本發(fā)明屬于醫(yī)藥技術(shù)領(lǐng)域，具體而言，涉及新的二價二氫喹唑啉酮類化合物及其藥學(xué)上可接受的鹽、水合物或前藥，這些化合物具有較好的bromodomain蛋白抑制活性。本發(fā)明還公開了其制備方法及含有它們的藥物制劑，以及這些化合物和其藥用組合物在治療腫瘤中的應(yīng)用。
背景技術(shù)：
目前藥物設(shè)計以及藥物治療集中于單價或單一結(jié)合配體的發(fā)現(xiàn)，然而這類配體對于多結(jié)合域或者具有額外延伸部分的蛋白的結(jié)合能力較弱，不能實現(xiàn)完全結(jié)合。例如臨床尚未對蛋白-蛋白相互作用進(jìn)行成功地干預(yù)，通過同時與單一蛋白上兩個結(jié)構(gòu)域進(jìn)行作用或者同時與兩個不同蛋白的不同結(jié)構(gòu)域作用。因而對于參與腫瘤發(fā)生的融合蛋白的調(diào)控，實現(xiàn)腫瘤治療的目的是臨床研究的熱點。
bromodomain結(jié)構(gòu)域是一進(jìn)化上高度保守的110個氨基酸的蛋白質(zhì)功能結(jié)構(gòu)域，可特異性識別組蛋白末端乙?；馁嚢彼嵛稽c，通過染色質(zhì)的組裝和乙酰化而參與信號依賴性、非基礎(chǔ)性的基因轉(zhuǎn)錄調(diào)控；bromodomain亦可通過對轉(zhuǎn)錄因子等非組蛋白的乙?；揎椂鴱V泛參與細(xì)胞周期調(diào)控、細(xì)胞分化、信號轉(zhuǎn)導(dǎo)等過程。如含bromodomain結(jié)構(gòu)域的bet家族包括四個蛋白(brd2，brd3，brd4和brdt)，每個蛋白都包含兩個獨立的bromodomain結(jié)構(gòu)域用來識別組蛋白末端乙?；馁嚢彼嵛稽c。bet蛋白能夠調(diào)控多個下游基因的轉(zhuǎn)錄(如原癌基因c-myc)，而且bet蛋白還能識別并結(jié)合染色體上乙酰化修飾的轉(zhuǎn)錄因子(如gata-1，nfκb)，共同調(diào)節(jié)基因轉(zhuǎn)錄，影響許多疾病的發(fā)生和病理進(jìn)程，尤其涉及腫瘤和炎癥。因此，設(shè)計小分子bet抑制劑干擾brd4與乙?；M蛋白的結(jié)合，將有可能抑制c-myc基因轉(zhuǎn)錄，達(dá)到抗腫瘤目的。通過對白血病細(xì)胞，淋巴瘤細(xì)胞和多發(fā)性骨髓瘤細(xì)胞研究發(fā)現(xiàn)，bet抑制劑(+)-jq1能夠影響brd4與乙酰化組蛋白結(jié)合，顯著下調(diào)c-myc基因轉(zhuǎn)錄，抑制腫瘤細(xì)胞的增殖，且對正常細(xì)胞毒性較低，表明bet抑制劑有希望成為c-myc高表達(dá)腫瘤的有效治療藥物。
當(dāng)前藥物設(shè)計以及藥物治療策略通常是集中于選擇性的對單一蛋白結(jié)構(gòu)域進(jìn)行結(jié)合，而忽視了對這些結(jié)構(gòu)域進(jìn)行同時結(jié)合有可能實現(xiàn)特異性靶向能力和結(jié)合能力的提高。盡管抗體或者其他生物療法能夠特異性地靶向蛋白表面，然而由于抗體分子量較大，使得其口服利用度以及細(xì)胞滲透度較差。相反地，口服活性小分子通常由于其分子量過小，而不能夠?qū)Φ鞍?蛋白相互作用表面進(jìn)行干預(yù)。
技術(shù)實現(xiàn)要素：
本發(fā)明的目的在于提供一些新的二價二氫喹唑啉酮類化合物及其藥學(xué)上可接受的鹽、水合物或前藥。這些化合物能夠有效地結(jié)合具有bromodomian結(jié)構(gòu)的蛋白，從而調(diào)節(jié)下游的信號通路，發(fā)揮特定功能，可用于治療與bromodomain結(jié)構(gòu)域蛋白相關(guān)的多種疾病。該類化合物可干擾具有bromodomain結(jié)構(gòu)域的brd4與乙?；M蛋白的結(jié)合，進(jìn)而下調(diào)癌基因c-myc和其相關(guān)靶基因的轉(zhuǎn)錄，可用于制備新型抗腫瘤藥物。
本發(fā)明的目的還在于提供一種合成新的二價二氫喹唑啉酮類化合物的制備方法。
本發(fā)明的另一目的在于提供一種含有新的二價二氫喹唑啉酮類化合物的藥物制劑。
詳細(xì)發(fā)明內(nèi)容如下：
本發(fā)明合成了一系列結(jié)構(gòu)通式(i)所述的化合物或其可藥用的鹽：
其中，
a1、a2、a3相同或不同，分別獨立地選自n、cra；
ra為h、d、鹵素、no2、nh2、oh、c1-3烷基、(c1-c3)烷氧基；
a4選自nrb；
rb為h、c1-3烷基、烯基或炔基-c1-3亞烷基、c3-6環(huán)烷基、c3-6環(huán)烷基-c1-3亞烷基、c1-3烷氧基-c1-6亞烷基、c3-6雜環(huán)基、c3-6雜環(huán)基-c1-3亞烷基、取代或未取代的芳香基、取代或未取代的芳香基-c1-3亞烷基、5-10個原子組成的雜芳基、5-10個原子組成的雜芳基-c1-3亞烷基；
