本發(fā)明涉及經放射性碘標記的吡啶并[1,2-a]苯并咪唑衍生物化合物或其鹽、及含有其的放射性藥物。
背景技術：
：在阿爾茨海默病(ad)患者的腦內觀察到以β淀粉樣蛋白(aβ)為主要成分的老年斑(sp)、和以tau蛋白為主要成分的神經原纖維纏結(nft)的蓄積。nft的蓄積顯示出較sp更高的臨床癥狀相關性，因此，最近，以tau蛋白作為靶標的核醫(yī)學診斷用放射性分子顯像探針的開發(fā)備受矚目。例如，專利文獻1中記載了對tau蛋白具有親和性的繞丹寧及乙內酰硫脲衍生物的放射性碘標記化合物。另外，專利文獻2、3中記載了對aβ及tau蛋白這兩者具有結合性的化合物。具體而言，專利文獻2中記載了以苯乙烯基苯并咪唑作為母核的放射性碘標記化合物，專利文獻3中記載了苯并咪唑嘧啶類等。專利文獻1：國際公開第2011/108236號小冊子專利文獻2：日本特開2013-237655號公報專利文獻3：日本特表2013-522365號公報技術實現(xiàn)要素：然而，上述專利文獻1～3中記載的化合物作為tau蛋白選擇性體內顯像劑而言還有改善的余地。本發(fā)明是鑒于上述情況而作出的，其目的在于提供能夠利用核醫(yī)學方法非侵入性地將生物體內的tau蛋白選擇性地圖像化的新型tau顯像劑(tauimagingagent)。本申請的發(fā)明人首次發(fā)現(xiàn)，利用經放射性碘標記的吡啶并[1,2-a]苯并咪唑衍生物化合物，能夠在保持對tau蛋白的選擇結合性的同時，還抑制向腦白質的非特異性集聚，從而完成了本發(fā)明。本發(fā)明的一種方式提供下述通式(1)表示的放射性碘標記化合物或其鹽。[化學式1]上述通式(1)中，r1為氫原子時，r2為放射性碘原子或放射性碘代苯基，r1為放射性碘原子時，r2為氫原子或苯基。本發(fā)明的其他方式提供含有上述的放射性碘標記化合物或其鹽的放射性藥物。另外，本發(fā)明的其他方式提供含有上述的放射性碘標記化合物或其鹽的阿爾茨海默病診斷劑。另外，本發(fā)明的其他方式提供下述通式(2)表示的化合物或其鹽。[化學式2]上述通式(2)中，r3為氫原子時，r4為三烷基甲錫烷基、三烷基甲硅烷基、三烷基甲錫烷基化苯基、或三烷基甲硅烷基化苯基，r3為三烷基甲錫烷基或三烷基甲硅烷基時，r4為氫原子或苯基。另外，本發(fā)明的其他方式提供從上述通式(2)表示的化合物或其鹽通過放射性碘化反應而制造上述通式(1)表示的放射性碘標記化合物或其鹽的方法。根據(jù)本發(fā)明，可提供能夠利用核醫(yī)學方法將生物體內的tau蛋白選擇性地圖像化的新型tau顯像劑。附圖說明上述目的及其他的目的、特征及優(yōu)點將通過以下記載的優(yōu)選實施方式及與其對應的以下附圖而更為明確。圖1是表示7-碘-3-苯基苯并[4,5]咪唑并[1,2-a]吡啶(bip-1)、及放射性碘標記bip-1的標記前體化合物的合成例的圖。圖2是表示3-(4-碘苯基)苯并[4,5]咪唑并[1,2-a]吡啶(bip-2)、及放射性碘標記bip-2的標記前體化合物的合成例的圖。圖3是表示7-碘苯并[4,5]咪唑并[1,2-a]吡啶(bip-3)、及放射性碘標記bip-3的標記前體化合物的合成例的圖。圖4是表示3-碘苯并[4,5]咪唑并[1,2-a]吡啶(bip-4)、及放射性碘標記bip-4的標記前體化合物的合成例的圖。圖5是表示經放射性碘標記的吡啶并[1,2-a]苯并咪唑衍生物化合物的標記合成例的圖。a為表示7-[125i]碘-3-苯基苯并[4,5]咪唑并[1,2-a]吡啶([125i]bip-1)的合成例的圖，b為表示3-(4-[125i]碘苯基)苯并[4,5]咪唑并[1,2-a]吡啶([125i]bip-2)的合成例的圖，c為表示7-[125i]碘苯并[4,5]咪唑并[1,2-a]吡啶([125i]bip-3)的合成例的圖，d為表示3-[125i]碘苯并[4,5]咪唑并[1,2-a]吡啶([125i]bip-4)的合成例的圖。圖6是表示使用了阿爾茨海默病患者剖檢腦組織的體外放射自顯影(invitroautoradiography)的結果的圖。e表示使用顳葉的腦組織切片對放射性碘標記bip-1的結合親和性進行評價的結果。f表示使用額葉的腦組織切片對[125i]bip-1的結合親和性進行評價的結果。g表示使用顳葉的腦組織切片對[125i]bip-2的結合親和性進行評價的結果。h表示使用額葉的腦組織切片對[125i]bip-2的結合親和性進行評價的結果。i表示使用顳葉的腦組織切片對[125i]bip-3的結合親和性進行評價的結果。j表示使用額葉的腦組織切片對[125i]bip-3的結合親和性進行評價的結果。k表示使用顳葉的腦組織切片對[125i]bip-4的結合親和性進行評價的結果。l表示使用額葉的腦組織切片對[125i]bip-4的結合親和性進行評價的結果。圖7是表示使用了阿爾茨海默病患者剖檢腦組織的體外放射自顯影及免疫染色的結果的圖。m為tau抗體的免疫染色的結果，o為aβ抗體的免疫染色的結果。n為圖6i的放大圖像。圖8是表示使用額葉的腦組織切片對[125i]bip-3的結合親和性進行評價的結果的圖。