本發(fā)明屬于生物醫(yī)學(xué)領(lǐng)域，具體的涉及一種熒光成像的膜材。

背景技術(shù)：

復(fù)合材料目前主要是指復(fù)合型導(dǎo)電高分子材料，是將聚合物與各種導(dǎo)電物質(zhì)通過一定的復(fù)合方式構(gòu)成。長期以來，高分子材料通常是作為絕緣材料被應(yīng)用。然而，在用于生物醫(yī)學(xué)研究領(lǐng)域的復(fù)合材料中，尤其是在細(xì)胞學(xué)方面研究中所用到的復(fù)合材料往往需要材料本身具有一定的導(dǎo)電性。眾所周知，生物電是生命功能的本質(zhì)，也是人體生命活動的基礎(chǔ)，人體的任何一種生命活動無不和生物電密切相關(guān)。然而，細(xì)胞作為生物體的基本單位，也是生物電的基本單位，因此，在細(xì)胞水平上研究與生物電相關(guān)的復(fù)合材料，在一定程度上，就需要復(fù)合材料具有一定的導(dǎo)電性。熒光成像即熒光物質(zhì)被特定外界能量激發(fā)，引起其電子向高能軌道躍遷，并最終釋放能量回歸基態(tài)的過程中會產(chǎn)生可被檢測的熒光信號。熒光成像技術(shù)在生物學(xué)和醫(yī)學(xué)領(lǐng)域已經(jīng)得到了廣泛的應(yīng)用，是觀測細(xì)胞形態(tài)、結(jié)構(gòu)和生命的有力工具。常將熒光共振能量轉(zhuǎn)移(FRET)與熒光顯微技術(shù)結(jié)合起來，定時、定量、定位地觀測活細(xì)胞內(nèi)蛋白激酶活性變化?；罴?xì)胞中核酸的定位信息采集及定量檢測與活細(xì)胞內(nèi)蛋白質(zhì)的顯微熒光成像分析也是熒光成像技術(shù)的應(yīng)用。

明膠是由動物皮膚、骨、肌膜、肌魅等結(jié)締組織中的膠原部分降解而白色或淡黃色、半透明、微帶光澤的薄片或者粉粒，有良好的生物相容性，植入體內(nèi)無毒性作用、免疫反應(yīng)和刺激性，能促進(jìn)細(xì)胞增值。它是生物醫(yī)學(xué)研究中非常重要的天然生物高分子材料。

