIC(4.0eq)溶解于無水DMF當(dāng)中，攪拌幾分鐘之后加入HOAT(4.0eq)，將該反應(yīng)液轉(zhuǎn)移到脫除Fmoc的TCP樹脂中，N₂鼓泡混勻，縮合反應(yīng)1.5h(四氯苯醌試劑檢測至反應(yīng)完全)。抽除反應(yīng)液，用DMF(4x 30mL)洗滌樹脂，重復(fù)上述脫保護(hù)，同時將Fmoc保護(hù)的氨基酸(4.0eq)和三光氣(BTC，1.64eq)溶于無水THF(15ml)，向該溶液中緩慢滴加三甲基吡啶(collidine，12eq)，反應(yīng)立即產(chǎn)生大量白色沉淀，加完反應(yīng)3min，將該反應(yīng)液轉(zhuǎn)移到脫除Fmoc的TCP樹脂中，同時加入DIEA(20eq)，N₂鼓泡混勻，縮合反應(yīng)0.5-1h(茚三酮檢測至反應(yīng)完全)，以上二步縮合方案重復(fù)，直至完成直鏈肽2(Sar-Ala-MeVal-Ala-MeVal-Resin)的合成。

用20％哌啶/DMF溶液(15ml)脫除Fmoc保護(hù)基，10min后，用DMF(4x30mL)洗滌樹脂，再用無水DMF(2x 30mL)洗滌樹脂，備用。同時將Fmoc保護(hù)氨基酸(4.0eq)，PyAOP(8.0eq)和Ethyl Cyanoglyoxylate-2-Oxime(8.0eq)溶解于無水DMF當(dāng)中，攪拌幾分鐘之后，將該反應(yīng)液轉(zhuǎn)移到脫除Fmoc的TCP樹脂中，同時加入DIEA(20eq)，N₂鼓泡混勻，縮合反應(yīng)1.5h(四氯苯醌試劑檢測至反應(yīng)完全)。得到直鏈肽3(Val-Sar-Ala-MeVal-Ala-MeVal-Resin)的合成。

用20％哌啶/DMF溶液(15ml)脫除Fmoc保護(hù)基，10min后，用DMF(4x 30mL)洗滌樹脂，再用無水THF(2x 30mL)洗滌樹脂，備用。同時將Fmoc保護(hù)的氨基酸(4.0eq)和三光氣(BTC，1.64eq)溶于無水THF(15ml)，向該溶液中緩慢滴加三甲基吡啶(collidine，12eq)，反應(yīng)立即產(chǎn)生大量白色沉淀，加完反應(yīng)3min，將該反應(yīng)液轉(zhuǎn)移到脫除Fmoc的TCP樹脂中，同時加入DIEA(20eq)，N₂鼓泡混勻，縮合反應(yīng)0.5-1h(茚三酮檢測和四氯苯醌試劑檢測至反應(yīng)完全)，重復(fù)以上脫保護(hù)和縮合方案，直至完成直鏈肽4(Sar-MeVal-MeAla-Val-Sar-Ala-MeVal-Ala-MeVal-Resin)的合成。

用20％哌啶/DMF溶液(15ml)脫除Fmoc保護(hù)基，10min后，用DMF(4x 30mL)洗滌樹脂，再用無水DMF(2x 30mL)洗滌樹脂，備用。同時將Fmoc保護(hù)氨基酸(4.0eq)和DCC(2.0eq)溶解于48mL CH₂Cl₂：DMF(3:1)當(dāng)中，在室溫下活化1h，離心去除白色固體，取出上清溶液加入到脫除Fmoc的TCP樹脂中，密封震蕩，縮合反應(yīng)3-4h(四氯苯醌試劑檢測至反應(yīng)完全)。抽除反應(yīng)液，用DMF(4x 30mL)洗滌樹脂，重復(fù)上述脫保護(hù)，同時將Fmoc保護(hù)的氨基酸(4.0eq)和三光氣(BTC，1.64eq)溶于無水THF(15ml)，向該溶液中緩慢滴加三甲基吡啶(collidine，12eq)，反應(yīng)立即產(chǎn)生大量白色沉淀，加完反應(yīng)3min，將該反應(yīng)液轉(zhuǎn)移到脫除Fmoc的TCP樹脂中，同時加入DIEA(20eq)，N₂鼓泡混勻，縮合反應(yīng)0.5-1h(茚三酮檢測至反應(yīng)完全)，以上二步縮合方案重復(fù)，直至完成直鏈肽5(MeVal-Val-MeVal-Val-MeVal-Ala-MeVal-Val-Sar-MeVal-MeAla-Val-Sar-Ala-MeVal-Ala-MeVal-Resin)的合成。

