本發(fā)明涉及一種玫瑰紅鈉瓊脂培養(yǎng)基平板，特別涉及一種可輻照滅菌的玫瑰紅鈉瓊脂培養(yǎng)基平板。
背景技術(shù)：
用戶在使用成品培養(yǎng)基時需要在潔凈區(qū)內(nèi)操作，而對于這類凈化級別要求較高的區(qū)域，除了要求遵循無菌操作外，對培養(yǎng)基本身無菌的要求也較高，防止培養(yǎng)基及包裝袋帶菌對工作臺及潔凈區(qū)域造成污染。對成品培養(yǎng)基平板進(jìn)行滅菌處理是非常有必要的。
輻照滅菌操作方法，滅菌效果好，是現(xiàn)有最佳的三層無菌包裝成品培養(yǎng)基所能接受的終端滅菌方式。然而，輻照會造成過氧化物形成并積累而導(dǎo)致氧化損傷，會對培養(yǎng)基產(chǎn)生一定的有毒效應(yīng)，特別是當(dāng)培養(yǎng)基中含有敏感物質(zhì)時。用于環(huán)境監(jiān)測的TSA、SDA等培養(yǎng)基經(jīng)過輻照后，由于不含敏感物質(zhì)，低劑量(10KGy以下)對培養(yǎng)基的性能影響不大。
玫瑰紅鈉瓊脂培養(yǎng)基是一種選擇性培養(yǎng)基，用于藥品和生物制品霉菌和酵母的計數(shù)。玫瑰紅鈉瓊脂培養(yǎng)基中的玫瑰紅鈉對輻照較為敏感，輻照滅菌后顏色會變淺。性能測試表明輻照滅菌后的玫瑰紅鈉瓊脂培養(yǎng)基置于陰涼庫(20～25℃)貯存7d后，目標(biāo)菌白色念珠菌CMCC(F)98001不生長，表明按標(biāo)準(zhǔn)配方配制的玫瑰紅鈉瓊脂平板(中華人民共和國藥典2010版)不適合輻照的終端滅菌。
現(xiàn)有的成品玫瑰紅鈉瓊脂培養(yǎng)基平板基本都采用其他更為復(fù)雜的方法滅菌，或臨用時配制并倒平板，使用極其不便。
開發(fā)出一種可輻照滅菌的玫瑰紅鈉瓊脂培養(yǎng)基平板，可以方便地獲得成品玫瑰紅鈉瓊脂培養(yǎng)基平板，利于后續(xù)的檢測。
技術(shù)實現(xiàn)要素：
本發(fā)明的目的在于提供一種可輻照滅菌的玫瑰紅鈉瓊脂培養(yǎng)基平板。
本發(fā)明所采取的技術(shù)方案是：
一種可輻照滅菌的玫瑰紅鈉瓊脂培養(yǎng)基平板，包括胨、玫瑰紅鈉、葡萄糖、瓊脂、磷酸二氫鉀、硫酸鎂和抗氧化劑。
作為上述玫瑰紅鈉瓊脂培養(yǎng)基平板的進(jìn)一步改進(jìn)，每1000ml培養(yǎng)基中含有胨5.0g、玫瑰紅鈉0.0133g、葡萄糖10.0g、瓊脂14.0g、磷酸二氫鉀1.0g、硫酸鎂0.5g。
作為上述玫瑰紅鈉瓊脂培養(yǎng)基平板的進(jìn)一步改進(jìn)，每1000ml培養(yǎng)基中含有抗氧化劑0.3～3.0g。
作為上述玫瑰紅鈉瓊脂培養(yǎng)基平板的進(jìn)一步改進(jìn)，抗氧化劑選自硫酸亞鐵、檸檬酸鈉、硫代硫酸鈉和亞硫酸氫鈉中的至少一種。
作為上述玫瑰紅鈉瓊脂培養(yǎng)基平板的進(jìn)一步改進(jìn)，抗氧化劑為硫代硫酸鈉和亞硫酸氫鈉的混合物。特別的，每1000ml培養(yǎng)基中含有硫代硫酸鈉0.4～0.6g，亞硫酸氫鈉0.5～0.7g。
作為上述玫瑰紅鈉瓊脂培養(yǎng)基平板的進(jìn)一步改進(jìn)，每1000ml培養(yǎng)基中含有胨5.0g、玫瑰紅鈉0.0133g、葡萄糖10.0g、瓊脂14.0g、磷酸二氫鉀1.0g、硫酸鎂0.5g、硫代硫酸鈉0.4～0.6g，亞硫酸氫鈉0.5～0.7g。
