本發(fā)明涉及一種細(xì)胞培養(yǎng)技術(shù)，特別涉及使用多個培養(yǎng)容器和培養(yǎng)基供給容器時的容器間的送液方法。

背景技術(shù)：

近年來，在藥品的生產(chǎn)、或基因治療、再生醫(yī)療、免疫療法等領(lǐng)域中，要求在人工的環(huán)境下高效大量地培養(yǎng)細(xì)胞或組織、微生物等。在這樣的細(xì)胞培養(yǎng)中，有時采用將多個容器用管道連接而構(gòu)成封閉體系的環(huán)境、在這些多個容器間進(jìn)行送液的方法。

具體而言，例如如下實行，即，將多個培養(yǎng)袋和培養(yǎng)基供給袋用管道連接，從培養(yǎng)基供給袋向培養(yǎng)袋移送培養(yǎng)基，在培養(yǎng)袋中培養(yǎng)細(xì)胞，將包含培養(yǎng)了的細(xì)胞及培養(yǎng)基的培養(yǎng)液(以下將包含細(xì)胞和培養(yǎng)基的液體稱作培養(yǎng)液)移送到培養(yǎng)面積更大的培養(yǎng)袋，使細(xì)胞進(jìn)一步增殖等。

此時，如果為了在多個袋間移送內(nèi)容物，而在每個袋間設(shè)置泵，則能夠高效地進(jìn)行內(nèi)容物的移送。然而，該方法中，存在有成本升高、并且需要復(fù)雜的控制機構(gòu)和大量設(shè)備的問題。

另一方面，通過使管道分支，能夠減少泵的臺數(shù)。然而，該情況下，為了控制分支了的管道的流路，需要夾管閥等，仍然存在有需要復(fù)雜的控制機構(gòu)和大量設(shè)備的問題。

在此，專利文獻(xiàn)1中，公開過用于在自動細(xì)胞培養(yǎng)裝置中使用的細(xì)胞培養(yǎng)用的容器組件。根據(jù)該細(xì)胞培養(yǎng)用組件，能夠在維持封閉體系的同時進(jìn)行細(xì)胞培養(yǎng)中的細(xì)胞的注入、培養(yǎng)基追加、取樣、甚至回收。

專利文獻(xiàn)1：國際公開2013/114845號小冊子

技術(shù)實現(xiàn)要素：

發(fā)明所要解決的問題

然而，該細(xì)胞培養(yǎng)用組件并非為了簡化細(xì)胞培養(yǎng)中的流路的控制機構(gòu)而設(shè)計的組件。因此，在控制多個容器間的流路時，需要使用1個或多個泵，并且使用多個夾子，存在有流路的控制機構(gòu)略為復(fù)雜的問題。

因而，本發(fā)明人等進(jìn)行了深入研究，將多個容器用三通閥連接，并且將培養(yǎng)容器依送液的順序設(shè)置落差地配置，由此成功地僅使用1臺泵來簡便地控制流路，從而完成了本發(fā)明。

根據(jù)這樣的本發(fā)明，可以利用泵進(jìn)行從培養(yǎng)基供給容器向培養(yǎng)容器的培養(yǎng)基的移送，利用自然送液進(jìn)行多個培養(yǎng)容器間的培養(yǎng)液的移送。另外，可以不需要夾管閥、夾子等，能夠大幅度簡化控制機構(gòu)。

本發(fā)明是鑒于上述事情而完成的，目的在于，提供一種細(xì)胞培養(yǎng)中的多個容器間的送液方法，該方法能夠簡化使用多個容器進(jìn)行細(xì)胞培養(yǎng)時的容器間的流路控制。

