本發(fā)明涉及多糖提取技術(shù)領(lǐng)域，具體是一種秋葵多糖的提取方法。

背景技術(shù)：

秋葵( Abelmoschus esculentus L .Moench )又名黃秋葵、羊角豆、咖啡黃葵、毛茄，黃蜀葵，民間也稱"洋辣椒"。原產(chǎn)于非洲，20世紀(jì)初由印度引入中國，多見于中國南方。其可食用部分是果莢，分綠色和紅色兩種，口感脆嫩多汁，滑潤不膩，香味獨(dú)特，種子可榨油。秋葵性味淡、寒，具有利咽、通淋、下乳、調(diào)經(jīng)之功效。秋葵含有豐富的維生素和礦物質(zhì)，每100克秋葵的嫩果中，約含有4毫克的維生素C、1 .03毫克的維生素E以及310微克的胡蘿卜素。秋葵中富含的鋅和硒等微量元素，對增強(qiáng)人體防癌抗癌能力很有幫助。其次，秋葵嫩果中有黏黏的液體物質(zhì)，這種黏液含有果膠和黏多糖類等多糖。黏多糖具有增強(qiáng)機(jī)體抵抗力，維護(hù)人體關(guān)節(jié)腔里關(guān)節(jié)膜和漿膜的光滑效果，削減脂類物質(zhì)在動脈管壁上的堆積，避免肝臟和腎臟中結(jié)締組織萎縮等功效。再者，秋葵含水量高，脂肪很少，每100克秋葵嫩果只含有0 .1克脂肪，很適合想要減肥瘦身的女士，而且它富含的維生素C和膳食纖維，還能使皮膚嫩白。此外，黃秋葵的粘性物質(zhì)，可促進(jìn)胃腸蠕動，有益于助消化，益腸胃；秋葵的粘性物質(zhì)中含有50％的可溶性纖維素，有利通便、排毒、防癌，能有效降低血清膽固醇，預(yù)防心血管病、可提高耐缺氧能力；黃秋葵中含有的果膠和多糖可有護(hù)肝功效，防治便秘；同時，黃秋葵不僅含鈣量與鮮奶相當(dāng)，且鈣的吸收率在50-60％，高于牛奶1倍，是理想的鈣源；黃秋葵為低能量食物，且黃酮含量為2 .8％，可延緩衰老、具有抗氧化、防衰老作用，防治糖尿病。

現(xiàn)在對于多糖的提取已有很多研究，現(xiàn)有技術(shù)如授權(quán)公告號為CN104311691B的中國發(fā)明專利，公開了一種苦瓜多糖的提取方法，包括下述的步驟：將苦瓜清洗干凈并晾干，再粉碎成苦瓜粉，在苦瓜粉中加入木瓜蛋白酶和中性蛋白酶，在微波條件下酶解，酶解后濃縮并脫色，離心，取上清液濃縮醇沉，再離心，采用乙醇清洗沉淀，冷凍干燥后并粉碎，得苦瓜多糖。采用該方法從苦瓜中提取多糖，采用酶作用條件溫和，采用各種不同的酶將苦瓜中的脂肪、纖維素酶解，將其中的多糖提取出來，提高了苦瓜的利用率。該方法未脫蛋白，多糖純度不高，且提取率也有待提高。現(xiàn)有技術(shù)如授權(quán)公告號為CN104844720B的中國發(fā)明專利，公開了一種百尾參多糖的分離提取方法，包括以下步驟：將新鮮百尾參洗凈，干燥后粉碎；與石油醚回流脫脂；添加蒸餾水提取，提取結(jié)束合并水提液；水提液用布氏漏斗抽濾，濾液醇沉后靜置、離心、去掉上清液，沉淀用蒸餾水定容；脫色純化、濃縮，得粗多糖液；粗多糖液按質(zhì)量比3:1的比例加入氯仿和正丁醇的混合液，振搖后取上層清液，加入乙醇、靜置、離心，得脫蛋白百尾參多糖；洗滌，冷凍干燥即得。該方法可獲得純度高、品質(zhì)好的百尾參多糖，方法簡單、易操作，極具市場推廣價值。該方法只采用水提法提取多糖，未采取其他方式輔助提取，提取率不高。

