本發(fā)明涉及一種肽的分離方法，，特別是涉及一種從牛胸腺組織中運(yùn)用生物酶解技術(shù)進(jìn)行小分子活性肽的提取方法。

背景技術(shù)：

胸腺為機(jī)體的重要淋巴器官。其功能與免疫緊密相關(guān)，是T細(xì)胞分化、發(fā)育、成熟的場所，還可以分泌胸腺激素及激素類物質(zhì)，具內(nèi)分泌機(jī)能的器官。胸腺肽是胸腺組織分泌的具有生理活性的一組多肽，能促使有絲分裂原激活后的外周血中的T淋巴細(xì)胞成熟，增加T細(xì)胞在各種抗原或致有絲分裂原激活后各種淋巴因子的分泌，增加T細(xì)胞上淋巴因子受體的水平。它同時(shí)通過對(duì)T4輔助細(xì)胞的激活作用來增強(qiáng)淋巴細(xì)胞反應(yīng)，具有調(diào)節(jié)和增強(qiáng)人體細(xì)胞免疫功能的作用。

目前上市場流通的胸腺肽產(chǎn)品均為肽類藥物，廣泛應(yīng)用于醫(yī)藥學(xué)領(lǐng)域：如胸腺肽腸溶片、胸腺肽注射液等。醫(yī)藥用胸腺肽提純度高，肽的種類單一，專門針對(duì)性治療某一種疾病，其制作工藝為以氨基酸為原材料，用化學(xué)試劑進(jìn)行人工嫁接合成出來的單一肽類物質(zhì)。因有化學(xué)試劑殘留，不可避免的會(huì)對(duì)人體有一定的毒副作用和不良反應(yīng)。

技術(shù)實(shí)現(xiàn)要素：

本發(fā)明是為了解決以上技術(shù)問題，而提供了一種胸腺肽的提取方法，該方法能夠通過安全而先進(jìn)的生物提取技術(shù)，將牛胸腺中其豐富的組織蛋白經(jīng)過生物酶解定向酶切成小分子活性肽，即胸腺肽。其結(jié)構(gòu)和功能與人體非常接近，而且分子小，可被腸道直接吸收，快捷參與人體的正常代謝與調(diào)節(jié)，在藥理學(xué)上，具有更高的生化機(jī)制合理性和特異治療有效性。胸腺肽具有針對(duì)性強(qiáng)、無毒副作用、療效顯著、營養(yǎng)價(jià)值高、易被人體吸收等特點(diǎn)。

本發(fā)明涉及一種胸腺肽的提取方法，所述提取方法包括以下步驟：

一、清洗：將牛胸腺用醋酸溶液進(jìn)行酸洗，時(shí)間0.5～1.5h；然后用水洗一次，再用醋酸溶液酸洗一次，時(shí)間0.5～1.5h，再水洗一次，得到清洗過的牛胸腺；。

二、蒸煮：向蒸煮罐中加入水，邊攪拌邊升溫，同時(shí)加入步驟一中清洗過的牛胸腺與食用醋酸，升溫至蒸煮罐下部55℃上部65℃，保溫60min；停止攪拌，靜置0.5～1.5h，上清即為一次湯；

三、除渣：靜置結(jié)束立即用真空抽提罐將一次湯泵入滅菌后的一次湯儲(chǔ)罐；此時(shí)湯溫在55℃左右；

四、水解：將一次湯泵入滅菌后的水解罐，升溫至100℃保持15min滅菌，降溫至55～65℃并保持，加入配置堿液調(diào)整pH值至中性，投入酶制劑水解7～9h，然后升溫至90℃保溫15min滅酶活；

