本發(fā)明屬于環(huán)境微生物技術(shù)領(lǐng)域，涉及一種用于河道治理的復(fù)合微生物菌劑及其制備方法和應(yīng)用。
背景技術(shù)：
城市河道和湖泊是與人類生產(chǎn)和生活緊密相連的水環(huán)境，隨著人口增長及城市化進程加速，大量污染物直接排入了河道和湖泊中，導(dǎo)致水體中有機物、氨氮、總磷和硫化氫等污染物持續(xù)增加，水體的自然凈化能力嚴(yán)重不足，嚴(yán)重制約經(jīng)濟與環(huán)境可持續(xù)發(fā)展，同時危及人類的身體健康。
去除水體污染物傳統(tǒng)的手段主要有物理和化學(xué)方法，雖然在河道及湖泊污染治理上具有一定效果，但這些方法要么投資及維護成本高，要么難以達到長久治理效果，甚至有些化學(xué)方法會造成水體二次污染。
生物修復(fù)技術(shù)是近期快速發(fā)展起來的一項水體污染物修復(fù)的新技術(shù)，它通過在水體中投放高效微生物菌株，利用這些微生物對水體中污染物的吸收、轉(zhuǎn)化或降解，達到減緩或最終消除水體污染、恢復(fù)水體生態(tài)功能的生物措施。微生物修復(fù)河道污水的主要機理有：微生物通過同化作用會轉(zhuǎn)化部分有機污染物為自身物質(zhì)，另一方面微生物會產(chǎn)生不同的生物酶作為催化劑降解n-nh3和tp等；另外，微生物可以通過營養(yǎng)競爭的方式，抑制藻類的生長；也可通過成為優(yōu)勢菌抑制一些病原菌和腐敗菌的生長，從而減少氨氣及臭味的產(chǎn)生。微生物修復(fù)技術(shù)因具有運行費用低、適應(yīng)能力強、降低污染物力度大、不會導(dǎo)致污染物轉(zhuǎn)移等特點，有望在治理河道污染水體的過程中發(fā)揮著重要作用。
我國在利用微生物技術(shù)修復(fù)水體污染方面的研究起步較晚，微生物修復(fù)在污染治理中的占比較小。目前的主要做法均是在污染水體中一次性投加復(fù)合微生物菌劑，這些現(xiàn)有技術(shù)目前還存在以下問題：1)若投加菌種種類和數(shù)量過少，由于我國水體污染源種類的復(fù)雜性，很難保證水體污染治理效果；而投加菌種種類和數(shù)量過多，可能存在菌種之間相互競爭甚至出現(xiàn)相克的現(xiàn)象，也會影響污染治理效果。另外，投放的微生物大量繁殖，如不及時處理，也會對水體造成二次污染；2)投放的復(fù)合微生物菌劑均是以降解有機污染物為主，由于我國水體污染除有機物污染外，還伴隨著各種固體懸浮顆粒、膠體粒子等，目前這類污染物的去除主要以物理或化學(xué)方法，雖然也有微生物絮凝劑的報道，但目前篩選出的高效微生物絮凝劑產(chǎn)生菌種類很少，且絕大多數(shù)停留在實驗室階段。因此，目前還缺乏綜合、高效的菌種以及成熟的修復(fù)技術(shù)，導(dǎo)致微生物綜合修復(fù)技術(shù)在工業(yè)上應(yīng)用效果不甚理想。
技術(shù)實現(xiàn)要素：
本發(fā)明要解決的技術(shù)問題是克服現(xiàn)有技術(shù)的不足，提供一種用于河道治理的復(fù)合微生物菌劑及其制備方法，該復(fù)合微生物菌劑不僅可以分解不同有機物、降解水中的氨基氮和硝基氮、降低水體中磷素濃度以及抑制藻類和有害菌的生長，而且還可以沉淀水體中不易降解的固體懸浮顆粒、菌體細(xì)胞及膠體粒子。相應(yīng)的，本發(fā)明還提供上述的復(fù)合微生物菌劑在河道污水處理中的應(yīng)用。
為解決上述技術(shù)問題，本發(fā)明提出以下技術(shù)方案：