技術(shù)實(shí)現(xiàn)要素：

本發(fā)明的目的在于提供一種提取率高，提取的多糖活性強(qiáng)，純度高的秋葵多糖的提取方法。

本發(fā)明針對背景技術(shù)中提到的問題，采取的技術(shù)方案為：

秋葵多糖的提取方法，具體操作步驟：

1）預(yù)處理：將新鮮秋葵在鼓風(fēng)機(jī)中干燥，溫度為50~70℃，干燥時間為0.8~1.5h，直至秋葵中水分為3~8%，研磨，過40~100目篩；

2）脫脂：在秋葵粉中按料液比為1:40~1:80加入石油醚，在索氏提取器中，于40~60℃下回流脫脂2~4h，過濾干燥得到去脂秋葵粉；

3）酶解：在去脂秋葵粉中按料液比1:30~1：60加入蒸餾水，攪拌，攪拌速率為200~500r/min。加入酶解劑，酶解劑成份及其重量份為2~6份纖維素酶，1~5份果膠酶，0.4~0.7份牛胰蛋白酶，0.2~0.5份氯化鈣，0.01~0.03份烷基酚聚氧乙烯醚，0.02~0.04份半胱氨酸，0.01~0.04份乙酸葉醇酯和0.03~0.05份2-吡咯烷乙酸。酶解溫度為40~55℃，pH為5.2~6.8，酶解時間為0.1~0.4h。微波助溶，微波功率為200~400W，頻率為500~1MHz，作用時間為30~50min。酶解結(jié)束后用沸水浴滅酶，滅酶時間為10~20min。過濾，濾液經(jīng)真空濃縮至原來體積的1/4~1/3得到秋葵粗多糖濃縮液。酶解條件溫和，不會破壞秋葵多糖的結(jié)構(gòu)，使其保持較高的活性；多種酶聯(lián)合酶解，并有多種酶激活劑激活復(fù)合酶，酶解速度快且酶解更徹底，提高秋葵多糖的提取率；利用溶劑提取和微波提取相結(jié)合，利用被加熱物體本身作為發(fā)熱體而進(jìn)行加熱，不靠熱傳導(dǎo)作用，可以使物料內(nèi)部溫度迅速提高，加熱時間縮短，同時采用蒸餾水作為提取溶劑，具有廉價、無毒、易于回收再利用的特點(diǎn)，大大降低了生產(chǎn)成本；

4）純化：在秋葵粗多糖濃縮液中按質(zhì)量比1:3~1:5加入95%乙醇，靜置，離心，去掉上清液，在沉淀中按質(zhì)量比1:10~1:30加入蒸餾水，用AB-8樹脂脫色純化；

5）脫蛋白：加入質(zhì)量比4：1~6:1的氯仿和正丁醇的混合液，加入量為脫色純化后秋葵多糖濃縮液質(zhì)量的1/2~1/4。攪拌后過濾取上清液，加入95%乙醇，靜置離心，收集沉淀并用95%乙醇反復(fù)清洗，冷凍干燥，并在1~5℃下粉碎，得到秋葵多糖粉末。氯仿和正丁醇能使蛋白質(zhì)變性而不溶于水，在含蛋白質(zhì)的多糖溶液中加入氯仿和正丁醇會形成凝膠物，通過離心的方式去除蛋白質(zhì)。最后得到的秋葵多糖的純度很高，提取率高且能保持較高活性。