r1選自c3-6環(huán)烷基、c3-6雜環(huán)基、c3-6雜環(huán)基-c1-3亞烷基、取代或未取代的芳香基、5-10個原子組成的雜芳基、5-10個原子組成的雜芳基-c1-3亞烷基；
r2選自h、c1-3烷基；
r3為h、c1-3烷基、c1-3烷氧基；
x選自
y選自
z選自
l1選自
本發(fā)明優(yōu)選涉及通式(i)所示的吡啶類化合物及其藥學(xué)上可接受的鹽、水合物或前藥，其中，
a1、a2、a3相同或不同，分別獨立地選自n、cra；
ra為h、c1-3烷基、(c1-c3)烷氧基；
a4選自nrb；
rb為h、c1-2烷基、5-6個原子組成的雜芳基-c1-2亞烷基、取代或未取代的芳香基-c1-2亞烷基；
r1選自取代或未取代的芳香基、5-6個原子組成的雜芳基；
r2選自h、甲基、乙基；
r3為h、甲基、乙基、甲氧基、乙氧基；
x選自
y選自
z選自
l1選自
本發(fā)明更優(yōu)選涉及通式(i)所示的吡啶類化合物及其藥學(xué)上可接受的鹽、水合物或前藥，其中，
a1、a2、a3相同或不同，分別獨立地選自n、cra；
ra為h、c1-2烷基、(c1-c2)烷氧基；
a4選自nrb；
rb為h、甲基、乙基；
r1選自取代或未取代的芳香基；
r2選自h、甲基、乙基；
r3為h、甲基、乙基；
x選自
y選自
z選自
l1選自
本發(fā)明通式(i)化合物及其藥學(xué)上可接受的鹽、水合物或前藥優(yōu)選自以下化合物：
3，3′-(丁烷-1，4-二基)雙(6-(3，5-二甲基異惡唑-4-基)-1-甲基-4-苯基-3，4-二氫喹唑啉-2(1h)-酮)(i-1)；
3，3′-(戊烷-1，5-二基)雙(6-(3，5-二甲基異惡唑-4-基)-1-甲基-4-苯基-3，4-二氫喹唑啉-2(1h)-酮)(i-2)；
3，3′-(己烷-1，6-二基)雙(6-(3，5-二甲基異惡唑-4-基)-1-甲基-4-苯基-3，4-二氫喹唑啉-2(1h)-酮)(i-3)；
3，3′-(癸烷-1，10-二基)雙(6-(3，5-二甲基異惡唑-4-基)-1-甲基-4-苯基-3，4-二氫喹唑啉-2(1h)-酮)(i-4)；
3，3′-((乙烷-1，2-二基雙(氧))雙(乙烷-2，1-二基))雙(6-(3，5-二甲基異惡唑-4-基)-1-甲基-4-苯基-3，4-二氫喹唑啉-2(1h)-酮)(i-5)；
3，3′-(((氧雙(乙烷-2，1-二基))雙(氧))雙(乙烷-2，1-二基))雙(6-(3，5-二甲基異惡唑-4-基)-1-甲基-4-苯基-3，4-二氫喹唑啉-2(1h)-酮)(i-6)；
3，3′-(((氧雙(乙烷-2，1-二基))雙(1h-1，2，3-三唑-1，4-二基))雙(亞甲基)-1，5-二甲基異惡唑-4-基)-1-甲基-4-苯基-3，4-二氫喹唑啉-2(1h)-酮)(i-7)；
3，3′-((((氧雙(乙烷-2，1-二基))雙(氧))雙(乙烷-2，1-二基))雙(1h-4-二基))雙(亞甲基))雙(6-(3，5-二甲基異惡唑-4-基)-1-甲基-4-苯基-3，4-二氫喹唑啉-2(1h)(i-8)；
3，3′-(((氧雙(乙烷-2，1-二基))雙(1h-1，2，3-三唑-1，4-二基))雙(亞甲基))雙(6-(3，5-二甲基異惡唑-4-基)-4-苯基-3，4-二氫喹唑啉-2(1h)-酮)(i-9)；
3，3′-((((氧雙(乙烷-2，1-二基))雙(氧))雙(乙烷-2，1-二基))雙(1h-，4-二基))雙(亞甲基))雙(6-(3，5-二甲基異惡唑-4-基)-4-苯基-3，4-二氫喹唑啉-2(1h)-酮(i-10)；
化合物的結(jié)構(gòu)為：
通式(i)所示的化合物可以含有不對稱或手性中心，因此可以以不同立體異構(gòu)形式存在。本發(fā)明化合物的所有立體異構(gòu)形式，包括但不限于非對映異構(gòu)體。對映異構(gòu)體和阻轉(zhuǎn)異構(gòu)體以及它們的混合物(如外消旋混合物)，均包括在本發(fā)明的范圍內(nèi)。
通式(i)所示的化合物還可以以不同互變異構(gòu)形式存在，所有這些形式均包括在本發(fā)明范圍內(nèi)。術(shù)語“互變異構(gòu)體”或“互變異構(gòu)形式”是指經(jīng)由低能壘相互轉(zhuǎn)化的不同能量的結(jié)構(gòu)異構(gòu)體。
根據(jù)本發(fā)明，藥學(xué)上可接受的鹽包括與下列酸形成的加成鹽：鹽酸、氫溴酸、硫酸、磷酸、甲磺酸、乙磺酸、對甲苯磺酸、苯磺酸、萘二磺酸、乙酸、丙酸、乳酸、三氟乙酸、馬來酸、檸檬酸、富馬酸、草酸、酒石酸、苯甲酸等。鹽酸、氫溴酸、硫酸、檸檬酸、酒石酸、磷酸、乳酸、丙酮酸、乙酸、三氟乙酸、馬來酸、苯磺酸、琥珀酸以及類似的已知可以接受的酸成鹽。
