本發(fā)明屬于生物醫(yī)藥領(lǐng)域，涉及一類使用多位點(diǎn)組合修飾的內(nèi)嗎啡肽（包括內(nèi)嗎啡肽-1和內(nèi)嗎啡肽-2）類似物及其合成方法，尤其涉及一種酪氨酸或2,6-二甲基酪氨酸，n-甲基-d型丙氨酸和非天然α-烯基-β-氨基酸共同修飾的內(nèi)嗎啡肽類似物及其合成方法，本發(fā)明同時(shí)還涉及該內(nèi)嗎啡肽類似物在制備鎮(zhèn)痛藥物中的應(yīng)用。

背景技術(shù)：

隨著現(xiàn)代社會人們生活、工作壓力的不斷增大和老年社會的到來，疼痛遍及范圍不斷擴(kuò)大，如何對其進(jìn)行藥物治療已成為重大的公共衛(wèi)生課題。阿片類藥物用于疼痛的治療已經(jīng)有數(shù)千年的歷史，其主要通過與大量分布于中樞神經(jīng)系統(tǒng)的μ,δ和κ三種經(jīng)典阿片受體相互結(jié)合而發(fā)揮生理作用，時(shí)至今日仍然在臨床中廣泛應(yīng)用，但傳統(tǒng)的阿片藥物（如嗎啡）在長期使用后會產(chǎn)生耐受、依賴、呼吸抑制以及影響胃腸運(yùn)動等副作用，嚴(yán)重限制了其臨床應(yīng)用。

內(nèi)嗎啡肽是人體內(nèi)廣泛存在的一類內(nèi)源性阿片類多肽物質(zhì)，包括內(nèi)嗎啡肽-1（tyr-pro-trp-phe-nh2，em-1）和內(nèi)嗎啡肽-2（tyr-pro-phe-phe-nh2，em-2），其可通過與μ阿片受體結(jié)合，參與包括痛覺、呼吸、心血管、胃腸、內(nèi)分泌、行為等諸多功能的調(diào)節(jié)，但其主要作用體現(xiàn)在鎮(zhèn)痛方面（nature.1997,386,499），且不會誘發(fā)耐受、呼吸抑制和血壓下降等常見的副作用，被認(rèn)為是一種有極大應(yīng)用潛力的鎮(zhèn)痛候選藥。然而，由于人體內(nèi)同時(shí)存在大量的蛋白水解酶，內(nèi)嗎啡肽在人體內(nèi)會被迅速降解，大大縮短了藥物作用的半衰期。鑒于此，大量化學(xué)修飾的方法被應(yīng)用于阿片肽的改造優(yōu)化中，以期能提高它們的生物利用度，從而發(fā)揮更好的鎮(zhèn)痛作用。另外，非天然氨基酸砌塊在研究多肽藥物構(gòu)效關(guān)系方面有非常重要的作用，通過引入非天然氨基酸代替原有的天然結(jié)構(gòu)，修飾關(guān)鍵酶切位點(diǎn)，能夠有助于延長藥物作用時(shí)間，提高生物利用度。近年來大量研究顯示，多肽藥物通過多位點(diǎn)修飾后能夠?qū)ζ浣Y(jié)構(gòu)和生理活性產(chǎn)生顯著影響（expertopin.ther.patents2012，22，1；medicinalresearchreviews，2012，32，536）。因此，通過化學(xué)組合修飾內(nèi)嗎啡肽提高其作用效果和作用時(shí)間，以獲得一系列神經(jīng)肽受體的高效配體成為近年來鎮(zhèn)痛藥物研究的方向。

申請?zhí)枮?01210426909.4的中國發(fā)明專利公開了一種多位點(diǎn)修飾的內(nèi)嗎啡肽-1類似物，其是將內(nèi)嗎啡肽-1的第1位氨基酸由酪氨酸或2,6-二甲基酪氨酸替代，第2位氨基酸由脯氨酸或（s/r）β-脯氨酸替代，第4位氨基酸分別由苯基或2-呋喃基取代的α-烯基-β-氨基酸替代得到。但內(nèi)嗎啡肽第2位的脯氨酸是主要的酶切位點(diǎn)，該內(nèi)嗎啡肽-1類似物制備成鎮(zhèn)痛藥物依然存在作用時(shí)間短的問題，且從工業(yè)生產(chǎn)角度而言，（s/r）β-脯氨酸價(jià)格昂貴，生產(chǎn)成本較高?；诖?，申請?zhí)枮?0111089179.9的中國發(fā)明專利“內(nèi)嗎啡肽-1類似物及其合成和在制備鎮(zhèn)痛藥物中的應(yīng)用”提供了一種內(nèi)嗎啡肽-1第2位氨基酸由d-型丙氨酸替代的內(nèi)嗎啡肽-1類似物，可顯著延長藥物作用時(shí)間，但其μ阿片受體的親和力較弱，鎮(zhèn)痛作用不夠顯著。

技術(shù)實(shí)現(xiàn)要素：

本發(fā)明的目的是提供一類多位點(diǎn)組合修飾的內(nèi)嗎啡肽（em-1和em-2）類似物。

本發(fā)明的另一目的是提供一種多位點(diǎn)組合修飾內(nèi)嗎啡肽類似物的合成方法。

本發(fā)明還有一個(gè)目的，就是提供一種上述多位點(diǎn)組合修飾的內(nèi)嗎啡肽類似物在制備鎮(zhèn)痛藥物中的應(yīng)用。

本發(fā)明的目的是通過以下技術(shù)方案實(shí)現(xiàn)的：

一、多位點(diǎn)組合修飾的內(nèi)嗎啡肽類似物

1、多位點(diǎn)修飾內(nèi)嗎啡肽類似物的結(jié)構(gòu)

本發(fā)明多位點(diǎn)組合修飾的內(nèi)嗎啡肽類似物，是針對內(nèi)嗎啡肽的第1、2、4位氨基酸進(jìn)行的組合改造，即內(nèi)嗎啡肽的第1位氨基酸由酪氨酸或2,6-二甲基酪氨酸替代，第2位氨基酸由n-甲基-d型丙氨酸替代，第4位氨基酸分別由苯基或2-呋喃基取代的α-烯基-β-氨基酸替代。

其結(jié)構(gòu)通式為下列之一：

其中，r1為h或甲基；r2為苯基或2-呋喃基，標(biāo)記為mel-n16系列，包括以下8中化合物：

第1位氨基酸為酪氨酸，第2位為n-甲基-d型丙氨酸，第3位為色氨酸，第4位r為苯基的化合物，標(biāo)記為mel-n1601；

第1位氨基酸為酪氨酸，第2位為n-甲基-d型丙氨酸，第3位為色氨酸，第4位r為2-呋喃基的化合物，標(biāo)記為mel-n1602；

第1位氨基酸為酪氨酸，第2位為n-甲基-d型丙氨酸，第3位為苯丙氨酸，第4位r為苯基的化合物，標(biāo)記為mel-n1603；

第1位氨基酸為酪氨酸，第2位為n-甲基-d型丙氨酸，第3位為苯丙氨酸，第4位r為2-呋喃基的化合物，標(biāo)記為mel-n1604；

第1位氨基酸為2,6-二甲基酪氨酸，第2位為n-甲基-d型丙氨酸，第3位為色氨酸，第4位r為苯基的化合物，標(biāo)記為mel-n1605；

第1位氨基酸為2,6-二甲基酪氨酸，第2位為n-甲基-d型丙氨酸，第3位為色氨酸，第4位r為2-呋喃基的化合物，標(biāo)記為mel-n1606；

第1位氨基酸為2,6-二甲基酪氨酸，第2位為n-甲基-d型丙氨酸，第3位為苯丙氨酸，第4位r為苯基的化合物，標(biāo)記為mel-n1607；

第1位氨基酸為2,6-二甲基酪氨酸，第2位為n-甲基-d型丙氨酸，第3位為苯丙氨酸，第4位r為2-呋喃基的化合物，標(biāo)記為mel-n1608。

2、多位點(diǎn)組合修飾的內(nèi)嗎啡肽類似物mel-n16系列的合成

本發(fā)明多位點(diǎn)修飾的內(nèi)嗎啡肽類似物mel-n16系列的合成方法，包括以下步驟：

（1）n-叔丁氧羰基-α-烯基-β-氨基酸酰胺的合成

將n-叔丁氧羰基-α-烯基-β-氨基酸溶于無水處理的二氯甲烷，于0-5℃下依次加入n-叔丁氧羰基-α-烯基-β-氨基酸摩爾量4.5-5倍量的n,n-二異丙基乙基胺，1.6-1.8倍量的1-羥基苯并三唑，1.6-1.8倍量的1-乙基-3-（3-二甲胺丙基）碳二亞胺，攪拌使其充分溶解后加入n-叔丁氧羰基-α-烯基-β-氨基酸摩爾量1.6-1.8倍的氨水，室溫反應(yīng)16-18h后洗滌，無水硫酸鈉干燥，減壓蒸餾，得到白色固體產(chǎn)物n-叔丁氧羰基-α-烯基-β-氨基酸酰胺；

（2）α-烯基-β-氨基酸酰胺三氟乙酸鹽的合成

將化合物n-叔丁氧羰基-α-烯基-β-氨基酸酰胺溶于三氟乙酸和二氯甲烷的混合溶液中，室溫反應(yīng)2.5-3h后，減壓蒸餾，得到白色固體產(chǎn)物α-烯基-β-氨基酸酰胺三氟乙酸鹽；

（3）n-叔丁氧羰基-色氨酸/苯丙氨酸-α-烯基-β-氨基酸酰胺的合成

將n-叔丁氧羰基-色氨酸/苯丙氨酸溶于無水處理的二氯甲烷，于0-5℃下依次加入n-叔丁氧羰基-色氨酸/苯丙氨酸摩爾量4.5-5倍量的n,n-二異丙基乙基胺，1.6-1.8倍量的1-羥基苯并三唑，1.6-1.8倍量的1-乙基-3-（3-二甲胺丙基）碳二亞胺，攪拌使其充分溶解后加入α-烯基-β-氨基酸酰胺三氟乙酸鹽的二氯甲烷溶液，室溫反應(yīng)16-18h后洗滌，無水硫酸鈉干燥，減壓蒸餾，得到白色固體產(chǎn)物n-叔丁氧羰基-色氨酸/苯丙氨酸-α-烯基-β-氨基酸酰胺；所述α-烯基-β-氨基酸酰胺的摩爾量為n-叔丁氧羰基-色氨酸/苯丙氨酸的1.6-1.8倍；