與現(xiàn)有技術(shù)相比，本發(fā)明的優(yōu)點(diǎn)在于：酶解條件溫和，不會破壞秋葵多糖的結(jié)構(gòu)，使其保持較高的活性；多種酶聯(lián)合酶解，并有多種酶激活劑激活復(fù)合酶，酶解速度快且酶解更徹底，提高秋葵多糖的提取率；利用溶劑提取和微波提取相結(jié)合，利用被加熱物體本身作為發(fā)熱體而進(jìn)行加熱，不靠熱傳導(dǎo)作用，可以使物料內(nèi)部溫度迅速提高，加熱時間縮短，同時采用蒸餾水作為提取溶劑，具有廉價、無毒、易于回收再利用的特點(diǎn)，大大降低了生產(chǎn)成本；氯仿和正丁醇能使蛋白質(zhì)變性而不溶于水，在含蛋白質(zhì)的多糖溶液中加入氯仿和正丁醇會形成凝膠物，通過離心的方式去除蛋白質(zhì)；最后得到的秋葵多糖的純度很高，提取率高且能保持較高活性；操作步驟簡單，成本低廉，經(jīng)濟(jì)效益高。

具體實(shí)施例

下面通過實(shí)施例對本發(fā)明方案作進(jìn)一步說明：

實(shí)施例1：

秋葵多糖的提取方法，具體操作步驟：

1）預(yù)處理：將新鮮秋葵在鼓風(fēng)機(jī)中干燥，溫度為50~70℃，干燥時間為0.8~1.5h，直至秋葵中水分為3~8%，研磨，過40~100目篩；

2）脫脂：在秋葵粉中按料液比為1:40~1:80加入石油醚，在索氏提取器中，于40~60℃下回流脫脂2~4h，過濾干燥得到去脂秋葵粉；

3）酶解：在去脂秋葵粉中按料液比1:30~1：60加入蒸餾水，攪拌，攪拌速率為200~500r/min。加入酶解劑，酶解劑成份及其重量份為2~6份纖維素酶，1~5份果膠酶，0.4~0.7份牛胰蛋白酶，0.2~0.5份氯化鈣，0.01~0.03份烷基酚聚氧乙烯醚，0.02~0.04份半胱氨酸，0.01~0.04份乙酸葉醇酯和0.03~0.05份2-吡咯烷乙酸。酶解溫度為40~55℃，pH為5.2~6.8，酶解時間為0.1~0.4h。微波助溶，微波功率為200~400W，頻率為500~1MHz，作用時間為30~50min。酶解結(jié)束后用沸水浴滅酶，滅酶時間為10~20min。過濾，濾液經(jīng)真空濃縮至原來體積的1/4~1/3得到秋葵粗多糖濃縮液。酶解條件溫和，不會破壞秋葵多糖的結(jié)構(gòu)，使其保持較高的活性；多種酶聯(lián)合酶解，并有多種酶激活劑激活復(fù)合酶，酶解速度快且酶解更徹底，提高秋葵多糖的提取率；利用溶劑提取和微波提取相結(jié)合，利用被加熱物體本身作為發(fā)熱體而進(jìn)行加熱，不靠熱傳導(dǎo)作用，可以使物料內(nèi)部溫度迅速提高，加熱時間縮短，同時采用蒸餾水作為提取溶劑，具有廉價、無毒、易于回收再利用的特點(diǎn)，大大降低了生產(chǎn)成本；

4）純化：在秋葵粗多糖濃縮液中按質(zhì)量比1:3~1:5加入95%乙醇，靜置，離心，去掉上清液，在沉淀中按質(zhì)量比1:10~1:30加入蒸餾水，用AB-8樹脂脫色純化；

5）脫蛋白：加入質(zhì)量比4：1~6:1的氯仿和正丁醇的混合液，加入量為脫色純化后秋葵多糖濃縮液質(zhì)量的1/2~1/4。攪拌后過濾取上清液，加入95%乙醇，靜置離心，收集沉淀并用95%乙醇反復(fù)清洗，冷凍干燥，并在1~5℃下粉碎，得到秋葵多糖粉末。氯仿和正丁醇能使蛋白質(zhì)變性而不溶于水，在含蛋白質(zhì)的多糖溶液中加入氯仿和正丁醇會形成凝膠物，通過離心的方式去除蛋白質(zhì)。最后得到的秋葵多糖的純度很高，提取率高且能保持較高活性。

