本發(fā)明涉及化學制藥技術(shù)領(lǐng)域，尤其涉及一種藥根堿衍生物鹽酸鹽的制備方法和應(yīng)用。
背景技術(shù)：
伴隨著世界上老齡人群持續(xù)的增加,老年癡呆患者的數(shù)量不斷上升,研究與開發(fā)預防與治療老年癡呆藥己成為醫(yī)藥界的焦點問題. 抑制乙酰膽堿酯酶的活性可以明顯改善和緩解病人的癥狀, 在過去的數(shù)十年中乙酰膽堿酯酶抑制劑的研究不斷發(fā)展并且也成功開發(fā)了一些乙酰膽堿脂酶的抑制劑,乙酰膽堿酯酶抑制劑是FDA唯一允許作為治療老年癡呆癥的藥物,有4種藥物獲得FDA許可,分別為:T acrin (他克林 )Donepezil(多奈哌齊) 、Rivastigmine(利斯的明)、Galantamine(加蘭他敏),上述4種應(yīng)用于臨床的AChE抑制劑大多存在半衰期短、較嚴重的外周膽堿能系統(tǒng)副作用等缺點,不利于患者長期服用。從天然產(chǎn)物中尋找和發(fā)現(xiàn)新的乙酰膽堿脂酶抑制劑是現(xiàn)在研究的熱點。
藥根堿是從黃連等中藥材中提取得到的一種天然異喹啉生物堿，具有顯著的生理活性，促進胃腸動力作用，降血糖作用，藥根堿對腎上腺素a受體的阻斷作用，清除自由基和抗氧化性，抗菌、消炎、抗瘧作用，抗HIV、抗誘變、細胞毒活性等多種生理活性，,有關(guān)藥根堿及其衍生物對乙酰膽堿脂酶的抑制活性未見報道，我們提出一種藥根堿衍生物鹽酸鹽的制備方法和應(yīng)用。
技術(shù)實現(xiàn)要素：
本發(fā)明提出了一種藥根堿衍生物鹽酸鹽的制備方法和應(yīng)用。本發(fā)明提出的一種藥根堿衍生物，包括取代衍生物I和II；
I的結(jié)構(gòu)式為；
II的結(jié)構(gòu)式為；
其中通式I中的 R1為2-氟、3-氟、4-氟、2，3-二氟、2，4-二氟、2，5-二氟、2，6-二氟、3，4-二氟、3，5- 二氟、2-氯、3-氯、4-氯、2，3-二氯、2，4-二氯、2，5-二氯、2，6-二氯、3，4-二氯或3，5-二氯；
其中通式II中n為2-12；
R2為1，2，4-三唑-1-基、咪唑-1-基、-N（CH3)2、 哌嗪基、N-甲基哌嗪基、-N（CH3)2、哌啶基 、嗎啡啉基。
本發(fā)明還提出一種藥根堿衍生物鹽酸鹽的制備方法，包括以下步驟：
S1、取代衍生物I的制備：提供
以乙腈、四氫呋喃、二甲亞砜或N，N-二甲基甲酰胺為溶劑，將通式III所示的化合物與1，2，4三唑在溫度20～60℃、碳酸鉀或氫化鈉堿性條件下反應(yīng)，制得通式IV所示的中間體；再以N，N-二甲基甲酰胺為溶劑，將該中間體IV與結(jié)構(gòu)式如V所示的化合物在溫度90～120℃反應(yīng)，即制得取代衍生物I；
S2、取代衍生物II的制備：提供
；
以乙腈或N，N-二甲基甲酰胺為溶劑，將結(jié)構(gòu)式如V所示的化合物與S2中VI 所示的化合物在溫度70～80℃反應(yīng)，制得通式VII所示的中間體；再以乙腈、四氫呋喃、二甲亞砜或 N，N-二甲基甲酰胺為溶劑，將該中間體與1，2，4-三唑、咪唑、哌嗪、N-甲基哌嗪、 HN（CH3)2，哌啶 、嗎啡啉 在溫度20～80℃，碳酸鉀堿性條件下反應(yīng)，即制得通式II所示的藥根堿衍生物。
本發(fā)明還提出一種藥根堿衍生物的一種可接受的鹽，其制備方法采用以下步驟：以40～80℃的甲醇或者乙醇溶劑，將通式I、II所示的藥根堿衍生物與AgCl反應(yīng)，即制得可接受的藥根堿衍生物鹽酸鹽。
