本發(fā)明涉及新的雙功能小分子及其藥學(xué)上可接受的鹽、水合物或前藥的制備方法以及這些化合物和其藥用組合物在治療腫瘤，炎癥，免疫等疾病中的應(yīng)用。本發(fā)明涉及的雙功能小分子是一種蛋白降解靶向聯(lián)合體(protacs)，它們能夠選擇性誘導(dǎo)bet蛋白降解。本發(fā)明通過使用連接臂將bet蛋白小分子抑制劑和e3泛素連接酶復(fù)合體中cereblon蛋白配體連接獲得雙功能小分子。
背景技術(shù)：
：cereblon是由人類crbn基因編碼的蛋白，crbn同源基因是高度保守的，這表明它在生理學(xué)中的重要性。cereblon與損傷dna結(jié)合蛋白1(ddb1)、cullin-4a(cul4a)以及cullin-1調(diào)節(jié)器(roc1)組成e3泛素連接酶復(fù)合體。該復(fù)合體能泛素化一系列蛋白，但具體機制尚不清楚。cereblon泛素化靶蛋白導(dǎo)致成纖維細胞生長因子8(fgf8)和成纖維細胞生長因子10(fgf10)增多，說明泛素化酶復(fù)合體對于胚胎肢體生長十分重要。泊馬度胺用于治療免疫疾病和腫瘤，包括多發(fā)性骨髓瘤。研究表明泊馬度胺可以結(jié)合cereblon，從而引發(fā)轉(zhuǎn)錄因子lkaros(ikzf1)和aiolos(ikzf3)的泛素化和降解，這些轉(zhuǎn)錄因子對于多發(fā)性骨髓瘤的生長極其重要。在目前的多發(fā)性骨髓瘤的治療中，高表達的cereblon與泊馬度胺或類似藥物的療效密切相關(guān)。bet蛋白家族被認為是眾多疾病尤其是癌癥的潛在靶點，得到許多研究所和藥企的關(guān)注。bet蛋白家族包括四個蛋白(brd2，brd3，brd4和brdt)，每個蛋白都包含兩個獨立的bromodomain結(jié)構(gòu)域(bd1，bd2)用來識別組蛋白末端乙?；馁嚢彼嵛稽c。bromodomain結(jié)構(gòu)域是一個高度保守的由約110個氨基酸構(gòu)成的蛋白質(zhì)功能結(jié)構(gòu)域，蛋白由四個α螺旋(z，a，b，c)和兩個loop(za，bc)構(gòu)成，能夠形成疏水區(qū)域，識別并結(jié)合乙酰化的賴氨酸殘基。brd4在調(diào)節(jié)基因轉(zhuǎn)錄過程中發(fā)揮重要作用，許多研究表明brd4被募集到靶基因的超增強子區(qū)域，促進c-myc，bcl-x1和bcl-6等致癌基因的轉(zhuǎn)錄。由于brd4在調(diào)節(jié)致癌基因轉(zhuǎn)錄中的關(guān)鍵作用，使其成為潛在的抗腫瘤靶點，利用bet抑制劑干擾brd4與靶基因結(jié)合，下調(diào)c-myc等致癌基因，達到抗腫瘤目的。近幾年，bet抑制劑發(fā)展迅速，有14個抑制劑處于早期臨床研究，例如ibet-762，otx-015，abbv-075，和cpi-0610等。雖然bet抑制劑在眾多體外實驗和動物模型中表現(xiàn)出很好的抗癌活性和耐受性，但是臨床研究還是發(fā)現(xiàn)存在一些問題。otx-015的i期臨床結(jié)果表明，當(dāng)使用劑量高于每天80mg時，患者會出現(xiàn)嚴重的毒副作用：血小板減少，當(dāng)劑量較低時，藥物抗腫瘤效果不理想。最終，研究人員給出的合理用藥方案是每天80mg，用藥兩周后需要停藥一周。