本發(fā)明屬于菌種保存技術(shù)領(lǐng)域，尤其涉及一種辣椒疫霉菌菌種的保存方法。
背景技術(shù)：
菌種保存工作是從事微生物學(xué)、免疫學(xué)教學(xué)及科研工作的一項(xiàng)非常重要的任務(wù)。由于辣椒疫霉菌的存活時(shí)間短，需要定期轉(zhuǎn)接來(lái)維持菌種活力。以往的菌種保存，常采用人工傳代法，但頻繁轉(zhuǎn)接既會(huì)造成菌株致病力的下降，又要通過(guò)回接復(fù)壯恢復(fù)菌種的致病力，這種方法，既費(fèi)時(shí)、費(fèi)力，又增加了菌種污染的機(jī)會(huì)，這給辣椒疫霉菌的研究帶來(lái)諸多不便。因此，一種長(zhǎng)期存辣椒疫霉菌方法的研究是十分必要和迫切的。
技術(shù)實(shí)現(xiàn)要素：
本發(fā)明的目的在于提供一種辣椒疫霉菌菌種的保存方法，旨在解決以往的菌種保存，常采用人工傳代法，但頻繁轉(zhuǎn)接既會(huì)造成菌株致病力的下降，又要通過(guò)回接復(fù)壯恢復(fù)菌種的致病力，這種方法，既費(fèi)時(shí)、費(fèi)力，又增加了菌種污染機(jī)會(huì)的問(wèn)題。
本發(fā)明是這樣實(shí)現(xiàn)的，一種辣椒疫霉菌菌種的長(zhǎng)期保存方法，所述辣椒疫霉菌菌種的保存方法包括以下步驟：
步驟一、將所需保存的辣椒疫霉菌株在燕麥培養(yǎng)基上培養(yǎng)3天，用打孔器沿菌落邊緣打取菌塊；
步驟二、用接種針將菌塊挑出，放入盛有滅菌蒸餾水的離心管中，每個(gè)離心管放置15-20個(gè)菌塊，每個(gè)菌株保存6管；
步驟三、用封口膜將離心管開(kāi)口處封緊后，直立放置于試管架中，置16℃培養(yǎng)箱中保存；
步驟四、每隔3個(gè)月用接種針挑取菌塊，接種至燕麥培養(yǎng)基上觀察，5天內(nèi)有疫霉菌落形成即視為有活力。
本發(fā)明的目的在于提供一種利用所述疫霉菌的保存方法進(jìn)行辣椒疫霉菌種的長(zhǎng)期保存。
本發(fā)明提供的辣椒疫霉菌菌種的保存采用離心管無(wú)菌水法；
將所需保存辣椒疫霉菌株在燕麥培養(yǎng)基上培養(yǎng)3天，用打孔器在菌落邊緣打取菌塊，后用接種針將菌塊挑出，放入盛有滅菌蒸餾水的離心管中，每個(gè)離心管放置15-20個(gè)菌塊，每個(gè)菌株保存6管；將離心管開(kāi)口處用封口膜封緊后，直立放置于試管架中，置16℃培養(yǎng)箱中保存；每隔3個(gè)月用接種針挑取菌塊，接種到燕麥培養(yǎng)基上觀察，5天內(nèi)有疫霉菌落形成的視為有活力。
以便檢查保存的菌株是否被污染，以及此方法保存菌株的存活時(shí)間。
附圖說(shuō)明
圖1是本發(fā)明實(shí)施例提供的辣椒疫霉菌菌種的保存方法流程圖。
具體實(shí)施方式
為了使本發(fā)明的目的、技術(shù)方案及優(yōu)點(diǎn)更加清楚明白，以下結(jié)合實(shí)施例，對(duì)本發(fā)明進(jìn)行進(jìn)一步詳細(xì)說(shuō)明。應(yīng)當(dāng)理解，此處所描述的具體實(shí)施例僅僅用以解釋本發(fā)明，并不用于限定本發(fā)明。
下面結(jié)合附圖對(duì)本發(fā)明的應(yīng)用原理作進(jìn)一步描述。
如圖1所示，本發(fā)明實(shí)施例提供的辣椒疫霉菌菌種的保存方法包括以下步驟：
s101：將所需保存的辣椒疫霉菌株在燕麥培養(yǎng)基上培養(yǎng)3天后，用打孔器沿菌落邊緣打取菌塊；
s102：用接種針將菌塊挑出，置于盛有滅菌蒸餾水的離心管中，每個(gè)離心管放置15-20個(gè)菌塊，每個(gè)菌株保存6管；
s103：用封口膜將離心管開(kāi)口處封緊后，直立放置于試管架中，置16℃培養(yǎng)箱中保存；
s104：每隔3個(gè)月用接種針挑取菌塊，接種至燕麥培養(yǎng)基上觀察，5天內(nèi)有疫霉菌落形成即視為有活力。
下面結(jié)合實(shí)驗(yàn)結(jié)果對(duì)本發(fā)明的應(yīng)用效果作詳細(xì)的描述。
1、供試菌株
辣椒疫霉菌于2010-2012年從重慶巴南、綦江、永川等辣椒產(chǎn)區(qū)采集的典型病樣上分離保存。
2、試驗(yàn)方法
將4個(gè)辣椒疫霉菌株(dx、yd、yc、ht)在燕麥培養(yǎng)基上培養(yǎng)3天后，用打孔器(內(nèi)徑5mm)沿菌落邊緣打取菌塊，用接種針將菌塊挑出，放入盛有滅菌蒸餾水的離心管，每試管放置15-20個(gè)菌塊，每個(gè)菌株保存6支試管。用封口膜將離心管開(kāi)口處封緊后，直立放置于試管架中，置于16℃培養(yǎng)箱保存。每隔3個(gè)月用接種針挑取菌塊，接種到燕麥培養(yǎng)基上觀察有無(wú)菌落形成，5天內(nèi)有疫霉菌落形成的視為有活力。
3、試驗(yàn)結(jié)果
在離心管無(wú)菌水中的4個(gè)辣椒疫霉菌株在保存24個(gè)月后仍有活力，挑出的菌塊在oma上都能繼續(xù)生長(zhǎng)，存活率達(dá)100％。
表1無(wú)菌水法保存辣椒疫霉菌的活力檢測(cè)
注：+、-分別代表有活力和無(wú)活力。
以上所述僅為本發(fā)明的較佳實(shí)施例而已，并不用以限制本發(fā)明，凡在本發(fā)明的精神和原則之內(nèi)所作的任何修改、等同替換和改進(jìn)等，均應(yīng)包含在本發(fā)明的保護(hù)范圍之內(nèi)。