作為上述玫瑰紅鈉瓊脂培養(yǎng)基平板的進(jìn)一步改進(jìn)，每1000ml培養(yǎng)基含有胨5.0g、玫瑰紅鈉0.0133g、葡萄糖10.0g、瓊脂14.0g、磷酸二氫鉀1.0g、硫酸鎂0.5g，硫代硫酸鈉0.57g，亞硫酸氫鈉0.6g。
本發(fā)明的有益效果是：
本發(fā)明的玫瑰紅鈉瓊脂培養(yǎng)基平板經(jīng)5KGy劑量輻照的最終滅菌，無菌保證程度高，避免了原有制備工藝的染菌風(fēng)險；并且培養(yǎng)基本身顏色基本不變化，解決了標(biāo)準(zhǔn)配方配制的培養(yǎng)基輻照后顏色明顯變淺的問題；培養(yǎng)基性能依舊良好，白色念珠菌在陰涼庫(20～25℃)貯存30d后的平板上仍然生長良好，而在標(biāo)準(zhǔn)配方配制的瓊脂培養(yǎng)基平板上7d后即不生長。
附圖說明
圖1是不同培養(yǎng)基平板輻照滅菌后的顏色變化情況。
具體實施方式
下面結(jié)合實施例，進(jìn)一步說明本發(fā)明的技術(shù)方案。
實施例1
一種可經(jīng)輻照終端滅菌的玫瑰紅鈉瓊脂培養(yǎng)基平板，每1000ml培養(yǎng)基含有胨5.0g、玫瑰紅鈉0.0133g、葡萄糖10.0g、瓊脂14.0g、磷酸二氫鉀1.0g、硫酸鎂0.5g，硫代硫酸鈉0.57g，亞硫酸氫鈉0.6g。
實施例2
一種可經(jīng)輻照終端滅菌的玫瑰紅鈉瓊脂培養(yǎng)基平板，每1000ml培養(yǎng)基含有胨5.0g、玫瑰紅鈉0.0133g、葡萄糖10.0g、瓊脂14.0g、磷酸二氫鉀1.0g、硫酸鎂0.5g，硫酸亞鐵1.1g。
實施例3
一種可經(jīng)輻照終端滅菌的玫瑰紅鈉瓊脂培養(yǎng)基平板，每1000ml培養(yǎng)基含有胨5.0g、玫瑰紅鈉0.0133g、葡萄糖10.0g、瓊脂14.0g、磷酸二氫鉀1.0g、硫酸鎂0.5g，檸檬酸鈉1.2g。
實施例4
一種可經(jīng)輻照終端滅菌的玫瑰紅鈉瓊脂培養(yǎng)基平板，每1000ml培養(yǎng)基含有胨5.0g、玫瑰紅鈉0.0133g、葡萄糖10.0g、瓊脂14.0g、磷酸二氫鉀1.0g、硫酸鎂0.5g，硫代硫酸鈉0.4g，亞硫酸氫鈉0.7g。
實施例5
一種可經(jīng)輻照終端滅菌的玫瑰紅鈉瓊脂培養(yǎng)基平板，每1000ml培養(yǎng)基含有胨5.0g、玫瑰紅鈉0.0133g、葡萄糖10.0g、瓊脂14.0g、磷酸二氫鉀1.0g、硫酸鎂0.5g，硫代硫酸鈉0.6g，亞硫酸氫鈉0.5g。
實施例6
一種可經(jīng)輻照終端滅菌的玫瑰紅鈉瓊脂培養(yǎng)基平板，每1000ml培養(yǎng)基含有胨5.0g、玫瑰紅鈉0.0133g、葡萄糖10.0g、瓊脂14.0g、磷酸二氫鉀1.0g、硫酸鎂0.5g，亞硫酸氫鈉2.5g。
實施例7
一種可經(jīng)輻照終端滅菌的玫瑰紅鈉瓊脂培養(yǎng)基平板，每1000ml培養(yǎng)基含有胨5.0g、玫瑰紅鈉0.0133g、葡萄糖10.0g、瓊脂14.0g、磷酸二氫鉀1.0g、硫酸鎂0.5g，硫代硫酸鈉0.3g。
實施例8
一種可經(jīng)輻照終端滅菌的玫瑰紅鈉瓊脂培養(yǎng)基平板，每1000ml培養(yǎng)基含有胨5.0g、玫瑰紅鈉0.0133g、葡萄糖10.0g、瓊脂14.0g、磷酸二氫鉀1.0g、硫酸鎂0.5g，亞硫酸氫鈉3g。