本發(fā)明中設(shè)計的雙功能小分子可以對brd4蛋白進行泛素化標(biāo)記，誘導(dǎo)蛋白降解，抗腫瘤效果優(yōu)于bet抑制劑。抑制brd4蛋白往往需要將藥物長期維持在較高的濃度，有可能造成嚴重的副作用；而誘導(dǎo)蛋白降解只需要少量的藥物就可以，這個過程類似于催化反應(yīng)，并不需要等摩爾量的藥物，所以使用雙功能小分子可以降低藥物使用劑量，減輕毒副作用。技術(shù)實現(xiàn)要素：本發(fā)明的目的在于提供一些新的雙功能小分子及其藥學(xué)上可接受的鹽、水合物或前藥。這些化合物有誘導(dǎo)bet蛋白降解的功能，可用于制備新型抗腫瘤藥物。所述腫瘤可為但不限于多發(fā)性骨髓瘤、胃癌、肺癌、乳腺癌、食管癌、結(jié)腸癌、髓母細胞瘤、急性粒細胞白血病、慢性白血病、前列腺癌、肝細胞瘤、腎細胞瘤、宮頸癌、皮膚癌、卵巢癌、結(jié)腸癌、神經(jīng)膠質(zhì)瘤、甲狀腺癌或胰腺癌。本發(fā)明的目的還在于提供一種合成新的雙功能小分子的制備方法。本發(fā)明的另一目的在于提供一種含有新的雙功能小分子的藥物制劑。詳細
發(fā)明內(nèi)容如下：為了實現(xiàn)上述目的，本發(fā)明提供了如下通式所示的雙功能小分子或其藥學(xué)上可接受的鹽、水合物或前藥：a-l-b其中：a是e3泛素連接酶復(fù)合體中cereblon蛋白的小分子配體，包含酰胺類化合物，鄰苯二酰亞胺類化合物，沙利度胺或其衍生物，來那度胺或其衍生物，泊馬度胺或其衍生物，部分配體結(jié)構(gòu)通式如下所示：其中：w選自ch2、c＝o、so2、nh、n-烷基；x選自o、s；y選自nh、n-烷基、n-芳基、n-雜環(huán)、n-環(huán)烷基、o、s；z選自-烷基、-環(huán)烷基、-cl、-f；g、g’選自-h、-烷基、-oh、-ch2-雜環(huán)；q1、q2、q3、q4選自c、n、no。l是連接臂，包含非線性鏈、脂肪族鏈、芳香鏈、雜芳環(huán)結(jié)構(gòu)鏈，通過共價鍵與a和b相連，部分連接臂結(jié)構(gòu)如下通式所示：其中：n選自1-10之間的整數(shù)。b是bet蛋白抑制劑或其衍生物。本發(fā)明優(yōu)選涉及如下通式(ia)所示的雙功能小分子或其藥學(xué)上可接受的鹽、水合物或前藥：其中：r1選自-h、-d、-ch3、-ch2f、chf2、-cf3、-ch2d、-chd2、-cd3、-ch2ch3、-ch2ch2ch3；r2、r3相同或不同，分別獨立地選自-h、-d、-f、-cl、-br、-i、-no2、-cn、-nh2、-oh、-ch3、-ch2f、chf2、-cf3、-ch2d、-chd2、-cd3、-ch2ch3；n選自1-10之間的整數(shù)。本發(fā)明更優(yōu)選涉及通式(ia)所示的雙功能小分子或其藥學(xué)上可接受的鹽、水合物或前藥：其中：r1選自-h、-ch3、-ch2ch3；r2、r3相同或不同，分別獨立地選自-h、-f、-cl、-br、-ch3、-ch2f、chf2、-cf3、-ch2d、-chd2、-cd3；n選自1-6之間的整數(shù)。