一種用于河道治理的復(fù)合微生物菌劑，所述復(fù)合微生物菌劑包括復(fù)合微生物菌劑a和微生物菌劑b，所述復(fù)合微生物菌劑a是由巨大芽孢桿菌cctccno.m2012352、枯草芽胞桿菌cgmccno.1.2162、地衣芽胞桿菌cgmccno.1.6510、解淀粉芽孢桿菌cgmccno.1.7463、黃孢原毛平革菌bkm-f1767分別單獨培養(yǎng)形成的五種發(fā)酵液混合而成；所述微生物菌劑b是由漢遜德巴利酵母菌cgmccno.5770單獨培養(yǎng)形成的發(fā)酵液。
上述的用于河道治理的復(fù)合微生物菌劑，優(yōu)選的，所述復(fù)合微生物菌劑a中，各組分的體積份為：巨大芽孢桿菌cctccno.m2012352發(fā)酵液10～20份、枯草芽胞桿菌cgmccno.1.2162發(fā)酵液10～20份、地衣芽胞桿菌cgmccno.1.6510發(fā)酵液10～20份、解淀粉芽孢桿菌cgmccno.1.7463發(fā)酵液10～20份、黃孢原毛平革菌bkm-f1767發(fā)酵液10～20份。
上述的用于河道治理的復(fù)合微生物菌劑，優(yōu)選的，所述復(fù)合微生物菌劑a中，總菌落數(shù)大于10.0×1010cfu/ml。
上述的用于河道治理的復(fù)合微生物菌劑，優(yōu)選的，所述微生物菌劑b中，絮凝活性大于65％。
作為一個總的發(fā)明構(gòu)思，本發(fā)明還提供一種上述的用于河道治理的復(fù)合微生物菌劑的制備方法，包括以下步驟：
(1)制備復(fù)合微生物菌劑a：
(1.1)將巨大芽孢桿菌cctccno.m2012352接種于固體斜面培養(yǎng)基i中進行活化，制得活化巨大芽孢桿菌；然后將活化巨大芽孢桿菌接種于液體培養(yǎng)基i進行擴大培養(yǎng)；再接種于發(fā)酵培養(yǎng)基i中，經(jīng)發(fā)酵培養(yǎng)制得菌體濃度不小于3.0×109cfu/ml的巨大芽孢桿菌cctccno.m2012352發(fā)酵液；
(1.2)將枯草芽胞桿菌cgmccno.1.2162接種于固體斜面培養(yǎng)基ii中進行活化，制得活化枯草芽胞桿菌；然后將活化枯草芽胞桿菌接種于液體培養(yǎng)基ii進行擴大培養(yǎng)；再接種于發(fā)酵培養(yǎng)基ii中，經(jīng)發(fā)酵培養(yǎng)制得菌體濃度不小于10.0×107cfu/ml的枯草芽胞桿菌cgmccno.1.2162發(fā)酵液；
(1.3)將地衣芽胞桿菌cgmccno.1.6510接種于固體斜面培養(yǎng)基iii中進行活化，制得活化地衣芽胞桿菌；然后將活化地衣芽胞桿菌接種于液體培養(yǎng)基iii進行擴大培養(yǎng)；再接種于發(fā)酵培養(yǎng)基iii中，經(jīng)發(fā)酵培養(yǎng)制得菌體濃度不小于8.0×109cfu/ml的地衣芽胞桿菌cgmccno.1.6510發(fā)酵液；
(1.4)將解淀粉芽孢桿菌cgmccno.1.7463接種于固體斜面培養(yǎng)基iv中進行活化，制得活化解淀粉芽孢桿菌；然后將活化解淀粉芽孢桿菌接種于液體培養(yǎng)基iv進行擴大培養(yǎng)；再接種于發(fā)酵培養(yǎng)基iv中，經(jīng)發(fā)酵培養(yǎng)制得菌體濃度不小于6.0×109cfu/ml的解淀粉芽孢桿菌cgmccno.1.7463發(fā)酵液；
(1.5)將黃孢原毛平革菌bkm-f1767接種于固體斜面培養(yǎng)基v中進行活化，制得活化黃孢原毛平革菌；然后將活化黃孢原毛平革菌接種于液體培養(yǎng)基v進行擴大培養(yǎng)；再接種于發(fā)酵培養(yǎng)基v中，經(jīng)發(fā)酵培養(yǎng)制得菌體濃度不小于6.0×108cfu/ml的黃孢原毛平革菌bkm-f1767發(fā)酵液；
