本發(fā)明涉及醫(yī)學(xué)診斷技術(shù)領(lǐng)域，具體而言，涉及一種用于檢測傳單患者EB病毒FISH檢測探針及其制備方法。

背景技術(shù)：

自從1964年Epstein和Barr等在淋巴瘤細(xì)胞系中發(fā)現(xiàn)了EB病毒顆粒以來，人們對EBV的認(rèn)識進(jìn)入了嶄新的階段。EBV與人類多種感染性疾病如傳染性單核細(xì)胞增多癥、慢性活動性EBV感染、EBV相關(guān)的噬血細(xì)胞增多綜合征、移植后淋巴組織增生癥及淋巴瘤、鼻咽癌及胃癌等多種惡性腫瘤密切相關(guān)。

傳染性單核細(xì)胞增多癥(infectious mononucleosis,IM)是一種急性全身淋巴細(xì)胞增生性疾病，常在兒童期或青春期初期感染較大量的EBV時發(fā)病，主要由飛沫與唾液經(jīng)呼吸道傳播，其次通過密切接觸傳播，潛伏期約40天。IM的典型特征包括不規(guī)則發(fā)熱，咽喉炎，淋巴結(jié)腫大，全身乏力，以及外周血非典型淋巴細(xì)胞增多。脾肝腫大，黃疸和脾破裂等并發(fā)癥十分罕見。其病程通常持續(xù)數(shù)天至數(shù)周，臨床常認(rèn)為其呈自限性。有文獻(xiàn)稱，近年來EBV感染兒童逐年增多，夏秋較冬春季節(jié)常見，且半數(shù)兒童感染EBV后表現(xiàn)為IM，且臨床表現(xiàn)趨于多樣化。一般情況下IM以抗病毒及對癥支持治療為主，預(yù)后較好。

但少數(shù)IM患兒臨床表現(xiàn)呈爆發(fā)性過程，出現(xiàn)嚴(yán)重并發(fā)癥，累及全身多個系統(tǒng)并造成多臟器損害，臨床稱為重癥IM(severe infectiousmononucleosis,SIM)或致死性IM(fatal infectious mononucleosis，F(xiàn)IM)，其中約80％FIM可進(jìn)一步進(jìn)展為EBV-AHS。然而目前國內(nèi)對于重癥IM并沒有統(tǒng)一認(rèn)識及診斷標(biāo)準(zhǔn)，臨床上主要依據(jù)患者癥狀輕重以及并發(fā)癥來判斷其病情輕重程度，以便與普通IM區(qū)分。有研究認(rèn)為IM患者有2個系統(tǒng)以上受損即可診斷為重癥IM，曾有學(xué)者進(jìn)行過統(tǒng)計(jì)分析發(fā)現(xiàn)重癥IM如不及時治療死亡率高達(dá)92.3％。所以如何及時并且準(zhǔn)確診斷SIM，對于病人的治療及預(yù)后十分關(guān)鍵。

因EBV的分離相對困難，所以臨床一般采用血清學(xué)方法作輔助診斷。但當(dāng)機(jī)體免疫低下時，則很難用血清學(xué)結(jié)果分析，所以在EBV感染中應(yīng)用分子診斷學(xué)方法十分必要。目前常見EBV的臨床檢測項(xiàng)目有外周血涂片進(jìn)行異型淋巴細(xì)胞計(jì)數(shù)、嗜異性凝集試驗(yàn)、EBV抗體檢測(包括EBV-VCA-IgM，EBV-VCA-IgG)、PCR檢測EBV-DNA。

外周血涂片異淋計(jì)數(shù)以及嗜異性凝集試驗(yàn)均為非特異性試驗(yàn)。多數(shù)IM患者異淋計(jì)數(shù)超過10％，但除EBV外的其他病毒如巨細(xì)胞病毒(cytomegalovirus)、登革病毒(Dengue virus)等，或某些藥物感染也可引起同樣反應(yīng)。嗜異性凝集試驗(yàn)在起病后1-2周可出現(xiàn)陽性，3-4周達(dá)到高峰，陽性率據(jù)稱80％以上，但是少數(shù)病例該實(shí)驗(yàn)結(jié)果始終陰性。另外感染過程的早期常出現(xiàn)嗜異性凝集試驗(yàn)假陰性。