此外，本發(fā)明還包括本發(fā)明衍生物的前藥。本發(fā)明衍生物的前藥是通式(i)的衍生物，它們自身可能具有較弱的活性甚至沒有活性，但是在給藥后，在生理條件下(例如通過代謝、溶劑分解或另外的方式)被轉(zhuǎn)化成相應(yīng)的生物活性形式。
本發(fā)明可以含有上式(i)的二價二氫喹唑啉酮類化合物及其藥學(xué)上可接受的鹽、水合物作為活性成份，與藥學(xué)上可接受的賦形劑混合制備成組合物，并制備成臨床上可接受的劑型，上述賦形劑是指可用于藥學(xué)領(lǐng)域的稀釋劑、輔助劑或載體。上述劑型是指臨床上常用的注射劑、片劑、膠囊劑等。
本發(fā)明涉及的化合物或其藥學(xué)上可接受的鹽、水合物、前藥可作為唯一的抗腫瘤藥物單獨使用，或者可以與現(xiàn)已上市的抗腫瘤藥物聯(lián)合使用，用于治療和/預(yù)防腫瘤等。
下文中提供的實施例和制備例進(jìn)一步闡明和舉例說明本發(fā)明化合物及其制備方法。應(yīng)當(dāng)理解，下述實例和制備例的范圍并不以任何方式限制本發(fā)明的范圍。
通式(i)的化合物制備方法，方法如下：
以2-氨基二苯甲酮(1)為原料，在二氯甲烷中被nbs(溴代丁二酰亞胺)溴代(2)；與叔丁基亞磺酸胺在thf回流下，進(jìn)行還原胺化得到(3)；與硼氫化鈉在thf中進(jìn)行還原反應(yīng)制備(4)；與三光氣在二氯甲烷中進(jìn)行環(huán)合反應(yīng)得到(5)；在乙腈中與碳酸銫進(jìn)行親和取代反應(yīng)得到(6)；在乙醇，甲苯，水的混合溶劑中，與3，5-二甲基異惡唑-4-硼酸頻哪醇酯進(jìn)行偶聯(lián)反應(yīng)獲得(7)；然后在dmf中與不同的連接鏈進(jìn)行親和取代反應(yīng)獲得目標(biāo)化合物(10)；另外，中間體(4)與溴丙炔在dmf中反應(yīng)獲得(9)；與不同的連接鏈進(jìn)行反應(yīng)獲得化合物(11)；與3，5-二甲基異惡唑-4-硼酸頻哪醇酯進(jìn)行偶聯(lián)反應(yīng)獲得目標(biāo)化合物(12)。
具體反應(yīng)步驟為：
以下是本發(fā)明部分化合物的藥理學(xué)實驗數(shù)據(jù)：
1.化合物對細(xì)胞的增殖抑制活性
合成的化合物對于hl-60和mv4-11細(xì)胞水平抑制活性的評估，采用celltiter-glo熒光細(xì)胞活力檢測法對于人早幼粒白血病細(xì)胞hl-60和人類急性單核細(xì)胞白血病細(xì)胞mv4-11增殖的抑制情況進(jìn)行評估。為了評估化合物對于腫瘤細(xì)胞的抑制作用，首先用hl-60細(xì)胞對合成的化合物進(jìn)行活性篩選。以1μm濃度進(jìn)行初篩，對抑制率較高的化合物測定ic50。mv4-11是brd4敏感型細(xì)胞，化合物對于其增殖抑制活性能夠間接反映化合物對于brd4的抑制能力。
具體實施方法為：
(1)將處于對數(shù)生長期的mv4-11或hl-60細(xì)胞接種至96孔培養(yǎng)板，培養(yǎng)過夜后。
(2)設(shè)置陽性對照組、空白組和調(diào)零孔，每孔分別加入100μl不同濃度梯度的化合物，每個濃度設(shè)五復(fù)孔。加入待測化合物后在37℃，5％co2孵育72h。
(3)檢測前30分鐘在室溫下平衡測定試劑。每孔加入30ulcelltiter-glo試劑，搖晃96孔板10分鐘誘導(dǎo)細(xì)胞裂解。
(4)將96孔板在室溫下孵育2分鐘來穩(wěn)定熒光信號。使用envision檢測儀來讀取熒光數(shù)值。
(5)以化合物濃度和相應(yīng)的抑制率做s曲線，用graphpadprism5.0軟件計算各化合物的ic50值。
i類各化合物對hl-60細(xì)胞的抑制率見表1：
表1.各化合物在1um濃度下對hl-60細(xì)胞的抑制率
優(yōu)選化合物hl-60細(xì)胞和mv4-11細(xì)胞抑制活性測試結(jié)果見表2：
表2.優(yōu)選化合物對hl-60細(xì)胞和mv4-11細(xì)胞的抑制活性
2.化合物對brd4蛋白水平的的抑制活性
利用alphascreen技術(shù)，測定了細(xì)胞活性較好的部分化合物對brd4(1)，brd4(2)以及fulllengthbrd4蛋白的抑制活性。
具體實施方法為：
(1)首先對化合物與brd4蛋白n端第一個bromodomain結(jié)構(gòu)域(以下稱作brd4(1))的結(jié)合活性進(jìn)行初篩，化合物初篩濃度為1μm，該條件下抑制率大于70％的化合物測定其brd4(1)，brd4(2)以及fulllengthbrd4蛋白的ic50值。
