本發(fā)明屬于生物技術(shù)領(lǐng)域，具體來說涉及嗜溫高溫放線菌，同時(shí)還涉及該嗜溫高溫放線菌在產(chǎn)土味素類物質(zhì)中的用途。
背景技術(shù)：
大曲是釀酒用的一種糖化劑和發(fā)酵劑，大曲的制作具有生料制作、開放制作、機(jī)械化程度低和操作簡(jiǎn)單四個(gè)特點(diǎn)，開放式制曲最大限度網(wǎng)羅了環(huán)境中的微生物，以增加大曲培養(yǎng)過程中微生物的總量；其培養(yǎng)具有自然培養(yǎng)、堆積升溫、季節(jié)性強(qiáng)、易培養(yǎng)、周期長(zhǎng)、菌酶共存等特點(diǎn)。
目前申請(qǐng)人采用第二代高通量測(cè)序的方法對(duì)貴州省白酒企業(yè)的醬香大曲的微生物多樣性進(jìn)行了分析，采用免培養(yǎng)的方法分析發(fā)現(xiàn)高溫放線菌屬的相對(duì)含量占大曲中原核微生物的34.30%，高于芽孢桿菌屬（Bacillus sp.），目前其分類地位屬于細(xì)菌域( Domain Bacteria)，厚壁菌門( Phylum Firmicutes)，芽孢桿菌綱( Class Bacilli) ，芽孢桿菌目(Order Bacillales)，高溫放線菌科( Thermoactinomycetaceae)。貴州的醬香型白酒是典型的高溫固態(tài)發(fā)酵體系，發(fā)酵工藝有三高的特點(diǎn)。長(zhǎng)期以來通過純培養(yǎng)方法對(duì)芽孢桿菌屬（Bacillus）的種類、功能及代謝途徑進(jìn)行大量研究，并確定芽孢桿菌在白酒發(fā)酵過程中的產(chǎn)酶、產(chǎn)醬香風(fēng)味物質(zhì)等重要作用。但是高溫放線菌屬目前僅在芝麻香型白酒的高溫大曲中分離鑒定到一株Thermoactinomyces vulgaris 。目前在醬香高溫大曲中高溫放線菌的發(fā)現(xiàn)及其功能探究方面研究較少，沒有相關(guān)文章或?qū)＠?/p>
技術(shù)實(shí)現(xiàn)要素：
本發(fā)明的目的在于提供的一種產(chǎn)土味素類物質(zhì)的嗜溫高溫放線菌。
本發(fā)明的另一目的在于提供該嗜溫高溫放線菌在產(chǎn)土味素類物質(zhì)中的用途。
本發(fā)明的一種嗜溫高溫放線菌，其形態(tài)特征：該菌株在ISP2培養(yǎng)基上，50℃培養(yǎng)3d，菌落直徑6～7mm，菌落圓形，基內(nèi)菌絲淡黃色，氣生菌絲白色，菌落凸起、干燥致密，菌落不易挑起，不透明，有皺褶，孢子白色，無可溶性色素產(chǎn)生，掃描電鏡觀察菌絲體上形成單個(gè)孢子，孢子無柄或直接著生在菌絲體上，孢子單個(gè)側(cè)生于菌絲體兩側(cè)。該菌種于2016年5月30日保藏在中國(guó)典型培養(yǎng)物保藏中心（地址：中國(guó) 武漢 武漢大學(xué)），保藏號(hào)：CCTCC M2016296，名稱為：嗜溫高溫放線菌FBKL4.005（Thermoactinomyces thalpohillus strain FBKL4.005）。
（一）嗜溫高溫放線菌（Thermoactinomyces thalpohillus strain）FBKL4.005的分離步驟：