在本發(fā)明中，通式III 所示的化合物與1，2，4三唑與碳酸鉀或氫化鈉的投料摩爾比為1:0.5～1: 1.4～3；通式 IV所示的中間體與結(jié)構(gòu)式如V所示的化合物的投料摩爾比為1:0.9～1.3；中結(jié)構(gòu)式如V所示的化合物與通式VI所示的化合物的投料摩爾比為1:2～4；通式 VII所示的中間體與1，2，4-三唑、咪唑、哌嗪、N-甲基哌嗪、 HN（CH3)2，哌啶 、嗎啡啉 和碳酸鉀或氫化鈉的摩爾比為1:1.2～1.5:2.0～2.4；通式I或II與AgCl的投料比為1:1.1～1.2。
本發(fā)明還提出一種藥根堿衍生物鹽酸鹽的應(yīng)用，通式I、II藥根堿衍生物用于治療老年癡呆其作用機制為對AChE酶的抑制。
本發(fā)明中，本發(fā)明利用藥物設(shè)計拼合原理，首次將藥根堿與1，2，4三唑雜合，設(shè)計合成了一系列結(jié)構(gòu)新穎的藥根堿唑類化合物(通式I)，在藥根堿3位引入不同烷基鏈，在烷基鏈末端進行N取代，得到一些列新的藥根堿衍生物(通式II)，這些 化合物經(jīng)體外AChE酶抑制實驗檢測發(fā)現(xiàn)，對AChE酶都有一定抑制活性，所有化合物的AChE酶抑制活性均強于藥根堿，其中部分化合物的抑制活性與陽性藥物他克林相當，其在單濃度1×10-6mol/L對乙酰膽堿膽堿脂酶的抑制率均超過50%，并且對乙酰膽堿脂酶和丁酰膽堿脂酶的抑制作用表現(xiàn)出良好的選擇性，從而為臨床AChE酶抑制劑提供了活性較強的候選藥物，可能有助于解決日趨嚴重的耐藥性、或者降低副作用等問題。
具體實施方式
下面結(jié)合具體實施例對本發(fā)明作進一步解說。
本發(fā)明提出的一種藥根堿衍生物鹽酸鹽，包括取代衍生物I和II；
I的結(jié)構(gòu)式為；
II的結(jié)構(gòu)式為；
其中通式I中的 R1為2-氟、3-氟、4-氟、2，3-二氟、2，4-二氟、2，5-二氟、2，6-二氟、3，4-二氟、3，5- 二氟、2-氯、3-氯、4-氯、2，3-二氯、2，4-二氯、2，5-二氯、2，6-二氯、3，4-二氯或3，5-二氯；
其中通式II中的n為2-12；
R2為1，2，4-三唑-1-基、咪唑-1-基、-N（CH3)2、 哌嗪基、N-甲基哌嗪基、-N（CH3)2、哌啶基 、嗎啡啉基 。
本發(fā)明還提出一種藥根堿衍生物的制備方法，包括以下步驟：為了使本發(fā)明的目的、技術(shù)方案和優(yōu)點更加清楚，下面對本發(fā)明的代表性實施例進行詳細的描述。原料III系按照文獻(中國專利CN101323594)所述方法合成。
S1、取代衍生物I的制備：提供
以乙腈、四氫呋喃、二甲亞砜或N，N-二甲基甲酰胺為溶劑，將通式III所示的化合物與1，2，4三唑在溫度20～60℃、碳酸鉀堿性條件下反應(yīng)，制得通式 IV所示的中間體；再以N，N-二甲基甲酰胺為溶劑，將該中間體IV與結(jié)構(gòu)式如V（藥根堿）所示的化合物在溫度90～120℃反應(yīng)，即制得取代衍生物I；
S2、取代衍生物II的制備：提供
；
以乙腈或N，N-二甲基甲酰胺為溶劑，將結(jié)構(gòu)式如V所示的化合物與通式VI 所示的化合物在溫度70～80℃反應(yīng)，制得通式VII所示的中間體；再以乙腈、四氫呋喃、二甲亞砜或 N，N-二甲基甲酰胺為溶劑，將該中間體與1，2，4-三唑、咪唑、哌嗪、N-甲基哌嗪、 HN（CH3)2，哌啶 、嗎啡啉 在溫度20～80℃，碳酸鉀或堿性條件下反應(yīng)，即制得通式II所示的藥根堿衍生物。
本發(fā)明還提出一種藥根堿衍生物可接受的鹽，其制備方法采用以下步驟：以40～80℃的甲醇或者乙醇溶劑，將通式I、II所示的藥根堿衍生物與AgCl反應(yīng)，即制得藥根堿衍生物鹽酸鹽。