用20％哌啶/DMF溶液(15ml)脫除Fmoc保護(hù)基，10min后，用DMF(4x 30mL)洗滌樹脂，再用無水DMF(2x 30mL)洗滌樹脂，備用。同時將Fmoc-Ser(OtBu)-OH(4.0eq)和DCC(2.0eq)溶解于48mL CH₂Cl₂：DMF(3:1)當(dāng)中，在室溫下活化1h，離心去除白色固體，取出上清溶液加入到脫除Fmoc的TCP樹脂中，密封震蕩，縮合反應(yīng)3-4h(四氯苯醌試劑(Ser(OtBu)-MeVal-Val-MeVal-Val-MeVal-Ala-MeVal-Val-Sar-MeVal-MeAla-Val-Sar-Ala-MeVal-Ala-MeVal-Resin)的合成。

(2)環(huán)十八肽Gymnopeptide A和B的制備：

將負(fù)載有6的樹脂1g取出，加入1％TFA/CH₂Cl₂(2mL)，室溫下振蕩反應(yīng)24h。將樹脂濾除，并用CH₂Cl₂(20mL)洗滌樹脂。將有機(jī)相濃縮，殘留物用制備型HPLC純化，收集產(chǎn)物并將溶劑減壓蒸發(fā)乙腈溶劑，凍干得到產(chǎn)物7(30mg,3％).Gymnopeptides A HRMS(ESI)m/z:calcd for C₈₈H₁₆₁N₁₈O₂₀[M+H]+1790.2129，found 1790.2123；Gymnopeptides B HRMS(ESI)m/z:calcd for C₈₉H₁₆₃N₁₈O₂₀[M+H]+1804.2286,found 1804.2318。

向產(chǎn)物7(30mg，0.017mmol)中加入溶解于27mLCH₂Cl₂當(dāng)中，再加入collidine(30ul,1.7mmol)攪拌10min，再稱量HATU(30mg,0.085mmol)溶解于DMF當(dāng)中，滴加到上述CH₂Cl₂當(dāng)中，攪拌反應(yīng)過夜。蒸干溶劑，再用制備型HPLC純化，收集產(chǎn)物并將溶劑減壓蒸發(fā)乙腈溶劑，凍干得到產(chǎn)物8(15mg，50％)Gymnopeptides A HRMS(ESI)m/z:calcd for C₈₈H₁₅₉N₁₈O₁₉[M+H]+1772.2023,found 1772.2185；Gymnopeptides B HRMS(ESI)m/z:calcd for C89H161N18O19[M+H]+1786.2180,found 1790.2177。

將產(chǎn)物8溶解于TFA，在冰浴條件下攪拌3h，蒸干TFA，用制備型HPLC純化，收集產(chǎn)物并將溶劑減壓蒸發(fā)乙腈溶劑，凍干得到最終產(chǎn)物9(5mg，33％).Gymnopeptides A HRMS(ESI)m/z:calcd for C₈₄H₁₅₁N₁₈O₁₉[M+H]⁺1716.1397,found 1716.1425，如圖1；Gymnopetide A

¹H NMR(500MHz,CDCl3)δ

0.7-1.03(m,33H),1.23-1.34(m,12H),2.03-2.44(m,10H),2.82(s,3H),2.96(d,J＝14.8,1H),2.97(s,3H),2.99(s,3H),3.13(m,1H),3.21(s,3H),3.22(s,3H),3.27(d,J＝15.9HZ,1H)3.28(s,3H)3.29(s,3H),3.31(s,3H).3.37(s,3H),3.52(s,3H),3.63(dd,J＝10.8,5.9HZ,1H),3.72(dd,J＝10.8,3.3HZ,1H),4.37(dd,J＝10.6,7.8HZ,1H),4.59(q,J＝6.5HZ,1H),4.68(dd,J＝9.3,3.1HZ,1H),4.69(d,J＝15.9HZ,1H),4.70(t,1H),4.78(t,J＝9.5HZ,1H),4.81(d,J＝11.4HZ,1H),4.97(d,J＝11.5HZ,1H),4.98(m,1H),4.99(qd,1H),5.00(d,J＝10.9HZ,1H),5.13(d,J＝11.4HZ,1H),5.14(dq,J＝9.1,6.8HZ,1H),5.22(d,J＝10.8HZ,1H),5.26(dq,J＝9.1,6.8HZ,1H),5.29(d,J＝14.8HZ,1H),7.43(d,J＝7.8HZ,1H),8.01(d,J＝9.5HZ,1H),8.06(d,J＝9.3HZ,1H),8.52(d,J＝9.3HZ,1H),8.72(d,J＝8.8HZ,1H),9.02(d,J＝9.1HZ,1H),9.07(d,J＝9.1HZ,1H),9.15(d,J＝9.4HZ,1H).如圖2；