（4）n-叔丁氧羰基-酪氨酸/2,6-二甲基酪氨酸-n甲基d型丙氨酸的合成

將n-叔丁氧羰基-酪氨酸/2,6-二甲基酪氨酸溶于無水二氯甲烷，0-5℃攪拌下依次加入n-叔丁氧羰基-酪氨酸/2,6-二甲基酪氨酸摩爾量4.5-5倍量的n,n-二異丙基乙基胺，1.6-1.8倍量的1-羥基苯并三唑，1.6-1.8倍量的1-乙基-3-（3-二甲胺丙基）碳二亞胺，攪拌充分溶解后加入n-甲基-d型丙氨酸的飽和碳酸氫鈉溶液，室溫反應(yīng)16-18h后洗滌，無水硫酸鈉干燥，減壓蒸餾，得到油狀液體產(chǎn)物n-叔丁氧羰基-酪氨酸/2,6-二甲基酪氨酸-n甲基d型丙氨酸；所述n甲基d型丙氨酸的摩爾量為n-叔丁氧羰基-酪氨酸/2,6-二甲基酪氨酸的1.6-1.8倍；

（5）色氨酸/苯丙氨酸-α-烯基-β-氨基酸酰胺三氟乙酸鹽的合成

將n-叔丁氧羰基-色氨酸/苯丙氨酸-α-烯基-β-氨基酸酰胺溶于三氟乙酸和二氯甲烷的混合溶液中，室溫反應(yīng)2.5-3h后，減壓蒸餾，得到白色固體產(chǎn)物色氨酸/苯丙氨酸-α-烯基-β-氨基酸酰胺三氟乙酸鹽；

（6）n-叔丁氧羰基-酪氨酸/2,6-二甲基酪氨酸-n甲基d型丙氨酸-色氨酸/苯丙氨酸-α-烯基-β-氨基酸酰胺的合成

將n-叔丁氧羰基-酪氨酸/2,6-二甲基酪氨酸-n甲基d型丙氨酸溶于無水二氯甲烷，于0-5℃下依次加入n-叔丁氧羰基-酪氨酸/2,6-二甲基酪氨酸-n甲基d型丙氨酸摩爾量4.5-5倍量的n,n-二異丙基乙基胺，1.6-1.8倍量的1-羥基苯并三唑，1.6-1.8倍量的1-乙基-3-（3-二甲胺丙基）碳二亞胺，攪拌充分溶解后加入色氨酸/苯丙氨酸-α-烯基-β-氨基酸酰胺三氟乙酸鹽的二氯甲烷溶液，室溫反應(yīng)18-20h后洗滌，無水硫酸鈉干燥，減壓蒸餾，得到白色固體產(chǎn)物n-叔丁氧羰基-酪氨酸/2,6-二甲基酪氨酸-n甲基d型丙氨酸-色氨酸/苯丙氨酸-α-烯基-β-氨基酸酰胺；所述色氨酸/苯丙氨酸-α-烯基-β-氨基酸酰胺三氟乙酸鹽的摩爾量為n-叔丁氧羰基-酪氨酸或2,6-二甲基酪氨酸-n甲基d型丙氨酸的1.6-1.8倍；

（7）酪氨酸/2,6-二甲基酪氨酸-n甲基d型丙氨酸-色氨酸/苯丙氨酸-α-烯基-β-氨基酸酰胺的合成

將n-叔丁氧羰基-酪氨酸/2,6-二甲基酪氨酸-n甲基d型丙氨酸-色氨酸/苯丙氨酸-α-烯基-β-氨基酸酰胺溶于乙酸乙酯和鹽酸的混合溶液中，室溫反應(yīng)4-5h后，調(diào)節(jié)ph=9-10，二氯甲烷萃取，無水硫酸鈉干燥，減壓蒸餾，得到白色固體產(chǎn)物酪氨酸或2,6-二甲基酪氨酸-n甲基d型丙氨酸-色氨酸/苯丙氨酸-α-烯基-β-氨基酸酰胺。

其中，上述步驟（2）和步驟（5）中三氟乙酸和二氯甲烷的混合體積比為1-1.2:1，以達(dá)到產(chǎn)率高，副產(chǎn)物少的目的。

步驟（7）中乙酸乙酯和鹽酸的混合體積比為4-4.5:1，反應(yīng)產(chǎn)率高，產(chǎn)物容易濃縮、方便后續(xù)處理。

α-烯基-β-氨基酸為3-氨基-2-甲烯基-3苯基丙酸或3-氨基-2-甲烯基-3-（2-呋喃）丙酸，引入該氨基酸有助于提高內(nèi)嗎啡肽類似物mel-n16系列的血腦屏障通透性，間接延長藥物作用時(shí)間，提高其生物利用度。

本發(fā)明多位點(diǎn)組合修飾的內(nèi)嗎啡肽類似物mel-n16系列的esi-ms測試（圖3-圖10）結(jié)果表明，上述方法成功合成了8種內(nèi)嗎啡肽類似物。em1和em2及其類似物的理化特征見表1。

表1.em1和em2及其類似物的理化特征

二、多位點(diǎn)組合修飾的內(nèi)嗎啡肽類似物mel-n16系列的藥理活性實(shí)驗(yàn)

內(nèi)嗎啡肽在體內(nèi)容易被多種多肽酶降解，其中第2位的脯氨酸是主要的酶切位點(diǎn)，因此要延長藥物的作用時(shí)間主要針對該酶切位點(diǎn)進(jìn)行修飾。本發(fā)明第2位氨基酸由結(jié)構(gòu)與脯氨酸近似的非環(huán)狀氨基酸n-甲基-d-丙氨酸替代，可以顯著延長藥物作用時(shí)間，相比與單純的d-丙氨酸替代可進(jìn)一步提升阿片受體親和力，結(jié)合第1位和第2位氨基酸分別由酪氨酸或2,6-二甲基酪氨酸和α-烯基-β-氨基酸的組合修飾，產(chǎn)生了更好的鎮(zhèn)痛作用。

本發(fā)明合成的多位點(diǎn)組合修飾的內(nèi)嗎啡肽類似物mel-n16系列，具備良好的藥理學(xué)活性和潛在的藥用價(jià)值?，F(xiàn)通過通過放射配體受體結(jié)合實(shí)驗(yàn)，離體器官生物檢定，離體酶解穩(wěn)定性和溫浴甩尾鎮(zhèn)痛實(shí)驗(yàn)對其藥理學(xué)活性進(jìn)行鑒定。

1放射配體受體結(jié)合實(shí)驗(yàn)

1.1穩(wěn)定表達(dá)細(xì)胞株的篩選和培養(yǎng)

本實(shí)驗(yàn)細(xì)胞采用hek293（人胚胎腎細(xì)胞），用含有10%胎牛血清的dmem培養(yǎng)液培養(yǎng)，并放于co2培養(yǎng)箱中促進(jìn)其生長；設(shè)計(jì)引物pcdna3.1(+)-flag-mor和pcdna3.1(+)-ha-dor構(gòu)建含有目的基因的真核表達(dá)質(zhì)粒，然后將該真核表達(dá)質(zhì)粒用轉(zhuǎn)染試劑轉(zhuǎn)入hek293細(xì)胞中，48h后將細(xì)胞無限稀釋并用抗生素g418進(jìn)行篩選，3周后對存活細(xì)胞進(jìn)行基因組、rna、蛋白、功能方面的一系列鑒定，篩選出穩(wěn)定表達(dá)μ/δ阿片受體的細(xì)胞株。篩選出的穩(wěn)定細(xì)胞株加入800ug/ml的g418隔天培養(yǎng)后，將細(xì)胞用pbs緩沖液吹下，離心后用適量親和緩沖液（25mmhepes,5mmmgcl2,1mmcacl2,2.5mmedta,0.4%bsa,鹽酸調(diào)ph=7.4）重懸備用。

1.2受體結(jié)合實(shí)驗(yàn)

實(shí)驗(yàn)分為總結(jié)合管、競爭結(jié)合管和非特異性結(jié)合管，每個(gè)反應(yīng)管中依次加入放射配體，納洛酮（naloxone，nx）/非放射性藥物，tris-hcl（ph=7.4）和細(xì)胞懸液（200μl）。其中，在總結(jié)合管中只加入[³h]damgo（0.5nm）和細(xì)胞懸液（200μl），在非特異性結(jié)合管和競爭結(jié)合管中分別另加入10μmnx/不同濃度的類似物和細(xì)胞懸液，最后補(bǔ)充tris-hcl緩沖液（ph=7.4）至總體積0.4ml。振蕩混勻反應(yīng)液，37℃搖床反應(yīng)1h后經(jīng)zt-ii型細(xì)胞收集器收集，gf/c型玻璃纖維素膜過濾。80℃油浴下烘烤玻璃纖維素膜30min后取出濾膜，放入24孔板中，每孔加入0.7ml閃爍液，封蓋膜封蓋。隔夜用β液體閃爍計(jì)數(shù)儀記錄放射性強(qiáng)度（cpm）。計(jì)算類似物對特異性結(jié)合的抑制率，以濃度的負(fù)對數(shù)為橫坐標(biāo)，抑制率為縱坐標(biāo)，線性回歸求得ic50值，根據(jù)公式ki=ic50/(1+[l]/kd)計(jì)算ki值。每個(gè)實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)分別未3組平行實(shí)驗(yàn)的平均值。

1.3實(shí)驗(yàn)結(jié)果

實(shí)驗(yàn)結(jié)果見表2。表2中實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)顯示，內(nèi)嗎啡肽類似物mel-n16系列中，第1位氨基酸為酪氨酸的mel-n1601至mel-n1604，其μ阿片受體的親和力高于母體約5-10倍，δ阿片受體的親和力略高于母體，而第1位氨基酸為酪氨酸2,6-二甲基酪氨酸的mel-n1605至mel-n1608，其μ阿片受體和δ阿片受體的親和力均明顯高于母體。