(1.6)將步驟(1.1)制得的巨大芽孢桿菌cctccno.m2012352發(fā)酵液、步驟(1.2)制得的枯草芽胞桿菌cgmccno.1.2162發(fā)酵液、步驟(1.3)制得的地衣芽胞桿菌cgmccno.1.6510發(fā)酵液、步驟(1.4)制得的解淀粉芽孢桿菌cgmccno.1.7463發(fā)酵液、步驟(1.5)制得的黃孢原毛平革菌bkm-f1767發(fā)酵液按照比例混合后，得到復(fù)合微生物菌劑a。
(2)制備微生物菌劑b：
(2.1)將漢遜德巴利酵母菌cgmccno.5770接種于固體斜面培養(yǎng)基vi中進行活化，制得活化漢遜德巴利酵母菌；然后將活化漢遜德巴利酵母菌接種于液體培養(yǎng)基vi進行擴大培養(yǎng)；再接種于發(fā)酵培養(yǎng)基vi中，經(jīng)發(fā)酵培養(yǎng)制得絮凝活性大于70％的漢遜德巴利酵母菌cgmccno.5770發(fā)酵液；
上述的用于河道治理的復(fù)合微生物菌劑的制備方法，優(yōu)選地，所述步驟(2.1)中，所述固體培養(yǎng)基vi中，含牛肉膏0.5～1g/100ml，蛋白胨0.5～1g/100ml，酵母膏0.5～1g/100ml，番茄汁5～6g/100ml，葡萄糖0.5～1.0g/100ml，碳酸氫鈣0.5～1.0g/100ml，瓊脂1～2g/100ml，ph值4～6.5；所述液體培養(yǎng)基vi中，含葡萄糖1.0～2.0g/100ml，酵母膏0.5～1g/100ml，玉米漿1～1.5g/100ml，磷酸二氫鉀0.01～0.02g/100ml，碳酸氫鈣0.5～1.0g/100ml；所述發(fā)酵培養(yǎng)基vi中，含豆渣10～25g/100ml，酵母膏1.0～5.0g/100ml，玉米渣5.0～10.0/100ml，磷酸二氫鉀0.01～0.1g/100ml，碳酸氫鈣0.5～2.0g/100ml，檸檬酸0.2～2.0g/100ml。
上述的用于河道治理的復(fù)合微生物菌劑的制備方法，優(yōu)選地，所述固體培養(yǎng)基i中，含蛋白胨0.5～1g/100ml，酵母粉1～1.5g/100ml，葡萄糖1～2g/100ml，磷酸氫二鉀0.1～0.5g/100ml，瓊脂1～2g/100ml，ph值6～8；所述固體培養(yǎng)基ii中，含蛋白胨1～1.5g/100ml，葡萄糖1～1.5g/100ml，氯化鈉0.5～1g/100ml，瓊脂1～2g/100ml，ph值6.5～7.5；所述固體培養(yǎng)基iii中，含胰蛋白胨1～1.5g/100ml，酵母膏0.5～1g/100ml，氯化鈉1～1.5g/100ml，瓊脂1.5～2g/100ml，ph值6～8；所述固體培養(yǎng)基iv中，含胰蛋白胨1～1.5g/100ml，酵母膏0.5～1g/100ml，氯化鈉1～1.5g/100ml，瓊脂1.5～2g/100ml，ph值6～8；所述固體培養(yǎng)基v中，含蛋白胨1～1.5g/100ml，酵母膏0.5～1g/100ml，氯化鈉0.5～1g/100ml，瓊脂1.5～2g/100ml，ph值6～8。
上述的用于河道治理的復(fù)合微生物菌劑的制備方法，優(yōu)選地，所述液體培養(yǎng)基i中，含葡萄糖1～1.5g/100ml，酵母膏0.5～1g/100ml，蛋白胨1～1.5g/100ml，磷酸二氫鉀0.05～0.1g/100ml，硫酸鎂0.04g/100ml；所述液體培養(yǎng)基ii中，含葡萄糖1～1.5g/100ml，酵母膏0.5～1g/100ml，蛋白胨1～1.5g/100ml，氯化鈉0.5～1.0g/100ml；液體培養(yǎng)基iii中，含葡萄糖2～2.5g/100ml，酵母膏0.2～0.5g/100ml，磷酸二氫鉀0.02～0.0.5g/100ml；所述液體培養(yǎng)基iv中，含葡萄糖2～2.5g/100ml，酵母膏0.2g/100ml，磷酸二氫鉀0.02g/100ml；所述液體培養(yǎng)基v中，含甘油2.0g/100ml，酵母膏0.5～0.5g/100ml，玉米漿1.5～2g/100ml，磷酸二氫鉀0.02～0.0.5g/100ml。