本發(fā)明的優(yōu)選化合物包括，但不限于：2-(2-(4-((6-(3，5-二甲基異噁唑-4-基)-1-甲基-2-氧代-4-苯基-1，4-二氫喹唑啉-3(2h)-基)甲基)-1h-1，2，3-三氮唑-1-基)乙氧基)-n-(2-(2，6-二氧代哌啶-3-基)-1，3-二氧代異吲哚啉-4-基)乙酰胺；2-(2-(2-(4-((6-(3，5-二甲基異噁唑-4-基)-1-甲基-2-氧代-4-苯基-1，4-二氫喹唑啉-3(2h)-基)甲基)-1h-1，2，3-三氮唑-1-基)乙氧基)乙氧基)-n-(2-(2，6-二氧代哌啶-3-基)-1，3-二氧代異吲哚啉-4-基)乙酰胺；2-(2-(2-(2-(4-((6-(3，5-二甲基異噁唑-4-基)-1-甲基-2-氧代-4-苯基-二氫喹唑啉-3(2h)-基)甲基)-1h-1，2，3-三氮唑-1-基)乙氧基)乙氧基)乙氧基)-n-(2-(2，6-二氧代哌啶-3-基)-1，3-二氧代異吲哚啉-4-基)乙酰胺；2-(2-(2-(2-(2-(4-((6-(3，5-二甲基異噁唑-4-基)-1-甲基-2-氧代-4-苯基-二氫喹唑啉-3(2h)-基)甲基)-1h-1，2，3-三氮唑-1-基)乙氧基)乙氧基)乙氧基)乙氧基)-n-(2-(2，6-二氧代哌啶-3-基)-1，3-二氧代異吲哚啉-4-基)乙酰胺；部分化合物的結(jié)構(gòu)為：通式(ia)所示的化合物可以含有不對稱或手性中心，因此可以以不同立體異構(gòu)形式存在。本發(fā)明化合物的所有立體異構(gòu)形式，包括但不限于非対映異構(gòu)體、対映異構(gòu)體和阻轉(zhuǎn)異構(gòu)體以及他們的混合物(如外消旋物)，均包括在本發(fā)明的范圍內(nèi)。通式(ia)所示的化合物還可以以不同互變異構(gòu)形式存在，所有這些形式均包括在本發(fā)明范圍內(nèi)。屬于“互變異構(gòu)體”或“互變異構(gòu)形式”是指經(jīng)由低能壘相互轉(zhuǎn)化的不同能量的結(jié)構(gòu)異構(gòu)體。根據(jù)本發(fā)明，藥學(xué)上可接受的鹽包括與下列酸形成的加成鹽：鹽酸、氫溴酸、硫酸、磷酸、甲磺酸、乙磺酸、對甲苯磺酸、苯磺酸、萘二磺酸、乙酸、丙酸、乳酸、三氟乙酸、馬來酸、檸檬酸、富馬酸、草酸、酒石酸、苯甲酸等。鹽酸、氫溴酸、硫酸、檸檬酸、酒石酸、磷酸、乳酸、丙酮酸、乙酸、三氟乙酸、馬來酸、苯磺酸、琥珀酸以及類似的已知可以接受的酸成鹽。此外，本發(fā)明還包括本發(fā)明衍生物的前藥。本發(fā)明衍生物的前藥是通式(ia)的衍生物，它們自身可能具有較弱的活性甚至沒有活性，但是在給藥后，在生理條件下(例如通過代謝、溶劑分解或另外的方式)被轉(zhuǎn)化成相應(yīng)的生物活性形式。本發(fā)明可以含有上式(ia)的雙功能小分子及其藥學(xué)上可接受的鹽、水合物作為活性成份，與藥學(xué)上可接受的賦形劑混合制備成組合物，并制備成臨床上可接受的劑型，上述賦形劑是指可用于藥學(xué)領(lǐng)域的稀釋劑、輔助劑或載體。上述劑型是指臨床上常用的注射劑、片劑、膠囊劑等。本發(fā)明涉及的化合物或其藥學(xué)上可接受的鹽、水合物、前藥可作為唯一的抗腫瘤藥物單獨使用，或者可以與現(xiàn)已上市的抗腫瘤藥物聯(lián)合使用，用于治療預(yù)防腫瘤等。下文中提供的實施例和制備例進一步闡明和舉例說明本發(fā)明化合物及其制備方法。應(yīng)當(dāng)理解，下述實例和制備例的范圍并不以任何方式限制本發(fā)明的范圍。