本發(fā)明涉及fxr受體激動劑、其藥學上可接受的鹽、其酯以及它們的立體異構(gòu)體，含有這些化合物的藥物制劑，以及該化合物、其藥學上可接受的鹽、其酯以及它們的立體異構(gòu)體，在制備治療和/或預防由fxr受體介導的非酒精性脂肪肝、原發(fā)性膽汁性肝硬化、脂質(zhì)代謝紊亂、糖尿病并發(fā)癥及惡性腫瘤等相關(guān)疾病的藥物中的用途。
背景技術(shù)：
fxr受體(法尼醇x受體)屬于配體激活轉(zhuǎn)錄因子核受體家族成員，具有典型的核受體結(jié)構(gòu)，即氨基末端高度保守的dna結(jié)合區(qū)(dbd)，羧基末端配體結(jié)合區(qū)(lbd)，氨基末端配體非依賴性轉(zhuǎn)錄激活功能區(qū)(af1)，羧基末端配體依賴性轉(zhuǎn)錄激活功能區(qū)(af2)和腳鏈區(qū)。fxr可與視黃醇類x受體(rxr)形成異二聚體，當配體與fxr的lbd區(qū)域結(jié)合后，fxr構(gòu)象可發(fā)生改變，dna的結(jié)合區(qū)結(jié)合到靶基因啟動子的fxr反應元件(ir-1)上面，釋放輔抑制因子(如ncor)，招募了輔激活因子，從而發(fā)揮轉(zhuǎn)錄調(diào)控作用。
fxr在多個器官組織中均有表達，包括脂肪組織、肝臟、胃腸道、腎臟等，其中肝臟中表達量最為豐富。fxr信號通路，可直接或間接調(diào)節(jié)多個下游基因的表達，如bsep、shp、cyp7a1、fgfr4、ostα/β、srebp-1c等基因，進而調(diào)節(jié)多種代謝途徑，如：甘油三酯、膽固醇、血糖及能量穩(wěn)定性代謝膽酸的代謝，具有治療癌癥、非酒精性脂肪肝、代謝紊亂、炎癥等疾病的功能。通過抑制膽酸的合成、結(jié)合及轉(zhuǎn)運，調(diào)節(jié)其代謝，是體內(nèi)膽酸平衡的主要調(diào)節(jié)者。
部分天然膽酸類化合物可激動fxr受體，如鵝去氧膽酸(cdca)、脫氧膽酸(dca)、石膽酸(lca)及?；撬岷瓦@些膽酸的甘氨酸結(jié)合物。除去天然的化合物，目前國際上研發(fā)的fxr激動劑可主要分為兩大類，一類是甾體類，以intercept公司的奧貝膽酸為代表(obeticholicacid，oca)，針對非酒精性脂肪肝適應癥，處于臨床iii期；另一類是新型分子實體，早期研發(fā)的化合物如gw4604(wo2000/037077)，雖然具有較強的激動活性，但其對光不穩(wěn)定且生物利用度較低。另外，phenex公司研發(fā)的px-104(wo2011020615a1)已轉(zhuǎn)讓給gilead公司，目前處于臨床ii期研究階段。
本專利涉及的發(fā)明在于提供具有新型分子結(jié)構(gòu)的化合物，其可有效激動fxr受體，提升bsep及shp基因表達水平，同時有效抑制cyp7a1基因的表達。另外，為了達到更好的治療效果的目的，更好的滿足市場需求，還希望能夠開發(fā)出高效低毒且穩(wěn)定性較好的fxr受體激動劑。本發(fā)明將提供一種新型結(jié)構(gòu)的fxr受體激動劑，其具有很好的藥效，為fxr受體激動劑用于治療非酒精性脂肪肝、原發(fā)性膽汁性肝硬化、脂質(zhì)代謝紊亂、糖尿病并發(fā)癥及惡性腫瘤提供了可能性。
技術(shù)實現(xiàn)要素：
本發(fā)明的目的是提供一類靶向fxr受體激動劑，具體的技術(shù)方案為如下：
方案1、通式(ⅰ)所示的化合物、其藥學上可接受的鹽、其酯或其立體異構(gòu)體：
其中，
r1、r2分別獨立地選自氫原子、氰基、鹵素原子、硝基、氨基、羥基、羧基、c1-6烷基、c1-6烷氧基、c1-6烷基氨基、二c1-6烷基氨基、c1-6烷基硫基、c1-6烷基羰基、鹵代c1-6烷基、鹵代c1-6烷氧基、c1-6烷氧基c1-6烷基、c1-6烷基羰基氧基、c1-6烷基磺?；?、c1-6烷基氨基磺?；?、二c1-6烷基氨基磺酰基、c1-6烷基磺酰氨基、c1-6烷基磺酰氧基、c2-8烯基或c2-8炔基；
r3選自氫原子，任選被一個或多個取代基p取代的c1-6烷基、c1-6烷氧基、c3-8環(huán)烷基、c3-8雜環(huán)基、c1-6烷基磺?；?、c1-6烷基氨基磺酰基、二c1-6烷基氨基磺酰基、c1-6烷基磺酰氨基、c1-6烷基磺酰氧基；
p選自羥基、氨基、羧基、氰基、硝基、鹵素原子、c1-6烷基、c1-6烷氧基、c1-6烷基氨基、二c1-6烷基氨基、鹵代c1-6烷基、鹵代c1-6烷氧基、c1-6烷基羰基、c1-6烷基羰基氧基、c1-6烷基磺酰基、c2-8烯基或c2-8炔基；
r4選自氫原子、鹵素原子、氰基、硝基、氨基、羥基、羧基、c1-6烷氧基、c1-6烷基、羥基c1-6烷基、鹵代c1-6烷基、羧基c1-6烷基、羧基氧基c1-6烷基、羧基氨基c1-6烷基、氨基c1-6烷基、氨基羰基c1-6烷基、羥基c1-6烷氧基、鹵代c1-6烷氧基、羧基c1-6烷氧基、c2-8烯基、c2-8炔基、c1-6烷基氨基、c1-6烷基羰基、c1-6烷基羰基氨基、c1-6烷基磺?；?、c1-6烷基氨基磺?；蚨1-6烷基氨基；
w選自ch2、nh、o、s、so、so2或co；a選自nh、o或s；
z選自未被取代或被一個或多個取代基q取代的環(huán)烷基；
q選自氰基、氨基、羥基、羧基、硝基、鹵素原子、c1-6烷基、c1-6烷氧基、c1-6烷基氨基、二c1-6烷基氨基、鹵代c1-6烷基、鹵代c1-6烷氧基、c1-6烷氧基c1-6烷基、c2-8烯基或c2-8炔基；
e選自c、ch、ch2、n、nh、o、s、so、so2或co；
f選自不存在、c、ch、ch2、n、nh、o、s、so、so2或co；
x選自c、ch或n；
y選自c、ch、ch2、n、nh、o、s、so、so2或co；
e、x、y、f之間的連接方式分別獨立地選自單鍵或雙鍵，e、x、y、f之間的連接方式至少有一個為雙鍵；
e、x、y、f連接形成的基團不為噻唑；
m選自0-3的整數(shù)；n選自0-4的整數(shù)。
方案2、如方案1所述的化合物、其藥學上可接受的鹽、其酯或其立體異構(gòu)體：
其中，
r1、r2分別獨立地選自氫原子、氰基、鹵素原子、硝基、氨基、羥基、羧基、c1-4烷基、c1-4烷氧基、c1-4烷基氨基、二c1-4烷基氨基、c1-4烷基硫基、c1-4烷基羰基、鹵代c1-4烷基、鹵代c1-4烷氧基或c1-4烷氧基c1-4烷基；
r3選自未被取代或被一個或多個取代基p取代的c3-6環(huán)烷基或c3-6雜環(huán)基；
p選自羥基、氨基、羧基、氰基、硝基、鹵素原子、c1-4烷基、c1-4烷氧基、c1-4烷基氨基、二c1-4烷基氨基、鹵代c1-4烷基或鹵代c1-4烷氧基；
r4選自氫原子、鹵素原子、氰基、硝基、氨基、羥基、羧基、c1-4烷氧基、c1-4烷基、羥基c1-4烷基、鹵代c1-4烷基、羧基c1-4烷基、羧基氧基c1-4烷基、羧基氨基c1-4烷基、氨基c1-4烷基、氨基羰基c1-4烷基、羥基c1-4烷氧基、鹵代c1-4烷氧基、羧基c1-4烷氧基、c2-6烯基、c2-6炔基、c1-4烷基氨基、c1-4烷基羰基、c1-4烷基羰基氨基、c1-4烷基磺?；?、c1-4烷基氨基磺?；蚨1-4烷基氨基；
w選自ch2、nh、o、s、so、so2或co；a選自nh、o或s；
z選自未被取代或被一個或多個取代基q取代的5-6元環(huán)烷基；
q選自氰基、氨基、羥基、羧基、硝基、鹵素原子、c1-4烷基、c1-4烷氧基、c1-4烷基氨基、二c1-4烷基氨基、鹵代c1-4烷基或鹵代c1-4烷氧基；
e選自c、ch、ch2、n、nh、co、o或s；