優(yōu)選的，通式III 所示的化合物與1，2，4三唑與碳酸鉀或氫化鈉的投料摩爾比為1:0.5～1: 1.4～3；通式 IV所示的中間體與結(jié)構(gòu)式如V所示的化合物的投料摩爾比為1:0.9～1.3；
優(yōu)選的，中結(jié)構(gòu)式如V所示的化合物與通式VI所示的化合物的投料摩爾比為1:2～4；通式 VII所示的中間體與1，2，4-三唑、咪唑、哌嗪、N-甲基哌嗪、 HN（CH3)2，哌啶 、嗎啡啉 和碳酸鉀或氫化鈉的摩爾比為1:1.2～1.5:2.0～2.4。
優(yōu)選的，通式I或II與AgCl的投料比為1:1.1～1.2。
本發(fā)明還提出一種藥根堿衍生物鹽酸鹽的應(yīng)用，通式I、II藥根堿衍生物鹽酸鹽用于治療老年癡呆其作用機制為對AChE酶的抑制。
本發(fā)明的目的，在于提供上述藥根堿衍生物及其藥學上可接受的鹽的醫(yī)藥用途， 以期為臨床疾病的治療提供更多、更好的藥物。為達到上述目的，經(jīng)過研究，本發(fā)明提供藥根堿衍生物及其藥學上可接受的鹽在制備治療老年癡呆癥藥物中的應(yīng)用。本發(fā)明的藥根堿衍生物或其藥學上可接受的鹽既可以與藥學上可接受的輔料組成組合物，按照藥劑學的常規(guī)方法制成單方制劑，也可以與已有的治療老年癡呆的藥物如鹽酸美金剛、 長春西汀、都可喜、他克林等以及藥學上可接受的輔料組成組合物，按照藥劑學的常規(guī)方法制成復方制劑，還可以將本發(fā)明記載的幾種不同結(jié)構(gòu)的藥根堿衍生物或其藥學上可接受的鹽以及藥學上可接受的輔料組成組合物，按照藥劑學的常規(guī)方法制成復方制劑。所述制劑類型包括但不限于片劑、膠囊劑、散劑、顆粒劑、滴丸 劑、注射劑、粉針劑等劑型，以及各種緩釋、控釋制劑和納米制劑。
1、通式I所示的藥根堿唑類化合物及其鹽酸鹽的制備
a、中間體IV的制備
方法1：在100mL圓底燒瓶中，加入1,2,4三唑、無水碳酸鉀和乙腈(10mL)，攪 拌升溫至60℃反應(yīng)1小時，再在冰水浴冷卻條件下加入原料VI，室溫反應(yīng)，用薄層色譜(TLC) 監(jiān)測反應(yīng)進度；反應(yīng)完成后，用乙酸乙酯萃取，飽和氯化鈉溶液洗滌，無水硫酸鈉干燥，柱 層析純化(以體積比為1～3∶5的乙酸乙酯-石油醚混合液為洗脫劑)，即得中間體IV-1～IV-3。
IV-1無色液體；MS(m/z)326.4[M+1]+；1H NMR(400MHz，CD3OD)：δ8.48(s，1H，Tri 3-H)，7.92s，1H，Tri 5-H)， 7.15-7.19(m，2H，Ph 3,5-H)，6.96-7.01(m，2H，Ph 4，6-H)，4.19(t，J＝6.0Hz，2H，Tri-CH2)， 3.65(s，2H，PhCH2)，3.39(t，J＝6.0Hz，2H，Br-CH2)，2.92-2.98(m，4H,Tri-CH2CH2，Br-CH2CH2)。
IV-1
IV-2無色液體；MS(m/z)343.3[M+1]+，345.3[M+3]+；1H NMR(400MHz，CD3OD)：δ8.47(s，1H，Tri 3-H)，7.69s，1H，Tri 5-H)， 7.18-7.30(m，4H，Ph-H)，4.29(t，J＝6.0Hz，2H，Tri-CH2)， 3.82(s，2H，PhCH2)，3.39(t，J＝6.0Hz，2H，Br-CH2)，2.96-3.04(m，4H,Tri-CH2CH2，Br-CH2CH2)。
IV-2