通式(ia)的化合物制備方法，方法如下：步驟a：化合物i與對甲苯磺酰氯反應(yīng)得到化合物ii；步驟b：化合物ii與疊氮鈉反應(yīng)得到化合物iii；步驟c：化合物iii與溴乙酸叔丁酯反應(yīng)得到化合物iv；步驟d：化合物iv與三氟乙酸反應(yīng)得到化合物v；步驟e：化合物v與二氯亞砜反應(yīng)得到化合物vi；步驟f：化合物vi與泊馬度胺或其衍生物反應(yīng)得到化合物vii；步驟g：化合物viii與vii反應(yīng)得到通式(ia)表示的化合物；其中，r1、r2、r3和n的定義如上所述。具體實施方式不需進一步詳細說明，認為本領(lǐng)域熟練技術(shù)人員借助前面的描述，可以最大程度的利用本發(fā)明。因此，下面提供的實施例僅僅是進一步闡明本發(fā)明而已，并不意味著以任何方式限制本發(fā)明范圍。原料可以從商業(yè)途徑獲得，或者通過本領(lǐng)域已知的方法制備，或根據(jù)本文所述方法制備。化合物的結(jié)構(gòu)通過核磁共振(1h-nmr)和/或質(zhì)譜(ms)來確定。nmr測定是用acf-300bruk型核磁共振儀，測定溶劑為氘代氯仿(cdcl3)或氘代二甲亞砜(dmso-d6)，tms為內(nèi)標(biāo)。ms的測定用hp1100型質(zhì)譜儀。柱層析采用200-300目硅膠(青島海洋化工廠生產(chǎn))。實施例1：制備2-(2-(4-((6-(3，5-二甲基異噁唑-4-基)-1-甲基-2-氧代-4-苯基-1，4-二氫喹唑啉-3(2h)-基)甲基)-1h-1，2，3-三氮唑-1-基)乙氧基)-n-(2-(2，6-二氧代哌啶-3-基)-1，3-二氧代異吲哚啉-4-基)乙酰胺(i-1)，其結(jié)構(gòu)式如下：步驟1)2-羥基乙基-4-甲基苯磺酸酯(1a)將乙二醇(3.91g，62.95mmol)溶于5ml吡啶中，分批加入對甲苯磺酰氯(6g，31.47mmol)，室溫攪拌4小時后，加入6mol/l鹽酸(40ml)，用乙酸乙酯萃取，飽和食鹽水洗，收集有機層，無水硫酸鈉干燥，減壓蒸去有機溶劑，殘留物通過硅膠柱色譜層析純化，使用石油醚/乙酸乙酯(v/v＝20/1-10/1)洗脫得到無色液體，重2g，收率29.39％。1hnmr(300mhz，cdcl3)δ7.81(d，j＝8.3hz，2h)，7.36(d，j＝8.0hz，2h)，4.16-4.12(m，2h)，3.85-3.78(m，2h)，2.45(s，3h)，2.01(d，j＝19.0hz，1h)。步驟2)2-羥基乙基疊氮(1b)將1a(1.2g，5.55mmol)和疊氮化鈉(0.72g，11.1mmol)溶于5ml丙酮和5ml水混合液中，加熱回流16小時加入20ml水，用乙酸乙酯萃取，飽和碳酸鈉水溶液洗，飽和食鹽水洗，收集有機層，無水硫酸鈉干燥，減壓蒸去有機溶劑，得到無色液體，重0.41g，收率84.85％。1hnmr(300mhz，cdcl3)δ3.82-3.74(m，2h)，3.49-3.39(m，2h)，2.01(s，1h)。步驟3)2-疊氮乙氧基乙酸叔丁酯(1c)將1b(0.41g，4.71mmol)和溴乙酸叔丁酯(1.1g，5.65mmol)溶于15ml四氫呋喃中，在冰水浴中攪拌10分鐘，分批加入氫化鈉(0.38g，9.42mmol)，繼續(xù)在冰水浴中反應(yīng)0.5小時后，室溫反應(yīng)3小時，加入30ml水，用乙酸乙酯萃取，飽和食鹽水洗，收集有機層，無水硫酸鈉干燥，減壓蒸去有機溶劑，殘留物通過硅膠柱色譜層析純化，使用石油醚/乙酸乙酯(v/v＝30/1-20/1)洗脫得到無色液體，重0.41g，收率43.28％。