圖9是表示使用顳葉的腦組織切片對[125i]bip-3的結合親和性進行評價的結果的圖。圖10是按照腦組織區(qū)域分別示出相對于腦組織切片整體而言的、各腦組織區(qū)域中的tau、aβ的免疫陽性部位的比例、和[125i]bip-3的放射性集聚部位的比例的圖。圖11是表示對實施例涉及的經放射性碘標記的吡啶并[1,2-a]苯并咪唑衍生物化合物的腦內行為進行比較的結果的圖。圖12是表示放射性碘標記bip-3的血漿中穩(wěn)定性評價的結果的圖。圖13是表示放射性碘標記bip-3的血液中代謝物質分析的結果的圖。圖14是表示放射性碘標記bip-3的腦內代謝物質分析的結果的圖。具體實施方式本發(fā)明中，所謂“放射性碘”，只要是碘的放射性同位素即可，沒有特別限定，優(yōu)選可用于單光子發(fā)射計算機斷層顯像(spect)等核醫(yī)學影像診斷的放射性原子核素，更優(yōu)選為123i、124i、125i或131i，對于核醫(yī)學影像診斷用途而言進一步優(yōu)選123i。另外，本發(fā)明中，所謂“放射性碘代苯基”，只要是苯基的至少1個氫原子被放射性碘原子取代而得到的取代基即可，優(yōu)選為苯基的1個氫原子被放射性碘原子取代而得到的單碘代苯基，更優(yōu)選為苯基的第2位、第3位或第4位的氫原子被放射性碘原子取代而得到的碘代苯基，進一步優(yōu)選為苯基的第4位氫原子被放射性碘原子取代而得到的取代基(放射性4-碘代苯基)。上述通式(1)表示的放射性碘標記化合物可形成鹽，作為該鹽，可舉出酸加成鹽，例如無機酸鹽(例如鹽酸鹽、硫酸鹽、氫溴酸鹽、磷酸鹽等)、有機酸鹽(例如乙酸鹽、三氟乙酸鹽、琥珀酸鹽、馬來酸鹽、富馬酸鹽、丙酸鹽、檸檬酸鹽、酒石酸鹽、乳酸鹽、草酸鹽、甲磺酸鹽、對甲苯磺酸鹽等)等。另外，上述通式(1)表示的化合物或其鹽也可以是水合物。本發(fā)明涉及的放射性碘標記化合物可具體舉出以下的化合物?！そ浄派湫缘鈽擞浀?-碘-3-苯基苯并[4,5]咪唑并[1,2-a]吡啶(上述通式(1)中的r1為放射性碘原子、r2為苯基的放射性碘標記化合物)·經放射性碘標記的3-(4-碘苯基)苯并[4,5]咪唑并[1,2-a]吡啶(上述通式(1)中的r1為氫原子、r2為放射性4-碘代苯基的放射性碘標記化合物)·經放射性碘標記的7-碘苯并[4,5]咪唑并[1,2-a]吡啶(上述通式(1)中的r1為放射性碘原子、r2為氫原子的放射性碘標記化合物)·經放射性碘標記的3-碘苯并[4,5]咪唑并[1,2-a]吡啶(上述通式(1)中的r1為氫原子、r2為放射性碘原子的放射性碘標記化合物)接下來，對上述通式(1)表示的放射性碘標記化合物或其鹽的制造方法進行說明。通式(1)表示的放射性碘標記化合物或其鹽可通過使用上述通式(2)表示的化合物或其鹽進行放射性碘化反應而得到。上述通式(2)中，作為三烷基甲錫烷基，可舉出三(c1-c6烷基)甲錫烷基，更優(yōu)選三丁基甲錫烷基。作為三烷基甲硅烷基，可舉出三(c1-c6烷基)甲硅烷基，更優(yōu)選三甲基甲硅烷基。另外，本發(fā)明中，所謂“三烷基甲錫烷基化苯基”，只要為苯基的至少1個氫原子被三烷基甲錫烷基取代而得到的取代基即可，優(yōu)選為苯基的1個氫原子被三烷基甲錫烷基取代而得到的苯基，更優(yōu)選為苯基的第2位、第3位或第4位的氫原子被三烷基甲錫烷基取代而得到的三烷基甲錫烷基化苯基，進一步優(yōu)選為苯基的第4位氫原子被三烷基甲錫烷基取代而得到的取代基(4-三烷基甲錫烷基化苯基)。另外，本發(fā)明中，所謂“三烷基甲硅烷基化苯基”，只要為苯基的至少1個氫原子被三烷基甲硅烷基取代而得到的取代基即可，優(yōu)選為苯基的1個氫原子被三烷基甲硅烷基取代而得到的苯基，更優(yōu)選為苯基的第2位、第3位或第4位的氫原子被三烷基甲硅烷基取代而得到的三烷基甲硅烷基化苯基，進一步優(yōu)選為苯基的第4位氫原子被三烷基甲硅烷基取代得到的取代基(4-三烷基甲硅烷基化苯基)。上述通式(2)表示的化合物可形成鹽。作為鹽，可采用與上述通式(1)表示的放射性碘標記化合物可形成的鹽同樣的鹽。上述通式(2)表示的化合物可按照例如圖1～4所示的路線進行制備。放射性碘化反應可通過使放射性碘化堿金屬鹽作用于上述通式(2)表示的化合物或其鹽來進行。放射性碘化堿金屬鹽只要是放射性碘與堿金屬形成的鹽即可，例如，可舉出放射性碘化鈉、放射性碘化鉀等。上述通式(2)表示的化合物與放射性碘化堿金屬鹽的反應在酸性條件下進行，進而可通過使其與氧化劑反應而進行。作為氧化劑，可使用氯胺-t、過氧化氫、過氧乙酸等。使用得到的通式(1)的放射性碘標記化合物作為放射性藥物時，優(yōu)選地，利用膜濾器、填充有各種填充劑的柱、hplc等針對未反應的放射性碘離子及不溶性的雜質進行純化。本發(fā)明涉及的放射性藥物可定義為：以適于向生物體內施予的形態(tài)含有上述通式(1)表示的放射性碘標記化合物或其鹽的配方物。對于該放射性藥物而言，可通過將上述得到的通式(1)的放射性碘標記化合物配合到已根據(jù)期望而調節(jié)為適當?shù)膒h的水或生理鹽水、或者林格液等中，從而以所得液體的形式進行制備。