上述的用于河道治理的復(fù)合微生物菌劑的制備方法，優(yōu)選地，所述發(fā)酵培養(yǎng)基i中，含葡萄糖0.5～5g/100ml，酵母膏0.5～4g/100ml，黃豆粉1.0～6g/100ml，磷酸二氫鉀0.01～0.1g/100ml，硫酸鎂0.01～0.1g/100ml；所述發(fā)酵培養(yǎng)基ii中，含葡萄糖0.5～5g/100ml，酵母膏0.3～3g/100ml，(nh4)2so40.1～2.0g/100ml，檸檬酸鈉0.1～1g/100ml，硫酸鎂0.01～0.5g/100ml；所述發(fā)酵培養(yǎng)基iii中，含糖蜜0.5～5.0g/100ml，紅糖0.3～3.0g/100ml，酵母膏0.2～2.0/100ml，玉米漿0.5～5.0/100ml，磷酸二氫鉀0.01～0.05g/100ml，硫酸鎂0.005～0.05g/100ml；所述發(fā)酵培養(yǎng)基iv中，含糖蜜0.5～5.0g/100ml，紅糖0.5～5.0g/100ml，黃豆粉0.5～3.0g/100ml，玉米漿1.0～5.0g/100ml，磷酸二氫鉀0.01～0.1g/100ml；所述發(fā)酵培養(yǎng)基v中，含甘油1.0～5.0g/100ml，糖蜜1.0～5.0/100ml，玉米漿1.0～5.0g/100ml，黃豆粉0.5～3.0g/100ml，磷酸二氫鉀0.01～0.1g/100ml，硫酸鎂0.01～0.1g/100ml。
優(yōu)選地，所述步驟(1.1)中，所述活化條件為：30～36℃，活化培養(yǎng)48～72h；所述擴大培養(yǎng)條件為：在旋轉(zhuǎn)式搖床200rpm轉(zhuǎn)速下，30℃培養(yǎng)48h；所述發(fā)酵培養(yǎng)條件為：在旋轉(zhuǎn)式搖床100～180rpm轉(zhuǎn)速下，30～36℃培養(yǎng)48～96h。
優(yōu)選地，所述步驟(1.2)中，所述活化條件為：30～36℃，活化培養(yǎng)48～72h；所述擴大培養(yǎng)條件為：在旋轉(zhuǎn)式搖床200rpm轉(zhuǎn)速下，30℃培養(yǎng)48h；所述發(fā)酵培養(yǎng)條件為：在旋轉(zhuǎn)式搖床100～180rpm轉(zhuǎn)速下，30～36℃培養(yǎng)49～720h。
優(yōu)選地，所述步驟(1.3)中，所述活化條件為：32～36℃，活化培養(yǎng)48～72h；所述擴大培養(yǎng)條件為：在旋轉(zhuǎn)式搖床160rpm轉(zhuǎn)速下，30℃培養(yǎng)48h；所述發(fā)酵培養(yǎng)條件為：在旋轉(zhuǎn)式搖床100～180rpm轉(zhuǎn)速下，30～36℃培養(yǎng)48～72h。
優(yōu)選地，所述步驟(1.4)中，所述活化條件為：32～36℃，活化培養(yǎng)48～72h；所述擴大培養(yǎng)條件為：在旋轉(zhuǎn)式搖床150rpm轉(zhuǎn)速下，37℃培養(yǎng)48h；所述發(fā)酵培養(yǎng)條件為：在旋轉(zhuǎn)式搖床100～200rpm轉(zhuǎn)速下，32～36℃培養(yǎng)48～120h。
優(yōu)選地，所述步驟(1.5)中，所述活化條件為：32～36℃，活化培養(yǎng)48～72h；所述擴大培養(yǎng)條件為：在旋轉(zhuǎn)式搖床150rpm轉(zhuǎn)速下，37℃培養(yǎng)48h；所述發(fā)酵培養(yǎng)條件為：在旋轉(zhuǎn)式搖床100～200rpm轉(zhuǎn)速下，30～36℃培養(yǎng)48～120h。