1hnmr(300mhz，cdcl3)δ4.06-4.00(m，2h)，3.76-3.70(m，2h)，3.48-3.41(m，2h)，1.49(d，j＝5.8hz，9h)。步驟4)2-疊氮乙氧基乙酸(1d)將1c(0.41g，2.04mmol)溶于4ml二氯甲烷中，加入1ml三氟乙酸，室溫反應(yīng)3小時后，減壓蒸去有機溶劑，得到棕色液體，重0.29g。步驟5)2-疊氮乙氧基乙酰氯(1e)將1d(0.29g，2.03mmol)溶于4ml二氯甲烷中，加入1ml二氯亞砜，再加入2滴dmf催化，加熱回流4小時后，減壓蒸去有機溶劑，得到褐色液體，重0.33g。步驟6)2-(2-疊氮乙氧基)-n-(2-(2，6-二氧代哌啶-3-基)-1，3-二氧代異吲哚啉-4-基)乙酰胺(1f)將泊馬度胺(0.26g，0.95mmol)溶于3mln-甲基吡咯烷酮中，加入1e(0.32g，1.9mmol)，室溫反應(yīng)4小時后，加入20ml水，有固體析出，抽濾，干燥得粗品，通過硅膠柱色譜層析純化，使用二氯甲烷/甲醇(v/v＝150/1-100/1)洗脫得到黃色固體，重0.21g，收率55.13％。步驟7)2-(2-(4-((6-(3，5-二甲基異噁唑-4-基)-1-甲基-2-氧代-4-苯基-1，4-二氫喹唑啉-3(2h)-基)甲基)-1h-1，2，3-三氮唑-1-基)乙氧基)-n-(2-(2，6-二氧代哌啶-3-基)-1，3-二氧代異吲哚啉-4-基)乙酰胺(i-1)將6-(3，5-二甲基異噁唑-4-基)-1-甲基-4-苯基-3-(丙-2-炔-1-基)-3，4-二氫喹唑啉-2(1h)-酮(0.06g，0.161mmol)，1f(0.064g，0.161mmol)和五水合硫酸銅(0.008g，0.032mmol)溶于2ml二氯甲烷，2ml甲醇和2ml水混合液中，室溫攪拌10分鐘，加入抗壞血酸鈉(0.013g，0.065mmol)，室溫反應(yīng)4小時后，加入20ml水，用二氯甲烷萃取，飽和食鹽水洗，收集有機層，無水硫酸鈉干燥，減壓蒸去有機溶劑，殘留物通過硅膠柱色譜層析純化，使用二氯甲烷/甲醇(v/v＝100/1-30/1)洗脫得到黃色固體，重0.057g，收率45.72％。ms(esi，m/z)：794.05[m+na]+1hnmr(300mhz，cdcl3)δ10.44(d，j＝35.6hz，1h)，9.49-8.95(m，1h)，8.81(s，1h)，7.66(d，j＝36.2hz，3h)，7.36(d，j＝46.0hz，5h)，6.99(d，j＝40.8hz，3h)，5.33(s，2h)，5.03(s，1h)，4.72(s，2h)，4.11(s，6h)，3.43(s，3h)，2.90(s，4h)，2.28(s，5h)。實施例2：制備2-(2-(2-(4-((6-(3，5-二甲基異噁唑-4-基)-1-甲基-2-氧代-4-苯基-1，4-二氫喹唑啉-3(2h)-基)甲基)-1h-1，2，3-三氮唑-1-基)乙氧基)乙氧基)-n-(2-(2，6-二氧代哌啶-3-基)-1，3-二氧代異吲哚啉-4-基)乙酰胺(i-2)，其結(jié)構(gòu)式如下：合成步驟同實施例1ms(esi，m/z)：838.05[m+na]+1hnmr(300mhz，cdcl3)δ10.44(d，j＝5.9hz，1h)