本發(fā)明屬于生物工程領(lǐng)域，涉及一種培養(yǎng)基，具體涉及一種副干酪乳桿菌N1115的培養(yǎng)基，同時(shí)本發(fā)明還涉及一種高密度培養(yǎng)副干酪乳桿菌N1115的方法。
背景技術(shù)：
：目前，我國的益生菌主要依靠進(jìn)口，由于技術(shù)壁壘的存在國產(chǎn)益生菌菌粉生產(chǎn)困難重重。其中一個(gè)很大的難題就是益生菌的高密度培養(yǎng)。高密度培養(yǎng)研究包括了培養(yǎng)基成分研究、培養(yǎng)條件研究。培養(yǎng)基主要成分包括：碳源、氮源、水、無機(jī)鹽和生長因子。碳源和氮源為微生物提供能量和組成自身所需的碳、氮元素；水為微生物提供穩(wěn)定的生長環(huán)境；無機(jī)鹽，維持細(xì)胞存活所需的滲透壓和提供微生物所需的其他化學(xué)元素；生長因子，是微生物必不可少的酶類催化因子和活性物質(zhì)的組成成分。這些因素都影響著培養(yǎng)基中微生物的生長速度和最終所能承載的微生物密度。而不同的微生物對于這些條件都有不同的需求，因此在副干酪乳桿菌N1115的高密度培養(yǎng)時(shí)有必要對于副干酪乳桿菌N1115的培養(yǎng)基成分進(jìn)行詳盡的研究。技術(shù)實(shí)現(xiàn)要素：本發(fā)明的目的是提供一種副干酪乳桿菌N1115培養(yǎng)基，該培養(yǎng)基用于高密度培養(yǎng)副干酪乳桿菌N1115。一種副干酪乳桿菌N1115培養(yǎng)基，由以下含量的原料組成：40g≤葡萄糖+酵母粉≤50g，且0.5≤葡萄糖:酵母粉≤1.0、緩沖鹽23.2g-24.7g，MnSO4·5H2O45mg-55mg、水1000mL。進(jìn)一步的，所述緩沖鹽由以下含量的原料組成：檸檬酸鈉6.2g-6.8g、CH3COONa15.0g-15.5g、K2HPO42.0g-2.4g。進(jìn)一步的，MnSO4·5H2O含量如下：MnSO4·5H2O48mg-50mg進(jìn)一步的，培養(yǎng)基由以下含量的原料組成：葡萄糖20g、酵母粉25g、檸檬酸鈉6.5g、CH3COONa15.3g、K2HPO42.2g、MnSO4·5H2O50mg、水1000mL。本發(fā)明所述的副干酪乳桿菌N1115培養(yǎng)基具有以下有益效果：1、專利CN201110357058.8公開了副干酪乳桿菌N1115，它是分離自內(nèi)蒙古民族傳統(tǒng)發(fā)酵乳制品，是一種具有耐酸耐膽鹽特性和免疫調(diào)節(jié)作用的益生菌，該菌菌株已于2011年3月17日保藏于中國微生物菌種保藏管理委員會(huì)普通微生物菌種保藏中心，保藏編號(hào)：CGMCCNo.4691。2、碳源和氮源是組成培養(yǎng)基的主要成分，為微生物提供能量和組成自身所需的碳、氮元素。本發(fā)明通過研究選擇合適副干酪乳桿菌N1115發(fā)酵的碳源葡萄糖及氮源酵母粉，并確定碳源氮源總量及碳源氮源質(zhì)量比如下：40g≤葡萄糖+酵母粉≤50g，且0.5≤葡萄糖:酵母粉≤1.0。氮源過多則會(huì)使菌體生長過于旺盛，容易引起菌體的衰老和自溶；碳源過多則容易形成較低的pH，不利于菌體生長。3、微量元素作為酶的激活劑或生物活性物質(zhì)的組成成分，是微生物在生長繁殖過程中不可缺少的。不同微生物或不同菌株對微量元素的需要程度均不相同。通過研究確定副干酪乳桿菌N1115培養(yǎng)基中MnSO4·5H2O含量為45mg-50mg。錳離子是乳酸脫氫酶的組成成分，是副干酪乳桿菌N1115生長的關(guān)鍵生長因子之一，在低濃度時(shí)對微生物生長和產(chǎn)物合成有促進(jìn)作用，高濃度時(shí)則常表現(xiàn)出明顯的抑制作用。4、在培養(yǎng)基中添加一定量的緩沖鹽可以緩解乳酸造成的低pH對菌體的抑制，促進(jìn)菌體生長繁殖，實(shí)現(xiàn)副干酪乳桿菌N1115的高密度培養(yǎng)。進(jìn)一步的，緩沖鹽由以下含量的原料組成：檸檬酸鈉6.2g-6.8g、CH3COONa15.0g-15.5g、K2HPO42.0g-2.4g。