(2)配制hepes緩沖液(50mmhepes，100mmnacl，0.1％bsa，0.05％chaps，ph7.5)用于制備brd4(1)，brd4(2)或fulllengthbrd4蛋白、biotin標(biāo)記的組蛋白h4、待測化合物(dmso0.1％)、donorbeads和acceptorbeads溶液。
(3)取384孔板一塊，按照布置，板上分待測化合物孔、空白對照孔(min，max)、陽性藥對照孔。向待測化合物孔和陽性藥孔分別加入不同濃度的化合物溶液5μl，空白加入緩沖液5μl(dmso0.1％)。
(4)繼續(xù)向除空白對照孔(min)外的各孔加入brd4(1)，brd4(2)或fulllengthbrd4蛋白溶液5μl，向空白對照孔(min)加入緩沖液5μl，室溫下孵育15分鐘后。
(5)每孔加入biotin標(biāo)記的組蛋白h4溶液5μl，繼續(xù)在室溫下孵育1小時后，加入donorbeads和acceptorbeads溶液15μl，避光室溫孵育1小時。
(6)用enspire檢測儀的alphamode(λex＝680，λem＝570)讀取熒光數(shù)值。
(7)用graphpadprism5.0軟件計算各化合物的ic50值。
部分化合物的實驗結(jié)果見表3：
表3化合物對brd4(1)，brd4(2)或fulllengthbrd4蛋白的抑制活性
本發(fā)明還包括藥物制劑，該制劑包含作為活性劑的通式(i)化合物或其藥用鹽或藥學(xué)上可接受的載體。上述藥學(xué)上可接受的載體是指藥學(xué)領(lǐng)域常規(guī)的藥物載體，是指一種或幾種惰性的、非毒性的固體或液體填充物、稀釋劑，助劑等，它們不逆向與活性化合物或病人發(fā)生作用。
本發(fā)明組合物的劑型可以是片劑、膠囊、丸劑、栓劑、軟膠囊、口服液、混懸劑、注射液等藥劑學(xué)上常用的劑型。
口服用藥片和膠囊含有傳統(tǒng)的賦形劑如填充物、稀釋劑、潤滑劑、分散劑以及粘合劑。
本發(fā)明藥物組合物的各種劑型可以按照藥學(xué)領(lǐng)域中熟知的方法進(jìn)行制備。
以上活性劑的劑量將因配方而異。
一般地，已證明有利的量，為達(dá)到所需結(jié)果，每千克每24小時給藥的式(i)化合物的總量為約0.01-800mg，優(yōu)選的總量為0.1-80mg/kg。如果必要，以幾次單劑量的形式給藥。
然而，如果必要，也可以偏離上述用量，即這取決于待治療的受試者的類型和體重、個體對藥物的行為、疾病的性質(zhì)和嚴(yán)重性、制劑和給藥的類型、以及給藥時間和間隔。
以下通過實施例對本發(fā)明作進(jìn)一步描述：
具體實施方式
實施例1
2-氨基-5-溴二苯甲酮的制備
將2-氨基二苯甲酮(5g，25.35mmol)溶于60ml二氯甲烷中，在-10℃冷阱中攪拌10min，分批加入n-溴代丁二酰亞胺(4.74g，26.62mmol)，繼續(xù)在冷阱中反應(yīng)2小時后，加入30ml水，用二氯甲烷萃取，飽和食鹽水洗，收集有機(jī)層，無水硫酸鈉干燥，減壓蒸去有機(jī)溶劑，殘留物通過硅膠柱色譜層析純化，使用石油醚/乙酸乙酯(v/v＝20/1-10/1)洗脫得到2-氨基-5-溴二苯甲酮6g，為黃色固體，收率86％。
ms(esi，m/z)：275.9[m+h]+.
1hnmr(300mhz，dmso)δ：7.68-7.48(m，5h)，7.42(dd，j＝8.9，2.4hz，1h)，7.31(d，j＝2.4hz，1h)，7.24(s，2h)，6.86(d，j＝8.9hz，1h).
實施例2
n-(2-氨基-5-溴二苯基)亞甲基叔丁基亞磺酰胺的制備
將2-氨基-5-溴二苯甲酮(6g，21.73mmol)、叔丁基亞磺酰胺(10.53g，86.91mmol)和鈦酸四乙酯(19.83g，86.91)依次溶于50ml四氫呋喃，加熱至70℃攪拌反應(yīng)48小時，加入30ml水和50ml乙酸乙酯，有固體析出，將反應(yīng)液用硅藻土抽濾，收集濾液，用乙酸乙酯萃取，收集有機(jī)層，無水硫酸鈉干燥，減壓蒸去有機(jī)溶劑，殘留物通過硅膠柱色譜層析純化，使用石油醚/乙酸乙酯(v/v＝3/1-1/1)洗脫得到n-(2-氨基-5-溴二苯基)亞甲基叔丁基亞磺酰胺7.7g，為黃色泡沫狀固體，收率93％。
ms(esi，m/z)：379.1[m+h]+.
實施例3
n-(2-氨基-5-溴二苯基)甲基叔丁基亞磺酰胺
將n-(2-氨基-5-溴二苯基)亞甲基叔丁基亞磺酰胺(7.7g，20.3mmol)溶于49ml四氫呋喃和1ml水中，室溫下攪拌，分批加入硼氫化鈉(3.07g，81.2mmol)，繼續(xù)室溫攪拌4小時，加入30ml水，用乙酸乙酯萃取，收集有機(jī)層，無水硫酸鈉干燥，減壓蒸去有機(jī)溶劑，得到n-(2-氨基-5-溴二苯基)甲基叔丁基亞磺酰胺7.6g，為白色固體，收率98％。
ms(esi，m/z)：381.1[m+h]+.
