本發(fā)明涉及一種新型基質(zhì)輔助激光解吸電離(MALDI)基質(zhì)的合成方法，具體涉及一種α-氰基-4-羥基肉桂酸(CHCA)與硅基介孔材料共價偶聯(lián)基質(zhì)的合成方法。

背景技術(shù)：

基質(zhì)輔助激光解吸電離飛行時間質(zhì)譜(MALDI-TOF MS)是一種快速、高通量的軟電離質(zhì)譜技術(shù)，在蛋白質(zhì)、多肽、寡核苷酸等物質(zhì)的分析方面獲得廣泛應(yīng)用。由于常用MALDI基質(zhì)為小分子有機酸，因此在分析分子量小于500Da的小分子化合物時會引入大量的基質(zhì)加合峰，干擾待測物信號。研究制備適于小分子(分子量＜500Da)檢測的基質(zhì)對進一步拓寬MALDI-TOF MS應(yīng)用范圍具有重要意義。

技術(shù)實現(xiàn)要素：

本發(fā)明針對常見基質(zhì)CHCA在MALDI-TOF MS小分子檢測時背景干擾大的不足，提供一種CHCA與硅基介孔材料共價偶聯(lián)的新基質(zhì)，降低了基質(zhì)的背景干擾。

本發(fā)明的技術(shù)方案概述如下：硅基介孔材料表面首先修飾氨基，之后CHCA表面羧基被EDC，NHS活化，與修飾氨基的硅基介孔材料共價結(jié)合，形成新型基質(zhì)。

(1)配制10～100mg/mL的介孔材料懸濁液，超聲輔助分散，溶劑為無水乙醇；

(2)按照3-氨丙基三乙氧基硅烷(APTES)：硅基介孔材料體積比0.5～3∶1的比例加入APTES，50～100℃水浴攪拌反應(yīng)4～12小時；

(3)反應(yīng)液2000r/min～10000r/min離心2～10min；依次用去離子水和無水乙醇洗滌3～5次；

(4)孔徑為0.22μm以下的濾膜抽濾，濾膜截留的合成產(chǎn)物30～60℃真空干燥，制得硅基介孔材料@APTES；

(5)按照硅基介孔材料@APTES，CHCA，N-羥基丁二酰亞胺(NHS)，1-乙基-(3-二甲基氨基丙基)碳酰二亞胺鹽酸鹽(EDC·HCl)質(zhì)量比1∶1∶3～5∶12～20的比例混合，加入純水使CHCA最終濃度為10～50mg/mL，避光條件下反應(yīng)4h以上；

(6)純水離心洗滌3次后，用乙腈洗滌，自然干燥備用。

附圖說明

圖1為α-氰基-4-羥基肉桂酸(CHCA)與硅基介孔材料共價偶聯(lián)基質(zhì)的合成路線示意圖

具體實施方式

實施方案1

(1)稱取0.5g SBA-15與50ml無水乙醇混合，超聲混勻；

(2)加入100ml的APTES，在75℃水浴攪拌10h；

(3)3000r/min離心5min后，依次用純水和無水乙醇洗3次后，0.22μm有機系濾膜抽濾；

(4)取抽濾后的合成產(chǎn)物50℃真空干燥，制得SBA-15@APTES；

(5)稱取0.03gSBA-15@APTES、0.12gNHS、0.45gEDC、0.03gCHCA，加入1ml純水混勻，避光條件下渦旋反應(yīng)10h；

(6)產(chǎn)物3000r/min離心，純水清洗3次，最后一次乙腈清洗，自然干燥。

實施方案2

(1)稱取0.3g SBA-15與150ml無水乙醇混合，超聲混勻；

(2)加入50ml的APTES，在60℃水浴攪拌5h；

(3)5000r/min離心5min后，依次用純水和無水乙醇洗3次，0.22μm有機系濾膜抽濾；

(4)取抽濾后的合成產(chǎn)物40℃真空干燥，制得SBA-15@APTES；

(5)稱取0.02gSBA-15@APTES、0.10gNHS、0.40gEDC、0.02gCHCA，加入1ml純水混勻，避光條件下渦旋反應(yīng)4h；

(6)產(chǎn)物5000r/min離心，純水清洗3次，最后一次乙腈清洗，自然干燥。