5、進(jìn)一步的，培養(yǎng)基成分含量如下：葡萄糖20g、酵母粉25g、檸檬酸鈉6.5g、CH3COONa15.3g、K2HPO42.2g、MnSO4·5H2O50mg、水1000mL，該培養(yǎng)基中碳源、氮源、微量元素、緩沖鹽各成分含量為最優(yōu)值，更好的促進(jìn)副干酪乳桿菌N1115的高密度培養(yǎng)。一種高密度培養(yǎng)副干酪乳桿菌N1115的方法，該方法包括如下步驟：a、菌懸液制備:將副干酪乳桿菌N1115活化、培養(yǎng)后，得到濃度為106cfu/mL的菌懸液；b、發(fā)酵：將上述菌懸液以1％的接種量接種到上述的副干酪乳桿菌N1115培養(yǎng)基中，37℃培養(yǎng)24h。進(jìn)一步的，步驟a所述副干酪乳桿菌N1115活化、培養(yǎng)過程如下：將副干酪乳桿菌N1115活化兩代后，劃線于固體MRS培養(yǎng)基平板上培養(yǎng)，37℃培養(yǎng)24h，再在MRS培養(yǎng)基中37℃培養(yǎng)24h，得到濃度為106cfu/mL的菌懸液。進(jìn)一步的，步驟a活化兩代的過程如下：將副干酪乳桿菌N1115在MRS培養(yǎng)基中37℃下培養(yǎng)24h，再以1％的接種量接種到MRS培養(yǎng)基中，37℃下培養(yǎng)24h。進(jìn)一步的，固體MRS培養(yǎng)基由以下含量成分組成：MRS培養(yǎng)基1000mL，瓊脂15g。進(jìn)一步的，所述MRS培養(yǎng)基由以下含量成分組成：牛肉膏5g，酵母粉4g，蛋白胨10g，葡萄糖20g，磷酸氫二鉀2g，乙酸鈉5g，檸檬酸三銨2g，硫酸鎂0.2g，硫酸錳0.05g，水1000mL。與現(xiàn)有的培養(yǎng)基和培養(yǎng)方法相比，本發(fā)明副干酪乳桿菌N1115的培養(yǎng)基及其培養(yǎng)方法具有成分簡單，配置簡便，成本低的優(yōu)點(diǎn)，節(jié)約了物料和人工成本，同時(shí)用副干酪乳桿菌N1115培養(yǎng)基培養(yǎng)副干酪乳桿菌N1115獲得的發(fā)酵液中的活菌濃度為9.6×1010cfu/mL。具體實(shí)施方式以下通過特定的具體實(shí)例說明本發(fā)明的實(shí)施方式，然而并非用以限制本發(fā)明的實(shí)施范圍。實(shí)施例1-5實(shí)施例1-5公開了一種副干酪乳桿菌N1115培養(yǎng)基，各實(shí)施例的原料含量如下表1所示：表1原料含量表應(yīng)用實(shí)施例1-5的培養(yǎng)基培養(yǎng)副干酪乳桿菌N1115的方法如下：a、菌懸液制備:將副干酪乳桿菌N1115活化兩代后，劃線于固體MRS培養(yǎng)基平板上培養(yǎng)，37℃培養(yǎng)24h，再在MRS培養(yǎng)基中37℃培養(yǎng)24h，得到濃度為106cfu/mL的菌懸液。b、發(fā)酵：將上述菌懸液以1％的接種量接種到實(shí)施例1-5的副干酪乳桿菌N1115培養(yǎng)基中，37℃培養(yǎng)24h。進(jìn)一步的，步驟a活化兩代的過程如下：將副干酪乳桿菌N1115在MRS培養(yǎng)基中37℃下培養(yǎng)24h，再以1％的接種量接種到MRS培養(yǎng)基中，37℃下培養(yǎng)24h。進(jìn)一步的，固體MRS培養(yǎng)基由以下含量成分組成：MRS培養(yǎng)基1000mL，瓊脂15g。進(jìn)一步的，所述MRS培養(yǎng)基由以下含量成分組成：牛肉膏5g，酵母粉4g，蛋白胨10g，葡萄糖20g，磷酸氫二鉀2g，乙酸鈉5g，檸檬酸三銨2g，硫酸鎂0.2g，硫酸錳0.05g，水1000mL。