該情況下，本放射性碘標記化合物的濃度優(yōu)選為經配合的本放射性碘標記化合物能實現(xiàn)穩(wěn)定性的濃度以下。本發(fā)明涉及的放射性藥物的施予形態(tài)優(yōu)選為注射劑，施予量只要為足以將被施予的化合物的分布圖像化的濃度即可，無需特別限定。被施予至生物體的本放射性碘標記化合物的分布可利用已知的方法進行圖像化，例如，[123i]碘標記化合物的情況下，可使用單光子發(fā)射計算機斷層顯像(spect)進行圖像化。利用如此得到的圖像，可將tau蛋白圖像化，例如，能夠非侵入性地對阿爾茨海默病進行診斷。[實施例]以下，記載實施例而進一步詳細地說明本發(fā)明，但本發(fā)明不受這些內容的限制。本實施例中使用的縮寫定義如下。bip-1：7-碘-3-苯基苯并[4,5]咪唑并[1,2-a]吡啶bip-2：3-(4-碘苯基)苯并[4,5]咪唑并[1,2-a]吡啶bip-3：7-碘苯并[4,5]咪唑并[1,2-a]吡啶bip-4：3-碘苯并[4,5]咪唑并[1,2-a]吡啶[125i]bip-1：7-[125i]碘-3-苯基苯并[4,5]咪唑并[1,2-a]吡啶[125i]bip-2：3-(4-[125i]碘苯基)苯并[4,5]咪唑并[1,2-a]吡啶[125i]bip-3：7-[125i]碘苯并[4,5]咪唑并[1,2-a]吡啶[125i]bip-4：3-[125i]碘苯并[4,5]咪唑并[1,2-a]吡啶[123i]bip-1：7-[123i]碘-3-苯基苯并[4,5]咪唑并[1,2-a]吡啶[123i]bip-2：3-(4-[123i]碘苯基)苯并[4,5]咪唑并[1,2-a]吡啶[123i]bip-3：7-[123i]碘苯并[4,5]咪唑并[1,2-a]吡啶[123i]bip-4：3-[123i]碘苯并[4,5]咪唑并[1,2-a]吡啶本實施例中，試劑使用了購自nacalaitesque,inc.、東京化成工業(yè)株式會社、和光純藥株式會社、或sigma-aldrich公司的試劑。但是，作為[125i]碘化鈉，使用了購自mpbiomedical,inc及perkinelmerjapanco.,ltd.的[125i]碘化鈉。中壓分取液相色譜裝置使用山善株式會社制的自動設定中壓分取液相色譜系統(tǒng)(epclc-w-prep2xy；送液泵(內部裝有混合器)：no.580d，檢測器(波長固定型)：prepuv-254w，級分收集器(fractoncollector)：fr-260)，并安裝有hi-flashcolumn(填料：硅膠sioh，孔徑：60埃，粒徑：40μm，色譜柱尺寸：l或2l)及injectcolumn(填料：硅膠sioh，孔徑：60埃，粒徑：40μm，色譜柱尺寸：m或l)。nmr使用日本電子公司制jnm-al400的nmr裝置，以四甲基硅烷作為內標物質進行測定。所有化學位移均為δ標度(δ)上的ppm，并且，使用縮寫(s：單峰，d：二重峰，dd：雙二重峰，ddd：三二重峰，m：多重峰)來表示信號的微細裂分。對于質譜分析而言，在大氣壓化學離子化(apci-ms)法中，使用株式會社島津制作所制lcms-2010ev進行測定，在電子離子化質譜分析(ei-ms)中，使用日本電子株式會社制gcmateii進行測定。另外，本實施例中，“室溫”為25℃。各化合物的合成例中，化合物合成中的各步驟根據(jù)需要而重復進行多次，確保了在其他合成中作為中間體等使用時所需要的量。放射性的測定使用了perkinelmer制wallacwizard1470。(實施例1)3-苯基-7-(三丁基甲錫烷基)苯并[4,5]咪唑并[1,2-a]吡啶(放射性碘標記bip-1的標記前體化合物)的合成按照圖1所示的路線，得到放射性碘標記bip-1的標記前體化合物(化合物9)。2-溴-4-苯基吡啶(化合物7)的合成將二甲基氨基乙醇(dmae，1.50ml，15.0mmol)溶解于己烷(20.0ml)，在冰冷卻下進行攪拌。在冰冷卻下一點點滴入正丁基鋰(2.5mol/l己烷溶液，12.0ml，30.0mmol)，在該狀態(tài)下攪拌30分鐘。在冰冷卻下一點點滴入4-苯基吡啶(776mg，5.00mmol)的己烷溶液(30.0ml)，在該狀態(tài)下攪拌1小時。將反應溶液冷卻至-78℃后，一點點滴入四溴化碳(6.30g，18.0mmol)的己烷溶液(15.0ml)，在該狀態(tài)下攪拌50分鐘。在冰冷卻下添加純化水從而停止反應，然后用乙酸乙酯(100ml×2)萃取。用飽和鹽水洗滌有機層后，用無水硫酸鎂脫水，減壓蒸餾除去溶劑。將殘余物供于以乙酸乙酯/己烷(1/4(體積比))作為洗脫溶劑的硅膠柱色譜，以645mg的收量(收率55.1％)得到化合物7。1h-nmr(400mhz，氘代氯仿)δ8.38(d,j＝5.2hz,1h)，7.66-7.67(m,1h)，7.56-7.58(m,2h)，7.42-7.49(m,4h)。7-溴-3-苯基苯并[4,5]咪唑并[1,2-a]吡啶(化合物8)的合成將化合物7(645mg，2.75mmol)溶解于二甲苯(30.0ml)，添加2,4-二溴苯胺(690mg，2.75mmol)、碘化亞銅(105mg，0.550mmol)、碳酸銫(2.67g，8.26mmol)及1,10-菲繞啉(phenanthroline)(198mg，1.10mmol)，然后在攪拌下加熱回流24小時。