表2.內(nèi)嗎啡肽及其類似物的μ/δ阿片受體親和能力

2.離體生物活性功能檢定

2.1豚鼠離體回腸縱行肌實(shí)驗(yàn)（gpi實(shí)驗(yàn)）

體重250-300g豚鼠，雌雄不限，實(shí)驗(yàn)前禁食12h，飲水不限。棒擊枕部處死，剖腹取出近盲腸端的回腸6厘米兩段，浸入持續(xù)通入95%o2和5%co2混合氣的kreb’s液（g/l:氯化鈉6.9，cac120.28，kcl0.35，kh2po40.16，mgso4·7h2o0.30，碳酸氫鈉2.1，葡萄糖1.98，苯海拉明50×10^-6，氯化膽堿2.8×10^-3）中，濕潤后套在一根玻璃棒上，沿回腸壁的一根縱形血管將縱行肌與環(huán)形肌分離，然后用零號絲線將縱行肌的一端縛在玻璃電極的小鉤上，另一端縛在jz-1型肌肉張力傳感器上，制備好后立即放入恒溫37±0.5℃玻璃浴管中盛有的持續(xù)通入氣體(95%o2和5%co2)的kreb’s液，預(yù)負(fù)荷500mg。前30min每5min換一次營養(yǎng)液，以后每10min換液一次，平衡2h后開始實(shí)驗(yàn)。給予電刺激，刺激參數(shù)：波寬0.3-0.1ms的單方波，頻率6次/min，負(fù)載電壓80v。記錄基礎(chǔ)收縮強(qiáng)度，再給予適量內(nèi)嗎啡肽-1鑒定其活性，然后分別給予不同劑量的待試藥物，記錄收縮強(qiáng)度，計(jì)算抑制百分率。每次藥物作用后，用營養(yǎng)液沖洗3次，平衡15min。根據(jù)公式：抑制百分率=（反應(yīng)前收縮高度-反應(yīng)后收縮高度）/反應(yīng)前收縮高度×100%，用劑量-效應(yīng)半對數(shù)作圖法，以抑制百分率為縱坐標(biāo)，以待測藥物濃度的對數(shù)為橫坐標(biāo)作圖，求得抑制50%收縮高度的藥物濃度（ic50）。

2.2小鼠輸精管實(shí)驗(yàn)（mvd實(shí)驗(yàn)）

體重30-35g雄性昆明系小白鼠，頸椎脫臼處死，剖腹取出兩側(cè)輸精管，浸入持續(xù)通入95%o2和5%co2混合氣的kreb’s液（g/l:氯化鈉6.9，cac120.28，kcl0.35，kh2po40.16，mgso4·7h2o0.30，碳酸氫鈉2.1，葡萄糖1.98），剝離附著于其上的脂肪及血管。剪去輸精管的一端，用小棉花球輕輕從末端向開口端壓出管內(nèi)精液，然后用零號絲線將其一端縛在玻璃電極的小鉤上，另一端縛在jz-1型肌肉張力傳感器上，制備好后立即放入恒溫37±0.5℃玻璃浴管中盛有的持續(xù)通入氣體(95%o2和5%co2)的kreb’s液，預(yù)負(fù)荷l00mg。前30min每5min換一次營養(yǎng)液，以后每10min換液一次，平衡2h后開始實(shí)驗(yàn)。給予電刺激，刺激參數(shù)：波寬2ms，頻率6次/min，負(fù)載電壓80v。記錄基礎(chǔ)收縮強(qiáng)度，再給予適量內(nèi)嗎啡肽-1鑒定其活性，然后分別給予不同劑量的待試藥物，記錄收縮強(qiáng)度。每次藥物作用后，用營養(yǎng)液沖洗5次，平衡15min。ic50測定方法同gpi實(shí)驗(yàn)。

2.3實(shí)驗(yàn)結(jié)果

上述實(shí)驗(yàn)結(jié)果見表3。表3中實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)顯示，gpi和mvd的實(shí)驗(yàn)結(jié)果與放射配體結(jié)合實(shí)驗(yàn)結(jié)果的趨勢一致。內(nèi)嗎啡肽類似物mel-n16系列中，第1位氨基酸為酪氨酸的mel-n1601至mel-n1604，其生物活性為母體的1-3倍，而第1位氨基酸為2,6-二甲基酪氨酸的mel-n1605至mel-n1608，其生物活性均明顯高于母體，gpi與mvd的ic50最小值分別為母體的1/37和1/16；使用δ阿片受體特異性拮抗劑naltrindole部分（39%-66%）拮抗這些類似物的mvd激動效應(yīng)，提示這些多肽的高dor激動效應(yīng)可能部分由共存于mvd上的mor介導(dǎo)。實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明這些類似物在離體生物標(biāo)本中對μ/δ阿片受體有強(qiáng)的激動活性，生物活性高。

表3.內(nèi)嗎啡肽及其類似物的離體生物活性

3.離體酶解穩(wěn)定性實(shí)驗(yàn)

3.115%小鼠腦質(zhì)膜標(biāo)本制備

體重30-35g成年雄性小鼠，頸椎脫臼處死，取大腦（去除小腦及腦橋）用濾紙吸干后稱重。用溫度為4攝氏度的1mm的tris-hcl緩沖液（ph=7.4）沖洗除去溢血后，再加入50倍體積（v/w）的上述tris-hcl緩沖液，0℃下用勻漿器使之成胞漿勻漿后置于冰浴中放置30min促進(jìn)細(xì)胞溶解。然后按每1ml勻漿液補(bǔ)加0.5ml50mm溫度為4攝氏度的tris-hcl，再次勻漿，吹打懸浮。49,000g離心45min，棄上清，將沉淀重懸于50倍體積（v/w）的冰冷50mm的tris-hcl中，吹打懸浮。49,000g再次離心45min，棄上清，沉淀懸浮于50mmtris-hcl中，使腦膜蛋白濃度約為2.3mg/ml。振蕩器震蕩渦旋混勻，分裝，-80℃凍存。

3.2腦質(zhì)膜孵育試驗(yàn)

取10μl多肽母液（10^-2m），加入到190μl腦質(zhì)膜中，立即振蕩混勻，然后迅速取出20μl混合液，加入離心管中并計(jì)時(shí)為0min，余者于37℃下繼續(xù)孵育，并分別在5、10、15、30、60、120、240和480min取出20μl。取出的樣品中加入90μl乙腈振蕩混勻，置于冰上放置5min，再用90μl0.5%的溫度為4攝氏度乙酸稀釋以確保酶解過程停止。然后于4℃下13,000g離心15min，收集上清，-80℃凍存，直至rp-hplc分析。

3.3反相-高效液相色譜分析

運(yùn)用rp-hplc分析各個(gè)時(shí)間點(diǎn)樣品的離體穩(wěn)定性。rp-hplc系統(tǒng)使用watersdelta600控制器、紫外監(jiān)測器和watersdeltapakc18柱（3.9mm×150mm）；檢測波長280nm，流動相=乙腈含0.05%tfa(a)+水含0.05%tfa(b)，流速0.8ml/min；采用梯度洗脫，a:b=10:90-90:10，洗脫時(shí)間30min。分別測定每個(gè)時(shí)間點(diǎn)樣品的濃度，并根據(jù)藥物代謝公式以每個(gè)時(shí)間點(diǎn)的藥物濃度為縱坐標(biāo)，時(shí)間為橫坐標(biāo)繪制藥物濃度變化曲線，計(jì)算求得藥物的半衰期。每個(gè)實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)為3組平行實(shí)驗(yàn)的平均值。

3.4實(shí)驗(yàn)結(jié)果

實(shí)驗(yàn)結(jié)果見表4。表4中實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)顯示，所有化合物的小鼠腦質(zhì)膜半衰期均明顯長于母體，其中通過2,6-二甲基酪氨酸修飾的mel-n1605至mel-n1608，其酶解穩(wěn)定性更加顯著。實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明這些化合物在離體生物組織中具有好的酶解穩(wěn)定性，因此可以延長其對痛覺的調(diào)節(jié)作用。

表4.內(nèi)嗎啡肽及其類似物的離體大腦半衰期

4鎮(zhèn)痛實(shí)驗(yàn)

4.1實(shí)驗(yàn)方法

采用小鼠溫浴甩尾法。體重18-20g昆明系雄性小鼠，環(huán)境溫度20℃，水浴溫度50±0.5℃。給藥前先測定小鼠的基礎(chǔ)痛閾（controllatency，cl)，將小鼠鼠尾的1/3-1/2浸入水浴，記錄鼠尾從剛浸入水浴至發(fā)生收縮的時(shí)間。過于敏感（<2.5s）或遲鈍的(>5s)小鼠棄去不用，浸入截止時(shí)間為10s以防小鼠燙傷。藥物注射劑量：a.側(cè)腦室注射（i.c.v.）4ul/只；b.尾靜脈注射（i.v.）100ul/只。每只小鼠分別注射8種mel-n16系列化合物，檢測給藥后60min內(nèi)的甩尾潛伏期（testlatency，tl），前30min每5min測一次，后30min每10min測一次，實(shí)驗(yàn)過程以0.9%生理鹽水作為空白對照。結(jié)果以最大可能效應(yīng)百分比（maximumpossibleeffect,mpe%）表示：mpe%=100×(tl-cl)/(10-cl)。

4.2實(shí)驗(yàn)結(jié)果

實(shí)驗(yàn)結(jié)果見圖1和圖2。圖1為側(cè)腦室注射20nmol/kg的mel-n16系列產(chǎn)生的鎮(zhèn)痛時(shí)效曲線，結(jié)果顯示，8種mel-n16系列化合物均產(chǎn)生強(qiáng)效的鎮(zhèn)痛作用，鎮(zhèn)痛效力和鎮(zhèn)痛持續(xù)時(shí)間都明顯增加，其最高鎮(zhèn)痛能力達(dá)到68-95%，且第1位氨基酸為2,6-二甲基酪氨酸的mel-n1605至mel-n1608，其鎮(zhèn)痛能力明顯高于第1位氨基酸為酪氨酸的mel-n1601至mel-n1604；圖2為尾靜脈注射3mg/kg的mel-n16系列產(chǎn)生的鎮(zhèn)痛時(shí)效曲線，8種mel-n16系列化合物均產(chǎn)生強(qiáng)效的鎮(zhèn)痛作用，鎮(zhèn)痛效力和鎮(zhèn)痛持續(xù)時(shí)間都明顯增加，其最高鎮(zhèn)痛能力可達(dá)43-84%，且第1位氨基酸為2,6-二甲基酪氨酸的mel-n1605至mel-n1608，其鎮(zhèn)痛能力同樣明顯高于第1位氨基酸為酪氨酸的mel-n1601至mel-n1604。實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明本發(fā)明內(nèi)啡肽類似物在體內(nèi)能夠發(fā)揮有效的鎮(zhèn)痛作用。