優(yōu)選地，所述步驟(2)中，所述活化條件為：32～36℃，活化培養(yǎng)48～72h；所述擴大培養(yǎng)條件為：在旋轉(zhuǎn)式搖床150rpm轉(zhuǎn)速下，35℃培養(yǎng)72h；所述發(fā)酵培養(yǎng)條件為：在旋轉(zhuǎn)式搖床30～100rpm轉(zhuǎn)速下，28～36℃培養(yǎng)120～200h。
作為一個總的發(fā)明構(gòu)思，本發(fā)明還提供一種上述的復(fù)合微生物菌劑或上述的制備方法所制備的復(fù)合微生物菌劑在河道治理中的應(yīng)用，包括以下步驟：先將復(fù)合微生物菌劑a按城鄉(xiāng)河道污水體積的1～1.5‰投加，每隔3～5天投加一次，連續(xù)投加3～5周；再將微生物菌劑b按城鄉(xiāng)河道污水體積的1～1.5％投加
與現(xiàn)有技術(shù)相比，本發(fā)明的優(yōu)點在于：
1、本發(fā)明的復(fù)合微生物菌劑，所篩選的由巨大芽孢桿菌cctccno.m2012352、枯草芽胞桿菌cgmccno.1.2162、地衣芽胞桿菌cgmccno.1.6510、解淀粉芽孢桿菌cgmccno.1.7463、黃孢原毛平革菌bkm-f1767分別單獨培養(yǎng)形成的五種發(fā)酵液混合而成的復(fù)合微生物菌劑a具有適應(yīng)性強的特點，并且相互之間無抑制影響，能快速形成優(yōu)勢菌群，可以同時分解不同有機物、降解水中的氨基氮和硝基氮、降低水體中磷素濃度以及抑制藻類和有害菌的生長。所篩選的由漢遜德巴利酵母菌cgmccno.5770培養(yǎng)形成的兩種發(fā)酵液(即微生物菌劑b)具有微生物絮凝劑產(chǎn)量高的特點，漢遜德巴利酵母菌cgmccno.5770是申請人在已經(jīng)公開的微生物中篩選得到的高效的絮凝劑產(chǎn)生菌，可使水體中不易降解的固體懸浮顆粒、菌體細(xì)胞及膠體粒子等凝集、沉淀。利用本發(fā)明的復(fù)合微生物菌劑進行城鄉(xiāng)河道污水原位修復(fù)，具有高效、快速、徹底、無二次污染、操作簡單、修復(fù)率高等特點，有利于大規(guī)模推廣應(yīng)用。
2、本發(fā)明的復(fù)合微生物菌劑在河道污水處理的應(yīng)用中，通過在河道中先投加復(fù)合微生物菌劑a，分解不同有機污染物、降解水中的氨基氮和硝基氮、降低水體中磷素濃度以及抑制藻類和有害菌的生長；再通過投加微生物菌劑b，漢遜德巴利酵母菌cgmccno.5770產(chǎn)生的特色高分子聚合物，即微生物絮凝劑，可使水體中不易降解的固體懸浮顆粒、復(fù)合微生物菌劑a投加后大量繁殖的菌體細(xì)胞及膠體粒子等凝集、沉淀。因而本發(fā)明的河道污水處理方法具有高效、徹底且無二次污染的等優(yōu)點。
具體實施方式
以下結(jié)合具體優(yōu)選的實施例對本發(fā)明作進一步描述，但并不因此而限制本發(fā)明的保護范圍。
實施例1：
城鄉(xiāng)河道污水原位修復(fù)的復(fù)合微生物菌劑的制備
(1)制備復(fù)合微生物菌劑a：
(1.1)取巨大芽孢桿菌cctccno.m2012352種子，接種于固體斜面培養(yǎng)基i中進行活化培養(yǎng)，活化條件為：32℃，活化培養(yǎng)48h；然后將活化的巨大芽孢桿菌cctccno.m2012352接種于液體培養(yǎng)基i進行擴大培養(yǎng)，擴大培養(yǎng)條件為：在旋轉(zhuǎn)式搖床200rpm轉(zhuǎn)速下，30℃培養(yǎng)48h；將擴大培養(yǎng)的巨大芽孢桿菌cctccno.m2012352按發(fā)酵液體積的10％接種于發(fā)酵培養(yǎng)基i中，在旋轉(zhuǎn)式搖床150rpm轉(zhuǎn)速下，32℃培養(yǎng)96h后，所得的巨大芽孢桿菌cctccno.m2012352發(fā)酵液中巨大芽孢桿菌cctccno.m2012352菌體濃度為4.0×109cfu/ml。