f選自不存在、c、ch、ch2、n、nh、o、co或s；
x選自c、ch或n；
y選自c、ch、ch2、n、nh、o、co或s；
e、x、y、f之間的連接方式分別獨立地選自單鍵或雙鍵；e、x、y、f之間的連接方式至少有一個為雙鍵；
e、x、y、f連接形成的基團不為噻唑；
m選自0-2的整數(shù)；n選自0-3的整數(shù)。
方案3、如方案2所述的化合物、其藥學上可接受的鹽、其酯或其立體異構(gòu)體：
其中，
r3選自未被取代或被一個或多個取代基p取代的c3-6環(huán)烷基；
p選自羥基、氨基、羧基、氰基、硝基、鹵素原子、c1-4烷基、c1-4烷氧基、c1-4烷基氨基、二c1-4烷基氨基、鹵代c1-4烷基或鹵代c1-4烷氧基；
w選自nh、o或s；a選自nh、o或s；
z選自未被取代或被一個或多個取代基q取代的5-6元環(huán)烷基；
q選自氰基、氨基、羥基、羧基、硝基、鹵素原子、c1-4烷基、c1-4烷氧基、c1-4烷基氨基、二c1-4烷基氨基、鹵代c1-4烷基或鹵代c1-4烷氧基；
e、x、y、f共同構(gòu)成的環(huán)狀基團與苯環(huán)一起形成以下的結(jié)構(gòu)：
苯并吡喃基、4h-色烯-4-酮基、苯并噻吩基、苯并噁唑基、4h-色原烯基、苯并呋喃基、苯并1,4-二氧雜環(huán)己二烯基、苯并4h-1,4-噁嗪基、苯并4h-1,2-噁嗪基、苯并4h-1,3-噁嗪基、二氫噌啉基、喹唑啉基、二氫喹唑啉基、喹啉基、二氫喹啉基、異喹啉基、二氫異喹啉基、喹啉酮基、異喹啉酮基、苯并二氫吡嗪基、苯并吡嗪、二氫萘基、吲哚基、異吲哚基、苯并咪唑基、苯并吡唑基或苯并三唑基；
n選自0-2的整數(shù)。
方案4、如方案3所述的化合物、其藥學上可接受的鹽、其酯或其立體異構(gòu)體：
r1、r2分別獨立地選自氫原子、氰基、氟原子、氯原子、溴原子、硝基、氨基、羥基、羧基、甲基、乙基、丙基、異丙基、丁基、異丁基、叔丁基、甲氧基、甲基氨基、二甲氨基、乙?；?、三氟甲基、三氟乙基或三氟甲氧基；
r3選自環(huán)丙基、環(huán)丁基、環(huán)戊基、環(huán)己基；
r4選自氫原子、鹵素原子、氰基、硝基、氨基、羥基、羧基、甲基、乙基、丙基、異丙基、甲氧基、乙氧基、三氟甲基、三氟甲氧基、羧基甲基、羧基乙基、乙炔基、甲氨基、乙氨基、乙?；?、乙酰氨基、甲磺酰基或二甲氨基；
n選自0-2的整數(shù)；
z選自未被取代或被一個或多個取代基q取代的飽和5-6元環(huán)烷基；
q選自氰基、氨基、羥基、羧基、硝基、鹵素原子、c1-4烷基、c1-4烷氧基、c1-4烷基氨基、二c1-4烷基氨基、鹵代c1-4烷基或鹵代c1-4烷氧基；
e、x、y、f共同構(gòu)成的環(huán)狀基團與苯環(huán)一起形成以下的結(jié)構(gòu)：
方案5、如方案4所述的化合物、其藥學上可接受的鹽、其酯或其立體異構(gòu)體：
r1、r2分別獨立地選自氫原子、氰基、氟原子、氯原子、甲基、乙基、丙基、丁基、甲氧基、甲基氨基、乙?；?、三氟甲基或三氟甲氧基；
r3選自環(huán)丙基、環(huán)丁基、環(huán)戊基；
r4選自氫原子、鹵素原子、氰基、硝基、氨基、羥基、羧基、甲基、乙基、丙基、甲氧基、乙氧基、三氟甲基、三氟甲氧基、羧基甲基、羧基乙基、乙?；蛞阴０被?/p>
w選自nh、o或s；a選自nh、o或s；
z選自未被取代或被一個或多個取代基q取代的環(huán)戊基或環(huán)己基；
q選自氰基、氨基、羥基、羧基、硝基、鹵素原子、c1-4烷基、c1-4烷氧基、c1-4烷基氨基、二c1-4烷基氨基、鹵代c1-4烷基或鹵代c1-4烷氧基；
e、x、y、f共同構(gòu)成的環(huán)狀基團與苯環(huán)一起形成以下的結(jié)構(gòu)：
n選自1或2。
方案6、如方案5所述的化合物、其藥學上可接受的鹽、其酯或其立體異構(gòu)體：
其中，r1、r2分別獨立地選自氫原子、氰基、氟原子、氯原子、甲基氨基、乙酰基、三氟甲基或三氟甲氧基；
r3選自環(huán)丙基；
r4選自氫原子、鹵素原子、氰基、硝基、氨基、羥基、羧基、三氟甲基、三氟甲氧基、羧基甲基、羧基乙基、乙?；蛞阴０被?；
w選自o；a選自o；
z選自未被取代或被1-2個取代基q取代的環(huán)己基；
q選自氰基、氨基、羥基、羧基、硝基、鹵素原子、c1-4烷基、c1-4烷氧基、c1-4烷基氨基、二c1-4烷基氨基、鹵代c1-4烷基或鹵代c1-4烷氧基；
e、x、y、f共同構(gòu)成的環(huán)狀基團與苯環(huán)一起形成以下的結(jié)構(gòu)：
n選自1或2。
方案7、如方案1所述的化合物、其藥學上可接受的鹽、其酯或其立體異構(gòu)體，具有通式(ⅱ)所示的結(jié)構(gòu)：
其中，
z選自未被取代或被一個或多個取代基q取代的5-6元環(huán)烷基；
q選自氰基、氨基、羥基、羧基、硝基、鹵素原子、c1-4烷基、c1-4烷氧基、c1-4烷基氨基、二c1-4烷基氨基、鹵代c1-4烷基、鹵代c1-4烷氧基、c1-4烷氧基c1-4烷基、c2-6烯基或c2-6炔基；
f選自ch、ch2、n、nh、o或co；
x選自c、ch或n；
y選自ch或n；
x、y、f之間的連接方式分別獨立地選自單鍵或雙鍵，x、y、f之間的連接方式至少有一個為雙鍵。
方案8、如方案7所述的化合物、其藥學上可接受的鹽、其酯或其立體異構(gòu)體：
z選自未被取代或被一個或多個取代基q取代的5-6元飽和環(huán)烷基；
q選自氰基、氨基、羥基、羧基、硝基、鹵素原子、c1-4烷基、c1-4烷氧基、c1-4烷基氨基、二c1-4烷基氨基、鹵代c1-4烷基或鹵代c1-4烷氧基；
f選自ch、ch2、n、nh或o；x選自c、ch或n；
y選自ch或n；
x、y、f之間的連接方式分別獨立地選自單鍵或雙鍵；x、y、f之間的連接方式至少有一個為雙鍵。
方案9、如方案8所述的化合物、其藥學上可接受的鹽、其酯或其立體異構(gòu)體：
其中，r1、r2分別獨立地選自氫原子、氰基、氟原子、氯原子、溴原子、硝基、氨基、羥基、羧基、甲基、乙基、丙基、異丙基、丁基、異丁基、叔丁基、甲氧基、甲基氨基、二甲氨基、乙?；⑷谆?、三氟乙基或三氟甲氧基；
r3選自環(huán)丙基、環(huán)丁基、環(huán)戊基、環(huán)己基；
r4選自氫原子、鹵素原子、氰基、硝基、氨基、羥基、羧基、甲基、乙基、丙基、異丙基、甲氧基、乙氧基、三氟甲基、三氟甲氧基、乙炔基、甲氨基、乙氨基、羧基甲基、羧基乙基、乙?；⒁阴０被?、甲磺酰基或二甲氨基；
n選自0-2的整數(shù)；
w選自nh、o或s；a選自nh、o或s；
z選自未被取代或被一個或多個取代基q取代的環(huán)戊基或環(huán)己基；
q選自氰基、氨基、羥基、羧基、硝基、鹵素原子、c1-4烷基、c1-4烷氧基、c1-4烷基氨基、二c1-4烷基氨基、鹵代c1-4烷基或鹵代c1-4烷氧基；
x、y、f之間的連接方式分別獨立地選自單鍵或雙鍵，x、y、f之間的連接方式至少有一個為雙鍵。
方案10、如方案9所述的化合物、其藥學上可接受的鹽、其酯或其立體異構(gòu)體：
其中，r1、r2分別獨立地選自氫原子、氰基、氟原子、氯原子、甲基、乙基、丙基、丁基、甲氧基、甲基氨基、乙酰基、三氟甲基或三氟甲氧基；
r3選自環(huán)丙基；
r4選自氫原子、鹵素原子、氰基、硝基、氨基、羥基、羧基、甲基、乙基、丙基、甲氧基、乙氧基、三氟甲基、三氟甲氧基、羧基甲基、羧基乙基、乙?；蛞阴０被?/p>
w選自nh、o或s；a選自nh、o或s；
z選自未被取代或被1-2個取代基q取代的環(huán)己基；
