1.一種密閉式慢病毒載體培養(yǎng)裝置和培養(yǎng)方法，其特征在于：培養(yǎng)裝置由盒體(1)、閥門(2)、連接管(3)、Q-syte分隔膜密閉式無針接頭(4)、Luer-Lock注射器(5)、過濾器(6)和密閉栓(7)組成；
所述的盒體(1)由上盒片和下盒片緊密貼合組成，上盒片和下盒片固定于剛性框架下，上盒片和下盒片中心部位向盒體(1)外側(cè)凹入形成矩形容積腔(12)，在盒體(1)的左右兩側(cè)各有一個(gè)變截面圓柱狀通道，通道內(nèi)固定有變截面圓柱狀的母槽連接管(13)；
所述的Luer-Lock注射器(5)的接頭為螺旋接頭。
2.一種密閉式慢病毒載體培養(yǎng)裝置和培養(yǎng)方法，其特征在于：慢性病毒載體培養(yǎng)方法包含以下步驟：
步驟一、試劑的制備：
(1)轉(zhuǎn)導(dǎo)質(zhì)粒的制備：首先使用PCR對(duì)hTERT+p53DD、cyclinD1+CDK4R24C和c-mycT58A+HRasG12V進(jìn)行增強(qiáng)處理，在CMVV5-LUC受體質(zhì)粒上的XmaI和KpnI部位之間克隆三個(gè)插入序列，并對(duì)插入序列進(jìn)行熒光素酶標(biāo)記基因操作，得到熒光素標(biāo)記的pLenti-hTERT+53DD、pLenti-cyclinD1+CDK4R24C和pLenti-c-mycT58A+HRasG12V質(zhì)粒，使用熒光素酶pLenti-CMVV5作為控制熒光素酶報(bào)告基因的控制質(zhì)粒；
(2)293T細(xì)胞和Huh7.5.1細(xì)胞的細(xì)胞培養(yǎng)基(CM)制備：向細(xì)胞培養(yǎng)基中添加體積比為10％的滅活胎牛血清，體積比為1％的非必需氨基酸，10ug/mL的慶大霉素；使用0.22um的過濾器過濾后在4℃的環(huán)境中保存最多兩個(gè)月；
(3)原代肝細(xì)胞(PPH)培養(yǎng)基(WM)制備：向500mL的William’s E培養(yǎng)基添加10mL的質(zhì)量體積比為7.5％的牛血清蛋白，5mL的ITS-G，10-7M的地塞米松溶液，體積比為1％的非必需氨基酸，體積比為1％的青霉素和鏈霉素的混合溶液，體積比為1％的穩(wěn)定性谷氨酸；使用0.22um的過濾器過濾后保存在-80℃的環(huán)境中；
(4)原代肝細(xì)胞(PPH)離析：將肝切成小塊組織立即置于含冰塊的生理鹽水中，在切割表面上插入可視裝置，然后在pH為7.4和37℃的環(huán)境中使用500mL的緩沖液對(duì)肝組織進(jìn)行灌洗，緩沖液中包含8.3g/L的NaCl、0.5g/L的KCl、2.4g/L的HEPES，0.19g/L的EGTA；使用包含100g的IV型膠原酶、3.9g/L的NaCl、0.5g/L的KCl、2.4g/L的HEPES和0.7g/L的CaCl2·H2O的400mL緩沖液在37℃的環(huán)境中進(jìn)行第二次灌洗；使用IV型的膠原酶循環(huán)灌注，然后移除大塊的組織，輕輕搖動(dòng)存儲(chǔ)在冰水中的包含有2.4g/L的HEPESD的HBSS緩沖液即可得到靶細(xì)胞；將含有靶細(xì)胞的懸浮液通過尼龍網(wǎng)過濾后在4℃的環(huán)境中沖洗三次；使用Trypan試劑排斥實(shí)驗(yàn)驗(yàn)證得到的肝細(xì)胞的可用性；立即使用合格的細(xì)胞或者凍結(jié)在-80℃的添加有10％的胎牛血清溶液中以代用；
步驟二、在密閉式慢病毒載體培養(yǎng)裝置中得到慢病毒上清液：
(1)培養(yǎng)裝置和293T細(xì)胞的準(zhǔn)備工作：將閥門(2)分別連接培養(yǎng)裝置的兩側(cè)，在閥門(2)上連接兩端為公槽的連接管(32)，左側(cè)的連接管(32)上連接0.22um的過濾器(61)，右側(cè)的連接管(31)連接Luer-Lock注射器(5)；50ml的試管中含有12mL的CM培養(yǎng)基，將293T細(xì)胞數(shù)量倍增至3.0～7.5×106，使用Luer-Lock注射器吸入2mL空氣后吸入10mL的細(xì)胞懸浮液；