傳統(tǒng)導(dǎo)電材料一般呈黑色，厚度較厚，透光性差，不能用于細(xì)胞熒光成像實驗。

技術(shù)實現(xiàn)要素：

為解決以上技術(shù)問題，本發(fā)明提供一種可用于細(xì)胞熒光成像的聚吡咯-明膠復(fù)合導(dǎo)電薄膜的制備方法。

技術(shù)方案如下：

一種聚吡咯-明膠復(fù)合導(dǎo)電薄膜的制備方法，其要點在于包括以下步驟：

步驟一、配制明膠水溶液；

步驟二、在避光條件下，按質(zhì)量比M(吡咯)：M(明膠)＝1：4-6的比例，向所述明膠水溶液中加入吡咯，得吡咯-明膠溶液；

步驟三、按摩爾比n(吡咯)：n(無水氯化鐵)＝1：3-5的比例，向所述吡咯-明膠溶液中加入無水氯化鐵；

步驟四、制膜。

作為優(yōu)選方案：

上述步驟一中，配置5％的明膠水溶液，并于60℃條件下攪拌直至溶解。

上述步驟二中，在所述明膠水溶液冷卻至室溫后，再向所述明膠水溶液中加入所述吡咯，攪拌1.5-3h。

上述步驟三中，加入無水氯化鐵后，攪拌20-30h，氧化得到成膜液。

上述步驟四中，取所述成膜液，滴加在帶有玻璃片的培養(yǎng)皿中，將所述培養(yǎng)皿放在勻膠機中制膜。

上述步驟二中，所述吡咯和明膠的質(zhì)量比為1：5。

上述步驟三中，所述吡咯和無水氯化鐵的摩爾比為1：4。

上述步驟三中，將所述無水氯化鐵用去離子水溶解后，再加入所述吡咯-明膠溶液。

附圖說明

圖1為經(jīng)過一段時間(≥10h)培養(yǎng)后，用熒光標(biāo)記的活細(xì)胞的狀態(tài)圖；

圖2為經(jīng)過一段時間(≥10h)培養(yǎng)后，未進(jìn)行熒光標(biāo)記的細(xì)胞狀態(tài)圖；

圖3為放大1000倍的掃描電鏡圖。

具體實施方式

一、下面結(jié)合具體實施方式對本發(fā)明作進(jìn)一步說明。

實施例1：

一種聚吡咯-明膠復(fù)合導(dǎo)電薄膜的制備方法，包括以下步驟：

步驟一、配制5％的明膠水溶液，并于60℃條件下，用磁力攪拌器攪拌直至溶解。

步驟二、在所述明膠水溶液冷卻至室溫后，在避光條件下，按質(zhì)量比M(吡咯)：M(明膠)＝1：5的比例，向所述明膠水溶液中加入吡咯，攪拌2h，得吡咯-明膠溶液。

步驟三、按摩爾比n(吡咯)：n(無水氯化鐵)＝1：4的比例，向所述吡咯-明膠溶液中加入無水氯化鐵攪拌24h，氧化得到成膜液。

步驟四、取所述成膜液，滴加在帶有玻璃片的培養(yǎng)皿中，將所述培養(yǎng)皿放在勻膠機中制膜。

實施例2：

步驟一、配制5％的明膠水溶液，并于60℃條件下，用磁力攪拌器攪拌直至溶解。

步驟二、在所述明膠水溶液冷卻至室溫后，在避光條件下，按質(zhì)量比M(吡咯)：M(明膠)＝1：4的比例，向所述明膠水溶液中加入吡咯，攪拌1.5h，得吡咯-明膠溶液。