所述固體培養(yǎng)基i中，含蛋白胨1g/100ml，酵母粉1.5g/100ml，葡萄糖2g/100ml，磷酸氫二鉀0.1g/100ml，瓊脂2g/100ml，ph值6～8；
所述液體培養(yǎng)基i中，含葡萄糖1.5g/100ml，酵母膏0.5g/100ml，蛋白胨1g/100ml，磷酸二氫鉀0.05g/100ml，硫酸鎂0.04g/100ml；
所述的發(fā)酵培養(yǎng)基i組分如下：葡萄糖2g/100ml，酵母膏1.5g/100ml，黃豆粉2/100ml，磷酸二氫鉀0.02g/100ml，硫酸鎂0.01g/100ml。
(1.2)取枯草芽胞桿菌cgmccno.1.2162種子，接種于固體斜面培養(yǎng)基ii中進行活化培養(yǎng)，活化條件為：32℃，活化培養(yǎng)48h；然后將活化的枯草芽胞桿菌cgmccno.1.2162接種于液體培養(yǎng)基ii進行擴大培養(yǎng)，擴大培養(yǎng)條件為：在旋轉(zhuǎn)式搖床200rpm轉(zhuǎn)速下，30℃培養(yǎng)48h；將擴大培養(yǎng)的枯草芽胞桿菌cgmccno.1.2162按發(fā)酵液體積的10％接種于發(fā)酵培養(yǎng)基ii中，在旋轉(zhuǎn)式搖床160rpm轉(zhuǎn)速下，32℃培養(yǎng)96h后，所得的枯草芽胞桿菌cgmccno.1.2162發(fā)酵液中枯草芽胞桿菌cgmccno.1.2162菌體濃度為12.0×107cfu/ml；
所述固體培養(yǎng)基ii中，含蛋白胨1.5g/100ml，葡萄糖1g/100ml，氯化鈉0.5g/100ml，瓊脂2g/100ml，ph值7.0；
所述液體培養(yǎng)基ii中，含葡萄糖1.5g/100ml，酵母膏0.5g/100ml，蛋白胨1g/100ml，氯化鈉0.5g/100ml；
所述的發(fā)酵培養(yǎng)基ii組分如下：葡萄糖3g/100ml，酵母膏1.5g/100ml，(nh4)2so40.5g/100ml，檸檬酸鈉0.2g/100ml，硫酸鎂0.02g/100ml。
(1.3)取地衣芽胞桿菌cgmccno.1.6510種子，接種于固體斜面培養(yǎng)基iii中進行活化培養(yǎng)，活化條件為：32℃，活化培養(yǎng)48h；然后將活化地衣芽胞桿菌接種于液體培養(yǎng)基iii進行擴大培養(yǎng)，擴大培養(yǎng)條件為：在旋轉(zhuǎn)式搖床160rpm轉(zhuǎn)速下，30℃培養(yǎng)48h；將擴大培養(yǎng)的地衣芽胞桿菌cgmccno.1.6510按發(fā)酵液體積的10％再接種于發(fā)酵培養(yǎng)基iii中，在旋轉(zhuǎn)式搖床160rpm轉(zhuǎn)速下，30℃培養(yǎng)72h后，所得的地衣芽胞桿菌cgmccno.1.6510發(fā)酵液中地衣芽胞桿菌cgmccno.1.6510菌體濃度為9.0×109cfu/ml；
所述固體培養(yǎng)基iii中，含胰蛋白胨1g/100ml，酵母膏0.5g/100ml，氯化鈉1g/100ml，瓊脂2g/100ml，ph值6.5；
所述液體培養(yǎng)基iii中，含葡萄糖2.5g/100ml，酵母膏0.2g/100ml，磷酸二氫鉀0.02g/100ml；
所述發(fā)酵培養(yǎng)基iii中，含糖蜜1.5g/100ml、紅糖1.0g/100ml、酵母膏1.5/100ml、玉米漿1.5/100ml、磷酸二氫鉀0.02g/100ml和硫酸鎂0.01g/100ml。