用于解決問題的方法

本發(fā)明的細(xì)胞培養(yǎng)中的多個容器間的送液方法是使用具備一個端口的培養(yǎng)基供給容器、和各自具備一個被從所述培養(yǎng)基供給容器供給培養(yǎng)基的內(nèi)容物移送用的端口的多個培養(yǎng)容器的細(xì)胞培養(yǎng)中的多個容器間的送液方法，將所述多個培養(yǎng)容器中的第一培養(yǎng)容器與三通閥與所述培養(yǎng)基供給容器利用管道連接，在所述三通閥與所述培養(yǎng)基供給容器之間配置1個泵，并且在所述多個培養(yǎng)容器中的培養(yǎng)容器的個數(shù)為2個的情況下，將所述三通閥與所述多個培養(yǎng)容器中的第二培養(yǎng)容器利用管道連接，在所述多個培養(yǎng)容器中的培養(yǎng)容器的個數(shù)為3個以上的情況下，在最近處連接的培養(yǎng)容器與三通閥之間的管道中具備新的三通閥，將該新的三通閥與下一個培養(yǎng)容器利用管道連接，反復(fù)進(jìn)行該操作，將全部的培養(yǎng)容器與三通閥連接，從所述培養(yǎng)基供給容器經(jīng)由三通閥，利用泵向所述多個培養(yǎng)容器中的各培養(yǎng)容器移送培養(yǎng)基。

發(fā)明效果

根據(jù)本發(fā)明，能夠簡化使用多個容器進(jìn)行細(xì)胞培養(yǎng)時的容器間的流路控制。

附圖說明

圖1是表示本發(fā)明的第一實施方式的細(xì)胞培養(yǎng)中的多個容器間的送液方法中所用的容器的連接關(guān)系的主視圖。

圖2是表示本發(fā)明的第一實施方式的細(xì)胞培養(yǎng)中的多個容器間的送液方法中所用的容器的連接關(guān)系的俯視圖。

圖3是表示本發(fā)明的第二實施方式的細(xì)胞培養(yǎng)中的多個容器間的送液方法中所用的容器的連接關(guān)系的主視圖。

圖4是表示本發(fā)明的第三實施方式的細(xì)胞培養(yǎng)中的多個容器間的送液方法中所用的容器的連接關(guān)系的主視圖。

具體實施方式

以下，在參照附圖的同時，對本發(fā)明的細(xì)胞培養(yǎng)中的多個容器間的送液方法的優(yōu)選的實施方式進(jìn)行說明。

首先，對本發(fā)明的實施方式的細(xì)胞培養(yǎng)中的多個容器間的送液方法的特征進(jìn)行概述。

本發(fā)明的實施方式的細(xì)胞培養(yǎng)中的多個容器間的送液方法的特征在于，是使用具備一個端口的培養(yǎng)基供給容器、和各自具備一個被從培養(yǎng)基供給容器供給培養(yǎng)基的內(nèi)容物移送用的端口的多個培養(yǎng)容器的細(xì)胞培養(yǎng)中的多個容器間的送液方法，其中，將多個培養(yǎng)容器中的第一培養(yǎng)容器與三通閥與培養(yǎng)基供給容器利用管道連接，在三通閥與培養(yǎng)基供給容器之間配置1個泵，并且在多個培養(yǎng)容器中的培養(yǎng)容器的個數(shù)為2個的情況下，將三通閥與多個培養(yǎng)容器中的第二培養(yǎng)容器利用管道連接，在多個培養(yǎng)容器中的培養(yǎng)容器的個數(shù)為3個以上的情況下，在最近處連接的培養(yǎng)容器與三通閥之間的管道中具備新的三通閥，將該新的三通閥與下一個培養(yǎng)容器利用管道連接，反復(fù)進(jìn)行該操作，將全部的培養(yǎng)容器與三通閥連接，從培養(yǎng)基供給容器經(jīng)由三通閥，利用泵向多個培養(yǎng)容器中的各培養(yǎng)容器移送培養(yǎng)基。

另外，優(yōu)選將本發(fā)明的實施方式的細(xì)胞培養(yǎng)中的多個容器間的送液方法設(shè)為如下的方法，即，將多個培養(yǎng)容器中的各培養(yǎng)容器配置為在先連接的培養(yǎng)容器的水平位置高于在后連接的培養(yǎng)容器的水平位置，利用基于水平位置的落差的自然送液，進(jìn)行從在先連接的培養(yǎng)容器向在后連接的培養(yǎng)容器的送液。