綜上，本發(fā)明多位點(diǎn)組合修飾的內(nèi)嗎啡肽類似物mel-n16系列較內(nèi)嗎啡肽母體具有更高的親和力、高酶解穩(wěn)定性和高鎮(zhèn)痛活性，在制備鎮(zhèn)痛藥物方面具有很好的臨床應(yīng)用價(jià)值。

本發(fā)明相對現(xiàn)有技術(shù)具有以下有益效果：

1、本發(fā)明通過對兩種內(nèi)嗎啡肽母體進(jìn)行1、2、4位氨基酸的多位點(diǎn)以及非天然氨基酸2,6-二甲基酪氨酸、n甲基d型丙氨酸、α-烯基-β-氨基酸的組合修飾，合成出了具有更好μ阿片受體親和力及酶解穩(wěn)定性的內(nèi)嗎啡肽類似物mel-n16系列，該內(nèi)嗎啡肽類似物mel-n16系列體內(nèi)鎮(zhèn)痛效果好，且長期使用不會誘發(fā)耐受、呼吸抑制和血壓下降等常見的副作用，可廣泛用于鎮(zhèn)痛藥物的制備方面。

2、本發(fā)明內(nèi)嗎啡肽類似物mel-n16系列的合成采用hobt/edc活化酯法接肽，n端二肽和c端二肽可以同時(shí)合成，然后將兩個(gè)合成好的片段對接，該方法大大簡化了合成線路，減少了工作時(shí)間，產(chǎn)率≥93%、成本低廉，產(chǎn)物不易消旋、易純化。

附圖說明

圖1為側(cè)腦室注射內(nèi)嗎啡肽類似物mel-n16系列鎮(zhèn)痛效應(yīng)-時(shí)間曲線。

圖2為尾靜脈注射內(nèi)嗎啡肽類似物mel-n16系列鎮(zhèn)痛效應(yīng)-時(shí)間曲線。

圖3為內(nèi)嗎啡肽類似物mel-n1601的esi-ms譜圖。

圖4為內(nèi)嗎啡肽類似物mel-n1602的esi-ms譜圖。

圖5為內(nèi)嗎啡肽類似物mel-n1603的esi-ms譜圖

圖6為內(nèi)嗎啡肽類似物mel-n1604的esi-ms譜圖。

圖7為內(nèi)嗎啡肽類似物mel-n1605的esi-ms譜圖。

圖8為內(nèi)嗎啡肽類似物mel-n1606的esi-ms譜圖。

圖9為內(nèi)嗎啡肽類似物mel-n1607的esi-ms譜圖。

圖10為內(nèi)嗎啡肽類似物mel-n1608的esi-ms譜圖。

具體實(shí)施方式

下面通過附圖和具體實(shí)施例對本發(fā)明多位點(diǎn)組合修飾的內(nèi)嗎啡肽類似物mel-n16系列的結(jié)構(gòu)、合成及其理化特征作進(jìn)一步詳細(xì)說明。

實(shí)施例1mel-n1601的合成

（1）n-叔丁氧羰基-3-氨基-2-甲烯基-3苯基丙酸酰胺的合成：將1mol的n-叔丁氧羰基-3-氨基-2-甲烯基-3苯基丙酸溶于無水二氯甲烷，于0℃在攪拌狀態(tài)下依次加入4.5mol的n,n-二異丙基乙基胺，1.6mol的1-羥基苯并三唑和1.6mol的1-乙基-3-（3-二甲胺丙基）碳二亞胺，攪拌充分溶解后加入1.6mol的氨水，室溫反應(yīng)16h后加入二氯甲烷稀釋，5%檸檬酸溶液洗滌2次，飽和碳酸氫鈉洗滌2次，飽和氯化鈉洗滌1次，無水硫酸鈉干燥，減壓蒸餾，得到白色固體產(chǎn)物n-叔丁氧羰基-3-氨基-2-甲烯基-3苯基丙酸酰胺，產(chǎn)率為為91%；

（2）3-氨基-2-甲烯基-3苯基丙酸酰胺三氟乙酸鹽的合成：將1mol的n-叔丁氧羰基-3-氨基-2-甲烯基-3苯基丙酸酰胺溶于0.05l三氟乙酸和0.05l二氯甲烷的混合溶液中，室溫反應(yīng)2.5h后，減壓蒸餾，得到白色固體產(chǎn)物3-氨基-2-甲烯基-3苯基丙酸酰胺三氟乙酸鹽，產(chǎn)率為99%；

（3）n-叔丁氧羰基-色氨酸-3-氨基-2-甲烯基-3苯基丙酸酰胺的合成：將1mol的n-叔丁氧羰基-色氨酸溶于無水二氯甲烷，于0℃在攪拌狀態(tài)下依次加入4.5mol的n,n-二異丙基乙基胺，1.6mol的1-羥基苯并三唑和1.6mol的1-乙基-3-（3-二甲胺丙基）碳二亞胺，攪拌充分溶解后，加入1.6mol的3-氨基-2-甲烯基-3苯基丙酸酰胺的二氯甲烷溶液，室溫反應(yīng)16h后加入二氯甲烷稀釋，5%檸檬酸溶液洗滌2次，飽和碳酸氫鈉洗滌2次，飽和氯化鈉洗滌1次，無水硫酸鈉干燥，減壓蒸餾，得到白色固體產(chǎn)物n-叔丁氧羰基-色氨酸-3-氨基-2-甲烯基-3苯基丙酸酰胺，產(chǎn)率為88%；

（4）n-叔丁氧羰基-酪氨酸-n甲基d型丙氨酸的合成：將1moln-叔丁氧羰基-酪氨酸溶于無水二氯甲烷，于0℃在攪拌狀態(tài)下依次加入4.5mol的n,n-二異丙基乙基胺，1.6mol的1-羥基苯并三唑和1.6mol的1-乙基-3-（3-二甲胺丙基）碳二亞胺，攪拌充分溶解后，加入1.6mol的n-甲基-d型丙氨酸的飽和碳酸氫鈉溶液，室溫反應(yīng)16h后加入二氯甲烷稀釋，5%檸檬酸溶液洗滌2次，飽和氯化鈉洗滌1次，無水硫酸鈉干燥，減壓蒸餾，得油狀液體產(chǎn)物n-叔丁氧羰基-酪氨酸-n甲基d型丙氨酸，產(chǎn)率為90%；

（5）色氨酸-3-氨基-2-甲烯基-3苯基丙酸酰胺三氟乙酸鹽的合成：將1mol的n-叔丁氧羰基-色氨酸-3-氨基-2-甲烯基-3苯基丙酸酰胺溶于0.05l三氟乙酸和0.05l二氯甲烷的混合溶液中，室溫反應(yīng)2.5h后，減壓蒸餾，得到白色固體產(chǎn)物色氨酸-3-氨基-2-甲烯基-3苯基丙酸酰胺三氟乙酸鹽，產(chǎn)率為99%；

（6）n-叔丁氧羰基-酪氨酸-n甲基d型丙氨酸-色氨酸-3-氨基-2-甲烯基-3苯基丙酸酰胺的合成：將1mol的n-叔丁氧羰基-酪氨酸-n甲基d型丙氨酸溶于無水二氯甲烷，于0℃在攪拌狀態(tài)下依次加入4.5mol的n,n-二異丙基乙基胺，1.6mol的1-羥基苯并三唑和1.6mol的1-乙基-3-（3-二甲胺丙基）碳二亞胺，攪拌下充分溶解后加入1.6mol色氨酸-3-氨基-2-甲烯基-3苯基丙酸酰胺的二氯甲烷溶液，室溫反應(yīng)18h后加入二氯甲烷稀釋，5%檸檬酸溶液洗滌2次，飽和氯化鈉洗滌1次，無水硫酸鈉干燥，減壓蒸餾，得到白色固體產(chǎn)物n-叔丁氧羰基-酪氨酸-n甲基d型丙氨酸-色氨酸-3-氨基-2-甲烯基-3苯基丙酸酰胺，產(chǎn)率為80%；

（7）酪氨酸-n甲基d型丙氨酸-色氨酸-3-氨基-2-甲烯基-3苯基丙酸酰胺的合成：將1mol的n-叔丁氧羰基-酪氨酸-n甲基d型丙氨酸-色氨酸-3-氨基-2-甲烯基-3苯基丙酸酰胺溶于2l乙酸乙酯和0.4l鹽酸的混合溶液中，室溫反應(yīng)4h后，調(diào)節(jié)ph=9-10，二氯甲烷萃取，無水硫酸鈉干燥，減壓蒸餾，得到白色固體酪氨酸-n甲基d型丙氨酸-色氨酸-3-氨基-2-甲烯基-3苯基丙酸酰胺，標(biāo)記為mel-n1601，其產(chǎn)率為97%。

mel-n1601的結(jié)構(gòu)式為：

其理化特征見表1，esi-ms譜圖見圖3。

實(shí)施例2mel-n1602的制備

（1）n-叔丁氧羰基-3-氨基-2-甲烯基-3（2-呋喃）丙酸酰胺的合成：將1mol的n-叔丁氧羰基-3-氨基-2-甲烯基-3（2-呋喃）丙酸溶于無水二氯甲烷，于0℃在攪拌狀態(tài)下依次加入4.6mol的n,n-二異丙基乙基胺，1.65mol的1-羥基苯并三唑和1.65mol的1-乙基-3-（3-二甲胺丙基）碳二亞胺，攪拌充分溶解后加入1.65mol的氨水，室溫反應(yīng)16h加入二氯甲烷稀釋，5%檸檬酸溶液洗滌2次，飽和碳酸氫鈉洗滌2次，飽和氯化鈉洗滌1次，無水硫酸鈉干燥，減壓蒸餾，得白色固體產(chǎn)物n-叔丁氧羰基-3-氨基-2-甲烯基-3（2-呋喃）丙酸酰胺，產(chǎn)率為89%；

（2）3-氨基-2-甲烯基-3（2-呋喃）丙酸酰胺三氟乙酸鹽的合成：將1mol的n-叔丁氧羰基-3-氨基-2-甲烯基-3（2-呋喃）丙酸酰胺溶于0.05l三氟乙酸和0.05l二氯甲烷的混合溶液中，室溫反應(yīng)2.5h后，減壓蒸餾，得到白色固體產(chǎn)物3-氨基-2-甲烯基-3（2-呋喃）丙酸酰胺三氟乙酸鹽，產(chǎn)率為99%；