(1.4)取解淀粉芽孢桿菌cgmccno.1.7463種子，接種于固體斜面培養(yǎng)基iv中進行活化培養(yǎng)，活化條件為：32℃，活化培養(yǎng)48h；然后將活化的解淀粉芽孢桿菌接種于液體培養(yǎng)基iv進行擴大培養(yǎng)，擴大培養(yǎng)條件為：在旋轉(zhuǎn)式搖床150rpm轉(zhuǎn)速下，37℃培養(yǎng)48h；將擴大培養(yǎng)的解淀粉芽孢桿菌cgmccno.1.7463按發(fā)酵液體積的5％接種于發(fā)酵培養(yǎng)基iv中，在旋轉(zhuǎn)式搖床180rpm轉(zhuǎn)速下，37℃培養(yǎng)72h后，所得的解淀粉芽孢桿菌cgmccno.1.7463發(fā)酵液中解淀粉芽孢桿菌cgmccno.1.7463菌體濃度為8.0×109cfu/ml；
所述固體培養(yǎng)基iv中，含胰蛋白胨1g/100ml，酵母膏0.5g/100ml，氯化鈉1g/100ml，瓊脂2g/100ml，ph值6.5；
所述液體培養(yǎng)基iv中，含葡萄糖2.5g/100ml，酵母膏0.2g/100ml，磷酸二氫鉀0.02g/100ml；
所述的發(fā)酵培養(yǎng)基iv組分如下：糖蜜2.0g/100ml、紅糖1.5g/100ml、黃豆粉2.0g/100ml、玉米漿1.5g/100ml、磷酸二氫鉀0.02g/100ml。
(1.5)取黃孢原毛平革菌bkm-f1767種子，接種于固體斜面培養(yǎng)基v中進行活化培養(yǎng)，活化條件為：32℃，活化培養(yǎng)48h；然后將活化的黃孢原毛平革菌接種于液體培養(yǎng)基v進行擴大培養(yǎng)，擴大培養(yǎng)條件為：在旋轉(zhuǎn)式搖床150rpm轉(zhuǎn)速下，37℃培養(yǎng)48h；將擴大培養(yǎng)的黃孢原毛平革菌bkm-f1767按發(fā)酵液體積的10％再接種于發(fā)酵培養(yǎng)基v中，在旋轉(zhuǎn)式搖床160rpm轉(zhuǎn)速下，32℃培養(yǎng)96h后，所得的黃孢原毛平革菌bkm-f1767發(fā)酵液中黃孢原毛平革菌bkm-f1767菌體濃度為1.0×109cfu/ml；
所述固體培養(yǎng)基v中，含蛋白胨1g/100ml，酵母膏0.5g/100ml，氯化鈉1g/100ml，瓊脂2g/100ml，ph值7；
所述液體培養(yǎng)基v中，含甘油2.0g/100ml，酵母膏0.5g/100ml，玉米漿1.5g/100ml，磷酸二氫鉀0.02g/100ml；
所述的發(fā)酵培養(yǎng)基v組分如下：甘油2.0g/100ml、糖蜜1.5/100ml、玉米漿3.0g/100ml、黃豆粉1.5g/100ml、、磷酸二氫鉀0.03g/100ml、硫酸鎂0.02g/100ml。
(1.6)將步驟(1.1)制得的巨大芽孢桿菌cctccno.m2012352發(fā)酵液、步驟(1.2)制得的枯草芽胞桿菌cgmccno.1.2162發(fā)酵液、步驟(1.3)制得的地衣芽胞桿菌cgmccno.1.6510發(fā)酵液、步驟(1.4)制得的解淀粉芽孢桿菌cgmccno.1.7463發(fā)酵液、步驟(1.5)制得的黃孢原毛平革菌bkm-f1767發(fā)酵液按照比例混合后，得到復(fù)合微生物菌劑a。
(2)制備微生物菌劑b：
取漢遜德巴利酵母菌cgmccno.5770種子，接種于固體斜面培養(yǎng)基vi中進行活化培養(yǎng)，活化條件為：32℃，活化培養(yǎng)48h；然后將活化漢遜德巴利酵母菌接種于液體培養(yǎng)基vi進行擴大培養(yǎng)，擴大培養(yǎng)條件為：在旋轉(zhuǎn)式搖床150rpm轉(zhuǎn)速下，35℃培養(yǎng)72h；將擴大培養(yǎng)的漢遜德巴利酵母菌cgmccno.5770再接種于發(fā)酵培養(yǎng)基vi中，在旋轉(zhuǎn)式搖床50rpm轉(zhuǎn)速下，32℃培養(yǎng)150h后，制得絮凝活性為80％的漢遜德巴利酵母菌cgmccno.5770發(fā)酵液，即得到微生物菌劑b；