使反應溶液恢復至室溫，用乙酸乙酯(100ml×2)萃取。用飽和鹽水洗滌有機層后，用無水硫酸鎂脫水，減壓蒸餾除去溶劑。將殘余物供于以乙酸乙酯/己烷(1/4(體積比))作為洗脫溶劑的硅膠柱色譜，以78.4mg的收量(收率8.80％)得到化合物8。1h-nmr(400mhz，氘代氯仿)δ8.47(d,j＝7.2hz,1h)，8.08(s,1h)，7.88(s,1h)，7.77(d,j＝8.7hz,1h)，7.72(d,j＝7.2hz,2h)，7.45-7.55(m,4h)，7.19(d,j＝7.0hz,1h)。3-苯基-7-(三丁基甲錫烷基)苯并[4,5]咪唑并[1,2-a]吡啶(化合物9)的合成將化合物8(95.0mg，0.294mmol)溶解于1,4-二氧雜環(huán)己烷(20.0ml)，添加雙(三丁基錫)(295μl，0.588mmol)、四(三苯基膦)鈀(tetrakistriphenylphosphinepalladium)(146mg，0.126mmol)及三乙胺(16.0ml)，在攪拌下加熱回流3小時。反應結束后，減壓蒸餾除去溶劑。將殘余物供于以乙酸乙酯/己烷(1/2(體積比))作為洗脫溶劑的硅膠柱色譜，以26.7mg的收量(收率17.0％)得到化合物9。1h-nmr(400mhz，氘代氯仿)δ8.48(d,j＝7.3hz,1h)，8.08(s,1h)，7.87-7.89(m,2h)，7.72(d,j＝7.5hz,2h)，7.44-7.53(m,4h)，7.12(dd,j＝7.2,1.7hz,1h)，0.87-1.63(m,27h)。(實施例2)bip-1(化合物10)的合成按照圖1所示的路線，得到bip-1的非放射性化合物(化合物10)。將通過實施例1所示的方法得到的化合物9(24.7mg，0.0463mmol)溶解于氯仿(15.0ml)，添加1.00ml碘的氯仿溶液(50.0mg/ml)并于室溫攪拌1.5小時。用飽和亞硫酸氫鈉水溶液使反應停止后，用氯仿(50.0ml×2)萃取。用飽和鹽水洗滌有機層后，用無水硫酸鎂脫水，減壓蒸餾除去溶劑。將殘余物供于以乙酸乙酯/己烷(1/2(體積比))作為洗脫溶劑的硅膠柱色譜，以10.3mg的收量(收率60.2％)得到化合物10(bip-1)。另外，bip-1是通過從4-苯基吡啶起始的4步反應而以0.496％的收率得到的。1h-nmr(400mhz，dmso-d6)δ9.18(d,j＝7.3hz,1h)，8.19-8.22(m,2h)，7.93-7.99(m,3h)，7.66(dd,j＝8.4,1.4hz,1h)，7.51-7.57(m,2h)，7.46-7.51(m,2h)。hrms(ei)m/zc17h11in2(m+)計算值369.9967，實際值369.9960。(實施例3)3-(4-(三丁基甲錫烷基)苯基)苯并[4,5]咪唑并[1,2-a]吡啶(放射性碘標記bip-2的標記前體化合物)的合成按照圖2所示的路線，得到放射性碘標記bip-2的標記前體化合物(化合物13)。3-溴苯并[4,5]咪唑并[1,2-a]吡啶(化合物11)的合成將2-溴苯胺(855mg，5.00mmol)溶解于二甲苯(5.00ml)，添加2,4-二溴吡啶(1.41g，6.00mmol)、碘化亞銅(191mg，1.00mmol)、碳酸銫(4.89g，15.0mmol)及1,10-菲繞啉(360mg，2.00mmol)，然后在攪拌下加熱回流9.5小時。使反應溶液恢復至室溫，用乙酸乙酯(100ml×2)萃取。用飽和鹽水洗滌有機層后，用無水硫酸鎂脫水，減壓蒸餾除去溶劑。將殘余物供于以乙酸乙酯/己烷(1/4(體積比))作為洗脫溶劑的硅膠柱色譜，以615mg的收量(收率50.0％)得到化合物11。1h-nmr(400mhz，氘代氯仿)δ8.32(d,j＝7.3hz,1h)，7.94(d,j＝8.2hz,1h)，7.86-7.90(m,2h)，7.56(dd,j＝7.3,7.3hz,1h)，7.41(dd,j＝7.3,7.3hz,1h)，6.96(dd,j＝7.1,1.8hz,1h)。3-(4-溴苯基)苯并[4,5]咪唑并[1,2-a]吡啶(化合物12)的合成將化合物11(123mg，0.500mmol)溶解于甲苯(5.00ml)及乙醇(5.00ml)，添加4-溴苯硼酸(100mg，0.500mmol)、四(三苯基膦)鈀(58.0mg，5.00×10-2mmol)及碳酸鉀(14.0mg，0.100mmol)，然后在攪拌下加熱回流11小時。使反應溶液恢復至室溫后，用乙酸乙酯(100ml×2)萃取。用飽和鹽水洗滌有機層后，用無水硫酸鎂脫水，減壓蒸餾除去溶劑。將殘余物供于以乙酸乙酯/己烷(1/4(體積比))作為洗脫溶劑的硅膠柱色譜，以90.0mg的收量(收率55.9％)得到化合物12。1h-nmr(400mhz，dmso-d6)δ9.18(d,j＝7.1hz,1h)，8.35(d,j＝8.0hz,1h)，8.02(s,1h)，7.91(d,j＝7.6hz,2h)，7.82(d,j＝8.5hz,1h)，7.74(d,j＝7.3hz,2h)，7.52(dd,j＝7.3,7.3hz,1h)，7.37-7.42(m,2h)。