從貴州某酒廠酒曲中，稱取保存曲粉樣品10g，按照樣品與CaCO3質(zhì)量比為10:1的比例在無菌燒杯混合，添加2ml無菌水，空氣濕度30%，在28℃富集培養(yǎng)1周；將富集后的大曲樣品放入盛90ml無菌CMC水溶液（2.5g/L）并帶有玻璃珠的三角燒瓶中，50℃、200r/min振蕩30min；將大曲樣品懸液在50℃水浴鍋中熱處理10min，取1ml樣品懸液進(jìn)行10倍梯度稀釋分別由10-4、10-5、10-6和10-7稀釋度的樣品懸液中各取0.2ml涂布于分離培養(yǎng)基上，50℃靜止培養(yǎng)3d，挑取單菌落進(jìn)一步篩選，斜面培養(yǎng)基上保藏。
（二）培養(yǎng)嗜溫高溫放線菌采用的培養(yǎng)基：
分離篩選培養(yǎng)基：
GTY培養(yǎng)基（g/L）：葡萄糖10.0g、胰蛋白胨0.5g、酵母浸粉2.0g、CaCO3 1.0g、瓊脂20.0g、蒸餾水1000ml、pH7.2-7.4，115℃滅菌20min，放置培養(yǎng)基冷卻到50℃加入經(jīng)0.22um的無菌濾膜過濾的新生霉素（30mg/L）和制霉菌素（20mg/L）混勻倒平板；
保藏培養(yǎng)基：
ISP2培養(yǎng)基（g/L）：酵母膏4g、麥芽汁10.0g、葡萄糖4.0g、瓊脂20.0g、蒸餾水1000ml、pH7.0-7.2。
固態(tài)發(fā)酵培養(yǎng)基：
高粱麥粒培養(yǎng)基：高粱與小麥質(zhì)量比為1:1，小麥高粱的粉碎顆粒與整粒比為1:1，加90℃熱水（加水量40%）攪拌均勻，潤(rùn)糧1d，200g/瓶裝瓶，121℃滅菌20min。
（三）菌種的保種和傳代：
1、菌種保藏培養(yǎng)基：
ISP2培養(yǎng)基（g/L）：酵母膏4g、麥芽汁10.0g、葡萄糖4.0g、瓊脂20.0g、蒸餾水1000ml、pH7.0-7.2。
2、保存方法有4種：
①傳代培養(yǎng)高溫放線菌菌種保存法：將高溫放線菌接種于ISP2斜面培養(yǎng)基上，置恒溫箱50℃培養(yǎng)3d后，將橡膠塞用滅菌固體石蠟熔封，移至4℃冰箱保存，一般高溫放線菌在4℃冰箱內(nèi)可以保存一個(gè)月，需定期移植。
②砂土管高溫放線菌菌種保存法：取清潔的海沙，用1mol/L的氫氧化鈉溶液清洗，然后再用1mol/L的鹽酸溶液清洗，在后用流水沖洗。分裝試管，約2-3厘米深，干熱滅菌，加入高溫放線菌培養(yǎng)液1mL左右與砂土混勻，置真空干燥管內(nèi)干燥，待完全干燥后熔封保存。
③真空冷凍干燥高溫放線菌菌種保存法：將待保存的微生物細(xì)胞或者孢子懸浮在合適的保護(hù)劑中，預(yù)先將細(xì)胞冷凍，使水凍結(jié)，然后在真空條件下，使冰升華以除去大部分水，殘留的一些不凍結(jié)的水分，再通過蒸發(fā)從細(xì)胞中除去。
④液體石蠟法：亦稱礦物油保藏法，將高溫放線菌菌種接種在適宜的斜面培養(yǎng)基上，最適條件下培養(yǎng)至待得到健壯的菌體后注入滅菌的液體石蠟，使其覆蓋整個(gè)斜面，再直立放置于低溫（4℃）干燥處進(jìn)行保存的一種菌種保藏方法，是定期移植保藏法的輔助方法。
（四）菌種的生態(tài)特征：
該菌形成的菌落在ISP2培養(yǎng)基上，50℃培養(yǎng)3d，菌落直徑6～7mm，菌落圓形，基內(nèi)菌絲淡黃色，氣生菌絲白色，菌落凸起、干燥致密，菌落不易挑起，不透明，有皺褶，孢子白色，無可溶性色素產(chǎn)生，掃描電鏡觀察菌絲體上形成單個(gè)孢子，孢子無柄或直接著生在菌絲體上，孢子單個(gè)側(cè)生于菌絲體兩側(cè)。
（五）菌種的培養(yǎng)特性
（1）培養(yǎng)溫度45℃～55℃，最適溫度45℃～50℃；
（2）培養(yǎng)pH 6～8；最佳范圍為7～7.2。