1hnmr(300mhz，dmso)δ：7.42-7.20(m，5h)，7.13-7.00(m，2h)，6.60(d，j＝8.5hz，1h)，5.95(d，j＝5.9hz，1h)，5.47(d，j＝6.0hz，1h)，5.25(s，2h)，1.13(s，9h).
實施例4
6-溴-4-苯基-3，4-二氫喹唑啉-2(1h)-酮的制備
將n-(2-氨基-5-溴二苯基)甲基叔丁基亞磺酰胺(1.63g，4.29mmol)溶于20ml四氫呋喃，室溫攪拌，加入三光氣(1.91g，6.44mmol)，室溫攪拌2小時，減壓濃縮反應(yīng)液，有固體析出，加入20ml水，用飽和碳酸鈉調(diào)ph至7，有大量固體析出，抽濾，干燥得到6-溴-4-苯基-3，4-二氫喹唑啉-2(1h)-酮1.25g，為白色固體。
ms(esi，m/z)：303.1[m+h]+.
1hnmr(300mhz，dmso)δ：9.38(s，1h)，7.52(s，1h)，7.32(ddd，j＝18.3，13.1，5.3hz，7h)，6.79(d，j＝8.4hz，1h)，5.55(d，j＝2.4hz，1h).
實施例5
6-溴-1-甲基-4-苯基-3，4-二氫喹唑啉-2(1h)-酮的制備
將6-溴-4-苯基-3，4-二氫喹唑啉-2(1h)-酮(1g，3.3mmol)溶于20ml乙腈，室溫攪拌加入碳酸銫(3.22g，9.90mmol)，室溫攪拌半個小時，緩慢加入硫酸二甲酯(0.41g，3.30mmol)。室溫攪拌過夜，向反應(yīng)液中加入水有白色固體析出，抽濾，干燥得6-溴-1-甲基-4-苯基-3，4-二氫喹唑啉-2(1h)-酮0.92g，白色固體，收率87％。
ms(esi，m/z)：317.2[m+h]+.
1hnmr(300mhz，dmso)δ：7.80(s，1h)，7.54-7.15(m，7h)，6.94(d，j＝8.5hz，1h)，5.53(s，1h)，3.19(s，3h).
實施例6
6-(3，5-二甲基異惡唑-4-基)-1-甲基-4-苯基-3，4-二氫喹唑啉-2(1h)-酮的制備
將6-溴-1-甲基-4-苯基-3，4-二氫喹唑啉-2(1h)-酮(0.5g，1.58mmol)，3，5-二甲基異惡唑-4-硼酸頻哪醇酯(0.38，1.73mmol)，碳酸鈉(0.50g，4.73mmol)，四三苯基膦鈀(0.18g，0.16mmol)溶于3ml甲苯，氮氣保護(hù)，加熱至70℃攪拌反應(yīng)24小時，加入10ml水和10ml乙酸乙酯，將溶液用硅藻土抽濾，收集濾液，用乙酸乙酯萃取，收集有機(jī)層，無水硫酸鈉干燥，減壓蒸去有機(jī)溶劑，殘留物通過硅膠柱色譜層析純化，使用石油醚/乙酸乙酯(v/v＝2/1-1/1)洗脫得到6-(3，5-二甲基異惡唑-4-基)-1-甲基-4-苯基-3，4-二氫喹唑啉-2(1h)-酮0.42g，白色固體，產(chǎn)率79％。
ms(esi，m/z)：334.2[m+h]+.
1hnmr(300mhz，cdcl3)δ：7.37(s，5h)，7.26(s，1h)，7.14(s，1h)，7.01(s，1h)，6.65(s，1h)，5.62(s，1h)，3.41(s，3h)，2.27(s，3h)，2.12(s，3h).
實施例7
(3，5-二甲基異惡唑-4-基)-3-乙炔基-1-甲基-4-苯基-3，4-二氫喹唑啉-2(1h)-酮的制備
將(3，5-二甲基異惡唑-4-基)-1-甲基-4-苯基-3，4-二氫喹唑啉-2(1h)-酮(0.5g，1.5mmol)溶于10mln，n-二甲基甲酰胺中，冰浴下攪拌，緩慢加入3-溴丙炔(0.35g，3mmol)，繼續(xù)冰浴攪拌半個小時，加入鈉氫(0.039g，1.65mmol)，冰浴反應(yīng)一個小時后撤去冰浴，室溫反應(yīng)6個小時。加入冰水有大量固體析出，抽濾，干燥得到(3，5-二甲基異惡唑-4-基)-3-乙炔基-1-甲基-4-苯基-3，4-二氫喹唑啉-2(1h)-酮0.50g，白色固體，產(chǎn)率93％。
ms(esi，m/z)：358.3[m+h]+.
1hnmr(300mhz，dmso)δ7.95(s，1h)，7.43-7.20(m，6h)，7.09(d，j＝8.2hz，1h)，5.86(s，1h)，4.68(d，j＝17.8hz，1h)，3.61(d，j＝17.4hz，1h)，3.33-3.30(m，3h)，3.24(s，1h)，2.88(d，j＝2.7hz，3h)，2.72(d，j＝2.9hz，3h).