3-(4-(三丁基甲錫烷基)苯基)苯并[4,5]咪唑并[1,2-a]吡啶(化合物13)的合成將化合物12(90.0mg，0.280mmol)溶解于1,4-二氧雜環(huán)己烷(5.00ml)，添加雙(三丁基錫)(280μl，0.560mmol)、四(三苯基膦)鈀(139mg，0.120mmol)及三乙胺(5.00ml)，在攪拌下加熱回流5小時。反應結束后，減壓蒸餾除去溶劑。將殘余物供于以乙酸乙酯/己烷(1/4(體積比))作為洗脫溶劑的硅膠柱色譜，以70.0mg的收量(收率47.0％)得到化合物13。1h-nmr(400mhz，氘代氯仿)δ8.46(d,j＝7.1hz,1h)，7.87-7.95(m,3h)，7.50-7.68(m,5h)，7.36(dd,j＝8.0,8.0hz,1h)，7.14(dd,j＝7.1,1.1hz,1h)。(實施例4)bip-2(化合物14)的合成按照圖2所示的路線，得到bip-2的非放射性化合物(化合物14)。將通過實施例3所示的方法得到的化合物13(70.0mg，0.130mmol)溶解于氯仿(30.0ml)，添加5.00ml碘的氯仿溶液(50.0mg/ml)，于室溫攪拌1小時。用飽和亞硫酸氫鈉水溶液使反應停止后，用氯仿(100ml×2)萃取。用飽和鹽水洗滌有機層后，用無水硫酸鎂脫水，減壓蒸餾除去溶劑。將殘余物供于以乙酸乙酯/己烷(1/4(體積比))作為洗脫溶劑的硅膠柱色譜，以10.0mg的收量(收率20.6％)得到化合物14(bip-2)。另外，化合物bip-2是通過從2-溴苯胺起始的4步反應而以2.71％的收率得到的。1h-nmr(400mhz，dmso-d6)δ9.60(d,j＝7.1hz,1h)，8.63(d,j＝8.5hz,1h)，8.33(s,1h)，8.00-8.04(m,3h)，7.95(d,j＝8.2hz,1h)，7.86(d,j＝8.7hz,2h)，7.80(dd,j＝7.1,7.1hz,1h)，7.68(dd,j＝7.3,7.3hz,1h)。hrms(ei)m/zc17h11in2(m+)計算值369.9967，實際值369.9970。(實施例5)7-(三丁基甲錫烷基)苯并[4,5]咪唑并[1,2-a]吡啶(放射性碘標記bip-3的標記前體化合物)的合成按照圖3所示的路線，得到放射性碘標記bip-3的標記前體化合物(化合物16)。7-溴苯并[4,5]咪唑并[1,2-a]吡啶(化合物15)的合成將2,5-二溴苯胺(1.24g，5.00mmol)溶解于二甲苯(5.00ml)，添加2-溴吡啶(585μl，6.00mmol)、碘化亞銅(190mg，1.00mmol)、碳酸銫(4.89g，15.0mmol)及1,10-菲繞啉(360mg，2.00mmol)，然后在攪拌下加熱回流22小時。使反應溶液恢復至室溫，用乙酸乙酯(100ml×2)萃取。用飽和鹽水洗滌有機層后，用無水硫酸鎂脫水，減壓蒸餾除去溶劑。將殘余物供于以乙酸乙酯/己烷(1/1(體積比))作為洗脫溶劑的硅膠柱色譜，以834mg的收量(收率67.8％)得到化合物15。1h-nmr(400mhz，氘代氯仿)δ9.12(d,j＝6.7hz,1h)，8.31(d,j＝8.4hz,1h)，8.01(d,j＝1.5hz,1h)，7.69(d,j＝9.3hz,1h)，7.60-7.64(m,1h)，7.52(dd,j＝8.7,1.7hz,1h)，7.06(dd,j＝6.7,6.7hz,1h)。7-(三丁基甲錫烷基)苯并[4,5]咪唑并[1,2-a]吡啶(化合物16)的合成將化合物15(834mg，3.39mmol)溶解于1,4-二氧雜環(huán)己烷(10.0ml)，添加雙(三丁基錫)(3.40ml，6.78mmol)、四(三苯基膦)鈀(1.69g，1.46mmol)及三乙胺(10.0ml)，在攪拌下加熱回流6小時。反應結束后，減壓蒸餾除去溶劑。將殘余物供于以乙酸乙酯/己烷(1/4(體積比))作為洗脫溶劑的硅膠柱色譜，以510mg的收量(收率32.8％)得到化合物16。1h-nmr(400mhz，氘代氯仿)δ8.46(d,j＝7.0hz,1h)，8.08(s,1h)，7.88(d,j＝8.1hz,1h)，7.69(d,j＝9.3hz,1h)，7.45(d,j＝8.1hz,1h)，7.40-7.42(m,1h)，6.84(dd,j＝7.0,7.0hz,1h)，0.87-1.64(m,27h)。(實施例6)bip-3(化合物17)的合成按照圖3所示的路線，得到bip-3的非放射性化合物(化合物17)。將通過實施例5所示的方法得到的化合物16(510mg，1.11mmol)溶解于氯仿(100ml)，添加10.0ml碘的氯仿溶液(50.0mg/ml)，于室溫攪拌11小時。用飽和亞硫酸氫鈉水溶液使反應停止后，用氯仿(100ml×2)萃取。用飽和鹽水洗滌有機層后，用無水硫酸鎂脫水，減壓蒸餾除去溶劑。將殘余物供于以乙酸乙酯/己烷(1/1(體積比))作為洗脫溶劑的硅膠柱色譜，以210mg的收量(收率64.2％)得到化合物17(bip-3)。