EBV-VCA-IgM是IM急性期重要的診斷指標(biāo)，出現(xiàn)在EBV感染早期，通常在4-6周消失，所以此項(xiàng)指標(biāo)與病人入院時間有密切關(guān)系，加之實(shí)驗(yàn)結(jié)果也常受到實(shí)驗(yàn)人員操作方式、診斷試劑盒檢出率的影響，常常不能準(zhǔn)確反應(yīng)病人情況。EBV-VCA-IgG出現(xiàn)在EBV感染的急性期，發(fā)病后2-4周達(dá)到高峰，略微下降后持續(xù)終生，所以這一指標(biāo)目前多用于流行病學(xué)統(tǒng)計(jì)。

臨床上常用且較為可靠的指標(biāo)僅有PCR檢測EBV-DNA結(jié)果。PCR是20世紀(jì)80年代中期發(fā)展起來的體外核酸擴(kuò)增技術(shù)，由Mullis首次報(bào)道，通過體外擴(kuò)增可以將目的基因片段百萬倍地放大，從而極大地提高核酸分子檢測的靈敏度。PCR具有特異性強(qiáng)、靈敏度高、重復(fù)性好、簡便快速、易自動化以及產(chǎn)率高等優(yōu)點(diǎn)。但正由于PCR使DNA拷貝數(shù)呈指數(shù)增長，所以極微量的模板污染就可以造成假陽性出現(xiàn)。其次在標(biāo)本采集、運(yùn)輸及處理過程中也易發(fā)生污染。另假陰性也是其反應(yīng)過程中易出現(xiàn)的一個不可忽視的問題，這類問題大多數(shù)與標(biāo)本處理、PCR試劑過期或PCR儀器故障有關(guān)。

有鑒于此，特提出本發(fā)明。

技術(shù)實(shí)現(xiàn)要素：

本發(fā)明的目的在于提供一種用于檢測傳染性單核細(xì)胞增多癥患者EB病毒FISH檢測探針，以解決上述問題。

為了實(shí)現(xiàn)本發(fā)明的上述目的，特采用以下技術(shù)方案：

一種用于檢測傳染性單核細(xì)胞增多癥患者EB病毒FISH檢測探針，所述探針為EB病毒BamHI-W片段經(jīng)過標(biāo)記得到；

所述BamHI-W片段的核苷酸序列為EBV基因組13232-16189所示。

目前傳染性單核細(xì)胞增多癥患者(以下簡稱傳單患者)EB病毒的臨床診斷方法主要有病毒培養(yǎng)、抗體檢測及核酸檢測等；EBV培養(yǎng)是患者標(biāo)本接種至新鮮的人B細(xì)胞或臍血淋巴細(xì)胞中，4周后可通過熒光抗體染色技術(shù)檢測EBV抗原。但EBV分離鑒定耗時長而且需要特殊的組織培養(yǎng)條件，因而不適宜常規(guī)檢測所采用。目前EBV培養(yǎng)主要應(yīng)用于對EBV感染的發(fā)病機(jī)制、預(yù)防、治療的體外研究。抗體檢測是用免疫熒光法、免疫酶法或ELISA法檢測EBV抗體有助于EBV感染的診斷。其中ELISA法是目前最常用的檢測EBV的方法。此方法操作簡單、快速，試驗(yàn)結(jié)果應(yīng)用酶標(biāo)儀讀數(shù)，準(zhǔn)確性較高，在臨床得到廣泛應(yīng)用。急性初次EBV感染的特點(diǎn)是可檢測到早期抗原VCA IgM抗體、VCA IgG及VCA IgA。此方法的缺點(diǎn)是特異性較差，抗體產(chǎn)生存在窗口期及操作穩(wěn)定性欠佳等。核酸檢測主要有EBVPCR擴(kuò)增法，具有較高敏感性和特異性。EBV-PCR有常規(guī)PCR、巢式PCR、多重PCR、逆轉(zhuǎn)錄PCR和實(shí)時PCR等。PCR從DNA水平檢測，其敏感度比病毒培養(yǎng)及抗體檢測高，但PCR檢測成本高且其特異性略差，結(jié)果易受各種不確定因素影響，易出現(xiàn)假陽性或假陰性，有時需要多次重復(fù)才能得出可靠結(jié)果。

以前國內(nèi)外的報(bào)道中從未有相關(guān)研究報(bào)道過利用FISH技術(shù)檢測傳單患者EBV的方法在臨床檢測中的應(yīng)用，因此如果在臨床中得以應(yīng)用及推廣無疑會在國內(nèi)外處于領(lǐng)先水平。

