本發(fā)明屬于肉桂揮發(fā)油提取技術(shù)領(lǐng)域，尤其涉及一種肉桂揮發(fā)油水蒸氣蒸餾法提取工藝。

背景技術(shù)：

肉桂，為樟科植物肉桂(cinnamomumcassia Presl)的干燥樹皮，多用于秋季剝?nèi)?，陰干。國?nèi)肉桂主要分布于廣西、廣東、福建、云南、海南等地。進(jìn)口肉桂主要產(chǎn)于越南、柬埔寨等地。肉桂主要成分有揮發(fā)油、二萜及其糖苷、黃烷醇及其多聚體，此外還含有黃酮類、多酚類等多種類型的化合物。為充分利用肉桂的醫(yī)藥用價(jià)值，有必要對(duì)其進(jìn)一步提取分離加工，對(duì)其提取物或單體深入研究，以便于發(fā)掘其中天然藥用成分給新藥研發(fā)提供新的資源。

技術(shù)實(shí)現(xiàn)要素：

本發(fā)明要解決的技術(shù)問題是提供一種工藝簡單、提取率高的肉桂揮發(fā)油水蒸氣蒸餾法提取工藝。

為解決上述技術(shù)問題，本發(fā)明采用以下技術(shù)方案：

肉桂揮發(fā)油水蒸氣蒸餾法提取工藝，取肉桂藥材粉碎至4-65目成肉桂粉末，按體積質(zhì)量比加4-12倍水于圓底燒瓶中浸泡0-120min，然后加熱蒸餾4-8h回流提取，獲得肉桂揮發(fā)油。

肉桂揮發(fā)油中桂皮醛含量為1.5-3.5％。

肉桂粉末的粉碎度為10目。

加水量為10倍。

浸泡時(shí)間為60min。

蒸餾時(shí)間為5h。

上述肉桂揮發(fā)油水蒸氣蒸餾法提取工藝，取肉桂藥材粉碎至10目成肉桂粉末，按體積質(zhì)量比加10倍水于圓底燒瓶中浸泡60min，然后加熱蒸餾5h回流提取。

針對(duì)肉桂揮發(fā)油缺乏有效提取分離加工方法的問題，發(fā)明人建立了一種肉桂揮發(fā)油水蒸氣蒸餾法提取工藝，取肉桂藥材粉碎至4-65目成肉桂粉末，按體積質(zhì)量比加4-12倍水于圓底燒瓶中浸泡0-120min，然后加熱蒸餾4-8h回流提取，獲得肉桂揮發(fā)油。研究中，發(fā)明人以桂皮醛含量為指標(biāo)，對(duì)影響提取肉桂中桂皮醛含量的藥材粉碎度、浸泡時(shí)間、加水倍數(shù)、蒸餾時(shí)間等進(jìn)行單因素考察，采用正交實(shí)驗(yàn)優(yōu)選獲得了肉桂揮發(fā)油的最佳提取工藝并進(jìn)行方法學(xué)考察。結(jié)果表明，應(yīng)用本發(fā)明提取肉桂中的揮發(fā)油，具有操作簡單，揮發(fā)油出油量多，桂皮醛含量高等特點(diǎn)，充深入研究肉桂的醫(yī)藥用價(jià)值提供了技術(shù)支持。

附圖說明

圖1是藥材粉碎度對(duì)桂皮醛含量的影響結(jié)果圖。

圖2是藥材浸泡時(shí)間對(duì)桂皮醛含量的影響結(jié)果圖。

圖3是藥材加水倍數(shù)對(duì)桂皮醛含量的影響結(jié)果圖。

圖4是藥材蒸餾時(shí)間對(duì)桂皮醛含量的影響結(jié)果圖。

圖5是桂皮醛標(biāo)準(zhǔn)曲線圖。

具體實(shí)施方式

1儀器與材料

1.1試驗(yàn)儀器

高效液相色譜儀(Agilent 1260型)，超聲波清洗器，98-1-B型電子調(diào)溫電熱套(天津市泰斯特儀器有限公司)，電子天平(北京賽多利斯儀器系統(tǒng)有限公司)、tTGL-16G型離心機(jī)(上海安亭科學(xué)儀器廠)，揮發(fā)油提取器、移液槍、藥典篩網(wǎng)。