另外，bip-3是通過從2,5-二溴苯胺起始的3步反應而以14.3％的收率得到的。1h-nmr(400mhz,dmso-d6)δ9.10(dd,j＝6.7,0.9hz,1h)，8.17-8.19(m,2h)，7.59-7.70(m,3h)，7.05(dd,j＝6.7,6.7hz,1h)。hrms(ei)m/zc11h7in2(m+)計算值293.9654，實際值293.9660。(實施例7)3-(三丁基甲錫烷基)苯并[4,5]咪唑并[1,2-a]吡啶(放射性碘標記bip-4的標記前體化合物)的合成按照圖4所示的路線，得到放射性碘標記bip-4的標記前體化合物(化合物18)。將通過實施例3所示的方法得到的化合物11(182mg，0.740mmol)溶解于1,4-二氧雜環(huán)己烷(10.0ml)，添加雙(三丁基錫)(741μl，1.48mmol)、四(三苯基膦)鈀(368mg，0.320mmol)及三乙胺(10.0ml)，在攪拌下加熱回流19.5小時。在反應結束后減壓蒸餾除去溶劑。將殘余物供于以乙酸乙酯/己烷(1/4(體積比))作為洗脫溶劑的硅膠柱色譜，以140mg的收量(收率41.3％)得到化合物18。1h-nmr(400mhz，氘代氯仿)δ8.29(d,j＝6.6hz,1h)，7.76-7.86(m,3h)，7.44(dd,j＝8.2,8.2hz,1h)，7.26(dd,j＝8.0,8.0hz,1h)，6.82(d,j＝6.6hz,1h)，0.79-1.60(m,27h)。(實施例8)bip-4(化合物19)的合成按照圖4所示的路線，得到bip-4的非放射性化合物(化合物19)。將通過實施例7所示的方法得到的化合物18(140mg，0.310mmol)溶解于氯仿(30.0ml)，添加5.00ml碘的氯仿溶液(50.0mg/ml)，于室溫攪拌1.5小時。用飽和亞硫酸氫鈉水溶液使反應停止后，用氯仿(100ml×2)萃取。用飽和鹽水洗滌有機層后，用無水硫酸鎂脫水，減壓蒸餾除去溶劑。將殘余物供于以乙酸乙酯/己烷(1/4(體積比))作為洗脫溶劑的硅膠柱色譜，以50.0mg的收量(收率55.7％)得到化合物19。另外，bip-4是通過從2-溴苯胺起始的3步反應而以11.5％的收率得到的。1h-nmr(400mhz，dmso-d6)δ8.91(d,j＝7.3hz,1h)，8.31(d,j＝8.2hz,1h)，8.18(s,1h)，7.81(d,j＝8.2hz,1h)，7.53(ddd,j＝7.1,7.1,0.9hz,1h)，7.39(ddd,j＝8.2,8.2,0.9,1h)，7.28(dd,j＝7.1,1.6hz,1h)。hrms(ei)m/zc11h7in2(m+)計算值293.9654，實際值293.9652。(實施例9)[125i]bip-1～4的合成按照圖5所示的路線，得到[125i]bip-1～4。具體而言，添加[125i]碘化鈉(3.7～7.4mbq，比放射性81.4tbq/mmol)，向1mol/l鹽酸(100μl)、3％(v/v)過氧化氫水溶液(100μl)中添加通過實施例1所示的方法得到的化合物9、通過實施例5所示的方法得到的化合物16、通過實施例7所示的方法得到的化合物18的乙醇溶液、或通過實施例3所示的方法得到的化合物13的含有0.1％(v/v)乙酸的甲醇溶液(1.00mg/ml，200μl)。于室溫反應40分鐘后，添加飽和亞硫酸氫鈉水溶液(200μl)作為還原劑，使反應停止。添加飽和碳酸氫鈉水溶液(200μl)，將反應液中和后，用乙酸乙酯萃取。通過填充有無水硫酸鈉的色譜柱進行脫水后，蒸餾除去溶劑。將通過實施例2、4、6、8所示的方法得到的對應的非放射性化合物bip-1～4作為標準品，使用反相高效液相色譜(hplc)進行純化，用乙酸乙酯萃取。hplc使用株式會社島津制作所制lc-20ad，作為檢測器，使用了紫外光譜檢測器spd-20a和hitachi-alokamedical株式會社制閃爍測定儀(scintillationsurveymeter)tcs-172。hplc用色譜柱使用了nacalaitesque,inc.制cosmosil5c18-ar-ii(4.6mmi.d.×150mm)。反相hplc的流動相及保留時間示于表1。通過填充有無水硫酸鈉的色譜柱進行脫水后，蒸餾除去溶劑。以45～85％的放射化學收率、99％以上的放射化學純度得到了[125i]bip-1～4的各化合物。[表1]表1(實施例10)[123i]bip-1～4的合成在實施例9中，使用37～111mbq的[123i]碘化鈉(111mbq/10μl)代替[125i]碘化鈉，除此以外，同樣地操作，得到[123i]bip-1～4。[評價1]使用了阿爾茨海默病患者剖檢腦組織的體外放射自顯影(1)體外放射自顯影使用了由京都大學醫(yī)學研究科提供的阿爾茨海默病(ad)患者剖檢腦組織切片(76歲，男性，額葉部位和顳葉部位，6μm)。通過二甲苯洗滌(15分鐘×2)、乙醇(1分鐘×2)、90體積％乙醇水溶液(1分鐘×1)、80體積％乙醇水溶液(1分鐘×1)、70體積％乙醇水溶液(1分鐘×1)及純化水洗滌(2.5分鐘×2)而進行脫石蠟處理。