五、過濾：按比例投入硅藻土、活性炭攪拌，靜置，粗過濾后，利用板框過濾器循環(huán)過濾0.5～1.5h，得到清液；

六、濃縮：利用真空濃縮器將清液濃縮至濃度18～22°Bé，得到濃縮液；

七、噴霧干燥：當(dāng)濃縮液澄清時(shí)，進(jìn)行噴霧干燥，即制得胸腺肽；

當(dāng)濃縮液渾濁時(shí)，先將濃縮液進(jìn)行板框過濾或用管式離心機(jī)分離，然后再進(jìn)行噴霧干燥，即制得胸腺肽；

所述步驟一中醋酸溶液為食用醋酸與水的混合溶液，醋酸溶液中食用醋酸的量為10～40vol％。

優(yōu)選地，所述步驟一中牛胸腺與醋酸溶液的質(zhì)量比為1:2～10；步驟二中的蒸煮罐為常溫蒸煮罐。

優(yōu)選地，所述步驟一中清洗過的牛胸腺在30min內(nèi)加入步驟二中的蒸煮罐。

優(yōu)選地，所述步驟四中堿液為NaOH溶液。

優(yōu)選地，所述步驟五中粗過濾為依次采用桶式過濾器和兩級(jí)板框過濾器過濾。

優(yōu)選地，所述步驟七中噴霧干燥的參數(shù)為：進(jìn)風(fēng)溫度200℃，出風(fēng)溫度95℃。

本發(fā)明的方法是采用以下技術(shù)方案：胸腺肽是采用天然放養(yǎng)的小牛體內(nèi)新鮮的胸腺組織，經(jīng)過低溫處理、組織搗碎、滅菌、生物酶解、提純、濃縮、高溫瞬時(shí)干燥而制成的高純度小分子肽。胸腺肽的分子量分布在500道爾頓以下，是分子極小的功能肽，活性超強(qiáng)，極易被人體或肌膚吸收，能夠快捷參與細(xì)胞生理活動(dòng)，具有超強(qiáng)的提高人體免疫的功能。

本發(fā)明胸腺肽的提取方法與現(xiàn)有技術(shù)不同之處在于：

1.本發(fā)明的方法制備得到的胸腺肽能連續(xù)誘導(dǎo)T細(xì)胞分化發(fā)育的各個(gè)階段。

2.本發(fā)明的方法制備得到的胸腺肽具有調(diào)節(jié)機(jī)體的免疫平衡的作用。

3.本發(fā)明的方法制備得到的胸腺肽能增強(qiáng)成熟T細(xì)胞對(duì)抗原或其它刺激的反應(yīng)。

4.本發(fā)明的方法制備得到的胸腺肽對(duì)全身性紅斑狼瘡、類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎等自身免疫性疾病有療效；應(yīng)用于復(fù)發(fā)性口瘡、麻風(fēng)、重癥感染、慢性腎炎等伴有細(xì)胞免疫功能低下的患者，對(duì)病毒性肝炎、惡性腫瘤、某些眼病也有特殊療效。

5.本發(fā)明的方法制備得到的胸腺肽純度高，不含任何化學(xué)成分與激素，對(duì)人體沒有任何毒副作用，是十分純凈的營養(yǎng)物質(zhì)，無需攪拌即可迅速溶于水，水溶液清亮透明，為淡黃色透明液體，不會(huì)析出任何雜質(zhì)和沉淀物，因此本發(fā)明的方法制備得到的胸腺肽利用率可達(dá)到95％。。

具體實(shí)施方式

通過以下實(shí)施例對(duì)本發(fā)明的胸腺肽的提取方法作進(jìn)一步的說明。

實(shí)施例1

本實(shí)施例的胸腺肽的提取方法按以下步驟進(jìn)行：

一、清洗：將牛胸腺用醋酸溶液進(jìn)行酸洗，時(shí)間0.5h；然后用水洗一次，再用醋酸溶液酸洗一次，時(shí)間1.5h，再水洗一次，得到清洗過的牛胸腺；。

二、蒸煮：向常溫蒸煮罐中加入水，邊攪拌邊升溫，同時(shí)加入步驟一中清洗過的牛胸腺(洗凈的牛胸腺組織應(yīng)不超過30min投入常溫蒸煮罐)與食用醋酸，升溫至蒸煮罐下部55℃上部65℃，保溫60min；停止攪拌，靜置0.5h，上清即為一次湯；

三、除渣：靜置結(jié)束立即用真空抽提罐將一次湯泵入滅菌后的一次湯儲(chǔ)罐；此時(shí)湯溫在55℃左右；

四、水解：將一次湯泵入滅菌后的水解罐，升溫至100℃保持15min滅菌，降溫至55℃并保持，加入配置NaOH溶液調(diào)整pH值至中性，投入酶制劑水解8h，然后升溫至90℃保溫15min滅酶活；

五、過濾：按比例投入硅藻土、活性炭攪拌，靜置，依次采用桶式過濾器和兩級(jí)板框過濾器過濾后，利用板框過濾器循環(huán)過濾1.5h，得到清液；

六、濃縮：利用真空濃縮器將清液濃縮至濃度18°Bé，得到濃縮液；

七、噴霧干燥：此時(shí)濃縮液澄清，進(jìn)行噴霧干燥，即制得胸腺肽；

步驟一中醋酸溶液為食用醋酸與水的混合溶液，醋酸溶液中食用醋酸的量為10～40vol％；

步驟一中牛胸腺與醋酸溶液的質(zhì)量比為1:2～10；步驟二中的蒸煮罐為常溫蒸煮罐；

進(jìn)風(fēng)溫度200℃，出風(fēng)溫度95℃。

實(shí)施例2

本實(shí)施例的胸腺肽的提取方法按以下步驟進(jìn)行：

一、清洗：將牛胸腺用醋酸溶液進(jìn)行酸洗，時(shí)間1.5h；然后用水洗一次，再用醋酸溶液酸洗一次，時(shí)間0.5h，再水洗一次，得到清洗過的牛胸腺；。