1.2試驗(yàn)材料

肉桂(批號(hào)20150901)購于北京同仁堂健康藥業(yè)(福州)有限公司，桂皮醛對(duì)照品(批號(hào)110710-201619)購于中國食品藥品檢定研究院。甲醇(分析純)，乙腈(色譜純)，水為超純水。

2方法與結(jié)果

2.1色譜條件

色譜柱：Inertsil ODS-3(4.6×250mm，5μm)，流動(dòng)相：乙腈-水(35：65)，檢測(cè)波長：290nm，流速：1ml/min，進(jìn)樣體積10μl，柱溫35℃。

2.2標(biāo)準(zhǔn)溶液的配置

精密量取桂皮醛對(duì)照品8.2mg，置25ml容量瓶中，加甲醇使溶解并稀釋至刻度，搖勻即得對(duì)照品儲(chǔ)備液。取桂皮醛儲(chǔ)備液1ml至25ml容量瓶，加甲醇稀釋至刻度即得每1ml含桂皮醛13.12μg的對(duì)照品溶液。

2.3單因素考察

2.3.1藥材粉碎度的考察

取肉桂藥材飲片，分別粉碎過4目，10目，24目，50目，65目得肉桂粉末，各取60g，分別加10倍水于1000ml圓底燒瓶中浸泡30分鐘，回流5h，于揮發(fā)油提取器下端收集黃色揮發(fā)油，5000r/min離心10min，吸去上層清水后置50ml容量瓶中，加甲醇定容，搖勻，稀釋100倍后取0.5ml定容到10ml，比較桂皮醛含量選出最優(yōu)粉碎度。

結(jié)果如圖1所述，隨著肉桂粉碎目數(shù)的增加，桂皮醛含量相應(yīng)下降，其中10目至50目之間曲線變化平緩，桂皮醛含量升降變化不大，65目時(shí)桂皮醛含量下降，故選擇10目、24目、50目作為粉碎度考察范圍。

2.3.2浸泡時(shí)間的考察

取粉碎過24目肉桂粉末5份各60g，加10倍水于1000ml圓底燒瓶中分別浸泡Omin，30min，60min，90min，120min，其他條件均同2.3.1，測(cè)定桂皮醛含量。

結(jié)果如圖2所述，隨著肉桂浸泡時(shí)間的增加，桂皮醛含量隨之增加，浸泡90min后，桂皮醛含量變化不大，故選擇30min、60min、90min作為浸泡時(shí)間考察范圍。

2.3.3加水倍數(shù)的考察

取粉碎過24目肉桂粉末5份各60g，分別加4倍，6倍，8倍，10倍，12倍水浸泡30min，其他條件均同2.3.1，測(cè)定桂皮醛含量。

結(jié)果如圖3所述，加水倍數(shù)為6倍時(shí)，桂皮醛含量最大，再增加加水倍數(shù)，含量反而下降，故選擇6倍、8倍、10倍作為加水倍數(shù)考察范圍。

2.3.4蒸餾時(shí)間的影響

取粉碎過24目肉桂粉末5份各60g，加10倍水浸泡30min，分別加熱回流3h，4h，5h，6h，7h，其他條件均同2.3.1，測(cè)定桂皮醛含量。

結(jié)果如圖4所述，桂皮醛含量隨提取時(shí)間的增加而上升，提取時(shí)間為5h時(shí)，含量曲線趨于平衡，故選擇4h、5h、6h作為蒸餾時(shí)間考察范圍。

2.4正交實(shí)驗(yàn)優(yōu)選揮發(fā)油最佳提取工藝

根據(jù)以上單因素提取結(jié)果，以桂皮醛含量為指標(biāo)設(shè)計(jì)正交實(shí)驗(yàn)，選擇粉碎度(A)、浸泡時(shí)間(B)、加水倍數(shù)(C)、蒸餾時(shí)間(D)4個(gè)因素，每個(gè)因素3個(gè)水平的試驗(yàn)方案，因素水平設(shè)計(jì)如表1。

表1正交實(shí)驗(yàn)因素水平設(shè)計(jì)

分別稱取10目、24目、50目肉桂粉末60g各三份，按上述因素水平采用L₉(3⁴)正交表進(jìn)行試驗(yàn)，收集揮發(fā)油，結(jié)果如表2所示。