添加通過實施例9所示的方法得到的[125i]bip-1～4的10體積％或50體積％乙醇水溶液(370kbq/ml)，于室溫孵育2小時。用50體積％乙醇水溶液(2小時×1)洗滌后，在成像板(fujifilmcorporation制bas-sr2025)上曝光12小時，用生物成像分析儀(fujifilmcorporation制bio-imaginganalyzerbas-5000)進行分析。定量分析中使用了fujifilmcorporation制multigauge。其結果示于圖6。圖6e、f表示使用了[125i]bip-1的結果，圖6g、h表示使用了[125i]bip-2的結果，圖6i、j表示使用了[125i]bip-3的結果，圖6k、l表示使用了[125i]bip-4的結果。圖6e、g、i、k表示使用了顳葉的腦組織切片的結果，圖6f、h、j、l表示使用了額葉的腦組織切片的結果。如圖6f、h所示，對于[125i]bip-1及[125i]bip-2而言，在額葉的腦組織切片中均確認不到放射性集聚，由此表明，它們對于β淀粉樣蛋白(aβ)的結合親和性低。另一方面，如圖6e、g所示，[125i]bip-1及[125i]bip-2向顳葉的腦灰質中的放射性集聚得以維持，表明它們對tau具有結合親和性。另外，這些化合物向腦白質的非特異性結合低，結果，得到了灰質與白質的對比度高的圖像。此外，如圖6i、j、k、l所示，[125i]bip-3及[125i]bip-4也得到了與[125i]bip-1及[125i]bip-2相同的圖像。根據(jù)以上結果，較之aβ而言，[125i]bip-1～4具有對于tau的選擇結合性，此外，其向白質的非特異性集聚低，因此，顯示出了有望用作tau顯像探針的骨架的可能性。(2)使用了ad患者剖檢腦組織切片的免疫染色使用與放射自顯影中使用的腦切片接近的切片，實施老年斑(sp)及神經原纖維纏結(nft)的染色。sp的免疫染色時的一抗使用了抗aβ1-42單克隆抗體(bc05，wako公司制)，nft的免疫染色時的抗體使用了抗磷酸化tau單克隆抗體(at8，thermoscientfic公司制)。通過二甲苯洗滌(15分鐘×2)、乙醇(1分鐘×2)、90體積％乙醇水溶液(1分鐘×1)、80體積％乙醇水溶液(1分鐘×1)、70體積％乙醇水溶液(1分鐘×1)及純化水洗滌(2.5分鐘×2)而進行脫石蠟處理。對于抗原的活化而言，進行0.01mol/l檸檬酸緩沖液(ph6.0)中的高壓釜處理(15分鐘)及甲酸處理(5分鐘)。用流水洗滌(5分鐘)后，用pbs-吐溫(tween)20洗滌(2分鐘×1)。于室溫與一抗溶液反應1小時后，用pbs-吐溫20洗滌(5分鐘×3)。于室溫與histofinesimplestainmax-po(multi)(nichireibiosciencesinc.制)反應30分鐘后，用pbs-吐溫20(3分鐘×3)及tbs(5分鐘×1)洗滌。最后，于室溫與dab溶液反應1分鐘。用蒸餾水(1分鐘×1)洗滌，使反應停止。封入腦組織切片后，用顯微鏡(株式會社keyence制bz-9000)進行觀察。圖7m為tau抗體的免疫染色的結果，圖7o為aβ抗體的免疫染色的結果。圖7n為圖6i的放大圖像。將利用[125i]bip-3而得到的顳葉的體外放射自顯影的放大圖像與tau及aβ的免疫染色圖像進行比較，結果，較之aβ的蓄積(圖7o)而言，[125i]bip-3向顳葉腦組織切片上的放射性集聚(圖7n)與tau的蓄積(圖7m)相對應，由此確認到，[125i]bip-3清楚地描繪出了在ad腦內蓄積的tau。關于[125i]bip-3，使用multigauge對集聚于腦組織切片上的放射性進行定量分析，對其與tau及aβ的免疫染色陽性部位的相關關系進行評價。如圖8所示的那樣，將額葉劃分成a.扣帶回、b.直回、c.額下回、d.額上回這4個部位，如圖9所示的那樣，將顳葉劃分成e.顳橫回、f.顳上回、g.顳中回、h.顳下回、i.海馬旁回、j.海馬體這6個部位。算出tau及aβ的免疫染色陽性部位在各部位整體面積中所占的比例，結果，定量地顯示了在額葉中僅有aβ的蓄積(圖10a～d)。另一方面，結果顯示，在顳葉中，與aβ相比，tau的免疫染色陽性部位的比例更高(圖10e～j)。將tau及aβ的免疫染色陽性部位的比例與[125i]bip-3的放射性集聚進行比較，結果，[125i]bip-3向額葉的放射性集聚低(圖10a～d)，而向顳葉的放射性集聚高于額葉的放射性集聚(圖10e～j)，由此表明，較之aβ而言，[125i]bip-3向腦組織切片上的放射性集聚與tau的蓄積比例更為相關。[評價2]腦內行為的比較將通過實施例9所示的方法得到的[125i]bip-1～4用含有10體積％乙醇及0.1體積％吐溫80的生理鹽水進行稀釋。向1組5只的5周齡ddy系雄性小鼠(26-28g)，經由尾靜脈以每1只為25.0-37.5kbq(100μl)的量分別施予[125i]bip-1～4，在2、10、30、60分鐘后處死，采血后，取出腦，測定重量和放射性。另外，關于[125i]bip-3，摘取主要的臟器，測定重量和放射性。其結果示于表2及圖11。