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一種稻曲病菌實(shí)驗(yàn)室材料的常備形態(tài)及其制備與應(yīng)用方法與流程

文檔序號(hào):12410881閱讀:來源:國(guó)知局

技術(shù)特征:

1.一種稻曲病菌實(shí)驗(yàn)室材料的常備形態(tài),其特征在于,用稻曲病菌的薄壁分生孢子作日常工作的常備形態(tài);薄壁分生孢子純凈無污染;薄壁分生孢子存放于無菌水中;薄壁分生孢子暫停生長(zhǎng)發(fā)育,但轉(zhuǎn)到培養(yǎng)基上能馬上恢復(fù)正常生長(zhǎng)發(fā)育。

2.如權(quán)利要求1所述的一種稻曲病菌實(shí)驗(yàn)室材料的常備形態(tài)的制備與應(yīng)用方法,其特征在于,制備和應(yīng)用方法步驟如下:

1)分生孢子的預(yù)培養(yǎng):以當(dāng)前實(shí)驗(yàn)室稻曲病菌的常備菌絲體為初始菌體,采用常規(guī)的液體振蕩培養(yǎng)方法,培養(yǎng)獲得含有薄壁分生孢子的培養(yǎng)產(chǎn)物;

2)分生孢子的制備培養(yǎng):用三角瓶作培養(yǎng)器具,裝盛馬鈴薯瓊脂培養(yǎng)基作產(chǎn)孢培養(yǎng)基,該培養(yǎng)基的組分配比為:馬鈴薯100g、瓊脂20g、水1000mL;用移液器從步驟1)獲得的含有分生孢子的培養(yǎng)產(chǎn)物中,吸取少量液體,移植入三角瓶?jī)?nèi)的產(chǎn)孢培養(yǎng)基面上并涂布均勻,在合適的溫度下培養(yǎng),直到培養(yǎng)基面上形成密布的微小菌落,菌落上形成大量的新一代薄壁分生孢子;

3)稻曲病菌材料常備形態(tài)的制備:取無菌水注入步驟2)培養(yǎng)獲得的產(chǎn)孢菌落上,輕輕洗脫菌落上的孢子,獲得含有菌絲碎段的孢子液;用滅菌紗布過濾去除該孢子液中的菌絲碎段;將該孢子液進(jìn)行離心沉淀,倒掉上清液,除去孢子液中混雜的菌體代謝產(chǎn)物和培養(yǎng)基組分;剩下的沉淀為純凈的薄壁分生孢子,以該純凈孢子作為稻曲病菌材料的常備形態(tài);用無菌水將沉淀孢子懸浮,攪動(dòng)使孢子充分分散,獲得稻曲病菌材料的常備孢子液;

4)稻曲病菌材料常備形態(tài)的孢子含量標(biāo)定:用無菌水將步驟3)獲得的常備孢子液的孢子濃度,調(diào)配為106孢子/mL;

5)稻曲病菌材料常備形態(tài)的日常存放:在無菌條件下,將步驟4)標(biāo)定的常備孢子液分裝到有蓋密閉的滅菌容器內(nèi),并轉(zhuǎn)移到25℃的暗環(huán)境中存放備用;

6)稻曲病菌材料常備形態(tài)的應(yīng)用:將步驟5)存放的稻曲病菌材料常備孢子液轉(zhuǎn)到超凈工作臺(tái),振蕩裝存常備孢子液的容器,使薄壁分生孢子充分懸浮和分散;開蓋后用移液器定量吸取孢子液,移植到相關(guān)的工作環(huán)節(jié)或?qū)嶒?yàn)程序中;吸液操作完畢后回蓋密封,將剩余的常備孢子液轉(zhuǎn)回步驟5)的存放處存放。

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