應(yīng)用實(shí)施例1-5的培養(yǎng)基，通過上述培養(yǎng)方法獲得的發(fā)酵液中的活菌數(shù)目如下表2所示：表2實(shí)施例發(fā)酵液中活菌含量表實(shí)施例實(shí)施例1實(shí)施例2實(shí)施例3實(shí)施例4實(shí)施例5活菌數(shù)(cfu/mL)8.9×10109.1×10109.4×10109.6×10109.2×1010對比例1-6對比例1-6分別對培養(yǎng)基成分中碳源氮源含量、微量元素含量、緩沖鹽含量進(jìn)行研究，各對比例的原料含量如下表3所示：表3原料含量表對比例7-15對比例7-15分別研究了培養(yǎng)基中碳源、氮源種類、微量元素種類的影響，各對比例的原料含量如下表4、表5所示表4碳源氮源種類的影響對比例7-12中的碳源和氮源代替實(shí)施例4中的碳源葡萄糖和氮源酵母粉，且含量不變，其他原料及含量與實(shí)施例4相同。表5微量元素種類的影響對比例13-15中的微量元素代替實(shí)施例4中的微量元素MnSO4·5H2O，且含量不變，其他原料及含量與實(shí)施例4相同。對比例16對比例16選用MRS培養(yǎng)基。MRS培養(yǎng)基由以下含量成分組成：牛肉膏5g，酵母粉4g，蛋白胨10g，葡萄糖20g，磷酸氫二鉀2g，乙酸鈉5g，檸檬酸三銨2g，硫酸鎂0.2g，硫酸錳0.05g，水1000mL。對比例7-16培養(yǎng)基培養(yǎng)副干酪乳桿菌N1115的方法如下：a、菌懸液制備:將副干酪乳桿菌N1115活化兩代后，劃線于固體MRS培養(yǎng)基平板上培養(yǎng)，37℃培養(yǎng)24h，再在MRS培養(yǎng)基中37℃培養(yǎng)24h，得到濃度為106cfu/mL的菌懸液。b、發(fā)酵：將上述菌懸液以1％的接種量接種到對比例7-16的培養(yǎng)基中，37℃培養(yǎng)24h。進(jìn)一步的，步驟a活化兩代的過程如下：將副干酪乳桿菌N1115在MRS培養(yǎng)基中37℃下培養(yǎng)24h，再以1％的接種量接種到MRS培養(yǎng)基中，37℃下培養(yǎng)24h。進(jìn)一步的，固體MRS培養(yǎng)基由以下含量成分組成：MRS培養(yǎng)基1000mL，瓊脂15g。進(jìn)一步的，所述MRS培養(yǎng)基由以下含量成分組成：牛肉膏5g，酵母粉4g，蛋白胨10g，葡萄糖20g，磷酸氫二鉀2g，乙酸鈉5g，檸檬酸三銨2g，硫酸鎂0.2g，硫酸錳0.05g，水1000mL。應(yīng)用對比例7-16的培養(yǎng)基，通過上述培養(yǎng)方法獲得的發(fā)酵液中的活菌數(shù)目如下表6所示：表6各對比例發(fā)酵液中活菌含量表案例對比例1對比例2對比例3對比例4活菌數(shù)(cfu/mL)7.2×10106.8×10104.2×10103.3×1010案例對比例5對比例6對比例7對比例8活菌數(shù)(cfu/mL)2.4×10101.3×10108.2×1096.9×109案例對比例9對比例10對比例11對比例12活菌數(shù)(cfu/mL)6.6×1095.8×1095.2×1096.1×109案例對比例13對比例14對比例15對比例16活菌數(shù)(cfu/mL)7.2×1098.2×1095.2×1094.5×108由實(shí)施例1-5，對比例7-16培養(yǎng)基培養(yǎng)副干酪乳桿菌N1115得到的發(fā)酵液中的活菌數(shù)目可知：副干酪乳桿菌N1115發(fā)酵的碳源選擇葡萄糖，氮源為酵母粉，碳源氮源總量及碳源氮源質(zhì)量比含量為40g≤葡萄糖+酵母粉≤50g，且0.5≤葡萄糖:酵母粉≤1.0時(shí)，有利于副干酪乳桿菌N1115的高密度培養(yǎng)；錳離子是副干酪乳桿菌N1115生長的關(guān)鍵生長因子之一，副干酪乳桿菌N1115培養(yǎng)基中MnSO4·5H2O含量為45mg-50mg。培養(yǎng)基成分含量為葡萄糖20g、酵母粉25g、檸檬酸鈉6.5g、CH3COONa15.3g、K2HPO42.2g、MnSO4·5H2O50mg、水1000mL時(shí)，更好的促進(jìn)副干酪乳桿菌N1115的高密度培養(yǎng)，獲得的發(fā)酵液中的活菌濃度為9.6×1010cfu/mL。當(dāng)前第1頁1 2 3