優(yōu)選的，如上所述的FISH檢測探針，所述標(biāo)記采用Biotin-dUTP標(biāo)記。

在相關(guān)酶(例如Klenow酶)的催化下，通過隨機(jī)引物標(biāo)記反應(yīng)(randomprime labeling)可以把生物素標(biāo)記的Biotin-dUTP摻入到新合成的DNA探針中，這樣就可以產(chǎn)生生物素標(biāo)記的DNA探針。在隨機(jī)引物標(biāo)記反應(yīng)過程中，一些標(biāo)記好的DNA探針可以被酶從模板DNA鏈上驅(qū)趕下來。這樣在模板量較少的情況下，通過隨機(jī)引物標(biāo)記反應(yīng)，最后可以產(chǎn)生比模板DNA量更多的生物素標(biāo)記DNA探針，可多達(dá)1-15倍左右。

更優(yōu)選的，所述標(biāo)記可采用Biotin-16-dUTP或Biotin-11-dUTP。

一種用于檢測傳染性單核細(xì)胞增多癥患者EB病毒FISH檢測探針的制備方法，包括：

培養(yǎng)EB病毒并提取EB病毒DNA作為模板，PCR擴(kuò)增EB病毒BamHI-W片段，對所述BamHI-W片段進(jìn)行標(biāo)記得到標(biāo)記產(chǎn)物；純化所述標(biāo)記產(chǎn)物后得到EB病毒FISH檢測探針。

優(yōu)選的，如上所述的制備方法，培養(yǎng)EB病毒所用的宿主細(xì)胞為P3hr-1細(xì)胞；

更優(yōu)選的，病毒懸液的制備過程包括：培養(yǎng)P3hr-1細(xì)胞，待細(xì)胞生長至融合度85～95％，收集培養(yǎng)液，凍于-70～90℃，過夜。次日，水浴融化，再放于-70～90℃冰箱，反復(fù)凍融2～4次。0～6℃，2500～3500rpm離心15～25min，將上清用0.4～0.5μm濾器過濾；用Millipore濃縮柱4500～5500rpm，0～6℃離心濃縮至2ml左右。將濃縮液轉(zhuǎn)移到無菌的EP管中，18000～22000g，0～6℃離心70～110min。將上清棄去后用無血清的培養(yǎng)液重懸沉淀，即為病毒懸液。

優(yōu)選的，如上所述的制備方法，擴(kuò)增EB病毒BamHI-W片段所用的上游引物核苷酸序列為：

5’-CTTCTCTCTGTCCCCCTGCTCCTCT-3’；

下游引物核苷酸序列為：

5’-CTAGGGTCCCTTCTGGGGGACATCCT-3’。

優(yōu)選的，如上所述的制備方法，在所述擴(kuò)增的反應(yīng)程序中，Tm值為53～57℃，反應(yīng)循環(huán)次數(shù)為30～34次。

優(yōu)選的，如上所述的制備方法，對所述BamHI-W片段進(jìn)行標(biāo)記的方法包括：

1)、將BamHI-W片段DNA加入水中98～100℃變性7～13分鐘；

2)、按照1g BamHI-W片段DNA：3.5～4.5μL Biotin-High prime的比例加入所述Biotin-High prime，瞬時離心，36～38℃水浴8～16h；

3)、63～67℃加熱8～12分鐘終止標(biāo)記得到標(biāo)記產(chǎn)物。

優(yōu)選的，如上所述的制備方法，純化所述標(biāo)記產(chǎn)物的操作包括：

a)、按體積份數(shù)計(jì)，將17～23份標(biāo)記產(chǎn)物、8～12份7.5M的醋酸銨、0.6～1.4份魚精DNA、70～110份冰冷的無水乙醇混合并于-75～85℃沉淀60～70min；

b)、0～6℃，11000～13000rpm離心15～25min后棄上清；

c)、加入73～77％乙醇洗滌1～2次，0～6℃，11000～13000rpm離心15～25min；

d)、棄上清，風(fēng)干沉淀，用FISH雜交液重懸。

一種用于檢測傳染性單核細(xì)胞增多癥患者EB病毒的試劑盒，其包含如上所述的FISH探針。

如上所述的FISH探針在制備檢測傳染性單核細(xì)胞增多癥患者EB病毒的試劑或試劑盒中的應(yīng)用。

一種檢測傳單患者EBV的FISH方法，使用如上所述的探針，或如上所述的試劑盒與預(yù)處理后的待檢樣品進(jìn)行雜交檢測；復(fù)染后在顯微鏡下觀察熒光信號。