(2)慢病毒上清液制備過程：向培養(yǎng)裝置中第一次注入10ml的293T細(xì)胞懸浮液，然后將培養(yǎng)裝置置于37℃和濃度為5％的CO2的條件下孵化6-8小時(shí)；使用注射器(5)將培養(yǎng)裝置里的細(xì)胞懸浮液抽出，然后再次向培養(yǎng)裝置中注入10mL的細(xì)胞懸浮液，將培養(yǎng)裝置置于37℃和濃度為5％的CO2的條件下孵化24小時(shí)；向培養(yǎng)裝置后注入10mL的CM培養(yǎng)基后使用注射器抽出懸浮液，再次注入10mlCM培養(yǎng)基，在37℃和濃度為5％的CO2的條件下孵化1小時(shí)；向1.5mL的Eppendorf試管中加入500uL的無菌水、8.1ug的HIV-gap-pol質(zhì)粒、8.1ug的pbabe-hTERT+p53DD、pbabe-cyclinD1+CDK4R24C或者pbabe-cmycT58A+HRasG12V質(zhì)粒、2.7ug的pMD2VSV-G-Env質(zhì)粒和62uL的CaCl2 2M；向5mL的試管中添加500uL的HBS 2x并輕微旋轉(zhuǎn)，旋轉(zhuǎn)在室溫條件下孵化20分鐘，然后添加9mL的CM培養(yǎng)基；將含有2mL氣體和10ml的轉(zhuǎn)染混合物注入培養(yǎng)裝置中，然后注入CM培養(yǎng)基，在37℃和CO2濃度5％的環(huán)境中孵化24小時(shí)；使用注射器注入10mLCM培養(yǎng)基然后抽出，然后再注入10mLCM培養(yǎng)基，將培養(yǎng)裝置置于在37℃和CO2濃度5％的環(huán)境中孵化24小時(shí)；將培養(yǎng)裝置(1)左側(cè)0.22um的過濾器(61)更換為0.45um的過濾器(62)，同時(shí)過濾器(62)連接第二個(gè)培養(yǎng)裝置，在第二個(gè)培養(yǎng)裝置的右側(cè)連接0.22um的過濾器(61)，第一個(gè)培養(yǎng)裝置連接注射器(5)，使用充滿空氣的注射器(5)將第一個(gè)培養(yǎng)裝置的細(xì)胞懸浮液轉(zhuǎn)移到第二個(gè)培養(yǎng)裝置中，將第二個(gè)培養(yǎng)裝置上的所有連接管(3)拆下，即可得到慢病毒上清液，將得到的上清液培養(yǎng)置于-80℃的條件下直接凍結(jié)；
步驟三、在密閉式慢病毒載體培養(yǎng)裝置中對(duì)原代細(xì)胞(PPH)轉(zhuǎn)染：
將PPH懸浮液注入培養(yǎng)裝置中，置于37℃和濃度5％的CO2環(huán)境中孵化4小時(shí)，然后將培養(yǎng)裝置(1)正反面調(diào)換，調(diào)換后置于37℃和濃度5％的CO2環(huán)境中孵化4小時(shí)；將步驟二得到的慢病毒載體置于37℃的水中解凍，將含有細(xì)胞懸浮液的培養(yǎng)裝置與慢病毒上清液的培養(yǎng)裝置連接一起；使用注射器抽入空氣后連接到慢病毒培養(yǎng)裝置上，將慢病毒上清液轉(zhuǎn)移到PPH細(xì)胞懸浮液中，將裝置置于37℃和CO2濃度5％的環(huán)境中48小時(shí)；將孵化得到的轉(zhuǎn)染慢病毒的PPH細(xì)胞懸浮液中注入添加有10％胎牛血清的低溫貯藏介質(zhì)，將得到的轉(zhuǎn)導(dǎo)PPH細(xì)胞懸浮液培養(yǎng)裝置置于-80℃低溫下凍結(jié)。
3.根據(jù)權(quán)利要求1的一種密閉式慢病毒載體培養(yǎng)裝置和培養(yǎng)方法，其特征在于：所述的上下盒片(11)面積為25cm2，上下盒片(11)為透氣和透明的材料制成。