1.一種葡萄斑點(diǎn)病毒熒光定量PCR檢測(cè)的專用引物，其特征在于，包括引物GFkV23和引物GFkV24；其中，所述引物GFkV23的核苷酸序列如SEQ ID NO.1所示；所述引物GFkV24的核苷酸序列如SEQ ID NO.2所示。
2.一種葡萄斑點(diǎn)病毒熒光定量PCR檢測(cè)方法，其特征在于，通過(guò)PCR擴(kuò)增、克隆獲得陽(yáng)性質(zhì)粒標(biāo)準(zhǔn)品，然后以已知濃度的目的基因作為模板進(jìn)行熒光定量PCR反應(yīng)，作出標(biāo)準(zhǔn)曲線，用于測(cè)算出待測(cè)樣品中的病毒含量。
3.根據(jù)權(quán)利要求2所述的葡萄斑點(diǎn)病毒熒光定量PCR檢測(cè)方法，其特征在于，包括以下步驟：
1)提取GFkV毒源材料的總RNA，用Oligo(dT)反轉(zhuǎn)錄得到cDNA，以該cDNA為模板，以GFkV23和GFkV24為引物進(jìn)行PCR擴(kuò)增，擴(kuò)增產(chǎn)物經(jīng)1.5％瓊脂糖凝膠電泳后割膠回收，連接克隆載體，轉(zhuǎn)化大腸桿菌感受態(tài)細(xì)胞，篩選并挑取含陽(yáng)性克隆的大腸桿菌進(jìn)行培養(yǎng)，提取質(zhì)粒得到陽(yáng)性質(zhì)粒標(biāo)準(zhǔn)品；
2)陽(yáng)性質(zhì)粒標(biāo)準(zhǔn)品分別梯度稀釋至108，107，106，105，104copy/μL為模板，以GFkV23和GFkV24為引物進(jìn)行熒光定量PCR擴(kuò)增，以Ct值為縱坐標(biāo)，以質(zhì)粒拷貝數(shù)為橫坐標(biāo)，繪制得到標(biāo)準(zhǔn)曲線；
3)提取待測(cè)樣品的總RNA，以O(shè)ligo(dT)為引物反轉(zhuǎn)錄得到cDNA，以該cDNA為模板，按照與步驟2)中完全相同的條件進(jìn)行熒光定量PCR擴(kuò)增，所得Ct值代入標(biāo)準(zhǔn)曲線公式得到待測(cè)樣品中GFkV基因組RNA的含量。
4.根據(jù)權(quán)利要求3所述的葡萄斑點(diǎn)病毒熒光定量PCR檢測(cè)方法，其特征在于，在步驟1)中，所述PCR反應(yīng)體系為：2×Ex Taq Mix 12.5μL，10μMGFkV23和GFkV24引物各1.0μL，cDNA 2.0μL，雙蒸水補(bǔ)足至25μL。
5.根據(jù)權(quán)利要求3所述的葡萄斑點(diǎn)病毒熒光定量PCR檢測(cè)方法，其特征在于，在步驟1)中，所述PCR反應(yīng)條件為：94℃3min；94℃30s，60℃30s，72℃20s，35cycles；72℃10min。
6.根據(jù)權(quán)利要求3所述的葡萄斑點(diǎn)病毒熒光定量PCR檢測(cè)方法，其特征在于，在步驟2)中，陽(yáng)性質(zhì)粒標(biāo)準(zhǔn)品拷貝數(shù)與濃度的換算方式按照如下公式：拷貝數(shù)＝濃度×10-9×6.02×1023/(質(zhì)粒堿基數(shù)×660)，其中，拷貝數(shù)的單位為copy/μL，濃度的溫單位為ng/μL。
7.根據(jù)權(quán)利要求3所述的葡萄斑點(diǎn)病毒熒光定量PCR檢測(cè)方法，其特征在于，在步驟2)中，所述熒光定量PCR反應(yīng)體系為：2×SYBR Green qPCR Mix10.0μL，10μM GFkV23和GFkV24各1.4μL，模板1.0μL，雙蒸水補(bǔ)足至20μL。
8.根據(jù)權(quán)利要求3所述的葡萄斑點(diǎn)病毒熒光定量PCR檢測(cè)方法，其特征在于，在步驟2)中，所述熒光定量PCR反應(yīng)條件為：94℃3min；94℃5s，60℃15s，72℃20s，read，40cycles；65℃to 94℃，0.5℃/10s，read。