步驟三、按摩爾比n(吡咯)：n(無水氯化鐵)＝1：3的比例，向所述吡咯-明膠溶液中加入無水氯化鐵，攪拌20h，氧化得到成膜液。

步驟四、取所述成膜液，滴加在帶有玻璃片的培養(yǎng)皿中，將所述培養(yǎng)皿放在勻膠機中制膜。

實施例3：

本實施例與實施例1和實施例2的不同在于：

所述步驟二中，按質(zhì)量比M(吡咯)：M(明膠)＝1：6的比例，向所述明膠水溶液中加入吡咯，攪拌3h，得吡咯-明膠溶液。

所述步驟三中，按摩爾比n(吡咯)：n(無水氯化鐵)＝1：5的比例，向所述吡咯-明膠溶液中加入無水氯化鐵，攪拌30h，氧化得到成膜液。

實施例4：

一種聚吡咯-明膠復(fù)合導(dǎo)電薄膜的制備方法，包括以下步驟：

首先，取15ml去離子水于錐形瓶，溶解1g明膠，于60℃條件下溶解完全，冷卻至室溫；

其次，在避光條件下，向錐形瓶中加入208ul，密度為0.96g/ml的吡咯，攪拌2h；

最后，取5ml去離子水充分溶解1.9g無水氯化鐵，將氯化鐵溶液逐滴加入錐形瓶中，保持?jǐn)嚢?4h，得到成膜液。

步驟四、取所述成膜液，滴加在帶有玻璃片的培養(yǎng)皿中，將所述培養(yǎng)皿放在勻膠機中制膜。

勻膠機制膜工藝如下：

吸取少量的溶液，滴加在帶有玻璃片的培養(yǎng)皿中，將整個培養(yǎng)皿放在勻膠機內(nèi)，設(shè)置t1＝9s，t2＝30s；v＝200r/s，v2＝3200r/s，抽真空操作時間約為半分鐘，結(jié)束后按下開始按鈕，液體將均勻地展開形成一張薄膜。該操作可以通過調(diào)整液體的用量、勻膠機的時間及轉(zhuǎn)速等實驗變量來控制膜的厚度，實驗要求膜的厚度盡可能地薄，薄膜在室溫(25℃～30℃)條件下自然干燥過夜。使用前用無水乙醇和去離子水交替清洗3次，每次浸泡5分鐘，得到聚吡咯-明膠復(fù)合導(dǎo)電試驗薄膜，即可用于細(xì)胞培養(yǎng)

二、下面結(jié)合試驗和附圖對本發(fā)明作進(jìn)一步說明。

對實施例4得到的聚吡咯-明膠復(fù)合導(dǎo)電試驗薄膜，結(jié)果如下：

2.1電導(dǎo)率的測定，采用四探針法測得聚吡咯-明膠復(fù)合導(dǎo)電試驗薄膜的電導(dǎo)率為0.42mS/cm。說明聚吡咯-明膠復(fù)合導(dǎo)電試驗薄膜具有良好的導(dǎo)電性。

2.2生物相容性測試，以聚吡咯-明膠復(fù)合導(dǎo)電試驗薄膜作為細(xì)胞生長的載體，培養(yǎng)一段時間(≥10h)后觀察細(xì)胞狀態(tài)，結(jié)果如圖1和圖2所示；

圖1為經(jīng)過一段時間培養(yǎng)后，用熒光標(biāo)記的活細(xì)胞的狀態(tài)圖；

圖2為經(jīng)過一段時間培養(yǎng)后，未進(jìn)行熒光標(biāo)記的細(xì)胞狀態(tài)圖。

圖1中，白色透光區(qū)域及其周圍的輪廓即為活細(xì)胞；

圖2中，深色線條及其圍成的區(qū)域即為活細(xì)胞。

從圖1到圖2可以看出，細(xì)胞在聚吡咯-明膠復(fù)合導(dǎo)電試驗薄膜上生長情況良好，較長時間之后細(xì)胞仍有較高的存活率，說明聚吡咯-明膠復(fù)合導(dǎo)電試驗薄膜具有良好的生物相容性。

2.3掃描電鏡觀察聚吡咯-明膠復(fù)合導(dǎo)電試驗薄膜的表面形貌，圖3為放大1000倍時的掃描電鏡圖，從圖3可以看出，聚吡咯-明膠復(fù)合導(dǎo)電試驗薄膜表面均勻，平整。

有益效果：采用本發(fā)明方法制備的導(dǎo)電復(fù)合膜不僅給熒光分子制造了良好的微環(huán)境使其不易影響熒光壽命，且具有較好的延展性和透明度。作為熒光成像技術(shù)的載體達(dá)到無毒、無刺激性、免疫抗原性小、良好的生物相容性等基本標(biāo)準(zhǔn)。此外，本發(fā)明對熒光成像技術(shù)中的受體蛋白對熒光物質(zhì)的量子效率有所提高。制備簡單，原料廉價，具有良好的生物活性和導(dǎo)電性。將其作為帶有熒光的細(xì)胞的生長載體，實驗證明細(xì)胞得以存活且觀察到細(xì)胞體內(nèi)的熒光有連續(xù)的變化現(xiàn)象。

最后需要說明的是，上述描述僅僅為本發(fā)明的優(yōu)選實施例，本領(lǐng)域的普通技術(shù)人員在本發(fā)明的啟示下，在不違背本發(fā)明宗旨及權(quán)利要求的前提下，可以做出多種類似的表示，這樣的變換均落入本發(fā)明的保護(hù)范圍之內(nèi)。