平板性能測試：
1材料
1.1菌株
枯草芽孢桿菌(Bacillus subtilis)CMCC(B)63501，釀酒酵母(Saccharomyces cerevisiae)ATCC9763，白色念珠菌(Candida albicans)CMCC(F)98001，黑曲霉(Aspergillus niger)CMCC(F)98003，桔青霉(Penicillium citrinum)AS.2788由本實驗室保存。這些菌株可以使用其他公知的菌株替換。
1.2培養(yǎng)基及試劑
實施例1所述玫瑰紅鈉瓊脂培養(yǎng)基平板(簡稱玫瑰紅鈉平板1)、實施例2所述玫瑰紅鈉瓊脂培養(yǎng)基平板(簡稱玫瑰紅鈉平板2)、實施例3所述玫瑰紅鈉瓊脂培養(yǎng)基平板(簡稱玫瑰紅鈉平板3)、原配方玫瑰紅鈉瓊脂培養(yǎng)基平板、胰酪胨大豆瓊脂培養(yǎng)基平板(簡稱TSA平板)和沙氏葡萄糖瓊脂培養(yǎng)基平板(簡稱SDA平板)由廣東環(huán)凱微生物科技有限公司提供。玫瑰紅鈉瓊脂培養(yǎng)基標(biāo)準(zhǔn)品由中國食品藥品檢定研究院提供。
2方法
2.1輻照對培養(yǎng)基顏色和生物學(xué)的影響
2.1.1玫瑰紅鈉瓊脂培養(yǎng)基平板制備：按玫瑰紅鈉瓊脂培養(yǎng)基標(biāo)準(zhǔn)配方稱取各原料，并按比例加入抗氧化物硫代硫酸鈉和亞硫酸氫鈉(玫瑰紅鈉平板1)、或硫酸亞鐵(玫瑰紅鈉平板2)、或檸檬酸鈉(玫瑰紅鈉平板3)，調(diào)整pH值，煮沸溶解，121℃滅菌20min，冷卻至50℃傾注平板，備用。
2.1.2將制備好的玫瑰紅鈉平板1進(jìn)行三層包裝，送交輻照中心進(jìn)行5KGy劑量的電子束輻照，以不進(jìn)行輻照的平板作為對照。輻照完成后觀察平板的色澤，并將兩種平板置于20～25℃陰涼庫中儲存，分別在0d、7d、15d、30d取樣，接種白色念珠菌CMCC(F)98001，觀察菌落生長情況并計數(shù)。接種方法見2.3。
2.2人工污染培養(yǎng)基輻照滅菌實驗
將白色念珠菌及黑曲霉3株菌的新鮮斜面培養(yǎng)物用0.85％的無菌生理鹽水制成102～103cfu/ml及10～102cfu/ml的菌懸液。分別取上述各菌液0.1ml用全自動螺旋接種儀接種至玫瑰紅鈉平板1上，同時接種參比培養(yǎng)基SDA平板。接種好的一半平板和參比培養(yǎng)基置于培養(yǎng)箱中培養(yǎng)，另一半放置室溫8h后送交輻照中心進(jìn)行5KGy劑量的電子束輻照，后置于培養(yǎng)箱中培養(yǎng)。23-28℃培養(yǎng)3～5d。進(jìn)行菌落計數(shù)。
2.3培養(yǎng)基性能評價實驗
生長率試驗：采用定量方法進(jìn)行。將白色念珠菌、黑曲霉2株菌的新鮮斜面培養(yǎng)物制成約103cfu/ml的菌懸液。分別取上述各菌液0.1ml用全自動螺旋接種儀分別接種于經(jīng)5KGy輻照的玫瑰紅鈉平板1、玫瑰紅鈉平板2、玫瑰紅鈉平板3及未經(jīng)輻照作為對照的原配方平板和玫瑰紅鈉瓊脂培養(yǎng)基標(biāo)準(zhǔn)品上，白色念珠菌、黑曲霉的菌液同時接種參比培養(yǎng)基SDA平板，23-28℃培養(yǎng)3～5d。每種平板進(jìn)行3個重復(fù)。觀察各株菌在培養(yǎng)基上的生長情況，并對其進(jìn)行菌落計數(shù)。按下列公式計算生長率PR。PR＝NS/N0，NS：待測培養(yǎng)基平板上得到的平均菌落數(shù)；N0：參比培養(yǎng)基平板上獲得的平均菌落數(shù)。