IV-3無色液體；MS(m/z)378.8[M+1]+，380.7[M+3]+；1H NMR(400MHz，CD3OD)：δ8.46(s，1H，Tri 3-H)，7.87s，1H，Tri 5-H)， 7.34(br，2H，Ph -H)，7.15-7.18(m，2H，Ph -H)，4.27(t，J＝6.0Hz，2H，Tri-CH2)， 3.73(s，2H，PhCH2)，3.40(t，J＝6.0Hz，2H，Br-CH2)，2.92-2.96(m，4H,Tri-CH2CH2，Br-CH2CH2)。
IV-2
b、化合物I的制備
在50mL圓底燒瓶中，加入原料V和N，N-二甲基甲酰胺(DMF)(5mL)，攪拌升溫至110℃， 緩慢滴加中間體IV 的DMF溶液，加畢保溫110℃反應(yīng)，用TLC監(jiān)測反應(yīng)進度；反應(yīng)完成 后，過濾，濃縮，固體用氯仿萃取，飽和氯化鈉溶液洗滌，無水硫酸鈉干燥，Al2O3柱層析純化(以體積比為1～10∶80 的甲醇-氯仿混合液為洗脫劑)，收集洗脫液，減壓蒸餾除去溶劑，殘余物用甲醇溶解，加入 AgCl，60℃攪拌2小時進行氯離子交換，過濾，收集濾液，再減壓蒸餾除去溶劑，即得化合物I。
I-1黃色粉末208℃-209℃ MS(m/z)583.7[M]+1H NMR(400MHz，CD3OD)：δ 9.75(s，1H，8-H)，8.82(s，1H，13-H)，8.67(s，1H，Tri 3-H)，8.08(d，J＝8.8Hz，1H，11-H)，8.03(d，J ＝8.8Hz，1H，12-H)，7.81(s，1H，Tri 5-H)，7.67(s，1H，1-H)，7.04-7.08(m，2H，Ph-H)，6.96 (s，1H，4-H)，6.85-6.89(m，2H，Ph -H)，4.93(t，J＝6.0Hz，2H，6-H)， 4.33(t，J＝6.0Hz，2H， Tri-CH2)，4.20(s，3H，-OCH3)，4.11(t，J ＝6.0Hz，2H，-OCH2-)，4.08(s，3H，-OCH3)，4.01(s，3H，-OCH3),3.66(s，2H Ph-CH2),3.25(t，J＝6.0Hz，2H，5-H)，3.01(t，J＝6.0Hz，2H，Tri-CH2CH2),2.91(t，J＝6.0Hz，2H，OCH2CH2N)
I-1
I-2黃色粉末205℃-206℃ MS(m/z)599.7[M]+IV-1黃色粉末208℃-209℃ MS(m/z)583.7[M+1]+,1H NMR(400MHz，CD3OD)：δ 9.73(s，1H，8-H)，8.78(s，1H，13-H)，8.61(s，1H，Tri 3-H)，8.04(d，J＝8.8Hz，1H，11-H)，8.01(d，J ＝8.8Hz，1H，12-H)，7.72(s，1H，Tri 5-H)，7.61(s，1H，1-H)，7.21-7.23(m，1H，Ph-H)，7.13-7.16(m，3H，Ph-H),6.95(s，1H，4-H)，4.92(t，J＝6.0Hz，2H，6-H)， 4.30(t，J＝6.0Hz，2H，OCH2CH2N，Tri-CH2)，4.18(s，3H，OCH3)，4.13(t，J ＝6.0Hz，2H，-OCH2-)，4.04(s，3H，-OCH3)，3.98(s，3H，-OCH3),3.77(s，2H Ph-CH2),3.23(t，J＝6.0Hz，2H，5-H)。3.03(t，J＝6.0Hz，2H，Tri-CH2CH2),2.94(t，J＝6.0Hz，2H，OCH2CH2N)
I-2