q選自氰基、氨基、羥基、羧基、硝基、鹵素原子、c1-4烷基、c1-4烷氧基、c1-4烷基氨基、二c1-4烷基氨基、鹵代c1-4烷基或鹵代c1-4烷氧基；
f選自ch或n；
x選自n；
y選自ch；
x、y之間的連接方式為單鍵，y、f之間的連接方式為雙鍵；
n選自1。
上述方案之間的基團可以相互組合。
本發(fā)明的部分化合物
發(fā)明詳述
本發(fā)明所述的“鹵素原子”包括氟原子、氯原子、溴原子和碘原子等。
本發(fā)明所述的“c1-6烷基”表示直鏈或支鏈的含有1-6個碳原子的烷基，包括例如“c1-4烷基”、“c1-3烷基”等，具體實例包括但不限于：甲基、乙基、正丙基、異丙基、正丁基、2-甲基丙基、1-甲基丙基、1,1-二甲基乙基、正戊基、3-甲基丁基、2-甲基丁基、1-甲基丁基、1-乙基丙基、正己基、4-甲基戊基、3-甲基戊基、2-甲基戊基、1-甲基戊基、3,3-二甲基丁基、2,2-二甲基丁基、1,1-二甲基丁基、1,2-二甲基丁基、1,3-二甲基丁基、2,3-二甲基丁基、2-乙基丁基、1,2-二甲基丙基等。
本發(fā)明所述的“c2-8烯基”是指含有至少一個雙鍵的碳原子數(shù)為2-8的直鏈或支鏈或環(huán)狀的烯基，包括例如“c2-6烯基”、“c2-4烯基”、“c2-3烯基”、“c3-6環(huán)烯基”等，具體實例包括但不限于：乙烯基、1-丙烯基、2-丙烯基、2-丁烯基、3-丁烯基、2-甲基-1-丙烯基、1-甲基-2-丙烯基、1-戊烯基、2-戊烯基、3-戊烯基、2-甲基-1-丁烯基、3-甲基-1-丁烯基、2-甲基-3-丁烯基、1,1-二甲基-2-丙烯基、1-乙基-2-丙烯基、2-己烯基、3-己烯基、2-甲基-1-戊烯基、3-甲基-1-戊烯基、1-甲基-2-戊烯基、3-甲基-2-戊烯基、2-甲基-3-戊烯基、1-甲基-4-戊烯基、3-甲基-4-戊烯基、1,1-二甲基-3-丁烯基、1,2-二甲基-3-丁烯基、1,3-二甲基-2-丁烯基、2,2-二甲基-3-丁烯基、2,3-二甲基-2-丁烯基、2,3-二甲基-1-丁烯基、2-乙基-1-丁烯基、2-乙基-3-丁烯基、2-庚烯基、3-庚烯基、4-庚烯基、1-辛烯基、3-辛烯基、4-辛烯基、1,3-丁二烯基、2,4-戊二烯基、1,4-己二烯基、2,4-己二烯基、1,5-庚二烯基、2,5-庚二烯基、2,6-辛二烯基等。
本發(fā)明所述的“c2-8炔基”是指含有三鍵的碳原子數(shù)為2-8的直鏈或支鏈的炔基，其中包括例如“c2-6炔基”、“c2-4炔基”、“c2-3炔基”等，具體實例包括但不限于：乙炔基、1-丙炔基、2-丁炔基、1-甲基-2-丙炔基、2-戊炔基、3-戊炔基、1-甲基-2-丁炔基、2-甲基-3-丁炔基、1,1-二甲基-2-丙炔基、1-乙基-2-丙炔基、2-己炔基、3-己炔基、1-甲基-2-戊炔基、1-甲基-3-戊炔基、2-甲基-3-戊炔基、1,1-二甲基-3-丁炔基、2-乙基-3-丁炔基、2-庚炔基、3-庚炔基、4-甲基-2-己炔基、5-甲基-2-己炔基、2-甲基-3-己炔基、5-甲基-3-己炔基、2-甲基-4-己炔基、4-甲基-5-己炔基、2-辛炔基、3-辛炔基、4-辛炔基、4-甲基-2-庚炔基、5-甲基-3-庚炔基、6-甲基-3-庚炔基、2-甲基-4-庚炔基、2-甲基-5-庚炔基、3-甲基-6-庚炔基等。
本發(fā)明所述的“c1-6烷氧基、c1-6烷基氨基、二c1-6烷基氨基、c1-6烷基硫基、c1-6烷基羰基、c1-6烷基羰基氧基、c1-6烷基磺?；?、c1-6烷基氨基磺?；?、二c1-6烷基氨基磺?；1-6烷基磺酰氨基、c1-6烷基磺酰氧基”，是指以c1-6烷基-o-、c1-6烷基-nh-、(c1-6烷基)2-n-、c1-6烷基-s-、c1-6烷基-c(o)-、c1-6烷基-c(o)-o-、c1-6烷基-so2-、c1-6烷基-nh-so2-、(c1-6烷基)2-n-so2-、c1-6烷基-so2-nh-、c1-6烷基-so2-o-方式形成的基團，其中“c1-6烷基”的定義如前文所述。
本發(fā)明所述的“c1-4烷氧基、c1-4烷基氨基、二c1-4烷基氨基、c1-4烷基硫基、c1-4烷基羰基、c1-4烷基羰基氧基、c1-4烷基磺?；?、c1-4烷基氨基磺酰基、二c1-4烷基氨基磺酰基”，是指以c1-4烷基-o-、c1-4烷基-nh-、(c1-4烷基)2-n-、c1-4烷基-s-、c1-4烷基-c(o)-、c1-4烷基-c(o)-o-、c1-4烷基-so2-、c1-4烷基-nhso2-、(c1-4烷基)2-n-so2-方式形成的基團，其中“c1-4烷基”的定義如前文所述。
本發(fā)明所述的“鹵代c1-6烷基、羥基c1-6烷基、羧基c1-6烷基、氨基c1-6烷基、c1-6烷氧基c1-6烷基、鹵代c1-6烷氧基、羥基c1-6烷氧基、羧基c1-6烷氧基、羧基氧基c1-6烷基、羧基氨基c1-6烷基、氨基羰基c1-6烷基”，是指一至多個，例如1～4個、1～3個、1～2個鹵素原子、羥基、氨基、羧基、羧基氧基、羧基氨基、氨基羰基、c1-6烷氧基分別取代c1-6烷基、c1-6烷氧基中的氫原子所形成的基團。
本發(fā)明所述的“鹵代c1-4烷基、羥基c1-4烷基、羧基c1-4烷基、氨基c1-4烷基、c1-4烷氧基c1-4烷基、鹵代c1-4烷氧基、羥基c1-4烷氧基、羧基c1-4烷氧基、羧基氧基c1-4烷基、羧基氨基c1-4烷基、氨基羰基c1-4烷基”，是指一至多個，例如1～4個、1～3個、1～2個鹵素原子、羥基、氨基、羧基、羧基氧基、羧基氨基、氨基羰基、c1-4烷氧基分別取代c1-4烷基、c1-4烷氧基中的氫原子所形成的基團。
“環(huán)烷基”是指碳原子的烷烴部分去除一個氫原子衍生的飽和或部分飽和的單環(huán)環(huán)狀烷基，包括例如“3～6元環(huán)烷基”、“3～8元環(huán)烷基”、“4～7元環(huán)烷基”、“4～6元環(huán)烷基”、“5～6元環(huán)烷基”等。其實例包括但不限于：環(huán)丙烷基、環(huán)丁烷基、環(huán)戊烷基、環(huán)己烷基、環(huán)庚烷基、環(huán)辛烷基、甲基環(huán)丙烷基、二甲基環(huán)丙烷基、甲基環(huán)丁烷基、二甲基環(huán)丁烷基、甲基環(huán)戊烷基、二甲基環(huán)戊烷基、甲基環(huán)己烷基、二甲基環(huán)己烷基、環(huán)戊烯基、1,3-環(huán)戊二烯基、環(huán)己烯基、1,4-環(huán)己二烯基、環(huán)庚烯基、1,4-環(huán)庚二烯基、環(huán)辛烯基等。
“雜環(huán)基”是指含有至少一個雜原子(例如1、2、3、4或5個雜原子)飽和或部分飽和的單環(huán)雜環(huán)化合物除去一個氫原子得到的基團。包括例如“3～8元雜環(huán)基”、“3～7元雜環(huán)基”、“3～6元雜環(huán)基”、“3～5元雜環(huán)基”、“4～7元雜環(huán)基”、“4～6元雜環(huán)基”、“5～6元雜環(huán)基”、6～7元雜環(huán)基”、“6～8元雜環(huán)基”等。3～8元部分飽和單雜環(huán)基，是指含有雙鍵、雜原子的環(huán)狀基團。3～8元飽和單雜環(huán)基，是指全部為飽和鍵的含有雜原子的環(huán)狀基團。具體實例包括但不僅限于：氮雜環(huán)丙烷基、2h-氮雜環(huán)丙烷基、二氮雜環(huán)丙烷基、3h-二氮雜環(huán)丙烯基、氮雜環(huán)丁烷基、1,4-二氧雜環(huán)己烷基、1,3-二氧雜環(huán)己烷基、1,3-二氧雜環(huán)戊烷基、1,4-二氧雜環(huán)己二烯基、四氫呋喃基、二氫吡咯基、吡咯烷基、咪唑烷基、4,5-二氫咪唑基、吡唑烷基、4,5-二氫吡唑基、2,5-二氫噻吩基、四氫噻吩基、4,5-二氫噻唑基、哌啶基、哌嗪基、嗎啉基、4,5-二氫噁唑基、4,5-二氫異噁唑基、2,3-二氫異噁唑基、2h-1,2-噁嗪基、6h-1,3-噁嗪基、4h-1,3-噻嗪基、6h-1,3-噻嗪基、2h-吡喃基、2h-吡喃-2-酮基、3,4-二氫-2h-吡喃基、2,5-二氫噻吩基、3,4-二氫-2h-吡喃基、5,6-二氫-4h-1,3-噁嗪基、1,2,3,6-四氫吡啶基、1,2,3,4-四氫吡啶基、2,3,4,5-四氫吡啶基等。