釀酒酵母、桔青霉劃線于經(jīng)5KGy輻照的玫瑰紅鈉平板1及未經(jīng)輻照作為對照的原配方平板和玫瑰紅鈉瓊脂標(biāo)準(zhǔn)品上，23-28℃培養(yǎng)3～5d。觀察各株菌在培養(yǎng)基上的生長情況。
3結(jié)果
3.1感官
實施例1所描述的玫瑰紅鈉瓊脂培養(yǎng)基平板經(jīng)5KGy輻照后，顏色基本不發(fā)生改變。而原配方經(jīng)輻照后，平板顏色明顯變淺。結(jié)果見圖1，圖中，(A：原配方未經(jīng)輻照；B：原配方5KGy輻照后；C：玫瑰紅鈉平板1未經(jīng)輻照；D：玫瑰紅鈉平板1經(jīng)5KGy輻照后。
3.2生物學(xué)
經(jīng)5KGy輻照后置于陰涼庫(20～25℃)貯存，之后取貯存不同時期的平板，接種白色念珠菌，檢測白色念珠菌在平板上的生長率，結(jié)果見表1：
表1、兩種培養(yǎng)基平板陰涼庫儲存條件下白色念珠菌生長率比較
實驗數(shù)據(jù)顯示，原配方平板7d后白色念珠菌即不生長。而實施案例1所述的平板在放置30d后白色念珠菌在平板上仍然生長良好。
3.3人工污染培養(yǎng)基輻照滅菌實驗
實施案例1所述培養(yǎng)基接種一定量的白色念珠菌、黑曲霉經(jīng)5KGy電子束輻照后，檢測其能否達(dá)到無菌要求，結(jié)果見表2：
表2、人工污染培養(yǎng)基輻照滅菌實驗
結(jié)果表明經(jīng)5KGy電子束輻照后的平板均無菌落生長，表明實施案例1所述培養(yǎng)基經(jīng)5KGy電子束輻照能達(dá)到無菌要求。
3.4培養(yǎng)基性能評價
取不同培養(yǎng)基平板進(jìn)行性能評價，結(jié)果見表3：
表3、培養(yǎng)基性能評價實驗
結(jié)果表明，實施案例1所述培養(yǎng)基經(jīng)5KGy輻照后與原配方和中檢所標(biāo)準(zhǔn)品相比，各目標(biāo)菌的生長率無明顯差異。目標(biāo)菌白色念珠菌CMCC(F)98001和黑曲霉CMCC(F)98003均能達(dá)到0.7的生長率，且目標(biāo)菌的菌落大小和形態(tài)與對照一致。釀酒酵母ATCC9763、桔青霉AS.2788在實施案例1所述的平板上均生長良好，菌落特征明顯。但是實施案例2、3所述培養(yǎng)基經(jīng)5KGy輻照后接種黑曲霉產(chǎn)孢子速度慢，培養(yǎng)3d后仍未見黑色孢子產(chǎn)生。
綜上所述，實施案例1的玫瑰紅鈉瓊脂培養(yǎng)基平板經(jīng)5KGy劑量輻照的最終滅菌，無菌保證程度高，并且培養(yǎng)基本身顏色基本不變化，培養(yǎng)基性能依舊良好，為輻照培養(yǎng)基的商業(yè)應(yīng)用提供了新的途徑。
雖然本發(fā)明對具體實施案例進(jìn)行了描述，但是本發(fā)明并不局限于此。本行業(yè)技術(shù)人員應(yīng)該意識到，在本發(fā)明所述原理下對本發(fā)明做的多種修飾和改變，均應(yīng)認(rèn)為是本發(fā)明的保護(hù)范圍。