表2中，對應施予后時間而示出的數(shù)值為％id/g的平均值，括號內示出標準偏差(sd)。[125i]bip-1～4顯示出施予早期的高的腦移行性及之后從腦中的快速消失。其中，施予[125i]bip-3后2分鐘時的腦內放射性(brain2min)為4.74％id/g。另外，對于[125i]bip-3而言，施予后2分鐘和60分鐘時的腦內放射性之比(brain2min/60min)為79.0，顯示出其具有良好的腦內行為。[表2]表2另外，將實施[125i]bip-3的體內放射性分布實驗的結果示于表3。表3中，對應施予后時間而示出的數(shù)值中，胃及甲狀腺為％id的平均值，除此以外的組織為％id/g的平均值，括號內示出標準偏差(sd)。施予2分鐘后向腎臟的攝入(23.7％id/g)和向肝臟的攝入(19.9％id/g)為同等程度。另外，施予60分鐘后的向腸的攝入為29.4％id/g，顯示出了從肝臟緩緩排泄至腸的行為。另外，向甲狀腺的攝入在施予60分鐘后仍為0.22％id，脫碘過程中向甲狀腺的集聚較低，由此暗示了在生物體內并未發(fā)生顯著的脫碘。[表3]表3[評價3][125i]bip-3的血漿中穩(wěn)定性評價用異氟烷將ddy小鼠(5周齡，體重為25-28g)麻醉，進行心臟采血。將采集的血液以4000×g離心分離10分鐘，回收上清液。將通過實施例9所示的方法得到的[125i]bip-3(188kbq，10.0μl，乙醇溶液)及小鼠血漿樣品(200μl)混合。于37℃孵育1小時，添加乙腈(400μl)后以4000×g離心分離10分鐘。回收上清液，用cosmonicefilter(s)(0.45μm，4mm)(nacalaitesque,inc.)處理，然后利用反相hplc進行分析。需要說明的是，hplc的分析條件與實施例9中使用的條件相同。對小鼠血漿中的[125i]bip-3的穩(wěn)定性進行了評價。將在小鼠血漿中孵育1小時后的樣品利用反相hplc進行分析，結果，僅檢測到未變化體的峰(圖12)。由以上結果表明，在小鼠血漿中，[125i]bip-3到1小時為止仍穩(wěn)定地存在。[評價4]logp值測定向裝有1-辛醇(3.00ml)及0.1mol/l磷酸緩沖液(ph7.4，3.00ml)的離心管中添加通過實施例9所示的方法得到的[125i]bip-1～4(125kbq)，振蕩混合(vortex)2分鐘后，以4,000×g離心分離10分鐘。從各層中分別采集500μl溶液后，測定各自的放射性，由1-辛醇/磷酸緩沖液的放射性比求出分配系數(shù)。將結果示于表4。[表4]表4化合物logp[125i]bip-12.64[125i]bip-22.61[125i]bip-33.22[125i]bip-42.35[評價5][123i]bip-3的血液中代謝物質分析作為正常小鼠，使用了5周齡、雄性的ddy小鼠。經由尾靜脈施予通過實施例10所示的方法得到的[123i]bip-3的含有0.1體積％吐溫80及10體積％乙醇的生理鹽水(3.70mbq，100μl)。在施予后2分鐘、10分鐘、30分鐘后處死，將血液采集至內壁涂布有肝素鈉注射液(nipropharmacorporation制)的試驗管中。在測定放射性后將血液以4℃、4000×g的條件離心5分鐘，分離成血漿和細胞成分。添加得到的血漿的2倍體積的甲醇使蛋白質變性，以4℃、4000×g的條件離心5分鐘。將得到的上清液通過cosmonicefilter(s)(0.45μm，4mm)(nacalaitesque,inc.)，利用反相hplc進行分析。需要說明的是，hplc的分析條件與實施例9中使用的條件相同。結果示于圖13及表5。表5中，未變化體的比例以試驗數(shù)量為3的平均值±標準誤差表示。該結果暗示了[123i]bip-3在被施予至小鼠后生成了比未變化體的水溶性更高的代謝物質(圖13)。另外，未變化體以表5所示的比例存在于血液中。[表5]表5[評價6][123i]bip-3的腦內代謝物質分析作為正常小鼠，使用了5周齡、雄性的ddy小鼠。經由尾靜脈施予通過實施例10所示的方法得到的[123i]bip-3的含有0.1體積％吐溫80及10體積％乙醇的生理鹽水(3.70mbq，100μl)，在2分鐘后處死，摘取腦并在甲醇(2.00ml)及tbs(2.00ml)中進行均質化，以4000×g、4℃的條件離心分離10分鐘后，采集上清液。將得到的上清液通過cosmonicefilter(s)(0.45μm，4mm)(nacalaitesque,inc.)，利用反相hplc進行分析。需要說明的是，hplc的分析條件與實施例9中使用的條件相同。將結果示于圖14。利用反相hplc對腦勻漿進行分析，結果，僅檢測到未變化體的單峰，由此表明，[123i]bip-3在小鼠腦內穩(wěn)定地存在。另外，還暗示了在血液樣品中檢測到的代謝物質不會向腦內移行。由以上所示的結果表明，本發(fā)明涉及的放射性碘標記化合物能夠選擇性且非侵入性地將腦內tau蛋白圖像化。本申請基于2015年3月4日提出申請的日本專利申請?zhí)卦?015-042748號主張優(yōu)先權，并將其全部公開內容并入本說明書中。當前第1頁12