¹³C NMR(101MHz,CDCl3)δ175.59,174.34,174.24,174.06,173.65,173.10,172.69,172.65,171.61,171.30,171.20,170.87,170.53,169.88,169.71,168.97,168.61,167.72,90.01,79.75,62.56,62.09,61.86,61.78,61.19,61.02,57.54,56.09,54.93,54.75,54.18,53.43,51.69,51.66,50.94,50.86,44.44,44.09,43.36,40.40,38.75,38.32,32.21,31.92,31.29,30.79,30.76,30.37,30.30,29.77,29.69,29.65,29.35,29.31,28.63,28.51,27.67,27.30,27.22,26.81,26.51,26.42,25.64,22.68,20.32,19.86,19.81,19.58,19.53,19.42,19.26,19.23,19.11,18.64,18.61,18.59,18.51,18.24,18.14,17.46,17.34,16.27,16.20,14.10.如圖3。

實施例2Gymnopeptides B的制備

以實施例1的方法制備Gymnopeptides B區(qū)別僅在于以Fmoc-Thr(OtBu)-OH

替換Fmoc-Ser(OtBu)-OH，將Fmoc-Ser(OtBu)-OH(4.0eq)和DCC(2.0eq)溶解于48mL CH₂Cl₂：DMF(3:1)當(dāng)中，在室溫下活化1h，離心去除白色固體，取出上清溶液加入到脫除Fmoc的TCP樹脂中，密封震蕩，縮合反應(yīng)3-4h完成Gymnopeptide B

(Thr(OtBu)-MeVal-Val-MeVal-Val-MeVal-Ala-MeVal-Val-Sar-MeVal-MeAla-Val-Sar-Ala-MeVal-Ala-MeVal-Resin)

Gymnopeptide B HRMS(ESI)m/z:calcd for C85H153N18O19[M+H]+1730.1554,found 1730.1586，如圖4；

1H NMR(500MHz,CDCl3)δ

0.7-1.05(m,36H),1.24-1.38(m,12H),2.02-2.4(m,10H),2.81(s,3H),2.95(d,J＝11.7HZ,1H),2.96(s,3H),2.98(s,3H),3.10(m,1H),3.19(s,6H),3.26(s,3H),3.28(s,6H),3.36(s,3H),3.51(s,3H),4.23(qd,J＝6.4,1.3HZ,1H),4.36(dd,J＝10.6,7.8HZ,1H),4.57(q,J＝6.6HZ,1H),4.66(dd,J＝9.4,2.4HZ,1H),4.68(d,J＝116.2HZ,2H),4.7(t,J＝9.4HZ,1H),4.75(t,J＝9.3HZ,1H),4.82(dd,J＝10.0,1.4HZ,1H),4.89(d,J＝11.3HZ,1H),4.96(d,J＝11.2,1H),4.96(od,1H),4.98(d,J＝10.3HZ,1H),5.09(d,J＝11.4HZ,1H),5.13(dq,J＝8.9,6.8HZ,1H),5.20(d,J＝11.1HZ,1H),5.23(d,J＝11.4,1H),5.26(dq,J＝9.1,6.8HZ,1H),5.29(d,J＝14.9HZ,1H),7.43(d,J＝7.8HZ,1H),7.85(d,J＝10HZ,1H),8.07(d,J＝9.4HZ,1H),8.58(d,J＝9.3HZ,1H),8.69(d,J＝8.8HZ,1H),9.03(d,J＝9.1HZ,1H),9.07(d,J＝9.1HZ,1H),9.15(d,J＝9.4HZ,1H).如圖5；

13C NMR(101MHz,CDCl3)δ175.49,174.14,173.93,173.67,173.63,173.38,172.56,172.23,171.39,171.29,171.05,170.85,170.50,169.78,169.63,169.20,168.57,167.67,67.12,62.08,61.77,61.70,61.08,61.04,61.00,57.46,56.00,54.86,54.72,54.16,53.37,53.17,51.56,50.75,44.37,44.05,43.30,40.47,38.65,38.19,32.13,31.83,31.80,31.18,30.65,30.62,30.21,29.59,29.56,29.26,29.22,28.54,28.43,28.31,27.53,27.21,26.68,26.39,26.31,25.28,22.58,20.24,19.75,19.71,19.52,19.40,19.29,19.16,19.12,19.06,19.01,18.96,18.53,18.50,18.42,18.20,18.13,18.11,17.97,17.53,17.18,16.16,15.98,14.00.如圖6。

通過上述實驗結(jié)果，首次證實天然Gymnopeptide A和Gymnopeptide B中的蘇氨酸或絲氨酸為L構(gòu)型。

本發(fā)明英文術(shù)語