所述固體培養(yǎng)基vi中，含牛肉膏0.5g/100ml，蛋白胨0.5g/100ml，酵母膏0.5g/100ml，番茄汁5g/100ml，葡萄糖1.0g/100ml，碳酸氫鈣1.0g/100ml，瓊脂2g/100ml，ph值4.5；
所述液體培養(yǎng)基vi中，含葡萄糖2.0g/100ml，酵母膏0.5g/100ml，玉米漿1.5g/100ml，磷酸二氫鉀0.02g/100ml，碳酸氫鈣1.0g/100ml；
所述的發(fā)酵培養(yǎng)基vi組分如下：葡萄糖2.5g/100ml、酵母膏2.0g/100ml、玉米漿3.0/100ml、磷酸二氫鉀0.02g/100ml，碳酸氫鈣1.0g/100ml、檸檬酸0.5g/100ml。
實施例2
城鄉(xiāng)河道污水原位修復(fù)的復(fù)合微生物菌劑的應(yīng)用
湖南懷化通道縣郊區(qū)某河道，常年有城市生活污水、農(nóng)村養(yǎng)殖種植污水排放，以及山洪水匯集，河水常年渾濁發(fā)臭，cod、氨氮和總磷超標(biāo)。從該河道取2l水樣，加入2ml實施例制備的液體復(fù)合微生物菌劑a，每隔三天加菌劑一次，連續(xù)投料三周后，測定結(jié)果表明，水體cod由投放微生物前的260mg/l下降至14.5mg/l；氨氮含量由修復(fù)前的17.2mg/l下降至0.69mg/l；總氮由32.4mg/l下降至0.93；總磷由2.80mg/l下降至0.27；再加入20ml實施例1制備的液體微生物菌劑b，投加3天后水質(zhì)濁度和色度明顯改善，透明度由10cm提高到了22cm，15天后透明度提高到了65cm。修復(fù)后的水體達到了中華人民共和國地表水環(huán)境質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)v類水質(zhì)標(biāo)準(zhǔn)。表現(xiàn)了明顯的水體修復(fù)效果(見下表1)。
表1復(fù)合微生物菌劑對通道縣某河道污水的修復(fù)效果
實施例3
城鄉(xiāng)河道污水原位修復(fù)的復(fù)合微生物菌劑的應(yīng)用
湖南常德石門縣某河道，河水常年渾濁，cod、氨氮和總磷超標(biāo)。從該河道取2l水樣，加入2.5ml實施例制備的液體復(fù)合微生物菌劑a，每隔四天加菌劑一次，連續(xù)投料三周后，測定結(jié)果表明，水體cod由投放微生物前的245mg/l下降至12.8mg/l；氨氮含量由修復(fù)前的19.2mg/l下降至0.64mg/l；總氮由35.24mg/l下降至0.97；總磷由3.03mg/l下降至0.28；再加入20ml實施例1制備的液體微生物菌劑b，投加3天后水質(zhì)濁度和色度明顯改善，透明度由15cm提高到了27cm，15天后透明度提高到了68cm。修復(fù)后的水體達到了中華人民共和國地表水環(huán)境質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)v類水質(zhì)標(biāo)準(zhǔn)。表現(xiàn)了明顯的水體修復(fù)效果(見下表2)。
表2復(fù)合微生物菌劑對石門縣某河道污水的修復(fù)效果
以上所述僅是本發(fā)明的優(yōu)選實施方式，本發(fā)明的保護范圍并不僅局限于上述實施例。凡屬于本發(fā)明思路下的技術(shù)方案均屬于本發(fā)明的保護范圍。應(yīng)該指出，對于本技術(shù)領(lǐng)域的普通技術(shù)人員來說，在不脫離本發(fā)明原理的前提下的改進和潤飾，這些改進和潤飾也應(yīng)視為本發(fā)明的保護范圍。