二、蒸煮：向常溫蒸煮罐中加入水，邊攪拌邊升溫，同時(shí)加入步驟一中清洗過的牛胸腺(洗凈的牛胸腺組織應(yīng)不超過30min投入常溫蒸煮罐)與食用醋酸，升溫至蒸煮罐下部55℃上部65℃，保溫60min；停止攪拌，靜置1.5h，上清即為一次湯；

三、除渣：靜置結(jié)束立即用真空抽提罐將一次湯泵入滅菌后的一次湯儲(chǔ)罐；此時(shí)湯溫在55℃左右；

四、水解：將一次湯泵入滅菌后的水解罐，升溫至100℃保持15min滅菌，降溫至60℃并保持，加入配置NaOH溶液調(diào)整pH值至中性，投入酶制劑水解8h，然后升溫至90℃保溫15min滅酶活；

五、過濾：按比例投入硅藻土、活性炭攪拌，靜置，依次采用桶式過濾器和兩級(jí)板框過濾器過濾后，利用板框過濾器循環(huán)過濾0.5h，得到清液；

六、濃縮：利用真空濃縮器將清液濃縮至濃度22°Bé，得到濃縮液；

七、噴霧干燥：此時(shí)濃縮液渾濁，先將濃縮液進(jìn)行板框過濾或用管式離心機(jī)分離，然后再進(jìn)行噴霧干燥，即制得胸腺肽；

步驟一中醋酸溶液為食用醋酸與水的混合溶液，醋酸溶液中食用醋酸的量為10～40vol％；

步驟一中牛胸腺與醋酸溶液的質(zhì)量比為1:2～10；步驟二中的蒸煮罐為常溫蒸煮罐；

進(jìn)風(fēng)溫度200℃，出風(fēng)溫度95℃。

實(shí)施例3

本實(shí)施例的胸腺肽的提取方法按以下步驟進(jìn)行：

一、清洗：將牛胸腺用醋酸溶液進(jìn)行酸洗，時(shí)間1h；然后用水洗一次，再用醋酸溶液酸洗一次，時(shí)間1h，再水洗一次，得到清洗過的牛胸腺；。

二、蒸煮：向常溫蒸煮罐中加入水，邊攪拌邊升溫，同時(shí)加入步驟一中清洗過的牛胸腺(洗凈的牛胸腺組織應(yīng)不超過30min投入常溫蒸煮罐)與食用醋酸，升溫至蒸煮罐下部55℃上部65℃，保溫60min；停止攪拌，靜置1h，上清即為一次湯；

三、除渣：靜置結(jié)束立即用真空抽提罐將一次湯泵入滅菌后的一次湯儲(chǔ)罐；此時(shí)湯溫在55℃左右；

四、水解：將一次湯泵入滅菌后的水解罐，升溫至100℃保持15min滅菌，降溫至65℃并保持，加入配置NaOH溶液調(diào)整pH值至中性，投入酶制劑水解7h，然后升溫至90℃保溫15min滅酶活；

五、過濾：按比例投入硅藻土、活性炭攪拌，靜置，依次采用桶式過濾器和兩級(jí)板框過濾器過濾后，利用板框過濾器循環(huán)過濾1h，得到清液；

六、濃縮：利用真空濃縮器將清液濃縮至濃度22°Bé，得到濃縮液；

七、噴霧干燥：此時(shí)濃縮液澄清，進(jìn)行噴霧干燥，即制得胸腺肽；

步驟一中醋酸溶液為食用醋酸與水的混合溶液，醋酸溶液中食用醋酸的量為10～40vol％；

步驟一中牛胸腺與醋酸溶液的質(zhì)量比為1:2～10；步驟二中的蒸煮罐為常溫蒸煮罐；

進(jìn)風(fēng)溫度200℃，出風(fēng)溫度95℃。

實(shí)施例4

本實(shí)施例的胸腺肽的提取方法按以下步驟進(jìn)行：

一、清洗：將牛胸腺用醋酸溶液進(jìn)行酸洗，時(shí)間1.5h；然后用水洗一次，再用醋酸溶液酸洗一次，時(shí)間0.5h，再水洗一次，得到清洗過的牛胸腺；。

二、蒸煮：向常溫蒸煮罐中加入水，邊攪拌邊升溫，同時(shí)加入步驟一中清洗過的牛胸腺(洗凈的牛胸腺組織應(yīng)不超過30min投入常溫蒸煮罐)與食用醋酸，升溫至蒸煮罐下部55℃上部65℃，保溫60min；停止攪拌，靜置15h，上清即為一次湯；