此外，也優(yōu)選將本發(fā)明的實施方式的細(xì)胞培養(yǎng)中的多個容器間的送液方法設(shè)為如下的方法，即，從在最后連接的培養(yǎng)容器經(jīng)由三通閥利用泵向培養(yǎng)基供給容器移送培養(yǎng)液的上清液或培養(yǎng)液。

另外，也優(yōu)選將本發(fā)明的實施方式的細(xì)胞培養(yǎng)中的多個容器間的送液方法設(shè)為如下的方法，即，在培養(yǎng)基供給容器與泵之間的管道中具備三通閥，在培養(yǎng)基供給容器處分別經(jīng)由三通閥利用管道連接具備一個端口的一個或兩個以上的另外的培養(yǎng)基供給容器，從這些培養(yǎng)基供給容器經(jīng)由三通閥利用泵向多個培養(yǎng)容器中的各培養(yǎng)容器移送培養(yǎng)基。

根據(jù)這樣的本發(fā)明的實施方式的細(xì)胞培養(yǎng)中的多個容器間的送液方法，通過在封閉體系的細(xì)胞培養(yǎng)系統(tǒng)中僅使用1臺泵，就能夠恰當(dāng)?shù)乜刂屏髀贰?/p>

即，該方法中，將多個容器用三通閥和1個泵連接，并且將培養(yǎng)容器依送液的順序設(shè)置落差地配置。

因此，就可以利用泵進(jìn)行從培養(yǎng)基供給容器向培養(yǎng)容器的培養(yǎng)基的移送，并且能夠利用基于培養(yǎng)容器的水平位置的落差的自然送液進(jìn)行多個培養(yǎng)容器間的培養(yǎng)液的移送。另外，根據(jù)該方法，由于不需要夾管閥、夾子等，因此能夠大幅度簡化以往的煩雜的流路的控制機構(gòu)。

(第一實施方式)

下面，參照圖1及圖2，對本發(fā)明的第一實施方式的細(xì)胞培養(yǎng)中的多個容器間的送液方法進(jìn)行說明。圖1是表示本實施方式的細(xì)胞培養(yǎng)中的多個容器間的送液方法中所用的容器的連接關(guān)系的主視圖，圖2是表示本實施方式的細(xì)胞培養(yǎng)中的多個容器間的送液方法中所用的容器的連接關(guān)系的俯視圖。

在本實施方式中所用的細(xì)胞培養(yǎng)系統(tǒng)中，具備2個培養(yǎng)容器。

即，如圖1及圖2所示，本實施方式中所用的細(xì)胞培養(yǎng)系統(tǒng)具備培養(yǎng)容器1、培養(yǎng)容器1a、培養(yǎng)基供給容器2、三通閥3、泵4、以及連接它們的管道5。

培養(yǎng)容器1與培養(yǎng)容器1a與培養(yǎng)基供給容器2被經(jīng)由三通閥3利用管道5連接。在各容器中，具備一個用于與其他的容器進(jìn)行內(nèi)容物的移送的端口，在該端口處連接有管道5。

另外，在三通閥3與培養(yǎng)基供給容器2之間的管道5中安裝有泵4。

此外，用于最先進(jìn)行培養(yǎng)的(在先連接的)培養(yǎng)容器1的水平位置被配置為高于用于其后進(jìn)行培養(yǎng)的(在后連接的)培養(yǎng)容器1a的水平位置。

在使用這樣的細(xì)胞培養(yǎng)系統(tǒng)時，在無菌環(huán)境下向培養(yǎng)容器1中注入包含細(xì)胞及培養(yǎng)基的培養(yǎng)液，將培養(yǎng)容器1、培養(yǎng)容器1a、培養(yǎng)基供給容器2和三通閥3用管道5連接而構(gòu)成封閉體系。