本發(fā)明所述的“雜原子”是指n、o、s、so和/或so2等，優(yōu)選n、o、s。
本發(fā)明所述的“f選自不存在”，是指y直接與苯基連接。
本發(fā)明通式(ⅰ)(ⅱ)中的
本發(fā)明所述“部分飽和”是指環(huán)部分包括至少一個雙鍵或三鍵。
本發(fā)明還提供了式(i)化合物的制備方法，其包括但不限于下述工藝路線(其中，各縮寫所代表的定義如下：dcm：二氯甲烷；dmf：n,n-二甲基甲酰胺；dmso：二甲基亞砜；ea：乙酸乙酯；meoh：甲醇；pe：石油醚；thf：四氫呋喃；dibal-h：二異丁基氫化鋁；tscl：對甲苯磺酰氯)
工藝路線：
r1、r2、r3、r4、m、n、w、a、z、e、f、x、y如前文所述，a'代表氟原子、氯原子、溴原子和碘原子。
具體的示例性步驟如下：
1、中間體1的制備
將起始原料1溶于有機溶劑(例如乙醇)中，分批緩慢加入起始原料2，加畢，加入堿性溶液(例如naoh溶液)，加熱到60℃-90℃反應5-48小時。反應完畢，反應液減壓除去溶劑，固體用水洗滌，干燥，得中間體1。
2、中間體2的制備
將中間體1溶于有機溶劑(例如dmf)中，分批緩慢加入親電取代試劑(例如n-氯代丁二酰亞胺)，加完后，攪拌0.2-5小時，將反應液倒入水中。用有機溶劑(例如乙酸乙酯)萃取，有機相用水和飽和氯化鈉溶液洗滌，干燥，除去溶劑得中間體2。
3、中間體3的制備
將中間體2溶于有機溶劑(例如三乙胺)中，加入起始原料3，反應5-20小時。反應完畢，減壓脫除溶劑，柱色譜分離(例如pe:ea＝10:1)得中間體3。
4、中間體4的制備
將中間體3溶于有機溶劑(例如四氫呋喃)中，冰浴冷卻，加入二異丁基氫化鋁(dibal-h)的甲苯溶液，加畢升溫至20-30℃反應5-20小時，反應完畢，冰浴，加入飽和的鹵化劑(例如氯化銨溶液)淬滅反應，用有機溶劑(例如乙酸乙酯)萃取，有機相用飽和的鹵化劑(例如氯化銨溶液和氯化鈉溶液)洗滌，干燥，除去溶劑得中間體4。
5、中間體5的制備
將中間體4溶于有機溶劑(例如二氯甲烷)中，加入三乙胺，然后加入鹵化物(例如三氯化磷，三溴化磷)，20-40℃反應0.5-5小時。反應完畢后除去溶劑，柱色譜分離(例如pe:ea＝10:1)得中間體5。
6、中間體6的制備
制備或購買中間體6。
7、中間體7的制備
將中間體6溶于有機溶劑(例如n,n-二甲基甲酰胺)中，冷卻，加入氫化鈉，氮氣保護，并升溫至20-40℃反應0.2-12小時，加入中間體5。室溫反應0.5-12小時，反應完畢，加入水(或甲醇)淬滅，用有機溶劑(例如乙酸乙酯，二氯甲烷)萃取，有機相用無水硫酸鈉干燥，濃縮，柱色譜(優(yōu)選為：pe:ea＝2-5:1)純化得中間體7。
8、式(i)化合物的制備
將中間體7溶于有機溶劑(例如甲醇，甲醇/水，四氫呋喃)中，加入堿性化合物(優(yōu)選為：氫氧化鋰，氫氧化鈉)，25-80℃反應0.5-24小時。反應完畢，加入酸性溶液(優(yōu)選為鹽酸)調(diào)節(jié)ph值，加入有機溶劑(例如乙酸乙酯，二氯甲烷)萃取，分液，有機相無水硫酸鈉干燥，真空濃縮，柱色譜純化(優(yōu)選為：dcm:meoh＝20-50:1)得式(i)化合物。
本發(fā)明式(i)所示化合物的“藥學上可接受的鹽”是指式(i)化合物中存在的酸性官能團與適當?shù)臒o機或者有機陽離子(堿)形成的鹽，包括與堿金屬或堿土金屬形成的鹽、銨鹽，以及與含氮有機堿形成的鹽；以及式(i)化合物中存在的堿性官能團(例如-nh2等)與適當?shù)臒o機或者有機陰離子(酸)形成的鹽，包括與無機酸、與有機羧酸。
本發(fā)明式(i)所示化合物的“酯”是指，當式(i)化合物存在羧基時，可以與醇發(fā)生酯化反應而形成的酯，當式(i)化合物存在羥基時，可以與有機酸、無機酸、有機酸鹽等發(fā)生酯化反應而形成的酯。酯在酸或者堿存在的條件下，可以發(fā)生水解反應生成相應的酸或醇。
本發(fā)明所述的“立體異構(gòu)體”，指當本發(fā)明化合物含有一個或多個不對稱中心，因而可作為外消旋體和外消旋混合物、單一對映異構(gòu)體、非對映異構(gòu)體混合物和單一非對映異構(gòu)體。本發(fā)明化合物有不對稱中心，這類不對稱中心各自會獨立地產(chǎn)生兩個光學異構(gòu)體，本發(fā)明的范圍包括所有可能的光學異構(gòu)體和非對映異構(gòu)體混合物和純的或部分純的化合物。本發(fā)明所述的化合物若含有烯烴雙鍵，除非特別說明，本發(fā)明包括順式異構(gòu)體和反式異構(gòu)體。本發(fā)明所述的化合物可以以互變異構(gòu)體形式存在，其通過一個或多個雙鍵位移而具有不同的氫的連接點。
本發(fā)明進一步要求保護包括式(i)所示的化合物、其藥學上可接受的鹽、其酯以及他們的立體異構(gòu)體與一種或多種藥用載體和/或稀釋劑的藥物組合物，其可以制成藥學上可接受的任一劑型。以口服、腸胃外、直腸或經(jīng)肺給藥等方式施用于需要這種治療的患者。用于口服給藥時，可制成常規(guī)的固體制劑，如片劑、膠囊劑、丸劑、顆粒劑等；也可制成口服液體制劑，如口服溶液劑、口服混懸劑、糖漿劑等。制成口服制劑時，可以加入適宜的填充劑、粘合劑、崩解劑、潤滑劑等。用于腸胃外給藥時，可制成注射劑，包括注射液、注射用無菌粉末與注射用濃溶液。制成注射劑時，可采用現(xiàn)有制藥領(lǐng)域中的常規(guī)方法生產(chǎn)，配制注射劑時，可以不加入附加劑，也可根據(jù)藥物的性質(zhì)加入適宜的附加劑。用于直腸給藥時，可制成栓劑等。用于經(jīng)肺給藥時，可制成吸入劑或噴霧劑等。
本發(fā)明還提供了本發(fā)明式(i)所示的化合物、其藥學上可接受的鹽、其酯以及它們的立體異構(gòu)體在制備用于治療和/或預防fxr介導的疾病及相關(guān)疾病的藥物中的應用。所述的疾病包括：(1)慢性肝內(nèi)或一些形式的肝外膽汁郁積病癥，或慢性膽汁郁積病癥或急性肝內(nèi)膽汁郁積病癥導致的肝纖維化，肝硬化，肝的梗阻性或慢性炎性紊亂，脂肪肝及其并發(fā)癥，與酒精有關(guān)的脂肪肝及其并發(fā)癥，急性肝衰竭，膽石病，和/或炎性腸道疾病，原發(fā)性膽汁性肝硬化；由于強迫脂質(zhì)，特別是甘油三酯蓄積，然后促進肝纖維化激活導致的慢性脂肪性和纖維性變性引起的病癥和疾病，如非酒精性脂肪肝病或非酒精性脂肪肝炎；脂質(zhì)或脂蛋白紊亂，如動脈粥樣硬化、血脂異常、血栓。(2)i型或ii型糖尿病的臨床并發(fā)癥，包括糖尿病性腎病、糖尿病性神經(jīng)病變、糖尿病性視網(wǎng)膜病、及其臨床顯性長期糖尿病的其他觀察到的結(jié)果。(3)非惡性過度增殖性疾病或過度增殖性疾病，選自：肝細胞癌、結(jié)腸腺瘤和息肉病、結(jié)腸腺癌、乳腺癌、胰腺癌、食管癌和其他形式的胃腸道和肝臟腫瘤性疾病。(4)血脂代謝異常性疾病包括動脈粥樣硬化、膽汁酸紊亂、良性肝內(nèi)膽汁淤積、進行性家族性肝內(nèi)膽汁淤積、原發(fā)性膽汁性肝硬化、原發(fā)性硬化性膽管炎、膽固醇結(jié)石、血脂異常、纖維化相關(guān)疾病、慢性肝炎、非病毒性肝炎、炎癥性腸病、腸道菌群失調(diào)、肝臟移植、脂肪肝、肝硬化、肝炎、肝臟衰竭、膽汁郁積、膽石病、非酒精性脂肪性肝病、酒精性脂肪性肝病、糖尿病、心肌梗塞、中風、血栓、癌癥等。