表2 L₉(3⁴)正交試驗(yàn)結(jié)果

表3方差分析表

根據(jù)以上結(jié)果，對(duì)肉桂揮發(fā)油提取結(jié)果進(jìn)行直觀分析，比較四個(gè)因素的極差，Rc＞Ra＞Rd＞Rb，因此因素影響的大小順序?yàn)镃＞A＞D＞B。由上述方差分析結(jié)果可知，因素C(加水倍數(shù))各水平間有顯著性差異(F＞9)，再結(jié)合各水平含量及實(shí)際生產(chǎn)，蒸餾6小時(shí)與蒸餾5小時(shí)揮發(fā)油含量差異不大，為節(jié)省成本，優(yōu)選最佳肉桂揮發(fā)油提取工藝為A₁B₂C₃D₂，即：粉碎度10目，浸泡60min，加10倍水，蒸餾5小時(shí)。

2.5方法學(xué)考察

2.5.1線性關(guān)系考察

精密量取桂皮醛對(duì)照品0.0082g，置25ml容量瓶中，加甲醇至刻度即得0.328mg/ml桂皮醛母液，精密吸取母液1ml，稀釋到25ml，得濃度為每1ml含桂皮醛0.013mg的溶液。分別進(jìn)樣4μL，6μL，8μL，10μL，12μL，14μL。按2.1色譜條件測(cè)定峰面積，結(jié)果如下表4所示，以峰面積(Y)對(duì)進(jìn)樣量(X)進(jìn)行回歸，計(jì)算回歸方程，并以峰面積為縱坐標(biāo)，進(jìn)樣量為橫坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，見圖5。

表4桂皮醛對(duì)照品測(cè)定結(jié)果

回歸方程：Y＝11381.5237*X+0.0194414 r＝1.00000。結(jié)果表明：桂皮醛在0.052～0.182μg范圍內(nèi)線性良好。

2.5.2精密度試驗(yàn)

根據(jù)2.1色譜條件，精密吸取對(duì)照品溶液10μL注入高效液相色譜儀，重復(fù)進(jìn)樣6次，分別測(cè)定峰面積，測(cè)得平均峰面積為1516.7，RSD值為0.04％，實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明該儀器精密度良好。

2.5.3重復(fù)性試驗(yàn)

取六份同一批次的肉桂6份，每份60g，按上述正交實(shí)驗(yàn)所得的最優(yōu)提取方案及2.1色譜條件進(jìn)行桂皮醛含量測(cè)定，測(cè)得桂皮醛平均含量為2.4257％，RSD值為1.89％，結(jié)果表明該方法重復(fù)性良好。

2.5.4穩(wěn)定性試驗(yàn)

精密量取供試品10μL，分別于0h，4h，8h，12h，16h，24h，按2.1色譜條件進(jìn)樣，計(jì)算所得RSD值為0.6％，結(jié)果表明供試品溶液中桂皮醛在24h內(nèi)穩(wěn)定。

2.5.5加樣回收試驗(yàn)

精密稱取6份已知含量(2.4257％)的10目肉桂粉末30g精密稱定后，分別精密加入與樣品中桂皮醛含量相近的桂皮醛對(duì)照品，按上述提取方法操作。按2.1色譜條件進(jìn)樣分析，測(cè)桂皮醛含量，計(jì)算回收率，得平均回收率為100.91％，RSD為2.61％，結(jié)果見表5。

表5桂皮醛回收率試驗(yàn)結(jié)果

2.5.6樣品含量測(cè)定

以粉碎度10目，浸泡60min，加10倍水，蒸餾5小時(shí)，測(cè)樣品中桂皮醛含量。結(jié)果見表6。

表6樣品中桂皮醛的含量測(cè)定

3討論

3.1桂皮醛是易揮發(fā)成分，粉碎度越細(xì)，時(shí)間越長，樣品中含量越小，因此應(yīng)盡量減少粉碎度，縮短粉碎時(shí)間。

3.2浸泡可以使肉桂組織細(xì)胞膨脹，細(xì)胞間隙變大，加速揮發(fā)油從藥材滲出從而利于揮發(fā)油的提取。