另外，在培養(yǎng)基供給容器2與三通閥3之間安裝配置泵4。此外，將培養(yǎng)容器1的水平位置配置為高于培養(yǎng)容器1a的水平位置。而且，從培養(yǎng)基供給容器2經(jīng)由三通閥3利用泵4向培養(yǎng)容器1移送培養(yǎng)基，在培養(yǎng)容器1中進(jìn)行細(xì)胞的培養(yǎng)。

當(dāng)培養(yǎng)容器1中的細(xì)胞培養(yǎng)結(jié)束時，繼而就從培養(yǎng)容器1利用自然送液向培養(yǎng)容器1a移送培養(yǎng)液，從培養(yǎng)基供給容器2經(jīng)由三通閥3，利用泵4向培養(yǎng)容器1a移送培養(yǎng)基，在培養(yǎng)容器1a中進(jìn)行細(xì)胞的培養(yǎng)。

此時，優(yōu)選在自然送液之前，攪拌培養(yǎng)容器內(nèi)的培養(yǎng)液。另外，優(yōu)選在進(jìn)行自然送液時，傾斜載放有培養(yǎng)容器的架臺，使得培養(yǎng)容器的端口為下。如果如此操作，則能夠高效地進(jìn)行培養(yǎng)容器間的自然送液。有關(guān)這樣的自然送液的方法在以下的實施方式中也可以同樣地進(jìn)行。

此外，該情況下，為了將培養(yǎng)基加溫，也可以從培養(yǎng)基供給容器2經(jīng)由三通閥3，利用泵4先向培養(yǎng)容器1移送培養(yǎng)基，在培養(yǎng)容器1中培養(yǎng)基被充分地加溫后，將培養(yǎng)基利用自然送液向培養(yǎng)容器1a移送。對于以下的實施方式的各個培養(yǎng)容器也可以同樣地進(jìn)行這樣的培養(yǎng)基的加溫。

當(dāng)培養(yǎng)容器1a中的細(xì)胞培養(yǎng)結(jié)束時，即從培養(yǎng)容器1a經(jīng)由管道5和三通閥3，利用泵4向變空了的培養(yǎng)基供給容器2移送培養(yǎng)液的上清液，可以將培養(yǎng)容器1a中的培養(yǎng)液濃縮。另外，同樣地也可以從培養(yǎng)容器1a向培養(yǎng)基供給容器2移送培養(yǎng)液。

對于培養(yǎng)容器的容量及培養(yǎng)面積，為了能夠培養(yǎng)像后面連接的培養(yǎng)容器那樣多的細(xì)胞，優(yōu)選像后面連接的培養(yǎng)容器那樣增大。

培養(yǎng)容器1及培養(yǎng)容器1a優(yōu)選以軟包裝材料為材料制成袋狀(袋型)，為了可以確認(rèn)內(nèi)容物，優(yōu)選一部分或全部具有透明性。

另外，這些培養(yǎng)容器需要具有細(xì)胞的培養(yǎng)所必需的透氣性(氧氣及二氧化碳透過性)，優(yōu)選在37℃、5％二氧化碳濃度的培養(yǎng)環(huán)境下使用。此外，為了實現(xiàn)高的細(xì)胞增殖效率，這些培養(yǎng)容器優(yōu)選具有低細(xì)胞毒性、低溶出性、以及輻照滅菌適應(yīng)性。

作為滿足這樣的條件的培養(yǎng)容器的材料，優(yōu)選聚乙烯系樹脂。作為該聚乙烯系樹脂，可以舉出聚乙烯、乙烯與α－烯烴的共聚物、乙烯與乙酸乙烯酯的共聚物、使用了乙烯和丙烯酸或甲基丙烯酸共聚物和金屬離子的離聚物等。另外，也可以使用聚烯烴、苯乙烯系彈性體、聚酯系熱塑性彈性體、硅酮系熱塑性彈性體、硅酮樹脂等。

可以采用培養(yǎng)容器的四邊被利用熱封密封了的容器。培養(yǎng)容器2的收容部的形狀可以設(shè)為長方形，另外也優(yōu)選如圖2所示，以隨著朝向端口逐漸變窄的方式構(gòu)成。而且，培養(yǎng)容器也可以是借助吹塑成形的一體成型袋。