，9.20(s，1h)，8.85(d，j＝8.2hz，1h)，7.77-7.66(m，2h)，7.57(d，j＝7.3hz，1h)，7.39-7.27(m，5h)，7.07(d，j＝8.4hz，1h)，6.90(d，j＝8.7hz，2h)，5.79(d，j＝11.5hz，1h)，5.10(s，1h)，4.98(s，1h)，4.50(s，2h)，4.19-3.84(m，6h)，3.75(s，4h)，3.41(s，3h)，2.86(d，j＝13.4hz，4h)，2.20(d，j＝41.5hz，9h)。實施例3：制備2-(2-(2-(2-(4-((6-(3，5-二甲基異噁唑-4-基)-1-甲基-2-氧代-4-苯基-二氫喹唑啉-3(2h)-基)甲基)-1h-1，2，3-三氮唑-1-基)乙氧基)乙氧基)乙氧基)-n-(2-(2，6-二氧代哌啶-3-基)-1，3-二氧代異吲哚啉-4-基)乙酰胺(i-3)，其結(jié)構(gòu)式如下：合成步驟同實施例1ms(esi，m/z)：782.30[m+na]+1hnmr(300mhz，cdcl3)δ10.47(s，1h)，9.08(s，1h)，8.86(d，j＝8.3hz，1h)，8.08-7.53(m，3h)，7.31(d，j＝16.6hz，5h)，7.09(d，j＝7.7hz，1h)，6.93(d，j＝8.4hz，2h)，5.84(s，1h)，4.98(s，1h)，4.51(s，2h)，4.20(s，2h)，3.84-3.34(m，14h)，2.82(s，4h)，2.29(s，3h)，2.15(s，4h)。實施例4：制備2-(2-(2-(2-(2-(4-((6-(3，5-二甲基異噁唑-4-基)-1-甲基-2-氧代-4-苯基-二氫喹唑啉-3(2h)-基)甲基)-1h-1，2，3-三氮唑-1-基)乙氧基)乙氧基)乙氧基)乙氧基)-n-(2-(2，6-二氧代哌啶-3-基)-1，3-二氧代異吲哚啉-4-基)乙酰胺(i-4)，其結(jié)構(gòu)式如下：合成步驟同實施例1ms(esi，m/z)：926.05[m+na]+1hnmr(300mhz，cdcl3)δ10.50(s，1h)，9.14(s，1h)，8.84(d，j＝8.4hz，1h)，7.93-7.67(m，2h)，7.57(d，j＝7.5hz，1h)，7.31(d，j＝22.5hz，5h)，7.07(d，j＝8.6hz，1h)，6.91(d，j＝8.4hz，2h)，5.80(s，1h)，5.18(s，1h)，4.98(s，1h)，4.49(s，2h)，4.18(s，2h)，3.82(d，j＝18.0hz，6h)，3.67(s，2h)，3.56(s，6h)，3.43(s，3h)，2.78(s，4h)，2.21(d，j＝41.5hz，7h)。實施例5：化合物的蛋白水平活性測定化合物與brd4蛋白n端第一個bromodomain結(jié)構(gòu)域(以下稱作brd4(bd1))的結(jié)合活性測試采用的是alphascreen檢測技術(shù)?；衔锍鹾Y濃度為500nm。配制hepes緩沖液(50mmhepes，100mmnacl，0.1％bsa，0.05％chaps，ph7.5)用于制備brd4(bd1)蛋白、biotin標(biāo)記的組蛋白h4、待測化合物(dmso0.1％)、donorbeads和acceptorbeads溶液。取384孔板一塊，按照布置，板上分待測化合物孔、空白對照孔(min，max)、陽性藥對照孔。