本發(fā)明化合物具有以下優(yōu)點：
(1)本發(fā)明式(i)化合物、其藥學上可接受的鹽、其酯、其溶劑化物以及它們的立體異構(gòu)體具有優(yōu)異的fxr受體激動活性，能被安全的用于治療和/或預防非酒精性脂肪肝、原發(fā)性膽汁性肝硬化、脂質(zhì)代謝紊亂、糖尿病并發(fā)癥及惡性腫瘤等相關(guān)疾病。
(2)本發(fā)明式(i)化合物、其藥學上可接受的鹽、其酯、其溶劑化物以及它們的立體異構(gòu)體顯示出良好的生物穩(wěn)定性，作用更持久，生物利用度高。
(3)本發(fā)明式(i)化合物、其藥學上可接受的鹽、其酯、其溶劑化物以及它們的立體異構(gòu)體顯示出較低的毒性，耐藥性好，安全性高。
以下通過生物學實驗進一步闡述本發(fā)明化合物有益效果，但不應將此理解為本發(fā)明化合物僅具有下列有益效果。
實驗例1：本發(fā)明化合物體外生化分析
(1)測試物：本發(fā)明化合物，其化學名稱和制備方法見各個化合物的制備實施例。
(2)實驗方法：
檢測化合物溶解在100％dmso中，稀釋1000倍后，取160nl，然后加入3.84μl檢測緩沖液；target/antibody混合物，稀釋2倍后，再加入8μl溶液；加入4.0μl稀釋4倍的共激活肽；在室溫孵育60分鐘；孵育后在熒光酶標儀檢測并分析數(shù)據(jù)。
(3)實驗結(jié)果和結(jié)論：
表1本發(fā)明化合物的生化分析
由表1可見，本發(fā)明化合物對fxr受體有一定的激動作用，對于治療非酒精性脂肪肝、原發(fā)性膽汁性肝硬化、脂質(zhì)代謝紊亂、糖尿病并發(fā)癥及惡性腫瘤等相關(guān)疾病具有重要的意義。
實驗例2：本發(fā)明化合物對hepg2細胞和人源肝細胞bsepmrna相對表達量的影響
(1)測試物：本發(fā)明化合物，其化學名稱和制備方法見各個化合物的制備實施例。
pbs：磷酸鹽緩沖液。
對照藥：px-102，為px-104(其結(jié)構(gòu)如背景技術(shù)所述)的消旋體。
(2)實驗方法：
①鋪細胞，加化合物和收集細胞
使用胰酶消化、收集細胞，測定細胞濃度；根據(jù)計數(shù)結(jié)果，重懸細胞至7.5e5cell/ml密度；6孔細胞培養(yǎng)板，每孔接種2ml細胞；將培養(yǎng)板至于培養(yǎng)箱中，于37℃，5％co2條件培養(yǎng)24小時。
使用dmso稀釋待測化合物至12150，4050，1350，450，150，50，16.67，5.56以及1.85μm；取上一步稀釋得到的儲液5μl分別加到5ml培養(yǎng)基中。得到的工作液濃度分別為12150，4050，1350，450，150，50，16.67，5.56，1.85nm。對照組培養(yǎng)基使用等體積的dmso代替儲液配制；移除細胞培養(yǎng)板的培養(yǎng)基，加入工作液和對照培養(yǎng)基；將培養(yǎng)板放回培養(yǎng)箱，于37℃，5％co2條件培養(yǎng)24小時。
處理24小時后，移除細胞培養(yǎng)板的培養(yǎng)基，用預冷(4℃)的pbs潤洗細胞3次；每孔加入200μl胰酶(預熱至37℃)，輕輕晃動使得胰酶均勻覆蓋板底。將培養(yǎng)板放回培養(yǎng)箱溫育直至細胞脫離板底。加入1ml培養(yǎng)基終止消化。用移液器輕輕吹打幾次后，將孔中所有物質(zhì)吸入到1.5ml的rnase-free的離心管中，200×g離心5分鐘；移除上清，收集細胞樣品。
②從細胞樣品中提取和純化rna
細胞裂解：準備新鮮的rna裂解液(1ml裂解液加10μl2-巰基乙醇)；向細胞樣品加入600μl裂解液；劇烈渦旋1-2分鐘，使細胞完全裂解；將細胞裂解液于12,000×g離心5分鐘；取上清轉(zhuǎn)移至rnase-free的1.5ml離心管中。
rna提取純化：添加等量的70％的乙醇到細胞裂解液中；劇烈震蕩離心管，充分混合，盡量分散加入乙醇后可能形成的微粒沉淀；將吸附柱置于收集管上，轉(zhuǎn)移混合物至吸附柱中。每次最多轉(zhuǎn)移700μl；室溫離心15秒。棄掉收集管中的溶液，將剩余的混合物全部轉(zhuǎn)移到吸附柱中。加700μl洗脫液i至吸附柱中；室溫離心15秒。加500μl洗脫液ii到吸附柱中；室溫離心15秒。棄掉收集管中的溶液，加500μl洗脫液ii到吸附柱中；室溫離心1-2分鐘，將吸附柱放置于rna收集管上；加入50μlrnase-free水至吸附柱的中心位置，室溫孵育1分鐘；室溫離心2分鐘，將rna洗脫至收集管中。
測量提取的rna的濃度和質(zhì)量。rna存儲于-80℃。
③rna逆轉(zhuǎn)錄為cdna
將第二步驟中提取的rna在70℃孵育5分鐘使rna變性。處理后將樣品置于冰上；使用rnase-free水稀釋rna樣品至200ng/μl；按照下表配制10μl的逆轉(zhuǎn)錄溶液，并和10μl變性rna混合。逆轉(zhuǎn)錄反應中rna的總量為2μg。實驗過程中，所有試劑均放置于冰上。
逆轉(zhuǎn)錄在g-stormgs1thermalcyclerpcr熱循環(huán)儀上進行。逆轉(zhuǎn)錄過程設(shè)置如下：25℃10分鐘→37℃120分鐘→85℃5分鐘→4℃∞。逆轉(zhuǎn)錄產(chǎn)物(cdna)存儲于-20℃。
④樣品qpcr實驗
根據(jù)qpcr擴增效率，選擇合適的cdna濃度進行樣品的qpcr實驗。第三步驟逆轉(zhuǎn)錄得到的cdna樣品，取10μl加60μlrnase-free水稀釋7倍。
按照下表準備80μl的反應混合物，用移液器取20μl到96孔pcr反應板中，3個重復(每個反應孔加7μl100ng)cdna樣品。
qpcr在abi7500實時定量pcr儀上進行，程序設(shè)置如下：50℃2分鐘→95℃10分鐘→95℃15秒→60℃60秒，其中95℃15秒與60℃60秒之間設(shè)置40個循環(huán)。
(3)實驗結(jié)果及結(jié)論：
表2.本發(fā)明化合物處理的hepg2細胞中bsepmrna相對表達量的檢測
備注：mrna的相對表達量％＝100*[mrna(測試物)/mrna(px-102)]
由表2可知本發(fā)明實施例化合物對hepg2細胞中bsepmrna有較好的表達作用，對于治療非酒精性脂肪肝具有重要的意義。
具體實施方式
以下通過實施例形式的具體實施方式，對本發(fā)明的上述內(nèi)容作進一步的詳細說明。但不應將此理解為本發(fā)明上述主題的范圍僅限于以下實施例。凡基于本發(fā)明上述內(nèi)容所實現(xiàn)的技術(shù)均屬于本發(fā)明的范圍。
制備方案
制備例1：(e)-2,6-二氯苯甲醛肟的制備
將2,6-二氯苯甲醛(25g,0.14mol)溶于乙醇(200ml)中，分批緩慢加入鹽酸羥胺(11g,0.16mol),加畢，加入naoh溶液(6.4g，0.16mol，溶于100ml水)，加熱到90℃反應24小時。反應完畢，反應液減壓除去溶劑，固體用水(200ml)洗滌，干燥，得標題化合物25.9g,產(chǎn)率97％。
制備例2：(z)-2,6-二氯-n-羥基亞氨芐基氯的制備