（3）n-叔丁氧羰基-色氨酸-3-氨基-2-甲烯基-3（2-呋喃）丙酸酰胺的合成：將1mol的n-叔丁氧羰基-色氨酸溶于無水二氯甲烷，于0℃在攪拌狀態(tài)下依次加入4.6mol的n,n-二異丙基乙基胺，1.65mol的1-羥基苯并三唑和1.65mol的1-乙基-3-（3-二甲胺丙基）碳二亞胺，攪拌充分溶解后，加入1.65mol的3-氨基-2-甲烯基-3（2-呋喃）丙酸酰胺的二氯甲烷溶液，室溫反應(yīng)16h后加入二氯甲烷稀釋，5%檸檬酸溶液洗滌2次，飽和碳酸氫鈉洗滌2次，飽和氯化鈉洗滌1次，無水硫酸鈉干燥，減壓蒸餾，得到白色固體產(chǎn)物n-叔丁氧羰基-色氨酸-3-氨基-2-甲烯基-3（2-呋喃）丙酸酰胺，產(chǎn)率為88%；

（4）n-叔丁氧羰基-酪氨酸-n甲基d型丙氨酸的合成：將1mol的n-叔丁氧羰基-酪氨酸溶于無水二氯甲烷，于0℃在攪拌狀態(tài)下依次加入4.6mol的n,n-二異丙基乙基胺，1.65mol的1-羥基苯并三唑和1.65mol的1-乙基-3-（3-二甲胺丙基）碳二亞胺，攪拌充分溶解后，加入1.65mol的n-甲基-d型丙氨酸的飽和碳酸氫鈉溶液，室溫反應(yīng)12h后加入二氯甲烷稀釋，5%檸檬酸溶液洗滌2次，飽和氯化鈉洗滌1次，無水硫酸鈉干燥，減壓蒸餾，得油狀液體產(chǎn)物n-叔丁氧羰基-酪氨酸-n甲基d型丙氨酸，產(chǎn)率為90%；

（5）色氨酸-3-氨基-2-甲烯基-3（2-呋喃）丙酸酰胺三氟乙酸鹽的合成：將1mol的n-叔丁氧羰基-色氨酸-3-氨基-2-甲烯基-3（2-呋喃）丙酸酰胺溶于0.05l三氟乙酸和0.05l二氯甲烷的混合溶液中，室溫反應(yīng)2.5h后，減壓蒸餾，得到白色固體產(chǎn)物色氨酸-3-氨基-2-甲烯基-3（2-呋喃）丙酸酰胺三氟乙酸鹽，產(chǎn)率為99%；

（6）n-叔丁氧羰基-酪氨酸-n甲基d型丙氨酸-色氨酸-3-氨基-2-甲烯基-3（2-呋喃）丙酸酰胺的合成：將1mol的n-叔丁氧羰基-酪氨酸-n甲基d型丙氨酸溶于無水二氯甲烷，于0℃在攪拌狀態(tài)下依次加入4.6mol的n,n-二異丙基乙基胺，1.65mol的1-羥基苯并三唑和1.65mol的1-乙基-3-（3-二甲胺丙基）碳二亞胺，攪拌下充分溶解后加入1.65mol色氨酸-3-氨基-2-甲烯基-3（2-呋喃）丙酸酰胺的二氯甲烷溶液，室溫反應(yīng)18h后加入二氯甲烷稀釋，5%檸檬酸溶液洗滌2次，飽和氯化鈉洗滌1次，無水硫酸鈉干燥，減壓蒸餾，得白色固體產(chǎn)物n-叔丁氧羰基-酪氨酸-n甲基d型丙氨酸-色氨酸-3-氨基-2-甲烯基-3（2-呋喃）丙酸酰胺，產(chǎn)率為82%；

（7）酪氨酸-n甲基d型丙氨酸-色氨酸-3-氨基-2-甲烯基-3（2-呋喃）丙酸酰胺的合成：將1mol的n-叔丁氧羰基-酪氨酸-n甲基d型丙氨酸-色氨酸-3-氨基-2-甲烯基-3（2-呋喃）丙酸酰胺溶于2l乙酸乙酯和0.4l鹽酸的混合溶液中，室溫反應(yīng)2.5h后，調(diào)節(jié)ph=9-10，二氯甲烷萃取，無水硫酸鈉干燥，減壓蒸餾，得白色固體產(chǎn)物酪氨酸-n甲基d型丙氨酸-色氨酸-3-氨基-2-甲烯基-3（2-呋喃）丙酸酰胺，標(biāo)記為mel-n1602，產(chǎn)率為95%。

mel-n1602的結(jié)構(gòu)式為：

其理化特征見表1，esi-ms譜圖見圖4。

實(shí)施例3mel-n1603的合成

（1）n-叔丁氧羰基-3-氨基-2-甲烯基-3苯基丙酸酰胺的合成：將1mol的n-叔丁氧羰基-3-氨基-2-甲烯基-3苯基丙酸溶于無水二氯甲烷，于0℃在攪拌狀態(tài)下依次加入4.6mol的n,n-二異丙基乙基胺，1.65mol的1-羥基苯并三唑和1.65mol的1-乙基-3-（3-二甲胺丙基）碳二亞胺，攪拌充分溶解后加入1.65mol的氨水，室溫反應(yīng)16h后加入二氯甲烷稀釋，5%檸檬酸溶液洗滌2次，飽和碳酸氫鈉洗滌2次，飽和氯化鈉洗滌1次，無水硫酸鈉干燥，減壓蒸餾，得到白色固體產(chǎn)物n-叔丁氧羰基-3-氨基-2-甲烯基-3苯基丙酸酰胺，產(chǎn)率為91%；

（2）3-氨基-2-甲烯基-3苯基丙酸酰胺三氟乙酸鹽的合成：將1mol的n-叔丁氧羰基-3-氨基-2-甲烯基-3苯基丙酸酰胺溶于0.05l三氟乙酸和0.05l二氯甲烷的混合溶液中，室溫反應(yīng)2.5h后，減壓蒸餾，得到白色固體產(chǎn)物3-氨基-2-甲烯基-3苯基丙酸酰胺三氟乙酸鹽，產(chǎn)率為99%；

（3）n-叔丁氧羰基-苯丙氨酸-3-氨基-2-甲烯基-3苯基丙酸酰胺的合成：將1mol的n-叔丁氧羰基-苯丙氨酸溶于無水二氯甲烷，于0℃在攪拌狀態(tài)下依次加入4.6mol的n,n-二異丙基乙基胺，1.65mol的1-羥基苯并三唑和1.65mol的1-乙基-3-（3-二甲胺丙基）碳二亞胺，攪拌充分溶解后，加入1.65mol的3-氨基-2-甲烯基-3苯基丙酸酰胺的二氯甲烷溶液，室溫反應(yīng)16h后加入二氯甲烷稀釋，5%檸檬酸溶液洗滌2次，飽和碳酸氫鈉洗滌2次，飽和氯化鈉洗滌1次，無水硫酸鈉干燥，減壓蒸餾，得白色固體產(chǎn)物n-叔丁氧羰基-苯丙氨酸-3-氨基-2-甲烯基-3苯基丙酸酰胺，產(chǎn)率為82%；

（4）n-叔丁氧羰基-酪氨酸-n甲基d型丙氨酸的合成：將1mol的n-叔丁氧羰基-酪氨酸溶于無水二氯甲烷，于0℃在攪拌狀態(tài)下依次加入4.6mol的n,n-二異丙基乙基胺，1.65mol的1-羥基苯并三唑和1.65mol的1-乙基-3-（3-二甲胺丙基）碳二亞胺，攪拌充分溶解后，加入1.65mol的n-甲基-d型丙氨酸的飽和碳酸氫鈉溶液，室溫反應(yīng)16h后加入二氯甲烷稀釋，5%檸檬酸溶液洗滌2次，飽和氯化鈉洗滌1次，無水硫酸鈉干燥，減壓蒸餾，得油狀液體產(chǎn)物n-叔丁氧羰基-酪氨酸-n甲基d型丙氨酸，產(chǎn)率為90%；

（5）苯丙氨酸-3-氨基-2-甲烯基-3苯基丙酸酰胺三氟乙酸鹽的合成：將1mol的n-叔丁氧羰基-苯丙氨酸-3-氨基-2-甲烯基-3苯基丙酸酰胺溶于0.05l三氟乙酸和0.05l二氯甲烷的混合溶液中，室溫反應(yīng)2.5h后，減壓蒸餾，得到白色固體產(chǎn)物苯丙氨酸-3-氨基-2-甲烯基-3苯基丙酸酰胺三氟乙酸鹽，產(chǎn)率為99%；

（6）n-叔丁氧羰基-酪氨酸-n甲基d型丙氨酸-苯丙氨酸-3-氨基-2-甲烯基-3苯基丙酸酰胺的合成：將1mol的n-叔丁氧羰基-酪氨酸-n甲基d型丙氨酸溶于無水二氯甲烷，于0℃在攪拌狀態(tài)下依次加入4.6mol的n,n-二異丙基乙基胺，1.65mol的1-羥基苯并三唑和1.65mol的1-乙基-3-（3-二甲胺丙基）碳二亞胺，攪拌下充分溶解后加入1.65mol苯丙氨酸-3-氨基-2-甲烯基-3苯基丙酸酰胺的二氯甲烷溶液，室溫反應(yīng)18h后加入二氯甲烷稀釋，5%檸檬酸溶液洗滌2次，飽和氯化鈉洗滌1次，無水硫酸鈉干燥，減壓蒸餾，得到白色固體產(chǎn)物n-叔丁氧羰基-酪氨酸-n甲基d型丙氨酸-苯丙氨酸-3-氨基-2-甲烯基-3苯基丙酸酰胺，產(chǎn)率為77%；