I-3黃色粉末184℃-185℃ MS(m/z)634.1[M]+ ，1 HNMR(400MHz，CD3OD)：δ 9.77(s，1H，8-H)，8.84(s，1H，13-H)，8.84(s，1H，Tri 3-H)，8.14(d，J＝8.8Hz，1H，11-H)，8.04(d，J ＝8.8Hz，1H，12-H)，7.74(s，1H，Tri 5-H)，7.69(s，1H，1-H)，7.29(s，1H，Ph-H)，7.08-7.14(m，2H，Ph-H),6.99(s，1H，4-H)，4.93(t，J＝6.0Hz，2H，6-H)， 4.33(t，J＝6.0Hz，2H，OCH2CH2N，Tri-CH2)，4.21(s，3H，OCH3)，4.18(t，J ＝6.0Hz，2H，-OCH2-)，4.11(s，3H，-OCH3),4.01(s，3H，-OCH3),3.77(s，2H Ph-CH2),3.26(t，J＝6.0Hz，2H，5-H)，3.07(t，J＝6.0Hz，2H，Tri-CH2CH2),2.95(t，J＝6.0Hz，2H，OCH2CH2N)
I-3
2、通式II所示的藥根堿衍生物及其鹽酸鹽的制備
a、中間體VII的制備
原料藥根堿V（0.1mol）溶于50ml乙腈與(0.2mol)1，4-二溴己烷,(0.3molK2CO3)于60-90℃反應(yīng)12小時，過濾，濃縮，柱層析純化(以體積比為1～6∶100的甲醇-氯仿混合液為洗脫劑)， 收集洗脫液，減壓蒸餾除去溶劑，得中間體VII
V黃色固體；m.p.：207℃-209℃ MS(m/z)472.71[M]+,475.5[M+2]+ ,1HNMR(400MHz，CD3OD)：δ9.75(s，1H，8-H)，8.81(s，1H，13-H)，8.11(d，J＝7.2Hz，1H，11-H)，8.07(d，J＝7.2Hz，1H，12-H)，， 7.67(s，1H，1-H)，7.01(s，1H，4-H)，4.92(t，J＝6.8Hz，2H，6-CH2)，4.25(t J＝6.8Hz，2H， -CH2Br)，4.15(s，-OCH3-)，4.13(t J＝6.8Hz，2H， -CH2O-),4.09(s，3H， -OCH3-) 4.06(s，3H， -OCH3-) ,2.04-2.08(m，，2H，-CH2-)，1.79-1.83(m，，2H，-CH2-)ppm。
b、化合物II的制備
化合物II-1的制備：在100mL圓底燒瓶中，加入1，2，4-三唑(0.65mmol)、無水碳酸鉀(150mg，1.09 mmol)和乙腈(20mL)，攪拌升溫至60℃反應(yīng)1小時，再用冰水浴冷卻至室溫，加入中間體VII (0.46mmol)，50℃反應(yīng)，用TLC監(jiān)測反應(yīng)進度；反應(yīng)完成后，用氯仿萃取，飽和氯化 鈉溶液洗滌，無水硫酸鈉干燥，柱層析純化(以體積比為1～6∶100的甲醇-氯仿混合液為洗脫劑)， 收集洗脫液，減壓蒸餾除去溶劑，殘余物用甲醇溶解，加入AgCl，60℃攪拌2小時進行氯離子交換，過濾，再減壓蒸餾除去溶劑，即得化合物II-1138mg，收率50%；；
黃色固體；m.p.：204-205℃ MS(m/z)461.3[M]]+ ，1H NMR(400MHz，CD3OD)：δ9.73s，1H，8-H)，8.78(s，1H，13-H)，8.57(s，1H， Tri-H)，8.06(d，J＝8.8Hz，1H，11-H)，8.00(s，1H，Tri 5-H)，8.01(d，J＝8.8Hz，1H，12-H，)， 7.61(s，1H，1-H)，6.99(s，1H，4-H)，4.92(t，J＝8.8Hz，,2H，6-H，)，4.38(t，J＝6.0Hz，2H,Tri-CH2)，4.19(s ，3H， CH30-)，4.12(t，J＝6.0Hz，2H，-OCH2-)，4.06(s ，3H， CH30-),3.99(s ，3H， CH30-),3.25(t，J＝6.0Hz，2H，5H),2.04-2.08(m，，2H，-CH2-，)，1.79-1.83(m，，2H，-CH2-)。