本發(fā)明的關(guān)鍵技術(shù)點(diǎn)在于對于傳單或其它常見的EBV引起的感染性疾病或EBV相關(guān)的腫瘤性疾病的診斷過程中，目前臨床上常用的檢測技術(shù)靈敏度和特異性有時達(dá)不到臨床上的要求導(dǎo)致部分病人的漏診及誤診，因此尋找更加靈敏、可靠及直觀的方法已經(jīng)勢在必行。

本發(fā)明首次在國際上利用P3hr-1產(chǎn)EBV的細(xì)胞株，提取病毒上清液并通過柱式病毒DNA濃縮純化EBV的DNA片段，然后以EBV的BamHI-W片段作為模板進(jìn)行PCR擴(kuò)增，得到3267bp的特異性PCR產(chǎn)物，通過對產(chǎn)物的純化后制備EBV的FISH探針，再通過逐步的熒光信號放大過程最終在熒光顯微鏡下可以清楚的看到細(xì)胞內(nèi)的EBV顆粒。利用此項(xiàng)技術(shù)先后在31例普通較為輕型的傳單患者及7例重癥的傳單患者的外周血提取的白細(xì)胞檢測，發(fā)現(xiàn)其靈敏度和特異性較常規(guī)的傳單檢測方法如嗜異性凝集實(shí)驗(yàn)、EBV-VCA IgM及PCR檢測EBV的病毒拷貝數(shù)都要高，而且病毒的細(xì)胞內(nèi)定位準(zhǔn)確，也能非常直觀的判斷病毒載量。這是國內(nèi)首次運(yùn)用FISH技術(shù)成功檢測出傳單患者體內(nèi)的EBV，此方法的建立為今后利用此方法檢測EBV相關(guān)腫瘤性疾病如鼻咽癌、淋巴瘤及胃癌也將起到很好的示范作用。

附圖說明

為了更清楚地說明本發(fā)明具體實(shí)施方式或現(xiàn)有技術(shù)中的技術(shù)方案，下面將對具體實(shí)施方式或現(xiàn)有技術(shù)描述中所需要使用的附圖作簡單地介紹，顯而易見地，下面描述中的附圖是本發(fā)明的一些實(shí)施方式，對于本領(lǐng)域普通技術(shù)人員來講，在不付出創(chuàng)造性勞動的前提下，還可以根據(jù)這些附圖獲得其他的附圖。

圖1為本發(fā)明實(shí)施例中的部分實(shí)驗(yàn)結(jié)果圖。

具體實(shí)施方式

下面將結(jié)合實(shí)施例對本發(fā)明的實(shí)施方案進(jìn)行詳細(xì)描述，但是本領(lǐng)域技術(shù)人員將會理解，下列實(shí)施例僅用于說明本發(fā)明，而不應(yīng)視為限制本發(fā)明的范圍。實(shí)施例中未注明具體條件者，按照常規(guī)條件或制造商建議的條件進(jìn)行。所用試劑或儀器未注明生產(chǎn)廠商者，均為可以通過市售購買獲得的常規(guī)產(chǎn)品。

實(shí)施例

FISH技術(shù)是目前臨床上檢測基因及病毒DNA的常用方法，具有非常直觀又有較高的靈敏度及特異性。但是國內(nèi)外在檢測EBV方面沒有成品的探針供應(yīng)，之前的報(bào)道常常僅限于基礎(chǔ)研究。因此要開發(fā)出能夠普遍適用于臨床的FISH EBV探針尤為必要。我們的前期工作中運(yùn)用培養(yǎng)產(chǎn)EBV的P3hr-1細(xì)胞株病毒上清通過柱式病毒純化柱濃縮EBV，通過DNA抽提試劑盒提取EBV的DNA。設(shè)計(jì)EBV的BaMH段特異的DNA引物擴(kuò)增此段DNA后得到3267bp的DNA片段，送南京金斯瑞公司測序證實(shí)。經(jīng)相關(guān)步驟成功研制出FISH探針。為驗(yàn)證此探針的臨床運(yùn)用價值，我們用此探針首先檢測了P3HR-1及raji細(xì)胞株中EBV的表達(dá)水平，結(jié)果顯示在這兩株細(xì)胞中都能有效的檢測出EB病毒顆粒。具體的探針制作過程如下：