（7）酪氨酸-n甲基d型丙氨酸-苯丙氨酸-3-氨基-2-甲烯基-3苯基丙酸酰胺的合成：將1mol的n-叔丁氧羰基-酪氨酸-n甲基d型丙氨酸-苯丙氨酸-3-氨基-2-甲烯基-3苯基丙酸酰胺溶于2l乙酸乙酯和0.4l鹽酸的混合溶液中，室溫反應(yīng)4h后，調(diào)節(jié)ph=9-10，二氯甲烷萃取，無水硫酸鈉干燥，減壓蒸餾，得到白色固體產(chǎn)物酪氨酸-n甲基d型丙氨酸-苯丙氨酸-3-氨基-2-甲烯基-3苯基丙酸酰胺，標(biāo)記為mel-n1603，其產(chǎn)率為96%。

mel-n1603的結(jié)構(gòu)式為：

其理化特征見表1，esi-ms譜圖見圖5。

實(shí)施例4mel-n1604的制備

（1）n-叔丁氧羰基-3-氨基-2-甲烯基-3（2-呋喃）丙酸酰胺的合成：將1mol的n-叔丁氧羰基-3-氨基-2-甲烯基-3（2-呋喃）丙酸溶于無水二氯甲烷，于0℃在攪拌狀態(tài)下依次加入4.7mol的n,n-二異丙基乙基胺，1.7mol的1-羥基苯并三唑和1.7mol的1-乙基-3-（3-二甲胺丙基）碳二亞胺，攪拌充分溶解后加入1.7mol的氨水，室溫反應(yīng)16h后加入二氯甲烷稀釋，5%檸檬酸溶液洗滌2次，飽和碳酸氫鈉洗滌2次，飽和氯化鈉洗滌1次，無水硫酸鈉干燥，減壓蒸餾，得白色固體產(chǎn)物n-叔丁氧羰基-3-氨基-2-甲烯基-3（2-呋喃）丙酸酰胺，產(chǎn)率為89%；

（2）3-氨基-2-甲烯基-3（2-呋喃）丙酸酰胺三氟乙酸鹽的合成：將1mol的n-叔丁氧羰基-3-氨基-2-甲烯基-3（2-呋喃）丙酸酰胺溶于0.05l三氟乙酸和0.05l二氯甲烷的混合溶液中，室溫反應(yīng)2.5h后，減壓蒸餾，得到白色固體產(chǎn)物3-氨基-2-甲烯基-3（2-呋喃）丙酸酰胺三氟乙酸鹽，產(chǎn)率為99%；

（3）n-叔丁氧羰基-苯丙氨酸-3-氨基-2-甲烯基-3（2-呋喃）丙酸酰胺的合成：將1mol的n-叔丁氧羰基-苯丙氨酸溶于無水二氯甲烷，于0℃在攪拌狀態(tài)下依次加入4.7mol的n,n-二異丙基乙基胺，1.7mol的1-羥基苯并三唑和1.7mol的1-乙基-3-（3-二甲胺丙基）碳二亞胺，攪拌充分溶解后，加入1.7mol的3-氨基-2-甲烯基-3（2-呋喃）丙酸酰胺的二氯甲烷溶液，室溫反應(yīng)16h，后加入二氯甲烷稀釋，5%檸檬酸溶液洗滌2次，飽和碳酸氫鈉洗滌2次，飽和氯化鈉洗滌1次，無水硫酸鈉干燥，減壓蒸餾，得白色固體產(chǎn)物n-叔丁氧羰基-苯丙氨酸-3-氨基-2-甲烯基-3（2-呋喃）丙酸酰胺，產(chǎn)率為87%；

（4）n-叔丁氧羰基-酪氨酸-n甲基d型丙氨酸的合成：將1mol的n-叔丁氧羰基-酪氨酸溶于無水二氯甲烷，于0℃在攪拌狀態(tài)下依次加入4.7mol的n,n-二異丙基乙基胺，1.7mol的1-羥基苯并三唑和1.7mol的1-乙基-3-（3-二甲胺丙基）碳二亞胺，攪拌充分溶解后，加入1.7mol的n-甲基-d型丙氨酸的飽和碳酸氫鈉溶液，室溫反應(yīng)16h后加入二氯甲烷稀釋，5%檸檬酸溶液洗滌2次，飽和氯化鈉洗滌1次，無水硫酸鈉干燥，減壓蒸餾，得油狀液體產(chǎn)物n-叔丁氧羰基-酪氨酸-n甲基d型丙氨酸，產(chǎn)率為90%；

（5）苯丙氨酸-3-氨基-2-甲烯基-3（2-呋喃）丙酸酰胺三氟乙酸鹽的合成：將1mol的n-叔丁氧羰基-苯丙氨酸-3-氨基-2-甲烯基-3（2-呋喃）丙酸酰胺溶于0.05l三氟乙酸和0.05l二氯甲烷的混合溶液中，室溫反應(yīng)2.5h后，減壓蒸餾，得到白色固體苯丙氨酸-3-氨基-2-甲烯基-3（2-呋喃）丙酸酰胺三氟乙酸鹽，產(chǎn)率為99%；

（6）n-叔丁氧羰基-酪氨酸-n甲基d型丙氨酸-苯丙氨酸-3-氨基-2-甲烯基-3（2-呋喃）丙酸酰胺的合成：將1mol的n-叔丁氧羰基-酪氨酸-n甲基d型丙氨酸溶于無水二氯甲烷，于0℃在攪拌狀態(tài)下依次加入4.7mol的n,n-二異丙基乙基胺，1.7mol的1-羥基苯并三唑和1.7mol的1-乙基-3-（3-二甲胺丙基）碳二亞胺，攪拌充分溶解后加入1.7mol苯丙氨酸-3-氨基-2-甲烯基-3（2-呋喃）丙酸酰胺的二氯甲烷溶液，室溫反應(yīng)18h，后加入二氯甲烷稀釋，5%檸檬酸溶液洗滌2次，飽和氯化鈉洗滌1次，無水硫酸鈉干燥，減壓蒸餾，得白色固體產(chǎn)物n-叔丁氧羰基-酪氨酸-n甲基d型丙氨酸-苯丙氨酸-3-氨基-2-甲烯基-3（2-呋喃）丙酸酰胺，產(chǎn)率為81%；

（7）酪氨酸-n甲基d型丙氨酸-苯丙氨酸-3-氨基-2-甲烯基-3（2-呋喃）丙酸酰胺的合成

：將1mol的n-叔丁氧羰基-酪氨酸-n甲基d型丙氨酸-苯丙氨酸-3-氨基-2-甲烯基-3（2-呋喃）丙酸酰胺溶于2l乙酸乙酯和0.4l鹽酸的混合溶液中，室溫反應(yīng)4h后，調(diào)節(jié)ph=9-10，二氯甲烷萃取，無水硫酸鈉干燥，減壓蒸餾，得到白色固體產(chǎn)物酪氨酸-n甲基d型丙氨酸-苯丙氨酸-3-氨基-2-甲烯基-3（2-呋喃）丙酸酰胺，標(biāo)記為mel-n1604，其產(chǎn)率為96%。

mel-n1604的結(jié)構(gòu)式為：

其理化特征見表1，esi-ms譜圖見圖6。

實(shí)施例5mel-n1605的合成

（1）n-叔丁氧羰基-3-氨基-2-甲烯基-3苯基丙酸酰胺的合成：將1mol的n-叔丁氧羰基-3-氨基-2-甲烯基-3苯基丙酸溶于無水二氯甲烷，于0℃在攪拌狀態(tài)下依次加入4.7mol的n,n-二異丙基乙基胺，1.7mol的1-羥基苯并三唑和1.7mol的1-乙基-3-（3-二甲胺丙基）碳二亞胺，攪拌充分溶解后加入1.7mol的氨水，室溫反應(yīng)16h后加入二氯甲烷稀釋，5%檸檬酸溶液洗滌2次，飽和碳酸氫鈉洗滌2次，飽和氯化鈉洗滌1次，無水硫酸鈉干燥，減壓蒸餾，得到白色固體產(chǎn)物n-叔丁氧羰基-3-氨基-2-甲烯基-3苯基丙酸酰胺；產(chǎn)率為91%；

（2）3-氨基-2-甲烯基-3苯基丙酸酰胺三氟乙酸鹽的合成：將1mol的n-叔丁氧羰基-3-氨基-2-甲烯基-3苯基丙酸酰胺溶于0.06l三氟乙酸和0.05l二氯甲烷的混合溶液中，室溫反應(yīng)3h后，減壓蒸餾，得到白色固體產(chǎn)物3-氨基-2-甲烯基-3苯基丙酸酰胺三氟乙酸鹽，產(chǎn)率為99%；

（3）n-叔丁氧羰基-色氨酸-3-氨基-2-甲烯基-3苯基丙酸酰胺的合成：將1mol的n-叔丁氧羰基-色氨酸溶于無水二氯甲烷，于0℃在攪拌狀態(tài)下依次加入4.7mol的n,n-二異丙基乙基胺，1.7mol的1-羥基苯并三唑和1.7mol的1-乙基-3-（3-二甲胺丙基）碳二亞胺，攪拌充分溶解后，加入1.7mol的3-氨基-2-甲烯基-3苯基丙酸酰胺的二氯甲烷溶液，室溫反應(yīng)16h后加入二氯甲烷稀釋，5%檸檬酸溶液洗滌2次，飽和碳酸氫鈉洗滌2次，飽和氯化鈉洗滌1次，無水硫酸鈉干燥，減壓蒸餾，得白色固體產(chǎn)物n-叔丁氧羰基-色氨酸-3-氨基-2-甲烯基-3苯基丙酸酰胺，產(chǎn)率為88%；

（4）n-叔丁氧羰基-2,6-二甲基酪氨酸-n甲基d型丙氨酸的合成：將1mol的n-叔丁氧羰基-2,6-二甲基酪氨酸溶于無水二氯甲烷，于0℃在攪拌狀態(tài)下依次加入4.7mol的n,n-二異丙基乙基胺，1.7mol的1-羥基苯并三唑和1.7mol的1-乙基-3-（3-二甲胺丙基）碳二亞胺，攪拌充分溶解后，加入1.7mol的n-甲基-d型丙氨酸的飽和碳酸氫鈉溶液，室溫反應(yīng)16h，反應(yīng)結(jié)束后加入二氯甲烷稀釋，5%檸檬酸溶液洗滌2次，飽和氯化鈉洗滌1次，無水硫酸鈉干燥，減壓蒸餾，得油狀液體產(chǎn)物n-叔丁氧羰基-2,6-二甲基酪氨酸-n-甲基-d型丙氨酸，產(chǎn)率為88%；

（5）色氨酸-3-氨基-2-甲烯基-3苯基丙酸酰胺三氟乙酸鹽的合成：將1mol的n-叔丁氧羰基-色氨酸-3-氨基-2-甲烯基-3苯基丙酸酰胺溶于0.06l三氟乙酸和0.05l二氯甲烷的混合溶液中，室溫反應(yīng)3h后，減壓蒸餾，得到白色固體產(chǎn)物色氨酸-3-氨基-2-甲烯基-3苯基丙酸酰胺三氟乙酸鹽，產(chǎn)率為99%；