向待測化合物孔和陽性藥孔分別加入不同濃度的化合物溶液5μl，空白加入緩沖液5μl(dmso0.1％)。繼續(xù)向除空白對照孔(min)外的各孔加入brd4(bd1)蛋白溶液5μl，向空白對照孔(min)加入緩沖液5μl。室溫下孵育15分鐘后，每孔加入biotin標(biāo)記的組蛋白h4溶液5μl，繼續(xù)在室溫下孵育1小時后，加入donorbeads和acceptorbeads溶液15μl，避光室溫孵育1小時后用enspire檢測儀的alphamode(λex＝680，λem＝570)讀取熒光數(shù)值。數(shù)值處理：抑制率＝(max-signal)/(max-min)×100％其中：max：biotin標(biāo)記的組蛋白h4與蛋白完全結(jié)合的值min：biotin標(biāo)記的組蛋白h4本底值signal：化合物相應(yīng)濃度下的值以化合物濃度和相應(yīng)的抑制率做s曲線。得到相應(yīng)化合物的ic50。部分化合物的實驗結(jié)果見表1：表1優(yōu)選化合物對brd4(bd1)的抑制活性結(jié)果。實施例6：化合物細胞水平活性測定化合物細胞水平的活性檢測采用celltiter-glo熒光細胞活力檢測法。將處于對數(shù)生長期的hl60或mv4-11細胞接種至96孔培養(yǎng)板，培養(yǎng)過夜后，加入待測化合物37℃，5％co2孵育72h，結(jié)束后，檢測前30分鐘在室溫下平衡測定試劑。每孔加入30ulcelltiter-glo試劑，搖晃96孔板10分鐘誘導(dǎo)細胞裂解。將96孔板在室溫下孵育2分鐘來穩(wěn)定熒光信號。使用envision檢測儀來讀取熒光數(shù)值。數(shù)值處理：抑制率＝(maxsignal-compoundsignal)/(maxsignal-minsignal)×100％其中：maxsignal：dmso作用中讀取到的最大值minsignal：只有介質(zhì)作用的最小值compoundsignal：化合物相應(yīng)濃度下的值以化合物濃度和相應(yīng)的抑制率做s曲線。得到相應(yīng)化合物的ic50。部分化合物的實驗結(jié)果見表2：表2優(yōu)選化合物對hl-60細胞和mv4-11細胞抗增殖活性?；衔飄l-60ic50(μm)mv4-11ic50(μm)i-1＜0.5＜0.5i-2＜0.5＜0.5i-3＜0.5＜0.5i-4＜1＜1實施例7：片劑用含有權(quán)利要求1中化合物(以實施例1化合物為例)10g，按照藥劑學(xué)一般壓片法加輔料20g混勻后，壓制成100片，每片重300mg。實施例8：膠囊劑用含有權(quán)利要求1中化合物(以實施例1化合物為例)10g，按照藥劑學(xué)膠囊劑的要求將輔料20g混勻后，裝入空心膠囊，每個膠囊重300mg。實施例9：注射劑用含有權(quán)利要求1中化合物(以實施例1化合物為例)10g，按照藥劑學(xué)常規(guī)方法，進行活性炭吸附，經(jīng)0.65μm微孔濾膜過濾后，填入氮氣罐制成水針制劑，每只裝2ml，共灌裝100瓶。盡管已經(jīng)通過特定實施方案描述了本發(fā)明，但修改和等價變化對于精通此領(lǐng)域的技術(shù)人員而言是顯見的，且它們都包含在本發(fā)明范圍之內(nèi)。當(dāng)前第1頁12