1.在酵母菌中實(shí)現(xiàn)高準(zhǔn)確率定點(diǎn)基因敲除的方法，其特征在于，采用聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)或全基因合成的方法獲得目標(biāo)敲除基因上下游序列后，將上下游序列按與原基因相反方向連接，并插入到載體質(zhì)粒上構(gòu)建環(huán)狀克隆載體，對(duì)環(huán)狀克隆載體進(jìn)行線性化處理得到線型雙鏈DNA，將線型雙鏈DNA經(jīng)由5’→3’核酸外切酶處理，形成線型3’突出長(zhǎng)粘端雙鏈DNA后轉(zhuǎn)化酵母菌細(xì)胞。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其特征在于，所述線型3’突出長(zhǎng)粘端雙鏈DNA兩端各攜帶1段與目標(biāo)敲除基因上游或下游序列相同的同源序列。
3.根據(jù)權(quán)利要求2所述的方法，其特征在于，所述線型3’突出長(zhǎng)粘端雙鏈DNA由線型雙鏈DNA經(jīng)由5’→3’核酸外切酶處理形成，酶用量為50-5000U/nmol線型雙鏈DNA載體，處理溫度25-60℃，處理時(shí)間為1min-1h。
4.根據(jù)權(quán)利要求2所述的方法，其特征在于，所述線型3’突出長(zhǎng)粘端雙鏈DNA的兩個(gè)3’突出粘端的延伸方向均指向目標(biāo)基因的編碼區(qū)，即兩個(gè)3’突出粘端相向而行共同指向目標(biāo)敲除基因區(qū)段。
5.根據(jù)權(quán)利要求2所述的方法，其特征在于，所述同源序列的長(zhǎng)度為100-1000bp，經(jīng)核酸酶處理后3’端單鏈粘端長(zhǎng)度為100-1000nt。
6.根據(jù)權(quán)利要求3所述的方法，其特征在于，所述5’→3’核酸外切酶是T5核酸外切酶、T7核酸外切酶或λ核酸外切酶。
7.根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其特征在于，線型3’突出長(zhǎng)粘端雙鏈DNA轉(zhuǎn)化酵母菌細(xì)胞的方法是電擊介導(dǎo)法、聚乙二醇介導(dǎo)法、氯化鋰介導(dǎo)法、醋酸鋰介導(dǎo)法、或原生質(zhì)體介導(dǎo)法。