為了不使所存放的培養(yǎng)基的ph在培養(yǎng)期間中大幅度變化，培養(yǎng)基供給容器2優(yōu)選具有對氧氣及二氧化碳的阻氣性。這是因為，為了避免培養(yǎng)基中所含的高濃度的二氧化碳?xì)怏w向空氣中釋出，培養(yǎng)基中的二氧化碳?xì)怏w濃度降低，結(jié)果使得ph升高，最好盡可能減少二氧化碳從培養(yǎng)基供給容器2的內(nèi)部向外部漏出。另外還因為，最好防止培養(yǎng)基的氧化。

三通閥3的種類沒有特別限定，然而由于容易實現(xiàn)細(xì)胞培養(yǎng)系統(tǒng)中的封閉體系，因此可以合適地使用封閉式三通閥。

另外，泵4的種類也沒有特別限定，然而從相同的觀點考慮，可以合適地使用蠕動泵(r)等軟管滾輪泵。

管道5的材料只要與使用環(huán)境匹配地適當(dāng)選擇即可，在co2培養(yǎng)箱內(nèi)使用的情況下，尤其優(yōu)選對于氧氣及二氧化碳的透氣性優(yōu)異的材料。在co2培養(yǎng)箱外使用的情況下，優(yōu)選阻氣性優(yōu)異的材料。例如可以使用硅橡膠、軟質(zhì)氯乙烯樹脂、聚丁二烯樹脂、乙烯－乙酸乙烯酯共聚物、氯代聚乙烯樹脂、聚氨酯系熱塑性彈性體、聚酯系熱塑性彈性體、硅酮系熱塑性彈性體、苯乙烯系彈性體等。另外，作為苯乙烯系彈性體，例如可以使用sbs(苯乙烯·丁二烯·苯乙烯)、sis(苯乙烯·異戊二烯·苯乙烯)、sebs(苯乙烯·乙烯·丁烯·苯乙烯)、seps(苯乙烯·乙烯·丙烯·苯乙烯)等。

特別是，在管道5中的安裝泵的部分，可以合適地使用硅酮管道，在其他的部分可以合適地使用軟質(zhì)氯乙烯樹脂管道。

本實施方式的培養(yǎng)細(xì)胞的種類沒有特別限定，例如能夠合適地培養(yǎng)淋巴細(xì)胞等懸浮系細(xì)胞、或皮膚細(xì)胞、角膜細(xì)胞、血管內(nèi)皮細(xì)胞、間葉系干細(xì)胞等貼壁系細(xì)胞。

(第二實施方式)

下面，參照圖3，對本發(fā)明的第二實施方式的細(xì)胞培養(yǎng)中的多個容器間的送液方法進(jìn)行說明。圖3是表示本實施方式的細(xì)胞培養(yǎng)中的多個容器間的送液方法中所用的容器的連接關(guān)系的主視圖。

在本實施方式中所用的細(xì)胞培養(yǎng)系統(tǒng)中，具備3個培養(yǎng)容器。

即，如圖3所示，本實施方式中所用的細(xì)胞培養(yǎng)系統(tǒng)具備培養(yǎng)容器1、培養(yǎng)容器1a、培養(yǎng)容器1b、培養(yǎng)基供給容器2、三通閥3、三通閥3a、泵4、以及連接它們的管道5。

培養(yǎng)容器1、培養(yǎng)容器1a和培養(yǎng)基供給容器2與第一實施方式相同，被經(jīng)由三通閥3利用管道5連接。另外，三通閥3與三通閥3a被利用管道5連接，培養(yǎng)容器1a、三通閥3a和培養(yǎng)容器1b被利用管道5連接。在各容器中，具備一個用于與其他的容器進(jìn)行內(nèi)容物的移送的端口，在該端口處連接有管道5。