1.EB病毒制備：培養(yǎng)P3hr-1細(xì)胞，待細(xì)胞生長至90％左右，收集培養(yǎng)基，凍于-80℃，過夜。次日，37℃水浴融化，再放于-80℃冰箱，反復(fù)凍融三次。4℃，3000rpm離心20分鐘，將上清用0.45μm濾器過濾。然后用Millipore濃縮柱5000rpm，4℃離心濃縮至2ml左右。將濃縮液轉(zhuǎn)移到無菌的1.5mlEP管中，20,000g，4℃離心1小時30分鐘。將上清棄去后用無血清的RPM1640培養(yǎng)基重懸沉淀，即為病毒懸液。

2.EB病毒DNA抽提：使用Qiagen公司QIAamp MinElute Virus Spin試劑抽提EBV-DNA。

3.探針模板的PCR擴(kuò)增：以EB病毒DNA為模板，PCR擴(kuò)增EB病毒BamHI-W(EBV genome 13232-16189)片段作為探針。

4.探針模板的PCR擴(kuò)增：

以EBV DNA為模板，PCR擴(kuò)增EBV BamH I-W片段。

引物序列如下：

上游引物5’-CTTCTCTCTGTCCCCCTGCTCCTCT-3’；

下游引物5’-CTAGGGTCCCTTCTGGGGGACATCCT-3’。

以50μL反應(yīng)體系計(jì)，PCR擴(kuò)增體系為：

PCR反應(yīng)程序?yàn)椋?/p>

5.PCR產(chǎn)物的膠回收純化：

(1)用1×TAE配制1％瓊脂糖凝膠，DNA與上樣緩沖液混合后100V電壓下電泳30min；

(2)30min后，用干凈的刀片在紫外燈下，小心并迅速的切下含有目的條帶的PCR產(chǎn)物置于1.5ml的EP管中，稱重，按1g:300μL加入BindingBuffer，56℃溶膠10分鐘；

(3)將純化柱放置于收集管中，將溶解后的膠轉(zhuǎn)移至純化柱內(nèi)，8000g離心1分鐘；

(4)將700μL溶解混合物轉(zhuǎn)移至離心過濾吸附柱內(nèi)，并將柱子放在一個干凈的2ml收集管中，室溫下10000g離心1min，使DNA結(jié)合在吸附柱上，棄去濾出液，將剩余混合物同樣方法移入吸附柱內(nèi)；