II-1
c、化合物II-2的制備
在100mL圓底燒瓶中，加入N-甲基哌嗪(45mg，0.65mmol)、無水碳酸鉀(150mg，1.09 mmol)和乙腈(10mL)，攪拌升溫至60℃反應(yīng)1小時，再用冰水浴冷卻至室溫，加入中間體II-2(0.46mmol)，50℃反應(yīng)，用TLC監(jiān)測反應(yīng)進度；反應(yīng)完成后，用氯仿萃取，飽和氯化 鈉溶液洗滌，無水硫酸鈉干燥，柱層析純化(以體積比為1～6∶100的甲醇-氯仿混合液為洗脫劑)， 收集洗脫液，減壓蒸餾除去溶劑，殘余物用甲醇溶解，加入鹽酸，60℃攪拌2小時進行氯離子 交換，再減壓蒸餾除去溶劑，即得化合物II-1110mg，收率48％。
黃色固體；m.p.：198-200℃，MS(m/z)492.3[M]+，1HNMR(400MHz，CD3OD)：δ9.76s，1H，8-H)，8.80(s，1H，13-H)，，8.11(d，J＝8.8Hz，1H，11-H)，8.02(d，J＝8.8Hz，1H，12-H，)， 7.66(s，1H，1-H)，7.03(s，1H，4-H)，4.92(t，J＝6.0Hz，,2H，6-H，)，4.20(s ，3H， CH30-),4.15(t，J＝6.0Hz，2H,Tri-CH2)，4.10(s ，3H， CH30-),3.99(s ，3H， CH30-),3.30(t,J＝6.0Hz，2H，-OCH2-),3.26(t，J＝6.0Hz，2H，5H), 2.60-2.50(m,8H),2.34(s 3H N-CH3), 1.84-1.91(m，2H，-CH2-，)，1.71-1.79(m，2H，-CH2-)。
II-2
參照上述代表性實施例I-1～I-3,II-1～II-2并結(jié)合本領(lǐng)域的常規(guī)技術(shù)手段，本領(lǐng)域技術(shù)人員可以制得通式 I-II所示的其它結(jié)構(gòu)的藥根堿衍生物及其藥學上可接受的鹽
3、藥根堿衍生物對乙酰膽堿脂酶和丁酰膽堿脂酶抑制活性篩選：
原理：乙酰膽堿脂酶與碘化硫代乙酰膽堿生成的產(chǎn)物，與5,5-二硫雙硝基苯甲酸生成一種黃色物質(zhì)，可以利用該顏色反應(yīng)，來測定待測樣品對乙酰膽堿脂酶的抑制程度。具體方法見文獻：孫黔云 楊付梅. 乙酰膽堿酯酶抑制劑微量篩選模型的比較研究《中國藥理學通報》2008,24(10):1387-1392 ； 楊付梅 孫黔云 丁酰膽堿酯酶抑制劑微量篩選模型的研究《中國藥理學通報》2009,25(5):690-2
采用 Ellman 法 對 AChE 體外抑制活性進行測試，用碘化乙酰膽堿為底物，化學標記的二硫硝基苯甲酸為顯 劑，在96孔板上樣品的AChE 抑制活性進行測定。測定時， 首先在96孔板上加入用DMSO 溶解的樣品 1ml、電鰻AChE溶液 50ml， 使用Bio-Rad 酶標儀， 在波長410nm 下，讀取每孔吸光度值( 樣品本底的吸光度) 。溫度保持在25℃,20min 后， 加入底物與顯色劑及磷酸緩沖液至總體積為 100 ml， 此時底物 濃 度 為 10 mmol.L-1， 顯 色 劑 濃 度 為12.5 mmol.L-1。20℃ 保溫反應(yīng) 20 min，讀取每孔的吸光度值。抑制率計算公式為I（%）E1-E2)/E1*100%，丁酰膽堿脂酶的抑制活性篩選用同樣的方法執(zhí)行。分別選用他克林和焦磷酰胺為陽性對照藥。得到如通式三個I-II的5個不同化合物的對乙酰膽堿和丁酰膽堿脂酶的單濃度抑制率。
表一 藥根堿衍生物的對乙酰膽堿脂酶和丁酰膽堿脂酶抑制活性