另外，在三通閥3與培養(yǎng)基供給容器2之間的管道5中安裝有泵4。

此外，用于最先進(jìn)行培養(yǎng)的(在先連接的)培養(yǎng)容器1的水平位置被配置為高于用于其后進(jìn)行培養(yǎng)的(在后連接的)培養(yǎng)容器1a的水平位置，培養(yǎng)容器1a的水平位置被配置為高于用于其后進(jìn)行培養(yǎng)的(進(jìn)一步在后連接的)培養(yǎng)容器1b的水平位置。

而且，本實施方式中，也可以設(shè)置4個以上的培養(yǎng)容器，與培養(yǎng)容器1a、培養(yǎng)容器1b相同，采用經(jīng)由三通閥利用管道5與培養(yǎng)容器1及培養(yǎng)基供給容器2連接的構(gòu)成。該情況下，優(yōu)選與培養(yǎng)容器1a、培養(yǎng)容器1b相同，將在先連接的培養(yǎng)容器的水平位置配置為高于在后連接的培養(yǎng)容器的水平位置，能夠?qū)⒓?xì)胞懸浮液從在先連接的培養(yǎng)容器向在后連接的培養(yǎng)容器自然送液。

另外，也優(yōu)選在最后進(jìn)行培養(yǎng)的培養(yǎng)容器中，具備取樣用的另外的端口，在該端口處連接取樣管道。

在使用這樣的細(xì)胞培養(yǎng)系統(tǒng)時，在無菌環(huán)境下向培養(yǎng)容器1注入包含細(xì)胞及培養(yǎng)基的培養(yǎng)液，將培養(yǎng)容器1、培養(yǎng)容器1a、培養(yǎng)容器1b、培養(yǎng)基供給容器2、三通閥3和三通閥3a用管道5連接而構(gòu)成封閉體系。

另外，在培養(yǎng)基供給容器2與三通閥3之間安裝配置泵4。此外，將培養(yǎng)容器1的水平位置配置為高于培養(yǎng)容器1a的水平位置，將培養(yǎng)容器1a的水平位置配置為高于培養(yǎng)容器1b的水平位置。而且，從培養(yǎng)基供給容器2經(jīng)由三通閥3，利用泵4向培養(yǎng)容器1供給培養(yǎng)基，在培養(yǎng)容器1中進(jìn)行細(xì)胞的培養(yǎng)。

當(dāng)培養(yǎng)容器1中的細(xì)胞培養(yǎng)結(jié)束時，繼而就從培養(yǎng)容器1向培養(yǎng)容器1a利用自然送液移送培養(yǎng)液，從培養(yǎng)基供給容器2經(jīng)由三通閥3、3a，利用泵4向培養(yǎng)容器1a移送培養(yǎng)基，在培養(yǎng)容器1a中進(jìn)行細(xì)胞的培養(yǎng)。

另外，當(dāng)培養(yǎng)容器1a中的細(xì)胞培養(yǎng)結(jié)束時，繼而就從培養(yǎng)容器1a向培養(yǎng)容器1b利用自然送液移送培養(yǎng)液，從培養(yǎng)基供給容器2經(jīng)由三通閥3、3a，利用泵4向培養(yǎng)容器1b移送培養(yǎng)基，在培養(yǎng)容器1b中進(jìn)行細(xì)胞的培養(yǎng)。

當(dāng)培養(yǎng)容器1b中的細(xì)胞培養(yǎng)結(jié)束時，即從培養(yǎng)容器1b經(jīng)由三通閥3a及三通閥3，利用泵4向變空了的培養(yǎng)基供給容器2移送培養(yǎng)液的上清液，可以將培養(yǎng)容器1b中的培養(yǎng)液濃縮。另外，同樣地也可以從培養(yǎng)容器1b向培養(yǎng)基供給容器2移送培養(yǎng)液。

