本實(shí)用新型涉及一種分離間充質(zhì)干細(xì)胞的試劑盒，尤其是一種用于從脂肪組織塊中快速分離間充質(zhì)干細(xì)胞的雙層保溫試劑盒。

背景技術(shù)：

近年來，間充質(zhì)干細(xì)胞的臨床研究越來越多，而自體脂肪間充質(zhì)也成為更安全的細(xì)胞來源之一。

傳統(tǒng)的脂肪組織塊中的間充質(zhì)干細(xì)胞分離方法已經(jīng)比較成熟，但是分離過程所用試劑需要前期配制和準(zhǔn)備工作而且過程比較繁瑣，分離耗時(shí)較長且原代生長緩慢，脂肪組織塊處理過程易污染。

技術(shù)實(shí)現(xiàn)要素：

本實(shí)用新型所要解決的技術(shù)問題是，提供一種提高分離速度，并且大大縮短分離前期試劑配制和準(zhǔn)備工作所耗時(shí)間，并且明顯降低標(biāo)本污染率的用于從脂肪組織塊中快速分離間充質(zhì)干細(xì)胞的雙層保溫試劑盒。

為了解決上述技術(shù)問題，本實(shí)用新型采用的技術(shù)方案是：一種用于從脂肪組織塊中快速分離間充質(zhì)干細(xì)胞的雙層保溫試劑盒，包括盒蓋和盒體，盒體分為獨(dú)立的上下兩層，上層為一次性器械耗材放置區(qū)，下層為帶有用于固定安放洗滌瓶、消化酶瓶、培養(yǎng)基瓶和低溫冰袋的4個(gè)卡槽；一次性器械耗材放置區(qū)放置有一次性無菌手術(shù)刀2把、一次性無菌鑷子2把、一次性無菌平皿1個(gè)、一次性50mL無菌離心管3個(gè)、一次性10ml無菌刻度吸管5支、一次性無菌100um細(xì)胞篩網(wǎng)1個(gè)，洗滌瓶中裝有250mL洗滌液，消化酶瓶中裝有10mL消化酶，培養(yǎng)基瓶中裝有250mL原代細(xì)胞培養(yǎng)基，低溫冰袋裝有500g制冷劑。

所述盒體為泡沫塑料合體，盒蓋為無色透明塑料材質(zhì)。

本實(shí)用新型的有益效果是：使用方便，省去實(shí)驗(yàn)前準(zhǔn)備時(shí)間，洗滌液可以降低標(biāo)本細(xì)菌污染率，可以低溫保藏。采用細(xì)胞消化液得到的細(xì)胞純度高，收獲細(xì)胞數(shù)更多增殖更快，一般8天即可完成原代細(xì)胞培養(yǎng)。將原代細(xì)胞傳代，添加培養(yǎng)基進(jìn)行培養(yǎng)，一般2-3天細(xì)胞密度即可達(dá)到85％，為利用脂肪組織塊中的間充質(zhì)干細(xì)胞進(jìn)行進(jìn)一步科學(xué)研究提供了豐富的來源。

附圖說明

圖1是本實(shí)用新型用于從脂肪組織塊中快速分離間充質(zhì)干細(xì)胞的雙層保溫試劑盒的上層結(jié)構(gòu)示意圖。

圖2是本實(shí)用新型用于從脂肪組織塊中快速分離間充質(zhì)干細(xì)胞的雙層保溫試劑盒的下層結(jié)構(gòu)示意圖。

具體實(shí)施方式

下面結(jié)合附圖和具體實(shí)施方式對本實(shí)用新型作進(jìn)一步詳細(xì)說明：

如圖1、2所示，本實(shí)用新型的用于從脂肪組織塊中快速分離間充質(zhì)干細(xì)胞的雙層保溫試劑盒，包括盒蓋和盒體，盒體分為獨(dú)立的上下兩層，上層1為一次性器械耗材放置區(qū)3，下層2為帶有用于固定安放洗滌瓶4、消化酶瓶5、培養(yǎng)基瓶6和低溫冰袋7的4個(gè)卡槽；一次性器械耗材放置區(qū)3放置有一次性無菌手術(shù)刀2把、一次性無菌鑷子2把、一次性無菌平皿1個(gè)、一次性50mL無菌離心管3個(gè)、一次性10ml無菌刻度吸管5支、一次性無菌100um細(xì)胞篩網(wǎng)1個(gè)，洗滌瓶4中裝有250mL洗滌液，消化酶瓶5中裝有10mL消化酶，培養(yǎng)基瓶6中裝有250mL原代細(xì)胞培養(yǎng)基，低溫冰袋7裝有500g制冷劑。

所述盒體為泡沫塑料盒體，盒蓋為無色透明塑料材質(zhì)。

250mL洗滌液1瓶，為含有120U/mL青霉素、120U/mL鏈霉素、50mg/mL溶菌酶的PBS溶液。

10mL消化酶1瓶，為質(zhì)量/體積百分比濃度為0.5％的IV型膠原酶和1％的I型膠原酶溶液。

250mL原代細(xì)胞培養(yǎng)基1瓶，為含有80ng/mL EGF、80ng/mL bFGF和50ng/mL aFGF、體積分?jǐn)?shù)為10％胎牛血清的DMEM溶液。

本實(shí)用新型使用方法如下：

步驟一：分別打開器械耗材放置區(qū)域中的50ml一次性無菌塑料杯和一次性無菌鑷子。

步驟二：打開洗滌液，分別加入至三個(gè)一次性50mL離心管中，大約45mL。

步驟三：用一次性無菌鑷子將脂肪組織塊放入步驟二中的裝有洗滌液的離心管中反復(fù)顛倒洗滌。洗滌后用一次性10mL無菌刻度吸管吸棄上清液，重復(fù)洗滌三次。

步驟四：將器械耗材放置區(qū)中的一次性無菌平皿取出，將脂肪組織塊放入平皿中心，用器械耗材放置區(qū)中的一次性無菌手術(shù)刀將其切至糜狀，將組織放入第2個(gè)離心管中。

步驟五：將消化酶放置區(qū)的消化酶取出，將切好的組織放入50mL離心杯中，按照每克脂肪組織1mL消化酶的比例，加入消化酶后，放入搖床中37℃，140r/min消化20～30min。

步驟六：取出一次性細(xì)胞篩網(wǎng)和洗滌液。消化后，向離心管中加入40mL洗滌液洗滌后經(jīng)過一次性細(xì)胞篩網(wǎng)過濾，將固體過濾后，將細(xì)胞懸液1200r/min，5min離心，重復(fù)離心操作一次。

步驟七：培養(yǎng)基取出，加入離心后沉淀物中，充分混勻后加入培養(yǎng)瓶中。待24小時(shí)后換液。

綜上所述，本實(shí)用新型的內(nèi)容并不局限在上述的實(shí)施例中，相同領(lǐng)域內(nèi)的有識(shí)之士可以在本實(shí)用新型的技術(shù)指導(dǎo)思想之內(nèi)可以輕易提出其他的實(shí)施例，但這種實(shí)施例都包括在本實(shí)用新型的范圍之內(nèi)。