（6）n-叔丁氧羰基-2,6-二甲基酪氨酸-n甲基d型丙氨酸-色氨酸-3-氨基-2-甲烯基-3苯基丙酸酰胺的合成：將1mol的n-叔丁氧羰基-2,6-二甲基酪氨酸-n甲基d型丙氨酸溶于無水二氯甲烷，于0℃在攪拌狀態(tài)下依次加入4.7mol的n,n-二異丙基乙基胺，1.7mol的1-羥基苯并三唑和1.7mol的1-乙基-3-（3-二甲胺丙基）碳二亞胺，攪拌下充分溶解后加入1.7mol色氨酸-3-氨基-2-甲烯基-3苯基丙酸酰胺的二氯甲烷溶液，室溫反應(yīng)18h，反應(yīng)結(jié)束后加入二氯甲烷稀釋，5%檸檬酸溶液洗滌2次，飽和氯化鈉洗滌1次，無水硫酸鈉干燥，減壓蒸餾，得到白色固體產(chǎn)物n-叔丁氧羰基-2,6-二甲基酪氨酸-n-甲基-d型丙氨酸-色氨酸-3-氨基-2-甲烯基-3苯基丙酸酰胺，產(chǎn)率為81%；

（7）2,6-二甲基酪氨酸-n甲基d型丙氨酸-色氨酸-3-氨基-2-甲烯基-3苯基丙酸酰胺的合成：將1mol的n-叔丁氧羰基-2,6-二甲基酪氨酸-n甲基d型丙氨酸-色氨酸-3-氨基-2-甲烯基-3苯基丙酸酰胺溶于2l乙酸乙酯和0.4l鹽酸的混合溶液中，室溫反應(yīng)3h后，調(diào)節(jié)ph=9-10，二氯甲烷萃取，無水硫酸鈉干燥，減壓蒸餾，得白色固體2,6-二甲基酪氨酸-n-甲基-d型丙氨酸-色氨酸-3-氨基-2-甲烯基-3苯基丙酸酰胺，標(biāo)記為mel-n1605，其產(chǎn)率為96%。

mel-n1605的結(jié)構(gòu)式為：

其理化特征見表1，esi-ms譜圖見圖7。

實(shí)施例6mel-n1606的合成

（1）n-叔丁氧羰基-3-氨基-2-甲烯基-3（2-呋喃）丙酸酰胺的合成：將1mol的n-叔丁氧羰基-3-氨基-2-甲烯基-3（2-呋喃）丙酸溶于無水二氯甲烷，于0℃在攪拌狀態(tài)下依次加入4.8mol的n,n-二異丙基乙基胺，1.7mol的1-羥基苯并三唑和1.7mol的1-乙基-3-（3-二甲胺丙基）碳二亞胺，攪拌充分溶解后加入1.7mol的氨水，室溫反應(yīng)16h后加入二氯甲烷稀釋，5%檸檬酸溶液洗滌2次，飽和碳酸氫鈉洗滌2次，飽和氯化鈉洗滌1次，無水硫酸鈉干燥，減壓蒸餾，得白色固體產(chǎn)物n-叔丁氧羰基-3-氨基-2-甲烯基-3（2-呋喃）丙酸酰胺，產(chǎn)率為92%；

（2）3-氨基-2-甲烯基-3（2-呋喃）丙酸酰胺三氟乙酸鹽的合成：將1mol的n-叔丁氧羰基-3-氨基-2-甲烯基-3（2-呋喃）丙酸酰胺溶于0.06l三氟乙酸和0.05l二氯甲烷的混合溶液中，室溫反應(yīng)3h后，減壓蒸餾，得到白色固體產(chǎn)物3-氨基-2-甲烯基-3（2-呋喃）丙酸酰胺三氟乙酸鹽，產(chǎn)率為99%。

（3）n-叔丁氧羰基-色氨酸-3-氨基-2-甲烯基-3（2-呋喃）丙酸酰胺的合成：將1mol的n-叔丁氧羰基-色氨酸溶于無水二氯甲烷，于0℃在攪拌狀態(tài)下依次加入4.8mol的n,n-二異丙基乙基胺，1.7mol的1-羥基苯并三唑和1.7mol的1-乙基-3-（3-二甲胺丙基）碳二亞胺，攪拌充分溶解后，加入1.7mol的3-氨基-2-甲烯基-3（2-呋喃）丙酸酰胺的二氯甲烷溶液，室溫反應(yīng)16h后加入二氯甲烷稀釋，5%檸檬酸溶液洗滌2次，飽和碳酸氫鈉洗滌2次，飽和氯化鈉洗滌1次，無水硫酸鈉干燥，減壓蒸餾，得白色固體產(chǎn)物n-叔丁氧羰基-色氨酸-3-氨基-2-甲烯基-3（2-呋喃）丙酸酰胺，產(chǎn)率為86%；

（4）n-叔丁氧羰基-2,6-二甲基酪氨酸-n甲基d型丙氨酸的合成：將1mol的n-叔丁氧羰基-2,6-二甲基酪氨酸溶于無水二氯甲烷，于0℃在攪拌狀態(tài)下依次加入4.8mol的n,n-二異丙基乙基胺，1.7mol的1-羥基苯并三唑和1.7mol的1-乙基-3-（3-二甲胺丙基）碳二亞胺，攪拌充分溶解后，加入1.7mol的n-甲基-d型丙氨酸的飽和碳酸氫鈉溶液，室溫反應(yīng)16h后加入二氯甲烷稀釋，5%檸檬酸溶液洗滌2次，飽和氯化鈉洗滌1次，無水硫酸鈉干燥，減壓蒸餾，得油狀液體產(chǎn)物n-叔丁氧羰基-2,6-二甲基酪氨酸-n甲基d型丙氨酸，產(chǎn)率為87%；

（5）色氨酸-3-氨基-2-甲烯基-3（2-呋喃）丙酸酰胺三氟乙酸鹽的合成：將1mol的n-叔丁氧羰基-色氨酸-3-氨基-2-甲烯基-3（2-呋喃）丙酸酰胺溶于0.06l三氟乙酸和0.05l二氯甲烷的混合溶液中，室溫反應(yīng)4h后，減壓蒸餾，得白色固體產(chǎn)物色氨酸-3-氨基-2-甲烯基-3（2-呋喃）丙酸酰胺三氟乙酸鹽，產(chǎn)率為99%；

（6）n-叔丁氧羰基-2,6-二甲基酪氨酸-n甲基d型丙氨酸-色氨酸-3-氨基-2-甲烯基-3（2-呋喃）丙酸酰胺的合成：將1mol的n-叔丁氧羰基-2,6-二甲基酪氨酸-n甲基d型丙氨酸溶于無水二氯甲烷，于0℃在攪拌狀態(tài)下依次加入4.8mol的n,n-二異丙基乙基胺，1.7mol的1-羥基苯并三唑和1.7mol的1-乙基-3-（3-二甲胺丙基）碳二亞胺，攪拌下充分溶解后加入1.7mol色氨酸-3-氨基-2-甲烯基-3（2-呋喃）丙酸酰胺的二氯甲烷溶液，室溫反應(yīng)18h后加入二氯甲烷稀釋，5%檸檬酸溶液洗滌2次，飽和氯化鈉洗滌2次，無水硫酸鈉干燥，無水硫酸鈉干燥，減壓蒸餾，得白色固體產(chǎn)物n-叔丁氧羰基-2,6-二甲基酪氨酸-n甲基d型丙氨酸-色氨酸-3-氨基-2-甲烯基-3（2-呋喃）丙酸酰胺，產(chǎn)率為80%；

（7）2,6-二甲基酪氨酸-n甲基d型丙氨酸-色氨酸-3-氨基-2-甲烯基-3（2-呋喃）丙酸酰胺的合成：將1mol的n-叔丁氧羰基-2,6-二甲基酪氨酸-n甲基d型丙氨酸-色氨酸-3-氨基-2-甲烯基-3（2-呋喃）丙酸酰胺溶于2l乙酸乙酯和0.4l鹽酸的混合溶液中，室溫反應(yīng)4h后，調(diào)節(jié)ph=9-10，二氯甲烷萃取，無水硫酸鈉干燥，減壓蒸餾，得白色固體產(chǎn)物2,6-二甲基酪氨酸-n甲基d型丙氨酸-色氨酸-3-氨基-2-甲烯基-3（2-呋喃）丙酸酰胺，標(biāo)記為mel-n1606，其產(chǎn)率為95%。

mel-n1606的結(jié)構(gòu)式為：

其理化特征見表1，esi-ms譜圖見圖8。

實(shí)施例7mel-n1607的合成

（1）n-叔丁氧羰基-3-氨基-2-甲烯基-3苯基丙酸酰胺的合成：將1mol的n-叔丁氧羰基-3-氨基-2-甲烯基-3苯基丙酸溶于無水二氯甲烷，于0℃在攪拌狀態(tài)下依次加入4.9mol的n,n-二異丙基乙基胺，1.8mol的1-羥基苯并三唑和1.8mol的1-乙基-3-（3-二甲胺丙基）碳二亞胺，攪拌充分溶解后加入1.8mol的氨水，室溫反應(yīng)18h后加入二氯甲烷稀釋，5%檸檬酸溶液洗滌2次，飽和碳酸氫鈉洗滌2次，飽和氯化鈉洗滌1次，無水硫酸鈉干燥，減壓蒸餾，得白色固體產(chǎn)物n-叔丁氧羰基-3-氨基-2-甲烯基-3苯基丙酸酰胺；產(chǎn)率為91%；

（2）3-氨基-2-甲烯基-3苯基丙酸酰胺三氟乙酸鹽的合成：將0.8mol的n-叔丁氧羰基-3-氨基-2-甲烯基-3苯基丙酸酰胺溶于0.06l三氟乙酸和0.05l二氯甲烷的混合溶液中，室溫反應(yīng)3h后，減壓蒸餾，得白色固體3-氨基-2-甲烯基-3苯基丙酸酰胺三氟乙酸鹽，產(chǎn)率為99%；

（3）n-叔丁氧羰基-苯丙氨酸-3-氨基-2-甲烯基-3苯基丙酸酰胺的合成：將1mol的n-叔丁氧羰基-苯丙氨酸溶于無水二氯甲烷，于0℃在攪拌狀態(tài)下依次加入4.9mol的n,n-二異丙基乙基胺，1.8mol的1-羥基苯并三唑和1.8mol的1-乙基-3-（3-二甲胺丙基）碳二亞胺，攪拌充分溶解后，加入1.8mol的3-氨基-2-甲烯基-3苯基丙酸酰胺的二氯甲烷溶液，室溫反應(yīng)18h后加入二氯甲烷稀釋，5%檸檬酸溶液洗滌2次，飽和碳酸氫鈉洗滌2次，飽和氯化鈉洗滌1次，無水硫酸鈉干燥，減壓蒸餾，得白色固體產(chǎn)物n-叔丁氧羰基-苯丙氨酸-3-氨基-2-甲烯基-3苯基丙酸酰胺，產(chǎn)率為88%；