基內(nèi)菌絲由有分支的長(zhǎng)菌絲組成，菌絲直徑約為500nm；氣生菌絲由長(zhǎng)菌絲及長(zhǎng)度為1um～2um的短菌絲組；孢子單個(gè)無柄，多為圓形，表面光滑，多直接著生在菌絲體兩側(cè)；偶見著生在很短孢子梗頂端。根據(jù)根據(jù)伯杰細(xì)菌鑒定手冊(cè)描述，綜合形態(tài)特征及 16S rDNA系統(tǒng)發(fā)育分析，嗜溫高溫放線菌FBKL4.005（Thermoactinomyces thalpohillus strain FBKL4.005）。
本發(fā)明的嗜溫高溫放線菌在產(chǎn)土味素類物質(zhì)中的用途。
本發(fā)明與現(xiàn)有技術(shù)相比，具有明顯的有益效果，從以上技術(shù)方案可知：本發(fā)明的嗜溫高溫放線菌FBKL4.005對(duì)溫度、pH等自然環(huán)境條件的適應(yīng)范圍廣，對(duì)不良環(huán)境的耐受力強(qiáng)，容易培養(yǎng)和保存及工業(yè)化生產(chǎn)，生產(chǎn)成本低，不污染環(huán)境，不破壞生態(tài)平衡。
具體實(shí)施方式
實(shí)施例：
本發(fā)明的嗜溫高溫放線菌（Thermoactinomyces thalpohillus）分離方法：
從貴州某酒廠酒曲中，稱取保存曲粉樣品10g，按照樣品與CaCO3質(zhì)量比為10:1的比例在無菌燒杯混合，添加2ml無菌水，空氣濕度30%，在28℃富集培養(yǎng)1周；將富集后的大曲樣品放入盛90ml無菌CMC水溶液（2.5g/L）并帶有玻璃珠的三角燒瓶中，50℃、200r/min振蕩30min；將大曲樣品懸液在50℃水浴鍋中熱處理10min，取1ml樣品懸液進(jìn)行10倍梯度稀釋分別由10-4、10-5、10-6和10-7稀釋度的樣品懸液中各取0.2ml涂布于分離培養(yǎng)基上，50℃靜止培養(yǎng)3d, 挑取單菌落進(jìn)一步篩選，斜面培養(yǎng)基上保藏。
該菌形成的菌落在ISP2培養(yǎng)基上，50℃培養(yǎng)3d，菌落直徑6～7mm，菌落圓形，基內(nèi)菌絲淡黃色，氣生菌絲白色，菌落凸起、干燥致密，菌落不易挑起，不透明，有皺褶，孢子白色，無可溶性色素產(chǎn)生，掃描電鏡觀察菌絲體上形成單個(gè)孢子，孢子無柄或直接著生在菌絲體上，孢子單個(gè)側(cè)生于菌絲體兩側(cè)。
試驗(yàn)例：產(chǎn)香能力測(cè)定
將菌株接種于GTY液體培養(yǎng)基，50℃振蕩培養(yǎng)1d，取10ml接種于盛有200g高粱麥粒培養(yǎng)基的三角瓶中，50℃恒溫靜置培養(yǎng)5d，進(jìn)行感官評(píng)定，土味較濃。
通過GC-MS對(duì)發(fā)酵產(chǎn)物的易揮發(fā)性物質(zhì)進(jìn)行分析，發(fā)酵試驗(yàn)后，實(shí)驗(yàn)組物質(zhì)成分與對(duì)照組差距明顯，產(chǎn)物增多。其中土味素類物質(zhì)含量為38.83%。
以上所述，僅是本發(fā)明的較佳實(shí)施例而已，并非對(duì)本發(fā)明作任何形式上的限制，任何未脫離本發(fā)明技術(shù)方案內(nèi)容，依據(jù)本發(fā)明的技術(shù)實(shí)質(zhì)對(duì)以上實(shí)施例所作的任何簡(jiǎn)單修改、等同變化與修飾，均仍屬于本發(fā)明技術(shù)方案的范圍內(nèi)。