而且，本實施方式中，在設(shè)有4個以上的培養(yǎng)容器的情況下，也與上述相同，將培養(yǎng)液利用自然送液從在先連接的培養(yǎng)容器向在后連接的培養(yǎng)容器移送，在在后連接的培養(yǎng)容器中進(jìn)行細(xì)胞的培養(yǎng)。而且，當(dāng)在最后連接的培養(yǎng)容器中的細(xì)胞培養(yǎng)結(jié)束時，從該培養(yǎng)容器經(jīng)由多個三通閥，利用泵4向變空了的培養(yǎng)基供給容器2移送培養(yǎng)液的上清液，可以將該培養(yǎng)容器中的培養(yǎng)液濃縮。另外，同樣地也可以從該培養(yǎng)容器向培養(yǎng)基供給容器2移送培養(yǎng)液。

本實施方式的培養(yǎng)細(xì)胞的種類沒有特別限定，例如可以合適地培養(yǎng)淋巴細(xì)胞等懸浮系細(xì)胞。

該情況下，可以將培養(yǎng)容器1作為用于進(jìn)行用于恢復(fù)受到損害的細(xì)胞的功能的養(yǎng)護培養(yǎng)及擴大培養(yǎng)的容器合適地使用。即，從患者采集的細(xì)胞、或冷凍保存后被解凍了的細(xì)胞之類的受到損害而功能衰減的細(xì)胞在原樣不變的狀態(tài)下即使意欲使之活化也無法充分地進(jìn)行，無法用于細(xì)胞的大量培養(yǎng)。因而，為了使這樣的細(xì)胞增殖，以使細(xì)胞本來的功能恢復(fù)的方式，在細(xì)胞培養(yǎng)的初期的階段中進(jìn)行一邊養(yǎng)護該細(xì)胞一邊培養(yǎng)的培養(yǎng)工序(養(yǎng)護培養(yǎng)工序)。此后，在細(xì)胞本來的功能恢復(fù)、且細(xì)胞的增殖推進(jìn)到一定程度后擴大培養(yǎng)面積，進(jìn)行繼續(xù)細(xì)胞的培養(yǎng)的培養(yǎng)工序(擴大培養(yǎng)工序)，直至達(dá)到給定的細(xì)胞密度為止。因而，該情況下，優(yōu)選具備能夠擴大培養(yǎng)面積的培養(yǎng)容器1，其方法沒有特別限定。

另外，該情況下，優(yōu)選將培養(yǎng)容器1a作為用于使細(xì)胞活化的培養(yǎng)工序(活化培養(yǎng)工序)中所用的活化培養(yǎng)容器使用。在這樣的培養(yǎng)容器1a內(nèi)的底面上，固相化有抗cd3抗體等使細(xì)胞活化的物質(zhì)，收容于培養(yǎng)容器1a中的細(xì)胞與該物質(zhì)結(jié)合而被活化。抗cd3抗體適合用于使淋巴細(xì)胞活化。

此外，該情況下，優(yōu)選將培養(yǎng)容器1b作為用于使細(xì)胞大量增殖的培養(yǎng)工序(擴增培養(yǎng)工序)中所用的擴增培養(yǎng)容器使用。

另外，優(yōu)選使培養(yǎng)容器1a的容量大于培養(yǎng)容器1的容量，例如可以合適地使用培養(yǎng)容器1的容量的2倍以上的培養(yǎng)容器。另外，由于培養(yǎng)容器1b是為了使細(xì)胞大量增殖而使用，因此優(yōu)選使用容量特別大的培養(yǎng)容器，例如可以合適地使用培養(yǎng)容器1a的容量的10倍左右的培養(yǎng)容器。

另外，本實施方式中，也可以培養(yǎng)皮膚細(xì)胞、角膜細(xì)胞、血管內(nèi)皮細(xì)胞、間葉系干細(xì)胞等貼壁系細(xì)胞。該情況下，例如優(yōu)選設(shè)為如下的構(gòu)成，即，在培養(yǎng)基供給容器2與泵4之間的管道5中具備三通閥，經(jīng)由該三通閥，連接封入有用于將細(xì)胞從培養(yǎng)容器的內(nèi)面剝離的酶溶液的酶溶液供給容器、和封入有用于阻礙該酶的作用的阻礙劑溶液的阻礙劑溶液供給容器。此外，也可以同樣地連接清洗液供給容器、廢液回收容器等另外的容器。