三、除渣：靜置結(jié)束立即用真空抽提罐將一次湯泵入滅菌后的一次湯儲(chǔ)罐；此時(shí)湯溫在55℃左右；

四、水解：將一次湯泵入滅菌后的水解罐，升溫至100℃保持15min滅菌，降溫至55℃并保持，加入配置NaOH溶液調(diào)整pH值至中性，投入酶制劑水解9h，然后升溫至90℃保溫15min滅酶活；

五、過濾：按比例投入硅藻土、活性炭攪拌，靜置，依次采用桶式過濾器和兩級(jí)板框過濾器過濾后，利用板框過濾器循環(huán)過濾0.5h，得到清液；

六、濃縮：利用真空濃縮器將清液濃縮至濃度20°Bé，得到濃縮液；

七、噴霧干燥：此時(shí)濃縮液渾濁，先將濃縮液進(jìn)行板框過濾或用管式離心機(jī)分離，然后再進(jìn)行噴霧干燥，即制得胸腺肽；

步驟一中醋酸溶液為食用醋酸與水的混合溶液，醋酸溶液中食用醋酸的量為10～40vol％；

步驟一中牛胸腺與醋酸溶液的質(zhì)量比為1:2～10；步驟二中的蒸煮罐為常溫蒸煮罐；

進(jìn)風(fēng)溫度200℃，出風(fēng)溫度95℃。

實(shí)施例5

本實(shí)施例的胸腺肽的提取方法按以下步驟進(jìn)行：

一、清洗：將牛胸腺用醋酸溶液進(jìn)行酸洗，時(shí)間0.5h；然后用水洗一次，再用醋酸溶液酸洗一次，時(shí)間1.5h，再水洗一次，得到清洗過的牛胸腺；。

二、蒸煮：向常溫蒸煮罐中加入水，邊攪拌邊升溫，同時(shí)加入步驟一中清洗過的牛胸腺(洗凈的牛胸腺組織應(yīng)不超過30min投入常溫蒸煮罐)與食用醋酸，升溫至蒸煮罐下部55℃上部65℃，保溫60min；停止攪拌，靜置0.5h，上清即為一次湯；

三、除渣：靜置結(jié)束立即用真空抽提罐將一次湯泵入滅菌后的一次湯儲(chǔ)罐；此時(shí)湯溫在55℃左右；

四、水解：將一次湯泵入滅菌后的水解罐，升溫至100℃保持15min滅菌，降溫至65℃并保持，加入配置NaOH溶液調(diào)整pH值至中性，投入酶制劑水解7h，然后升溫至90℃保溫15min滅酶活；

五、過濾：按比例投入硅藻土、活性炭攪拌，靜置，依次采用桶式過濾器和兩級(jí)板框過濾器過濾后，利用板框過濾器循環(huán)過濾1h，得到清液；

六、濃縮：利用真空濃縮器將清液濃縮至濃度18°Bé，得到濃縮液；

七、噴霧干燥：此時(shí)濃縮液澄清時(shí)，進(jìn)行噴霧干燥，即制得胸腺肽；

步驟一中醋酸溶液為食用醋酸與水的混合溶液，醋酸溶液中食用醋酸的量為10～40vol％；

步驟一中牛胸腺與醋酸溶液的質(zhì)量比為1:2～10；步驟二中的蒸煮罐為常溫蒸煮罐；

進(jìn)風(fēng)溫度200℃，出風(fēng)溫度95℃。

以上實(shí)施例通過安全而先進(jìn)的生物提取技術(shù)，將牛胸腺中其豐富的組織蛋白經(jīng)過生物酶解定向酶切成小分子活性肽，即胸腺肽。其結(jié)構(gòu)和功能與人體非常接近，而且分子小，可被腸道直接吸收，快捷參與人體的正常代謝與調(diào)節(jié)，在藥理學(xué)上，具有更高的生化機(jī)制合理性和特異治療有效性。胸腺肽具有針對(duì)性強(qiáng)、無毒副作用、療效顯著、營養(yǎng)價(jià)值高、易被人體吸收等特點(diǎn)。

經(jīng)驗(yàn)證，以上實(shí)施例的方法制得的胸腺肽無需攪拌即可迅速溶于水，水溶液清亮透明，為淡黃色透明液體，不會(huì)析出任何雜質(zhì)和沉淀物。因此，本發(fā)明的方法制備得到的胸腺肽利用率可達(dá)到95％。

雖然以上描述了本發(fā)明的具體實(shí)施方式，但是本領(lǐng)域的技術(shù)人員應(yīng)當(dāng)理解，這些僅是舉例說明，本發(fā)明的保護(hù)范圍是由所附權(quán)利要求書限定的。本領(lǐng)域的技術(shù)人員在不背離本發(fā)明的原理和實(shí)質(zhì)的前提下，可以對(duì)這些實(shí)施方式作出多種變更或修改，但這些變更和修改均落入本發(fā)明的保護(hù)范圍。