實施例8
n-(2-氨基-5-溴二苯基)甲基-n-丙炔基叔丁基亞磺酰胺的制備
將n-(2-氨基-5-溴二苯基)甲基叔丁基亞磺酰胺((2g，5.24mmol)和3-溴丙炔(0.93g，7.87mmol)溶于10mln，n-一二甲基甲酰胺，在0℃冰浴中攪拌5min，分批加入60％氫化鈉(0.63g，15.73mmol)，繼續(xù)在0℃冰浴中攪拌1小時，加入30ml水，用乙酸乙酯萃取，收集有機(jī)層，無水硫酸鈉干燥，減壓蒸去有機(jī)溶劑，殘留物通過硅膠柱色譜層析純化，使用石油醚/乙酸乙酯(v/v＝6/1-5/1)洗脫得到n-(2-氨基-5-溴二苯基)甲基-n-丙炔基叔丁基亞磺酰胺1.9g，為黃色固體，收率86％。
ms(esi，m/z)：334.2[m+h]+.
1hnmr(300mhz，dmso)δ：7.41-7.27(m，5h)，7.15(dd，j＝8.6，2.2hz，2h)，6.62(d，j＝8.6hz，1h)，5.82(s，1h)，5.31(s，2h)，4.07-3.97(m，1h)，3.42(d，j＝20.7hz，1h)，3.26(d，j＝2.3hz，1h)，1.03(d，j＝8.4hz，9h).
實施例9
6-溴-4-苯基-3-丙炔基-3，4-二氫喹唑啉-2(1h)-酮的制備
將n-(2-氨基-5-溴二苯基)甲基-n-丙炔基叔丁基亞磺酰胺(1.8g，4.29mmol)溶于20ml四氫呋喃，室溫攪拌，加入三光氣(1.91g，6.44mmol)，室溫攪拌2小時，減壓濃縮反應(yīng)液，有固體析出，加入20ml水，用飽和碳酸鈉調(diào)ph至7，有大量固體析出，抽濾，干燥得到6-溴-4-苯基-3-丙炔基-3，4-二氫喹唑啉-2(1h)-酮1.25g，為淺黃色固體，收率85％。
ms(esi，m/z)：334.2[m+h]+.
1hnmr(300mhz，dmso)δ：9.83(s，1h)，7.55-7.17(m，7h)，6.81(d，j＝8.5hz，1h)，5.81(s，1h)，4.66(dd，j＝17.7，2.5hz，1h)，3.41(dd，j＝17.7，2.3hz，1h)，3.23(t，j＝2.4hz，1h).
實施例10
3，3′-(丁烷-1，4-二基)雙(6-(3，5-二甲基異惡唑-4-基)-1-甲基-4-苯基-3，4-二氫喹唑啉-2(1h)-酮)(i-1)的制備
將實施例6(0.20g，0.60mmol)溶于n，n-二甲基甲酰胺中，冰浴下攪拌，加入1，4-二溴丁烷(0.06g，0.30mmol)，繼續(xù)冰浴下攪拌，分批緩慢加入鈉氫(0.02g，0.66mmol)，冰浴下反應(yīng)4個小時，加入冰水，有大量固體析出，抽濾，干燥得到3，3′-(丁烷-1，4-二基)雙(6-(3，5-二甲基異惡唑-4-基)-1-甲基-4-苯基-3，4-二氫喹唑啉-2(1h)-酮)0.15g，白色固體，產(chǎn)率69％。mp：187～188℃。
ms(esi，m/z)：743.3[m+na]+.
1hnmr(300mhz，cdcl3)δ：7.29(dd，j＝10.4，5.7hz，5h)，7.23(dd，j＝8.2，3.0hz，6h)，7.11(dd，j＝3.7，2.0hz，1h)，7.09(dd，j＝3.7，2.1hz，1h)，6.97(d，j＝1.9hz，1h)，6.94(d，j＝1.8hz，1h)，6.92(d，j＝3.7hz，1h)，6.89(d，j＝3.7hz，1h)，5.49(s，1h)，5.43(s，1h)，3.89(s，2h)，3.38(d，j＝1.6hz，6h)，2.86(d，j＝6.2hz，2h)，2.32(s，6h)，2.18(d，j＝1.0hz，6h)，1.60-1.45(m，4h).
實施例11
3，3′-(戊烷-1，5-二基)雙(6-(3，5-二甲基異惡唑-4-基)-1-甲基-4-苯基-3，4-二-氫喹唑啉-2(1h)-酮)(i-2)的制備合成步驟同i-1，所用原料為1，5-二溴戊烷，得到白色固體92mg，產(chǎn)率87％。mp：192～194℃。
ms(esi，m/z)：757.4[m+na]+.
1hnmr(300mhz，cdcl3)δ：7.34-7.23(m，12h)，7.12(s，1h)，7.09(s，1h)，6.96(dd，j＝6.0，1.8hz，2h)，6.90(dd，j＝8.4，2.7hz，2h)，5.43(d，j＝3.3hz，2h)，3.94-3.77(m，2h)，3.38(d，j＝4.3hz，6h)，2.84(dd，j＝14.4，9.5hz，2h)，2.32(s，6h)，2.19(d，j＝0.9hz，6h)，1.54(dd，j＝15.1，9.0hz，4h)，0.86(dd，j＝11.1，4.5hz，2h).
實施例12
3，3′-(己烷-1，6-二基)雙(6-(3，5-二甲基異惡唑-4-基)-1-甲基-4-苯基-3，4-二氫喹唑啉-2(1h)-酮)(i-3)的制備合成步驟同i-1，所用原料為1，6-二溴戊烷，得到白色固體96mg，產(chǎn)率88％。mp：192～194℃。
ms(esi，m/z)：749.4[m+h]+.