（4）n-叔丁氧羰基-2,6-二甲基酪氨酸-n甲基d型丙氨酸的合成：將1mol的n-叔丁氧羰基-2,6-二甲基酪氨酸溶于無水二氯甲烷，于0℃在攪拌狀態(tài)下依次加入4.9mol的n,n-二異丙基乙基胺，1.8mol的1-羥基苯并三唑和1.8mol的1-乙基-3-（3-二甲胺丙基）碳二亞胺，攪拌充分溶解后，加入1.8mol的n-甲基-d型丙氨酸的飽和碳酸氫鈉溶液，室溫反應(yīng)18h后加入二氯甲烷稀釋，5%檸檬酸溶液洗滌2次，飽和氯化鈉洗滌1次，無水硫酸鈉干燥，減壓蒸餾，得油狀液體產(chǎn)物n-叔丁氧羰基-2,6-二甲基酪氨酸-n-甲基-d型丙氨酸，產(chǎn)率為88%；

（5）苯丙氨酸-3-氨基-2-甲烯基-3苯基丙酸酰胺三氟乙酸鹽的合成：將1mol的n-叔丁氧羰基-苯丙氨酸-3-氨基-2-甲烯基-3苯基丙酸酰胺溶于0.06l三氟乙酸和0.05l二氯甲烷的混合溶液中，室溫反應(yīng)3h后，減壓蒸餾，得白色固體產(chǎn)物苯丙氨酸-3-氨基-2-甲烯基-3苯基丙酸酰胺三氟乙酸鹽，產(chǎn)率為99%；

（6）n-叔丁氧羰基-2,6-二甲基酪氨酸-n甲基d型丙氨酸-苯丙氨酸-3-氨基-2-甲烯基-3苯基丙酸酰胺的合成：將1mol的n-叔丁氧羰基-2,6-二甲基酪氨酸-n甲基d型丙氨酸溶于無水二氯甲烷，于0℃在攪拌狀態(tài)下依次加入4.9mol的n,n-二異丙基乙基胺，1.8mol的1-羥基苯并三唑和1.8mol的1-乙基-3-（3-二甲胺丙基）碳二亞胺，攪拌下充分溶解后加入1.8mol苯丙氨酸-3-氨基-2-甲烯基-3苯基丙酸酰胺的二氯甲烷溶液，室溫反應(yīng)20h后加入二氯甲烷稀釋，5%檸檬酸溶液洗滌2次，飽和氯化鈉洗滌1次，無水硫酸鈉干燥，減壓蒸餾，得白色固體產(chǎn)物n-叔丁氧羰基-2,6-二甲基酪氨酸-n甲基d型丙氨酸-苯丙氨酸-3-氨基-2-甲烯基-3苯基丙酸酰胺，產(chǎn)率為81%；

（7）2,6-二甲基酪氨酸-n甲基d型丙氨酸-苯丙氨酸-3-氨基-2-甲烯基-3苯基丙酸酰胺的合成：將1mol的n-叔丁氧羰基-2,6-二甲基酪氨酸-n甲基d型丙氨酸-苯丙氨酸-3-氨基-2-甲烯基-3苯基丙酸酰胺溶于2.75l乙酸乙酯和0.5l鹽酸的混合溶液中，室溫反應(yīng)5h后，調(diào)節(jié)ph=9-10，二氯甲烷萃取，無水硫酸鈉干燥，減壓蒸餾，得白色固體產(chǎn)物2,6-二甲基酪氨酸-n甲基d型丙氨酸-苯丙氨酸-3-氨基-2-甲烯基-3苯基丙酸酰胺，標(biāo)記為mel-n1607，其產(chǎn)率為93%。

mel-n1607的結(jié)構(gòu)式為：

其理化特征見表1，esi-ms譜圖見圖9。

實(shí)施例8mel-n1608的合成

（1）n-叔丁氧羰基-3-氨基-2-甲烯基-3（2-呋喃）丙酸酰胺的合成：將1mol的n-叔丁氧羰基-3-氨基-2-甲烯基-3（2-呋喃）丙酸溶于無水二氯甲烷，于0℃在攪拌狀態(tài)下依次加入5mol的n,n-二異丙基乙基胺，1.8mol的1-羥基苯并三唑和1.8mol的1-乙基-3-（3-二甲胺丙基）碳二亞胺，攪拌充分溶解后加入1.8mol的氨水，室溫反應(yīng)18h后加入二氯甲烷稀釋，5%檸檬酸溶液洗滌2次，飽和碳酸氫鈉洗滌2次，飽和氯化鈉洗滌1次，無水硫酸鈉干燥，減壓蒸餾，得白色固體產(chǎn)物n-叔丁氧羰基-3-氨基-2-甲烯基-3（2-呋喃）丙酸酰胺，產(chǎn)率為92%；

（2）3-氨基-2-甲烯基-3（2-呋喃）丙酸酰胺三氟乙酸鹽的合成：將1mol的n-叔丁氧羰基-3-氨基-2-甲烯基-3（2-呋喃）丙酸酰胺溶于0.06l三氟乙酸和0.05l二氯甲烷混合溶液中，室溫反應(yīng)3h后，減壓蒸餾，得白色固體3-氨基-2-甲烯基-3（2-呋喃）丙酸酰胺三氟乙酸鹽，產(chǎn)率為99%；

（3）n-叔丁氧羰基-苯丙氨酸-3-氨基-2-甲烯基-3（2-呋喃）丙酸酰胺的合成：將1mol的n-叔丁氧羰基-苯丙氨酸溶于無水二氯甲烷，于0℃在攪拌狀態(tài)下依次加入5mol的n,n-二異丙基乙基胺，1.8mol的1-羥基苯并三唑和1.8mol的1-乙基-3-（3-二甲胺丙基）碳二亞胺，攪拌充分溶解后，加入1.8mol的3-氨基-2-甲烯基-3（2-呋喃）丙酸酰胺的二氯甲烷溶液，室溫反應(yīng)18h后加入二氯甲烷稀釋，5%檸檬酸溶液洗滌2次，飽和碳酸氫鈉洗滌2次，飽和氯化鈉洗滌1次，無水硫酸鈉干燥，減壓蒸餾，得白色固體產(chǎn)物n-叔丁氧羰基-苯丙氨酸-3-氨基-2-甲烯基-3（2-呋喃）丙酸酰胺，產(chǎn)率為88%；

（4）n-叔丁氧羰基-2,6-二甲基酪氨酸-n甲基d型丙氨酸的合成：將1mol的n-叔丁氧羰基-2,6-二甲基酪氨酸溶于無水二氯甲烷，于0℃在攪拌狀態(tài)下依次加入5mol的n,n-二異丙基乙基胺，1.8mol的1-羥基苯并三唑，1.8mol的1-乙基-3-（3-二甲胺丙基）碳二亞胺，攪拌充分溶解后，加入1.8mol的n甲基d型丙氨酸的飽和碳酸氫鈉溶液，室溫反應(yīng)18h后加入二氯甲烷稀釋，5%檸檬酸溶液洗滌2次，飽和氯化鈉洗滌1次，無水硫酸鈉干燥，減壓蒸餾，得油狀液體產(chǎn)物n-叔丁氧羰基-2,6-二甲基酪氨酸-n甲基d型丙氨酸，產(chǎn)率為87%；

（5）苯丙氨酸-3-氨基-2-甲烯基-3（2-呋喃）丙酸酰胺三氟乙酸鹽的合成：將1mol的n-叔丁氧羰基苯丙氨酸-3-氨基-2-甲烯基-3（2-呋喃）丙酸酰胺溶于0.06l三氟乙酸和0.05l二氯甲烷的混合溶液中，室溫反應(yīng)3h后，減壓蒸餾，得白色固體產(chǎn)物苯丙氨酸-3-氨基-2-甲烯基-3（2-呋喃）丙酸酰胺三氟乙酸鹽，產(chǎn)率為99%；

（6）n-叔丁氧羰基-2,6-二甲基酪氨酸-n甲基d型丙氨酸-苯丙氨酸-3-氨基-2-甲烯基-3（2-呋喃）丙酸酰胺的合成：將1mol的n-叔丁氧羰基-2,6-二甲基酪氨酸-n甲基d型丙氨酸溶于無水二氯甲烷，于0℃在攪拌狀態(tài)下依次加入5mol的n,n-二異丙基乙基胺，1.8mol的1-羥基苯并三唑和1.8mol的1-乙基-3-（3-二甲胺丙基）碳二亞胺，攪拌下充分溶解后加入1.8mol苯丙氨酸-3-氨基-2-甲烯基-3（2-呋喃）丙酸酰胺的二氯甲烷溶液，室溫反應(yīng)16h后加入二氯甲烷稀釋，5%檸檬酸溶液洗滌2次，飽和氯化鈉洗滌1次，無水硫酸鈉干燥，減壓蒸餾，得白色固體產(chǎn)物n-叔丁氧羰基-2,6-二甲基酪氨酸-n甲基d型丙氨酸-苯丙氨酸-3-氨基-2-甲烯基-3（2-呋喃）丙酸酰胺，產(chǎn)率為80%；

（7）2,6-二甲基酪氨酸-n甲基d型丙氨酸-苯丙氨酸-3-氨基-2-甲烯基-3（2-呋喃）丙酸酰胺的合成：將1mol的n-叔丁氧羰基-2,6-二甲基酪氨酸-n甲基d型丙氨酸-苯丙氨酸-3-氨基-2-甲烯基-3（2-呋喃）丙酸酰胺溶于2.75l乙酸乙酯和0.5l鹽酸的混合溶液中，室溫反應(yīng)5h后，調(diào)節(jié)ph=9-10，二氯甲烷萃取，無水硫酸鈉干燥，減壓蒸餾，得白色固體產(chǎn)物2,6-二甲基酪氨酸-n甲基d型丙氨酸-苯丙氨酸-3-氨基-2-甲烯基-3（2-呋喃）丙酸酰胺，標(biāo)記為mel-n1608，其產(chǎn)率為95%。

mel-n1608的結(jié)構(gòu)式為：

其理化特征見表1，esi-ms譜圖見圖10。