本發(fā)明涉及植物化學(xué)及醫(yī)藥技術(shù)領(lǐng)域，具體涉及薰衣草中的酚酸類化合物及其制備方法和用途。

背景技術(shù)：

薰衣草(lavandulaangustifoliamill.)，系被子植物門雙子葉植物綱管狀花目唇形科薰衣草屬(lavandula)植物，為多年生草本或小矮灌木；原產(chǎn)于地中海沿岸，新疆伊犁地區(qū)自1965年首次從法國(guó)引種，因其與法國(guó)的普羅旺斯地處同一緯度帶，加之獨(dú)特的逆溫帶自然氣候和水肥條件，成為薰衣草大面積種植生長(zhǎng)的理想地理環(huán)境，是全國(guó)最大的薰衣草種植基地。薰衣草首載于阿維森納著《醫(yī)典》中，目前也成為了維吾爾族習(xí)用藥材(名為“吾斯提庫(kù)都斯”)，維吾爾醫(yī)認(rèn)為其性質(zhì)為二級(jí)干熱，適合任何皮膚，促進(jìn)細(xì)胞再生、加速傷口愈合，改善粉刺、膿腫、濕疹，平衡皮脂分泌，對(duì)燒燙灼曬傷有奇效，可抑制細(xì)菌(葡萄球菌、鏈球菌、八疊球菌)、減少疤痕、舒緩壓力、松弛神經(jīng)、幫助入眠，解除緊張焦慮，也可治療初期感冒咳嗽，也可逐漸改善頭痛，安定消化系統(tǒng)，是治療偏頭痛的理想花茶；可以飲用，也可以沐浴時(shí)使用，也可放置于衣櫥內(nèi)代替樟腦丸等。薰衣草精油通常采用水蒸氣蒸餾法提取，由許多不同類型的芳香族化合物組成，是目前國(guó)內(nèi)外研究開(kāi)發(fā)的重點(diǎn)；與之相比，針對(duì)性地對(duì)其非揮發(fā)性成分及生物活性的研究甚少，僅發(fā)現(xiàn)少量黃酮類及其他酚酸類化合物。因此，對(duì)薰衣草精油提取后的殘?jiān)谢瘜W(xué)成分的進(jìn)一步挖掘研究，對(duì)明確薰衣草次生代謝產(chǎn)物，研究其有效成分及藥理功效奠定了良好的基礎(chǔ)，也為同類產(chǎn)品進(jìn)一步開(kāi)發(fā)再利用，提高商品技術(shù)附加值提供理論與技術(shù)支持。

眾所周知，所有需氧生物的生理過(guò)程均會(huì)產(chǎn)生大量的自由基，自由基損傷與衰老及多種疾病的發(fā)生、發(fā)展有著密切的關(guān)系，在某些病理情況下，活性氧自由基代謝失衡、含量升高、脂質(zhì)過(guò)氧化水平提高，這種不平衡會(huì)對(duì)機(jī)體造成損傷，引發(fā)炎癥、癌癥等多種疾病，為了減輕自由基的危害，目前尋找和篩選高效、價(jià)廉、低毒甚至無(wú)毒的天然抗氧化劑的工作倍受關(guān)注。

技術(shù)實(shí)現(xiàn)要素：

本發(fā)明的目的在于，提供一種薰衣草中的酚酸類化合物及其制備方法和用途。以薰衣草(lavandulaangustifoliamill.)的水蒸氣蒸餾提取精油后產(chǎn)生的殘?jiān)鼮樵?，用有機(jī)溶劑提取并萃取后，靈活運(yùn)用各柱色譜分離方法，結(jié)合波譜解析手段，得到式(i)至式(ⅵ)6個(gè)新的酚酸類化合物，并對(duì)得到的式(i)至式(ⅵ)6個(gè)新的酚酸類化合物進(jìn)行了抗氧化活性測(cè)定，結(jié)果表明：所述新的酚酸類化合物具有不同程度的抗氧化活性，可用于抗氧化藥物或保健品、營(yíng)養(yǎng)食品制備的應(yīng)用。