1hnmr(300mhz，cdcl3)δ：7.33-7.26(m，10h)，7.12(d，j＝8.2hz，2h)，6.98(s，2h)，6.93(d，j＝8.3hz，2h)，5.45(s，2h)，3.87(dd，j＝14.6，8.0hz，2h)，3.41(s，6h)，2.90-2.77(m，2h)，2.34(d，j＝0.8hz，6h)，2.21(d，j＝1.2hz，6h)，1.54(d，j＝11.3hz，4h)，1.28(s，4h).
實施例13
3，3′-(癸烷-1，10-二基)雙(6-(3，5-二甲基異惡唑-4-基)-1-甲基-4-苯基-3，4-二氫喹唑啉-2(1h)-酮)(i-4)的制備
合成步驟同i-1，所用原料為1，10-二溴癸烷，得到白色固體88mg，產(chǎn)率85％。mp：197～199℃。
ms(esi，m/z)：827.3[m+na]+.
1hnmr(300mhz，cdcl3)δ：7.29(dd，j＝9.1，5.6hz，10h)，7.11(d，j＝6.5hz，2h)，6.97(s，2h)，6.91(d，j＝8.5hz，2h)，5.45(s，2h)，3.95-3.83(m，2h)，3.40(s，6h)，2.85(d，j＝5.3hz，2h)，2.32(s，6h)，2.19(s，6h)，1.20(s，16h).
實施例14
3，3′-((乙烷-1，2-二基雙(氧))雙(乙烷-2，1-二基))雙(6-(3，5-二甲基異惡唑-4-基)-1-甲基-4-苯基-3，4-二氫喹唑啉-2(1h)-酮)(i-5)的制備
合成步驟同i-1，所用原料為三乙二醇二(對甲苯磺酸酯)，得到白色固體78mg，產(chǎn)率81％。mp：221～223℃。
ms(esi，m/z)：803.4[m+na]+.
1hnmr(300mhz，cdcl3)δ：7.33-7.23(m，10h)，7.09(d，j＝8.0hz，2h)，6.96-6.87(m，4h)，5.62(s，2h)，3.97(d，j＝14.4hz，2h)，3.53(ddd，j＝22.2，18.7，10.4hz，8h)，3.39(d，j＝3.2hz，6h)，3.19-3.05(m，2h)，2.31(s，6h)，2.17(s，6h).
實施例15
3，3′-(((氧雙(乙烷-2，1-二基))雙(氧))雙(乙烷-2，1-二基))雙(6-(3，5-二甲基異惡唑-4-基)-1-甲基-4-苯基-3，4-二氫喹唑啉-2(1h)-酮)(i-6)的制備
合成步驟同i-1，所用原料為四乙二醇二(對甲苯磺酸酯)，得到白色固體75mg，產(chǎn)率78％。mp：224～226℃。
ms(esi，m/z)：847.4[m+na]+.
1hnmr(300mhz，cdcl3)δ：7.28(s，10h)，7.10(d，j＝7.8hz，2h)，6.98-6.85(m，4h)，5.65(s，2h)，3.99(s，2h)，3.60-3.29(m，18h)，3.13(s，2h)，2.30(d，j＝5.7hz，6h)，2.17(d，j＝6.0hz，6h).
實施例16
3，3′-(((氧雙(乙烷-2，1-二基))雙(1h-1，2，3-三唑-1，4-二基))雙(亞甲基)-1，5-二甲基異惡唑-4-基)-1-甲基-4-苯基-3，4-二氫喹唑啉-2(1h)-酮)(i-7)的制備
將實施例7(0.2g，0.54mmol)和二乙二醇二(疊氮)(0.04g，0.27mmol)溶于3ml二氯甲烷、3ml甲醇和2ml水的混合液，室溫攪拌，加入五水合硫酸銅(0.0146g，0.058mmol)，室溫攪拌20min，加入抗壞血酸鈉(0.046g，0.234mmol)，室溫攪拌2小時，減壓濃縮反應(yīng)液，有固體析出，加入10ml水，抽濾，用石油醚洗濾餅，干燥得到3，3′-(((氧雙(乙烷-2，1-二基))雙(1h-1，2，3-三唑-1，4-二基))雙(亞甲基)-1，5-二甲基異惡唑-4-基)-1-甲基-4-苯基-3，4-二氫喹唑啉-2(1h)-酮)0.12g，黃色固體，產(chǎn)率50％。mp：235～237℃。
ms(esi，m/z)：921.4[m+na]+.
1hnmr(300mhz，cdcl3)δ：7.63(s，2h)，7.44-7.26(m，10h)，7.08(d，j＝7.6hz，2h)，6.90(d，j＝8.1hz，4h)，5.82(s，2h)，5.12(s，2h)，4.42(s，4h)，4.10(s，2h)，3.77(s，4h)，3.41(s，6h)，2.27(s，6h)，2.13(s，6h).
實施例17
3，3′-((((氧雙(乙烷-2，1-二基))雙(氧))雙(乙烷-2，1-二基))雙(1h-4-二基))雙(亞甲基))雙(6-(3，5-二甲基異惡唑-4-基)-1-甲基-4-苯基-3，4-二氫喹唑啉-2(1h)(i-8)的制備
合成步驟同i-7，所用原料為四乙二醇二(疊氮)，得到白色固體98mg，產(chǎn)率48％。mp：238～240℃。
ms(esi，m/z)：1009.4[m+na]+.