實(shí)施例2：

秋葵多糖的提取方法，最優(yōu)選操作步驟：

1）預(yù)處理：將新鮮秋葵在鼓風(fēng)機(jī)中干燥，溫度為60℃，干燥時間為1h，直至秋葵中水分為5%，研磨，過50目篩；

2）脫脂：在秋葵粉中按料液比為1:60加入石油醚，在索氏提取器中，于50℃下回流脫脂3h，過濾干燥得到去脂秋葵粉；

3）酶解：在去脂秋葵粉中按料液比1:40加入蒸餾水，攪拌，攪拌速率為300r/min。加入酶解劑，酶解劑成份及其最優(yōu)選重量份為5份纖維素酶，3份果膠酶，0.5份牛胰蛋白酶，0.4份氯化鈣，0.02份烷基酚聚氧乙烯醚，0.03份半胱氨酸，0.02份乙酸葉醇酯和0.05份2-吡咯烷乙酸。酶解溫度為45℃，pH為6.2，酶解時間為0.2h。微波助溶，微波功率為300W，頻率為800MHz，作用時間為30min。酶解結(jié)束后用沸水浴滅酶，滅酶時間為15min。過濾，濾液經(jīng)真空濃縮至原來體積的1/4得到秋葵粗多糖濃縮液。酶解條件溫和，不會破壞秋葵多糖的結(jié)構(gòu)，使其保持較高的活性；多種酶聯(lián)合酶解，并有乙酸葉醇酯和2-吡咯烷乙酸等成分激活復(fù)合酶，增效酶解，酶解速度快且酶解更徹底，提高秋葵多糖的提取率；利用溶劑提取和微波提取相結(jié)合，利用被加熱物體本身作為發(fā)熱體而進(jìn)行加熱，不靠熱傳導(dǎo)作用，可以使物料內(nèi)部溫度迅速提高，加熱時間縮短，同時采用蒸餾水作為提取溶劑，具有廉價、無毒、易于回收再利用的特點(diǎn)，大大降低了生產(chǎn)成本；

4）純化：在秋葵粗多糖濃縮液中按質(zhì)量比1:4加入95%乙醇，靜置，離心，去掉上清液，在沉淀中按質(zhì)量比1:18加入蒸餾水，用AB-8樹脂脫色純化；

5）脫蛋白：加入質(zhì)量比5:1的氯仿和正丁醇的混合液，加入量為脫色純化后秋葵多糖濃縮液質(zhì)量的1/3。攪拌后過濾取上清液，加入95%乙醇，靜置離心，收集沉淀并用95%乙醇反復(fù)清洗，冷凍干燥，并在1~5℃下粉碎，得到秋葵多糖粉末。氯仿和正丁醇能使蛋白質(zhì)變性而不溶于水，在含蛋白質(zhì)的多糖溶液中加入氯仿和正丁醇會形成凝膠物，通過離心的方式去除蛋白質(zhì)。最后得到的秋葵多糖的純度很高，提取率高且能保持較高活性。

本發(fā)明的操作步驟中的常規(guī)操作為本領(lǐng)域技術(shù)人員所熟知，在此不進(jìn)行贅述。

以上所述的實(shí)施例對本發(fā)明的技術(shù)方案進(jìn)行了詳細(xì)說明，應(yīng)理解的是以上所述僅為本發(fā)明的具體實(shí)施例，并不用于限制本發(fā)明，凡在本發(fā)明的原則范圍內(nèi)所做的任何修改、補(bǔ)充或類似方式替代等，均應(yīng)包含在本發(fā)明的保護(hù)范圍之內(nèi)。