將(e)-2,6-二氯苯甲醛肟(25.9g,0.136mol)溶入到dmf(300ml)，分批緩慢加入n-氯代丁二酰亞胺(18.2g,0.136mol)，加完后，25℃攪拌一小時，將反應液倒入水(500ml)中。用乙酸乙酯(500ml)萃取，有機相用水(200ml)和飽和氯化鈉溶液(200ml)洗滌，無水硫酸鈉干燥，除去溶劑得標題化合物28g，粗產(chǎn)物不提純，進行下一步。
制備例3：5-環(huán)丙基-3-(2,6-二氯苯基)異噁唑-4-甲酸乙酯的制備
將(z)-2,6-二氯-n-羥基亞氨芐基氯(28g,0.125mol)溶于三乙胺中(100ml)，加入3-環(huán)丙基-3-氧代丙酸乙酯(19.5g,0.125mol)，25℃反應12小時。反應完畢，減壓脫除溶劑，柱色譜分離(pe:ea＝10:1)得標題化合物24.4g，兩步產(chǎn)率55.1％。
制備例4：(5-環(huán)丙基-3-(2,6-二氯苯基)異噁唑-4-基)甲醇的制備
將5-環(huán)丙基-3-(2,6-二氯苯基)異噁唑-4-甲酸乙酯(20g,61.3mmol)溶于四氫呋喃(300ml)中，冰浴冷卻，加入二異丁基氫化鋁(dibal-h)的甲苯溶液(1.5mol/l,123ml,0.184mol)，加畢升溫至25℃反應12小時，反應完畢，冰浴，加入飽和氯化銨溶液(200ml)淬滅反應，用乙酸乙酯(500ml)萃取，有機相用飽和氯化銨溶液(200ml)和飽和氯化鈉溶液(200ml)洗滌，無水硫酸鈉干燥，除去溶劑得標題化合物16g，產(chǎn)率92.0％。
制備例5-1：4-(溴甲基)-5-環(huán)丙基-3-(2,6-二氯苯基)異噁唑的制備
將(5-環(huán)丙基-3-(2,6-二氯苯基)異噁唑-4-基)甲醇(5.0g,17.6mmol)加入到二氯甲烷(30ml)中，加入三乙胺(1.78g,17.6mmol)，然后加入三溴化磷(4.77g,17.6mmol)，30℃反應2小時。反應完畢后除去溶劑，柱色譜分離(pe:ea＝10:1)得標題化合物4.3g，產(chǎn)率70.4％。
制備例5-2：4-(氯甲基)-5-環(huán)丙基-3-(2,6-二氯苯基)異噁唑的制備
將(5-環(huán)丙基-3-(2,6-二氯苯基)異噁唑-4-基)甲醇(5.0g,17.6mmol)加入到二氯甲烷(30ml)中，加入三乙胺(1.78g,17.6mmol)，然后加入三氯化磷(2.42g,17.6mmol)，30℃反應2小時。反應完畢后除去溶劑，柱色譜分離(pe:ea＝10:1)得標題化合物3.60g，產(chǎn)率67.7％。
實施例11-((反式)-4-((5-環(huán)丙基-3-(2,6-二氯苯基)異噁唑-4-基)甲氧基)環(huán)己基)-1h-吲哚-5-甲酸(化合物1)
(1)1,4-二氧雜螺[4.5]癸烷-8-醇的制備
將1,4-二氧雜螺[4,5]癸烷-8-酮(10g,64mmol)加入到甲醇(50ml)中，冰浴，緩慢分批加入硼氫化鈉(3.14g,83mmol)，然后升溫至25℃反應2小時。反應完畢，減壓濃縮，加入乙酸乙酯(100ml)，依次用水(30ml)和飽和氯化鈉溶液(30ml)洗滌，有機相用無水硫酸鈉干燥，濃縮，得到標題化合物9.6g,產(chǎn)率94.9％。
(2)1,4-二氧雜螺[4.5]癸烷-8-基4-甲基苯磺酸酯的制備
將1,4-二氧雜螺[4.5]癸烷-8-醇(9.6g,60mmol)加入吡啶(20ml)中，冰浴冷卻加入對甲苯磺酰氯(13.8g,72mmol)，然后加熱至30℃反應8小時。反應完畢，加入乙酸乙酯(250ml)，依次用1.0mol/l的稀鹽酸(250ml)，飽和碳酸氫鈉溶液(50ml)洗滌，有機相用無水硫酸鈉干燥，濃縮，柱色譜(石油醚:乙酸乙酯＝5:1)分離，得標題化合物13.6g，產(chǎn)率72.6％。
(3)1-(1,4-二氧雜螺[4.5]癸烷-8-基)-1h-吲哚-5-甲酸甲酯的制備
將1h-吲哚-5-甲酸甲酯(2.8g,16mmol)，1,4-二氧雜螺[4.5]癸烷-8-基4-甲基苯磺酸酯(10g,32mmol)，碳酸銫(11.2g,34mmol)加入n，n-二甲基乙酰胺(30ml)中，然后加熱至120℃反應2小時。反應完畢，加入乙酸乙酯(150ml)，用水(200ml)分三次洗滌，有機相用無水硫酸鈉干燥，濃縮，柱色譜(pe:ea＝5:1)分離，得標題化合物1.2g，產(chǎn)率23.8％。
(4)1-(4-氧環(huán)己基)-1h-吲哚-5-甲酸甲酯的制備
將1-(1,4-二氧雜螺[4.5]癸烷-8-基)-1h-吲哚-5-甲酸甲酯(1.2g,3.8mmol)和對甲苯磺酸(652mg,3.8mmol)加入到乙腈(30ml)和水(10ml)的混合溶液中，90℃微波反應25分鐘，反應完畢，加入乙酸乙酯(200ml)，依次用飽和碳酸氫鈉(100ml)和飽和氯化鈉溶液(100ml)洗滌，有機相用無水硫酸鈉干燥，濃縮，柱色譜分離(pe:ea＝5:1)，得產(chǎn)物640mg，產(chǎn)率62.1％。
(5)1-((反式)-4-羥基環(huán)己基)-1h-吲哚-5-甲酸甲酯的制備
將1-(4-氧環(huán)己基)-1h-吲哚-5-甲酸甲酯(640mg,2.36mmol)加入到甲醇(15ml)中，冰浴，加入硼氫化鈉(136mg,3.6mmol)，然后升溫至25℃反應2小時。反應完畢，減壓濃縮，加入乙酸乙酯(30ml)，依次用水(10ml)和飽和氯化鈉溶液(10ml)洗滌，有機相用無水硫酸鈉干燥，濃縮，得標題化合物480mg，產(chǎn)率74.5％。
(6)1-((反式)-4-((5-環(huán)丙基-3-(2,6-二氯苯基)異噁唑-4-基)甲氧基)環(huán)己基)-1h-吲哚-5-甲酸甲酯的制備
將1-((反式)-4-羥基環(huán)己基)-1h-吲哚-5-甲酸甲酯(240mg,0.88mmol)溶于n,n-二甲基甲酰胺(6ml)中，冰浴冷卻，加入nah(106mg,4.4mmol)，氮氣保護，并升溫至25℃反應1小時。加入4-(溴甲基)-5-環(huán)丙基-3-(2,6-二氯苯基)異噁唑(348mg,1.0mmol)的n,n-二甲基甲酰胺(1ml)溶液，25℃反應2小時，反應完畢，加入水(10ml)淬滅，用乙酸乙酯(25ml)萃取，有機相用無水硫酸鈉干燥，濃縮，柱色譜(pe:ea＝5:1)，得產(chǎn)物204mg，產(chǎn)率43.0％。
(7)1-((反式)-4-((5-環(huán)丙基-3-(2,6-二氯苯基)異噁唑-4-基)甲氧基)環(huán)己基)-1h-吲哚-5-甲酸的制備
將1-((反式)-4–((5-環(huán)丙基-3-(2,6-二氯苯基)異噁唑-4-基)甲氧基)環(huán)己基)-1h-吲哚-5-甲酸甲酯(204mg,0.38mmol)，氫氧化鋰(92mg,3.8mmol)加入甲醇(6ml)中，然后加熱至60℃反應2小時。反應完畢，加入0.5mol/l的稀鹽酸(10ml)，用乙酸乙酯(50ml)萃取，有機相用無水硫酸鈉干燥，濃縮，柱色譜(dcm:meoh＝20:1)，得產(chǎn)物138mg，產(chǎn)率69.2％。
分子式：c28h26cl2n2o4分子量：525.4lc-ms(m/z):525.1(m+h)+
1h-nmr(400mhz,meod)δ:8.30(s,1h),7.82(dd,1h,j1＝8.8hz,j2＝1.6hz),7.45-7.60(m,4h),7.38(d,1h,j＝3.2hz),6.57(d,1h,j＝3.2hz),4.41(s,2h),4.34-4.38(m,2h),2.20-2.23(m,1h),2.01-2.03(m,4h),1.78-1.81(m,2h),1.31-1.39(m,4h),1.19-1.21(m,4h).