(5)將純化柱置于一空的收集管中，13000g離心2分鐘；

(6)將吸附柱重新套入收集管內(nèi)，加入300μl Binding Buffer(XP2)至吸附柱，室溫下13000g離心1min，棄去濾液；

(7)將空吸附柱重新套入收集管內(nèi)，室溫下13000g離心2min以甩干柱基質(zhì)殘余的液體；

(8)收集洗脫的DNA片段，即為目標(biāo)DNA，測定管中DNA濃度后送至南京金斯瑞公司測序，剩余DNA保存于-20℃?zhèn)溆谩?/p>

6.FISH探針的標(biāo)記：

采用Roche公司Biotin-High prime隨機(jī)引物標(biāo)記試劑盒。

具體步驟如下：

(1)取1μg模板DNA加于1.5mL EP管，再加入無酶水使總體積至16μL；

(2)將上述DNA置于沸水中變性10分鐘后，立即置冰上冷卻；

(3)輕輕混勻Biotin-High prime，加入4μL Biotin-High prime至上述變性的DNA中，瞬時離心，37℃水浴過夜；

(4)次日將上述混合液轉(zhuǎn)移至200μL PCR管中，65℃加熱10分鐘終止標(biāo)記。

7.探針的純化：

(1)向20μL的探針中加入10μL NH4AC(7.5M)，1μL魚精DNA，90μL冰冷的無水乙醇，-80℃沉淀1小時；

(2)4℃，12000rpm 20分鐘離心后棄上清；

(3)加入75％乙醇洗滌一次，離心4℃，12000rpm 20分鐘；

(4)將上清棄去，風(fēng)干沉淀，并用30μLFISH雜交液重懸探針。

8.細(xì)胞預(yù)處理：

(1)將懸浮細(xì)胞轉(zhuǎn)移至10ml離心管中，1100rpm離心10min，棄上清；

(2)加入0.075mol/LKCL低滲液，37℃水浴中放置20分鐘，離心丟棄上清；

(3)加入6ml固定液(甲醇：冰醋酸＝3:1)吹勻，1100rpm離心10min，重復(fù)三次；

(4)吸取20μL懸液滴片，20分鐘干燥后將玻片依次置于70％、95％及無水乙醇中脫水各3分鐘，晾干備用。

9.間接法FISH過程：

(1)將含有探針的雜交液10μL滴于上述處理后的玻片上，加蓋玻片，封片膠封嚴(yán)，82℃水浴箱中變性7分鐘，再置于濕盒42℃恒溫箱中過夜；

(2)42℃50％甲酰胺/2×SSC洗2次各5分鐘，0.05％TritonX-100/2×SSC洗5分鐘；

(3)加50μL1:100avidin-FITC(2.5％BSA/4×SSC),37℃濕盒中避光孵育30分鐘，0.05％Triton X-100/2×SSC洗3次；

(4)加50μL1:100鼠抗FITC(2.5％BSA/4×SSC)，37℃濕盒中避光孵育30分鐘，0.05％Triton X-100/2×SSC洗3次；

(5)加50μL1:100兔抗鼠FITC(2.5％BSA/4×SSC)，37℃濕盒中避光孵育30分鐘，0.05％Triton X-100/2×SSC洗3次；

(6)依次置于70％、95％及無水乙醇中脫水各3分鐘，晾干；

(7)加50μL DAPI液染色5分鐘，用防熒光淬滅的蓋玻片封片。

10.熒光顯微鏡檢測及結(jié)果判斷：

待玻片稍干后，置于熒光顯微鏡下，選擇合適的濾光片波長觀察。正常人胞漿中無綠色熒光信號，若出現(xiàn)綠色熒光信號則為陽性。

11.閾值的建立：

選取湘雅醫(yī)院健康體檢人群20人，外周血取血標(biāo)本作為對照樣本。每人用技術(shù)FISH分析200個細(xì)胞并計(jì)算平均的熒光顆粒數(shù)，我們得出正常閾值為4.02。如果患者檢測的熒光顆粒值高于此值判為陽性。

其中圖1為本發(fā)明的部分實(shí)驗(yàn)結(jié)果圖。圖A：FISH方法檢測的BJAB細(xì)胞株，顯示EBV為陰性；圖B：FISH方法檢測P3hr-1細(xì)胞株，為EBV陽性；圖C：FISH方法檢測raji細(xì)胞株，為EBV陽性。

注：BJAB細(xì)胞株為不產(chǎn)生EBV的淋巴瘤細(xì)胞株，P3hr-1和raji細(xì)胞株為產(chǎn)EBV的淋巴瘤細(xì)胞株，此圖是為了驗(yàn)證我們FISH探針的可靠性。

圖D：FISH方法檢測的健康對照者，顯示EBV為陰性；圖E：FISH方法檢測輕型傳單患者，顯示EBV弱陽性；圖F：FISH方法檢測重型傳單患者，顯示EBV強(qiáng)陽性。

實(shí)驗(yàn)例

發(fā)明人運(yùn)用自行研制的FISH探針，檢測38例傳單患者，并與常規(guī)檢測方法比較，具體結(jié)果如下。由表可知運(yùn)用FISH方法檢測的傳單患者，無論是普通型還是重癥傳單其陽性率明顯高于常規(guī)的嗜異性凝集實(shí)驗(yàn)，EBV-VCA-IgM，也高于目前臨床上認(rèn)為最為敏感的PCR法，因此在臨床上推廣此方法具有廣闊的實(shí)用前景。

注：上表運(yùn)用FISH技術(shù)檢測38例傳單患者取得了97.4％的陽性率，明顯比嗜異性凝集，免疫法測EBV-VCA抗體及PCR陽性率高。而且對于可用于檢測輕型及重型傳單的EBV載量有一定的鑒別診斷意義。

最后應(yīng)說明的是：以上各實(shí)施例僅用以說明本發(fā)明的技術(shù)方案，而非對其限制；盡管參照前述各實(shí)施例對本發(fā)明進(jìn)行了詳細(xì)的說明，但本領(lǐng)域的普通技術(shù)人員應(yīng)當(dāng)理解：其依然可以對前述各實(shí)施例所記載的技術(shù)方案進(jìn)行修改，或者對其中部分或者全部技術(shù)特征進(jìn)行等同替換；而這些修改或者替換，并不使相應(yīng)技術(shù)方案的本質(zhì)脫離本發(fā)明各實(shí)施例技術(shù)方案的范圍。