本發(fā)明涉及的是中藥酸棗仁中微量酸棗仁堿a，即歐鼠李葉堿（sanjoininea或frangufoline,c31h42n4o4）的一種提取與分離純化方法，屬于提取純化技術。
背景技術：
酸棗仁（semenzizyphispinosae）為鼠李科植物酸棗的種子，具有改善睡眠的功能，有研究表明酸棗仁堿a，即歐鼠李葉堿（sanjoininea或frangufoline,c31h42n4o4）是酸棗仁改善睡眠活性成分之一，具有很好的藥用價值和廣闊的應用前景。據世界衛(wèi)生組織調查，在世界范圍內有27%的人有睡眠障礙，在中國有各類睡眠障礙的人更是高達38.2%。由于酸棗仁中所含化學成分復雜且酸棗仁堿a在酸棗仁中含量極低，市場上又買不到酸棗仁堿a的標準品，酸棗仁堿a的定性篩查識別困難，所以，目前酸棗仁堿a還沒有一個穩(wěn)定、可靠的提取與分離純化方法，這嚴重阻礙了人們對這種天然產物的進一步研究及利用。本專利通過索氏提取、溶劑萃取、中壓c18反相制備色譜分離純化和高壓c18反相制備色譜分離純化建立了酸棗仁中微量酸棗仁堿a的提取與分離純化方法。
技術實現(xiàn)要素：
本發(fā)明提供一種通過索氏提取、溶劑萃取、中壓c18反相制備色譜分離純化和高壓c18反相制備色譜分離純化的酸棗仁中微量酸棗仁堿a的提取與分離純化方法。
本發(fā)明是采用以下技術方案來實現(xiàn)的：酸棗仁堿a的提取與分離純化方法包括酸棗仁堿a的提取及初步分離純化、酸棗仁堿a的制備色譜分離純化兩個步驟。
第一步酸棗仁堿a的提取及初步分離純化，先是酸棗仁堿a的提?。簩⒎鬯楹蟮乃釛椚史勰┮允兔褳樘崛∫哼M行索氏提取脫脂5h，石油醚提取液通過旋轉蒸發(fā)儀濃縮待用，脫脂后的酸棗仁粉末晾干后以甲醇為提取液進行索氏5h，甲醇提取液通過旋轉蒸發(fā)儀濃縮待用。
然后是酸棗仁堿a的初步分離純化：濃縮后的石油醚提取液用等體積5%鹽酸溶液萃取3次，收集下相，用等體積乙醚對收集的下相萃取2次除去其中殘留的油，收集下相，用氨水調ph值到10，然后用等體積三氯甲烷萃取3次，收集下相并在旋轉蒸發(fā)儀上進行濃縮，得到一部分酸棗仁堿a；將濃縮后的甲醇提取物溶于水中，用等體積乙醚萃取3次，收集上相乙醚層，用等體積5%鹽酸溶液對收集的乙醚層萃取3次，收集下相，用等體積乙醚對收集的下相萃取2次除去其中殘留的油，收集下相，用氨水調ph值到10，然后用等體積三氯甲烷萃取3次，收集下相并在旋轉蒸發(fā)儀上進行濃縮，得到另一部分酸棗仁堿a，將得到的兩部分酸棗仁堿a混合待用。
第二步酸棗仁堿a的制備色譜分離純化，先是中壓c18反相制備色譜分離純化：將第一步得到的酸棗仁堿a提取液用10倍體積的體積分數(shù)為42%的甲醇水溶液稀釋，用孔徑為0.22mm的有機系尼龍微濾膜過濾，然后用c18填料填裝的中壓反相制備色譜柱在制備液相上對過濾后的樣液進行分離純化，制備柱規(guī)格為3.5cm×40cm，a流動相為0.1%的甲酸水，b流動相為甲醇，總流速為20ml/min，進樣量為柱體積的2~5%，洗脫梯度為0~70min，42%~100%b。收集35~47min洗出液，多次收集后在旋轉蒸發(fā)儀上濃縮待用。
然后是高壓c18反相制備色譜分離純化：將經過中壓c18反相制備色譜后收集并濃縮的目標成分用體積分數(shù)為42%的甲醇水溶液溶解，然后用高壓c18反相制備色譜分離純化，制備柱規(guī)格為2cm×25cm，a流動相為水，b流動相為甲醇，總流速為10ml/min，進樣量為柱體積的2~5%，洗脫梯度為0~70min，42%~100%b。收集19~34min洗出液，多次收集后在旋轉蒸發(fā)儀上濃縮，在真空冷凍干燥機上干燥后得到酸棗仁堿a。
本發(fā)明的優(yōu)點和積極效果：本發(fā)明解決了市場上沒有標準品，定性篩查識別困難且在酸棗仁中含量極微的酸棗仁堿a的提取與分離純化問題，方法穩(wěn)定，得到的酸棗仁堿a純度高，為酸棗仁堿a的進一步研究提供了便利，為酸棗仁堿a的工業(yè)化生產提供了參考。
附圖說明
圖例為本發(fā)明酸棗仁中微量酸棗仁堿a的提取與分離純化方法的示意流程圖。
具體實施方式
由圖例給出具體實施例。圖例給出的是酸棗仁中微量酸棗仁堿a的提取與分離純化工藝流程圖，它包括酸棗仁堿a的提取及初步分離純化、酸棗仁堿a的制備色譜分離純化。