實施例21-((順式)-4-((5-環(huán)丙基-3-(2,6-二氯苯基)異噁唑-4-基)甲氧基)環(huán)己基)-1h-吲哚-5-甲酸(化合物2)
(1)1-((順式)-4-乙酰氧基環(huán)己基)-1h-吲哚-5-甲酸甲酯的制備
將1-((反式)-4-羥基環(huán)己基)-1h-吲哚-5-甲酸甲酯(制備方法同實施例1中的制備過程，240mg,0.88mmol)，醋酸(54mg,0.90mmol)，三苯基膦(472mg,1.8mmol)溶于干燥的四氫呋喃中，氮氣保護，冰浴下滴加偶氮二甲酸二乙酯(313mg,1.8mmol)，加完后升溫至25℃反應2小時，加入乙酸乙酯(20ml)，用飽和氯化鈉溶液(10ml)洗滌，有機相用無水硫酸鈉干燥，濃縮，柱色譜分離(pe:ea＝5:1)，得標題化合物220mg，產(chǎn)率79.4％。
(2)1-((順式)-4-羥基環(huán)己基)-1h-吲哚-5-甲酸的制備
將1-((順式)-4-乙酰氧基環(huán)己基)-1h-吲哚-5-甲酸甲酯(220mg,0.70mmol)溶于甲醇(5ml)中，加入氫氧化鋰(168mg,7.0mmol)，25℃反應12小時，加入0.5mol/l的稀鹽酸(10ml)，用乙酸乙酯(50ml)萃取，有機相用無水硫酸鈉干燥，濃縮得標題化合物169mg，產(chǎn)率92.8％。
(3)1-((順式)-4-羥基環(huán)己基)-1h-吲哚-5-甲酸甲酯的制備
將1-((順式)-4-羥基環(huán)己基)-1h-吲哚-5-甲酸(169mg,0.65mmol)溶于乙腈(5ml)中，加入碳酸鉀(90mg,0.65mmol)，碘甲烷(99mg,0.70mmol)，25℃反應2小時。加入水(10ml)，用乙酸乙酯(50ml)萃取，有機相用無水硫酸鈉干燥，濃縮，得標題化合物138mg，產(chǎn)率77.7％。
(4)1-((順式)-4-((5-環(huán)丙基-3-(2,6-二氯苯基)異噁唑-4-基)甲氧基)環(huán)己基)-1h-吲哚-5-甲酸甲酯的制備
將1-((順式)-4-羥基環(huán)己基)-1h-吲哚-5-甲酸甲酯(120mg,0.44mmol)溶于n，n-二甲基甲酰胺(6ml)中，冰浴冷卻，加入nah(53mg,2.2mmol)，氮氣保護，并升溫至25℃反應1小時。加入4-(溴甲基)-5-環(huán)丙基-3-(2,6-二氯苯基)異噁唑(174mg,0.5mmol)的n，n-二甲基甲酰胺(1ml)溶液，25℃反應2小時，反應完畢，加入水(10ml)淬滅，用乙酸乙酯(25ml)萃取，有機相用無水硫酸鈉干燥，濃縮，經(jīng)柱層析(pe:ea＝5:1)，得標題化合物84mg，產(chǎn)率35.4％。
(5)1-((順式)-4-((5-環(huán)丙基-3-(2,6-二氯苯基)異噁唑-4-基)甲氧基)環(huán)己基)-1h-吲哚-5-甲酸的制備
將1-((順式)-4-((5-環(huán)丙基-3-(2,6-二氯苯基)異噁唑-4-基)甲氧基)環(huán)己基)-1h-吲哚-5-甲酸甲酯(84mg,0.16mmol)，氫氧化鋰(38mg,1.6mmol)加入甲醇(6ml)中，然后加熱至60℃反應2小時。反應完畢，加入0.5mol/l的稀鹽酸(10ml)，用乙酸乙酯(50ml)萃取，有機相用無水硫酸鈉干燥，濃縮，柱色譜(dcm:meoh＝20:1)，得產(chǎn)物38mg，產(chǎn)率45.2％。
分子式：c28h26cl2n2o4分子量：525.4lc-ms(m/z):525.1(m+h)+
1h-nmr(400mhz,meod)δ:8.30(s,1h),7.81(dd,1h,j1＝8.8hz,j2＝1.2hz),7.45-7.51(m,4h),7.30(d,1h,j＝3.2hz),6.60(d,1h,j＝3.2hz),4.36(s,2h),4.27-4.30(m,1h),3.58-3.59(m,1h),2.27-2.31(m,1h),1.56-2.01(m,8h),1.18-1.19(m,4h).