1hnmr(300mhz，cdcl3)δ：7.75(s，2h)，7.35(d，j＝6.1hz，10h)，7.09(d，j＝7.2hz，2h)，6.92(d，j＝11.3hz，4h)，5.80(s，2h)，5.17(s，2h)，4.48(s，4h)，4.05(s，2h)，3.83(s，4h)，3.55(s，8h)，3.41(d，j＝6.1hz，6h)，2.28(d，j＝6.5hz，6h)，2.14(d，j＝6.2hz，6h).
實施例18
3，3′-(((氧雙(乙烷-2，1-二基))雙(1h-1，2，3-三唑-1，4-二基))雙(亞甲基))雙(6-溴-4-苯基-3，4-二氫喹唑啉-2(1h)-酮)的制備
合成步驟同i-7，所用原料為6-溴-4-苯基-3-丙炔基-3，4-二氫喹唑啉-2(1h)-酮，得到白色固體88mg，產(chǎn)率56％。mp：243～244℃。
ms(esi，m/z)：859.2[m+na]+.
1hnmr(300mhz，cdcl3)δ：9.84(s，2h)，7.62(s，2h)，7.43-7.22(m，10h)，7.06(d，j＝7.4hz，2h)，6.93(d，j＝7.8hz，4h)，5.88(s，2h)，5.21(s，2h)，4.48(s，4h)，4.16(s，2h)，3.81(s，4h).
實施例19
3，3′-((((氧雙(乙烷-2，1-二基))雙(氧))雙(乙烷-2，1-二基))雙(1h-，4-二基))雙(亞甲基))雙(6-溴-4-苯基-3，4-二氫喹唑啉-2(1h)-酮)的制備
合成步驟同i-8，所用原料為6-溴-4-苯基-3-丙炔基-3，4-二氫喹唑啉-2(1h)-酮，得到白色固體85mg，產(chǎn)率66％。mp：241～243℃。
ms(esi，m/z)：947.2[m+na]+.
1hnmr(300mhz，cdcl3)δ：9.86(s，2h)，7.78(s，2h)，7.37(d，j＝5.9hz，10h)，7.12(d，j＝7.1hz，2h)，6.90(d，j＝10.9hz，4h)，5.78(s，2h)，5.19(s，2h)，4.51(s，4h)，4.11(s，2h)，3.86(s，4h)，3.60(s，8h).
實施例20
3，3′-(((氧雙(乙烷-2，1-二基))雙(1h-1，2，3-三唑-1，4-二基))雙(亞甲基))雙(6-(3，5-二甲基異惡唑-4-基)-4-苯基-3，4-二氫喹唑啉-2(1h)-酮)(i-9)的制備
合成步驟同實施例6，所用原料為3，3′-(((氧雙(乙烷-2，1-二基))雙(1h-1，2，3-三唑-1，4-二基))雙(亞甲基))雙(6-溴-4-苯基-3，4-二氫喹唑啉-2(1h)-酮)的制備，得到黃色固體85mg，產(chǎn)率54％。mp：247～249℃。
ms(esi，m/z)：903.4[m+na]+.
1hnmr(300mhz，cdcl3)δ：9.86(s，2h)，7.68(s，2h)，7.47-7.26(m，10h)，7.14(d，j＝7.6hz，2h)，6.98(d，j＝8.5hz，4h)，5.88(s，2h)，5.17(s，2h)，4.49(s，4h)，4.21(s，2h)，3.79(s，4h)，3.46(s，6h)，2.29(s，6h)，2.17(s，6h).
實施例21
3，3′-((((氧雙(乙烷-2，1-二基))雙(氧))雙(乙烷-2，1-二基))雙(1h-，4-二基))雙(亞甲基))雙(6-(3，5-二甲基異惡唑-4-基)-4-苯基-3，4-二氫喹唑啉-2(1h)-酮(i-10)的制備
合成步驟同實施例6，所用原料為3，3′-((((氧雙(乙烷-2，1-二基))雙(氧))雙(乙烷-2，1-二基))雙(1h-，4-二基))雙(亞甲基))雙(6-溴-4-苯基-3，4-二氫喹唑啉-2(1h)-酮)，得到黃色固體89mg，產(chǎn)率52％。mp：246～247℃。
ms(esi，m/z)：981.3[m+na]+.
1hnmr(300mhz，cdcl3)δ：9.88(s，2h)，7.78(s，2h)，7.38(d，j＝6.4hz，10h)，7.11(d，j＝7.3hz，2h)，6.94(d，j＝11.8hz，4h)，5.81(s，2h)，5.17(s，2h)，4.49(s，4h)，4.08(s，2h)，3.84(s，4h)，3.59(s，8h)，3.44(d，j＝6.2hz，6h)，2.29(d，j＝6.4hz，6h)，2.17(d，j＝6.3hz，6h).
實施例22：片劑
用含有權(quán)利要求1中化合物(以實施例25化合物為例)10g，按照藥劑學(xué)一般壓片法加輔料20g混勻后，壓制成100片，每片重300mg。
實施例23：膠囊劑
用含有權(quán)利要求1中化合物(以實施例12化合物為例)10g，按照藥劑學(xué)膠囊劑的要求將輔料20g混勻后，裝入空心膠囊，每個膠囊重300mg。
實施例24：注射劑
用含有權(quán)利要求1中化合物(以實施例13化合物為例)10g，按照藥劑學(xué)常規(guī)方法，進(jìn)行活性炭吸附，經(jīng)0.65μm微孔濾膜過濾后，填入氮氣罐制成水針制劑，每只裝2ml，共灌裝100瓶。
盡管已經(jīng)通過特定實施方案描述了本發(fā)明，但修改和等價變化對于精通此領(lǐng)域的技術(shù)人員而言是顯見的，且它們都包含在本發(fā)明范圍之內(nèi)。