從上表可以看出,優(yōu)選的化合物的單濃度對乙酰膽堿脂酶的抑制活性和陽性對照他克林比較,對乙酰膽堿脂酶的抑制活性和陽性對照相當，所有化合物在1×10-6 mol/L對乙酰膽堿脂酶的抑制率均大于50%，可以推測這些化合物對乙酰膽堿脂酶的IC50（IC50是指酶催化反應(yīng)被抑制一半時抑制劑的濃度，又稱半抑制濃度）均應(yīng)小于1×10-6 mol/L為納摩爾級，對丁酰膽堿脂酶的抑制活性遠不如對乙酰膽堿脂酶的抑制活性，但這也表現(xiàn)出了如通式I-II的化合物對乙酰膽堿脂酶和丁酰膽堿脂酶的抑制有良好的選擇性，這種選擇性抑制為該系列藥根堿衍生物成為新的乙酰膽堿脂酶抑制劑也提供了可能，雖然表1只提供了部分具有代表性的藥根堿衍生物單濃度乙酰膽堿脂酶和丁酰膽堿脂酶的抑制率檢測結(jié)果，但本領(lǐng)域技術(shù)人員根據(jù)表1給出的結(jié)果和本領(lǐng)域的專業(yè)知識，可以預測本發(fā)明所述的通式I-II所示的其它結(jié)構(gòu)的藥根堿衍生物及其藥學上可接受的鹽也具有相同或相近的乙酰膽堿脂酶和丁酰膽堿脂酶抑制活性。
4、藥根堿衍生物的制藥用途
根據(jù)藥根堿衍生物單濃度乙酰膽堿脂酶和丁酰膽堿脂酶的抑制率檢測結(jié)果，本發(fā)明的藥根堿衍生物具有較好的抑制乙酰膽堿脂酶活性，并且對乙酰膽堿脂酶和丁酰膽堿脂酶的抑制作用有較好的選擇性，因此，這一類藥根堿衍生物或其藥學上可接受的鹽可能成為治療老年癡呆的藥供臨床使用,其作用機理是對乙酰膽堿脂酶的抑制,所述藥根堿衍生物既可以是單方制劑，例如由一種結(jié)構(gòu)的藥根堿衍生物及其藥學上可接受的鹽與藥學上可接受的輔料制成；也可以是復方制劑，例如由一種結(jié)構(gòu)的藥根堿衍生物或其藥學上可接受的鹽與已有治療老年癡呆的藥物組成復方制劑,或者由不同結(jié)構(gòu)的幾種藥根堿衍生物或其藥學上可接受的鹽與藥學上可接受的輔料制成。所述制劑類型包括但不限于片劑、膠囊劑、散劑、顆粒劑、滴丸劑、注射劑、粉針劑、溶液劑、等劑型，以及各種緩釋、控釋制劑和納米制劑。
1、片劑1的制備
處方：化合物I-110g，乳糖187g，玉米淀粉50g，硬脂酸鎂3.0g，體積百分濃度為70％ 的乙醇溶液適量，共制成1000片。
制法：將玉米淀粉于105℃干燥5小時備用；將化合物I-1與乳糖、玉米淀粉混合均勻， 用70％乙醇溶液制軟材，過篩制濕顆粒，干燥，過篩整粒，再加入硬脂酸鎂，壓片，即得； 每片重250mg，活性成分含量為10mg。
2、片劑2的制備
處方：化合物I-810g，乳糖80g，微晶纖維素5.0g，硬脂酸鎂5.0g，共制成200片。
制法：將化合物I-8與乳糖、微晶纖維素和硬脂酸鎂混合均勻，壓片，即得；每片重0.5 g，活性成分含量為50mg。
3、膠囊劑的制備
處方：化合物I-210g，乳糖188g，硬脂酸鎂2.0g，體積百分濃度為70％的乙醇溶液適 量，共制成1000粒。
制法：將化合物I-2、乳糖和硬脂酸鎂混合均勻，過篩，裝入空膠囊中，即得；每粒膠囊 內(nèi)容物重200mg，活性成份含量為10mg。
4、顆粒劑的制備
處方：化合物I-3126g，糊精120g，蔗糖280g。
制法：將化合物I-3、糊精和蔗糖混合均勻，濕法制粒，60℃干燥，分裝，即得。
以上所述，僅為本發(fā)明較佳的具體實施方式，但本發(fā)明的保護范圍并不局限于此，任何熟悉本技術(shù)領(lǐng)域的技術(shù)人員在本發(fā)明揭露的技術(shù)范圍內(nèi)，根據(jù)本發(fā)明的技術(shù)方案及其發(fā)明構(gòu)思加以等同替換或改變，都應(yīng)涵蓋在本發(fā)明的保護范圍之內(nèi)。