實施例31-((反式)-4-((5-環(huán)丙基-3-(2,6-二氯苯基)異噁唑-4-基)甲氧基)環(huán)己基)-1h-苯并[d]咪唑-5-甲酸的制備(化合物3)
(1)4-(((反式)-4-羥基環(huán)己基)氨基)-3-硝基苯甲酸乙酯的制備
依次稱取4-氟-3-硝基苯甲酸乙酯(2.13g,10.0mmol)、(反式)-4-氨基環(huán)己醇(1.27g,11.0mmol)和碳酸銫(9.77g,30.0mmol)加入到n-甲基吡咯烷酮(20ml)中，升溫至85℃反應6小時。反應液冷卻至25℃，加入水(200ml)，析出大量固體，抽濾，濾餅水洗，真空干燥，得標題化合物(2.57g,產(chǎn)率83.4％)。
(2)3-氨基-4-(((反式)-4-羥基環(huán)己基)氨基)苯甲酸乙酯的制備
將4-(((反式)-4-羥基環(huán)己基)氨基)-3-硝基苯甲酸乙酯(2.57g,8.3mmol)溶解到甲醇(100ml)中，加入鈀炭(180mg)，氫氣氛圍下反應2小時。抽濾，濾餅用甲醇(50ml)洗，濾液濃縮，得標題化合物(2.18g,產(chǎn)率94.0％)。
(3)1-((反式)-4-羥基環(huán)己基)-1h-苯并[d]咪唑-5-甲酸乙酯的制備
將3-氨基-4-(((反式)-4-羥基環(huán)己基)氨基)苯甲酸乙酯(2.18g,7.8mmol)溶解到乙二醇甲醚(20ml)中，加入醋酸甲脒(2.41g,23.4mmol)，置于100℃油浴中反應5小時。冷卻，反應液直接濃縮，粗品經(jīng)硅膠柱層析(二氯甲烷:甲醇＝20:1)純化，得標題化合物(1.49g,產(chǎn)率65.9％)。
(4)1-((反式)-4-((5-環(huán)丙基-3-(2,6-二氯苯基)異噁唑-4-基)甲氧基)環(huán)己基)-1h-苯并[d]咪唑-5-甲酸乙酯的制備
將1-((反式)-4-羥基環(huán)己基)-1h-苯并[d]咪唑-5-甲酸乙酯(202mg,0.7mmol)溶解到n,n-二甲基甲酰胺(5ml)中，冰水浴下加入氫化鈉(質(zhì)量分數(shù)60％,52mg,1.3mmol)，加完升至25℃攪拌30分鐘，加入4-(溴甲基)-5-環(huán)丙基-3-(2,6-二氯苯基)異噁唑(243mg,0.7mmol)，繼續(xù)攪拌0.5小時。反應液加入甲醇(1ml)淬滅，加入水(20ml)，二氯甲烷(30ml×2)萃取，有機相合并，飽和氯化鈉溶液(20ml)洗，無水硫酸鈉干燥，濃縮，粗品經(jīng)硅膠柱層析(石油醚:乙酸乙酯＝2:1)，得標題化合物(88mg,產(chǎn)率22.7％)。
(5)1-((反式)-4-((5-環(huán)丙基-3-(2,6-二氯苯基)異噁唑-4-基)甲氧基)環(huán)己基)-1h-苯并[d]咪唑-5-甲酸的制備
將1-((反式)-4-((5-環(huán)丙基-3-(2,6-二氯苯基)異噁唑-4-基)甲氧基)環(huán)己基)-1h-苯并[d]咪唑-5-甲酸乙酯(88mg,0.16mmol)，溶解到四氫呋喃(2ml)中，加入1mol/l的氫氧化鋰水溶液(1ml)，25℃攪拌3小時。加入水(20ml)和乙酸乙酯(15ml)，分液，水相用1mol/l的鹽酸調(diào)節(jié)ph至3，加入二氯甲烷(15ml×2)萃取，有機相合并，無水硫酸鈉干燥，真空濃縮，粗品經(jīng)硅膠柱層析(二氯甲烷:甲醇＝50:1)，得標題化合物(25mg,產(chǎn)率29.9％)。分子式:c27h25cl2n3o4分子量:526.4lc-ms(m/z)：526.2(m+h)+
1hnmr(400mhz,dmso-d6)δ:8.39(s,1h),8.19(s,1h),7.88-7.81(m,1h),7.75-7.66(m,1h),7.66-7.62(m,2h),7.60-7.55(m,1h),4.45-4.32(m,3h),2.40-2.30(m,1h),2.05-1.78(m,7h),1.20-1.08(m,6h).
實施例41-((順式)-4-((5-環(huán)丙基-3-(2,6-二氯苯基)異噁唑-4-基)甲氧基)環(huán)己基)-1h-苯并[d]咪唑-5-甲酸的制備(化合物4)
(1)4-(((順式)-4-羥基環(huán)己基)氨基)-3-硝基苯甲酸乙酯的制備
制備過程參照實施例3，反應步驟(1)。
(2)3-氨基-4-(((順式)-4-羥基環(huán)己基)氨基)苯甲酸乙酯的制備
制備過程參照實施例3，反應步驟(2)。
(3)1-((順式)-4-羥基環(huán)己基)-1h-苯并[d]咪唑-5-甲酸乙酯的制備
制備過程參照實施例3，反應步驟(3)。
(4)1-((順式)-4-((5-環(huán)丙基-3-(2,6-二氯苯基)異噁唑-4-基)甲氧基)環(huán)己基)-1h-苯并[d]咪唑-5-甲酸乙酯的制備
制備過程參照實施例3，反應步驟(4)。
(5)1-((順式)-4-((5-環(huán)丙基-3-(2,6-二氯苯基)異噁唑-4-基)甲氧基)環(huán)己基)-1h-苯并[d]咪唑-5-甲酸的制備
制備過程參照實施例3，反應步驟(5)。
分子式:c27h25cl2n3o4分子量:526.4lc-ms(m/z)：526.2(m+h)+
1hnmr(400mhz,dmso-d6)δ:12.67(s,1h),8.24-8.22(m,2h),7.83(m,1h),7.64(d,j＝8.8hz,1h),7.58-7.56(m,2h),7.48-7.45(m,1h),4.35-4.30(m,3h),3.52(m,1h),2.40-2.30(m,1h),1.78-1.72(m,5h),1.60-1.48(m,2h),1.18-1.14(m,5h).
實施例51-(-4-((5-環(huán)丙基-3-(2,6-二氯苯基)異噁唑-4-基)甲氧基)環(huán)己基)-1h-苯并[d]咪唑-4-甲酸的制備(化合物5)
(1)3-氟-2-硝基苯甲酸乙酯的制備
將3-氟-2-硝基苯甲酸(6.8g，36.8mmol)加入到乙醇(80ml)中，然后加入濃硫酸(2ml)，在85℃下反應24小時。反應液濃縮，加入水(100ml)和乙酸乙酯(100ml)，分液，有機相真空濃縮，得標題化合物(6.2g,產(chǎn)率79.1％)。
(2)3-((4-羥基環(huán)己基)氨基)-2-硝基苯甲酸乙酯的制備
制備過程參照實施例3，反應步驟(1)。
(3)2-氨基-3-((4-羥基環(huán)己基)氨基)苯甲酸乙酯的制備
制備過程參照實施例3，反應步驟(2)。
(4)1-(4-羥基環(huán)己基)-1h-苯并[d]咪唑-4-甲酸乙酯的制備
制備過程參照實施例3，反應步驟(3)。
(5)1-(-4-((5-環(huán)丙基-3-(2,6-二氯苯基)異噁唑-4-基)甲氧基)環(huán)己基)-1h-苯并[d]咪唑-4-甲酸的制備
制備過程參照實施例3，反應步驟(4),(5)。
分子式:c27h25cl2n3o4分子量:526.4lc-ms(m/z)：526.2(m+h)+
1hnmr(400mhz,dmso-d6)δ:8.38(s,1h),7.93(d,j＝8.0hz,1h),7.59-7.47(m,4h),7.28-7.24(m,1h),5.14(s,2h),4.45-4.35(m,1h),3.64-3.55(m,1h),2.65-2.60(m,1h),2.05-1.85(m,6h),1.55-1.45(m,3h),1.22-1.10(m,3h).
實施例61-(4-((5-環(huán)丙基-3-(2,6-二氯苯基)異噁唑-4-基)甲氧基)環(huán)己基)-1h-苯并[d]咪唑-6-甲酸的制備(化合物6)
(1)3-氟-4-硝基苯甲酸乙酯的制備
稱取3-氟-4-硝基苯甲酸(5.0g,27.0mmol)溶于乙醇(60ml)，加入濃硫酸(1ml)，加熱至85℃反應6小時，lc-ms檢測反應完全，減壓濃縮，加入飽和碳酸氫鈉水溶液(100ml)和乙酸乙酯(150ml)，分液，有機相用無水硫酸鈉干燥，抽濾，濾液濃縮，得標題化合物(5.6g,產(chǎn)率97.2％)。
(2)3-((4-羥基環(huán)己基)氨基)-4-硝基苯甲酸乙酯的制備
制備過程參照實施例3，反應步驟(1)。
(3)4-氨基-3-((4-羥基環(huán)己基)氨基)苯甲酸乙酯的制備
制備過程參照實施例3，反應步驟(2)。
(4)1-(4-羥基環(huán)己基)-1h-苯并[d]咪唑-6-甲酸乙酯的制備
制備過程參照實施例3，反應步驟(3)。
(5)1-(4-((5-環(huán)丙基-3-(2,6-二氯苯基)異噁唑-4-基)甲氧基)環(huán)己基)-1h-苯并[d]咪唑-6-甲酸乙酯的制備
制備過程參照實施例3，反應步驟(4)。
(6)1-(4-((5-環(huán)丙基-3-(2,6-二氯苯基)異噁唑-4-基)甲氧基)環(huán)己基)-1h-苯并[d]咪唑-6-甲酸的制備
制備過程參照實施例3，反應步驟(5)。
分子式:c27h25cl2n3o4分子量:526.4lc-ms(m/z)：526.2(m+h)+
1hnmr(400mhz,dmso-d6)δ:8.46(s,1h),8.22(s,1h),7.81-7.79(m,1h),7.69-7.65(m,3h),7.60-7.57(m,1h),4.56-4.51(m,1h),4.33(s,2h),3.31(s,1h),2.37-2.32(m,1h),2.00-1.79(m,6h),1.31-1.12(m,7h)。