該情況下，對于培養(yǎng)容器的容量及培養(yǎng)面積，為了可以高效地進(jìn)行繼代培養(yǎng)等，也優(yōu)選像后面連接的培養(yǎng)容器那樣增大。

本實施方式中，對于培養(yǎng)容器的材料或性質(zhì)、形態(tài)等，可以設(shè)為與第一實施方式相同。另外，對于培養(yǎng)基供給容器2的性質(zhì)、三通閥3和泵4的種類、管道5的材料，也可以設(shè)為與第一實施方式相同。

(第三實施方式)

下面，參照圖4，對本發(fā)明的第三實施方式的細(xì)胞培養(yǎng)中的多個容器間的送液方法進(jìn)行說明。圖4是表示本實施方式的細(xì)胞培養(yǎng)中的多個容器間的送液方法中所用的容器的連接關(guān)系的主視圖。

本實施方式中所用的細(xì)胞培養(yǎng)系統(tǒng)中，具備3個培養(yǎng)容器，且具備2個培養(yǎng)基供給容器。對于其他方面，可以設(shè)為與第二實施方式相同。

即，如圖4所示，本實施方式中所用的細(xì)胞培養(yǎng)系統(tǒng)在第二實施方式的構(gòu)成以外，還具備三通閥6和培養(yǎng)基供給容器2a，三通閥3與三通閥6被利用管道5連接，并且培養(yǎng)基供給容器2與三通閥6與培養(yǎng)基供給容器2a被利用管道5連接。

這些培養(yǎng)基供給容器的性質(zhì)可以設(shè)為與第一實施方式相同。另外，在培養(yǎng)基供給容器2和培養(yǎng)基供給容器2a中，可以封入相同的培養(yǎng)基，也可以封入不同的培養(yǎng)基。

另外，本實施方式中，也可以設(shè)為如下的構(gòu)成，即，設(shè)置3個以上的培養(yǎng)基供給容器，與培養(yǎng)基供給容器2a相同，經(jīng)由三通閥利用管道5與培養(yǎng)基供給容器2及各培養(yǎng)容器連接。

這樣的本實施方式可以特別合適地用于向多個培養(yǎng)容器供給不同的培養(yǎng)基的情況。

例如，可以從培養(yǎng)基供給容器2a向培養(yǎng)容器1和培養(yǎng)容器1a供給培養(yǎng)基，在培養(yǎng)容器1中進(jìn)行上述的養(yǎng)護培養(yǎng)工序及擴大培養(yǎng)工序，在培養(yǎng)容器1a中進(jìn)行上述的活化培養(yǎng)工序。另外，繼而可以從培養(yǎng)基供給容器2向培養(yǎng)容器1b供給培養(yǎng)基，在培養(yǎng)容器1b中進(jìn)行上述的擴增培養(yǎng)工序等。

以上，對于本發(fā)明，給出優(yōu)選的實施方式而進(jìn)行了說明，然而本發(fā)明并不限定于前述的實施方式，當(dāng)然可以在本發(fā)明的范圍中實施各種變更。

例如，可以在第一實施方式中，采用像第三實施方式那樣具備多個培養(yǎng)基供給容器、或還具備其他容器的構(gòu)成等，適當(dāng)?shù)剡M(jìn)行變更。

產(chǎn)業(yè)上的可利用性

本發(fā)明可以適合用于使用多個培養(yǎng)容器在封閉體系中大量培養(yǎng)細(xì)胞的基因治療、免疫療法、再生醫(yī)療或抗體醫(yī)藥生產(chǎn)等中。

將本說明書中記載的文獻(xiàn)及成為本申請的巴黎優(yōu)先權(quán)的基礎(chǔ)的日本申請說明書的內(nèi)容全都引用到此處。

符號的說明

1、1a、1b培養(yǎng)容器，2、2a培養(yǎng)基供給容器，3、3a、3b三通閥，4泵，5管道，6三通閥。