本發(fā)明所述的一種薰衣草中的酚酸類化合物，該類化合物的結(jié)構(gòu)式為：

其中：

式(ⅰ)化合物為α(s)-2-乙酰氧基-3-(3,4-二羥基苯基)-丙酸甲酯；

式(ⅱ)化合物為3-(7,8-二羥基二苯并[b,d]呋喃)丙烯酸-[α(r)-(1-甲氧羰基)-2-(3,4-二羥基)苯基乙醇]酯；

式(ⅲ)化合物為3-(6,7-二羥基-2-(9-芴酮)丙酸-[α(s)-(1-甲氧羰基)-2-(3,4-二羥基)苯基乙醇]酯；

式(ⅳ)化合物為3-(4-(3,4-二羥基聯(lián)二苯)丙烯酸-[α(r)-(1-甲氧羰基)-2-(3,4-二羥基)苯基乙醇]酯；

式(ⅴ)化合物為3-(3-(3,4-二羥基聯(lián)二苯)丙烯酸-[α(r)-(1-甲氧羰基)-2-(3,4-二羥基)苯基乙醇]酯；

式(ⅵ)化合物為α(r)-2-羥基-3-(6,7-二羥基-3,4苯并香豆素)丙酸甲酯。

所述薰衣草中的酚酸類化合物的制備方法，按下列步驟進(jìn)行：

a、以薰衣草的水蒸氣蒸餾提取精油后產(chǎn)生的殘?jiān)鼮樵?，將原料粉碎后?-10倍體積濃度為30-95％的乙醇水溶液在室溫下進(jìn)行滲漉提取、冷浸提取或加熱回流提取，再將提取物濃縮，烘干后得到薰衣草殘?jiān)痔嵛铮?/p>

b、將步驟a得到的粗提物用蒸餾水分散，依次加入二氯甲烷或三氯甲烷，乙酸乙酯分別萃取，各溶劑萃取3-5次，將乙酸乙酯萃取液濃縮，得到乙酸乙酯萃取物浸膏；

c、將步驟b得到的乙酸乙酯萃取物浸膏經(jīng)正相硅膠柱層析法、反相硅膠柱層析法和葡聚糖凝膠lh-20凝膠柱層析法進(jìn)行分離，即得到式(ⅰ)化合物為α(s)-2-乙酰氧基-3-(3,4-二羥基苯基)-丙酸甲酯；式(ⅱ)化合物為3-(7,8-二羥基二苯并[b,d]呋喃)丙烯酸-[α(r)-(1-甲氧羰基)-2-(3,4-二羥基)苯基乙醇]酯；式(ⅲ)化合物為3-(6,7-二羥基-2-(9-芴酮)丙酸-[α(s)-(1-甲氧羰基)-2-(3,4-二羥基)苯基乙醇]酯；式(ⅳ)化合物為3-(4-(3,4-二羥基聯(lián)二苯)丙烯酸-[α(r)-(1-甲氧羰基)-2-(3,4-二羥基)苯基乙醇]酯；式(ⅴ)化合物為3-(3-(3,4-二羥基聯(lián)二苯)丙烯酸-[α(r)-(1-甲氧羰基)-2-(3,4-二羥基)苯基乙醇]酯；式(ⅵ)化合物為α(r)-2-羥基-3-(6,7-二羥基-3,4苯并香豆素)丙酸甲酯。

3、根據(jù)權(quán)利要求2所述薰衣草中的酚酸類化合物的制備方法，其特征在于步驟c中所述正相硅膠柱層析法為常壓或加壓柱層析，所用填料為硅膠，所用洗脫劑為正己烷、環(huán)己烷、二氯甲烷、三氯甲烷、乙酸乙酯、丙酮或甲醇中至少兩種溶劑的混合物，采用等度洗脫或梯度洗脫。

步驟c中所述反相硅膠柱層析法為常壓或加壓柱層析，洗脫劑為體積濃度10-99％的甲醇水溶液、10-99％的含0.1％甲酸的甲醇水溶液、10-99％的乙腈水溶液或10-99％的含0.1％甲酸的乙腈-水混合溶液，采用等度洗脫或梯度洗脫。

步驟c中所述葡聚糖凝膠lh-20凝膠柱層析法為常壓柱層析，洗脫劑為甲醇、三氯甲烷或二氯甲烷中至少兩種溶劑的混合物，采用等度洗脫或梯度洗脫。

所述薰衣草中的酚酸類化合物在制備抗氧化藥物中的用途。

所述薰衣草中的酚酸類化合物在制備抗氧化保健品或營(yíng)養(yǎng)食品中的用途。

本發(fā)明所述的薰衣草中的酚酸類化合物及其制備方法和用途，該化合物中所述式(ⅰ)化合物“α(s)-2-乙酰氧基-3-(3,4-二羥基苯基)-丙酸甲酯”，經(jīng)檢索，在發(fā)明專利申請(qǐng)?zhí)枮?01210150013.8，名稱為“一種丹參素的合成方法”，申請(qǐng)公布號(hào)為cn102863328a中公開(kāi)過(guò)其同分異構(gòu)體，該專利中公開(kāi)的化合物“d-(+)-2-乙酰氧基-3-(3,4-二羥基苯基)-丙酸甲酯”作為丹參素合成過(guò)程中的中間體出現(xiàn)，旋光值為“+”。而本發(fā)明中式(i)化合物是從薰衣草精油提取后殘?jiān)蟹蛛x得到，是一種新的天然產(chǎn)物，旋光值為“-”。

本發(fā)明所述的薰衣草中的酚酸類化合物及其制備方法和用途，通過(guò)所述方法獲得的(ⅰ)至式(ⅵ)6個(gè)新的酚酸類化合物，經(jīng)過(guò)對(duì)自由基1,1-二苯基-2-三硝基苯肼的清除率的測(cè)定，實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明：所述式(ⅰ)至式(ⅵ)化合物能夠不同程度地清除自由基1,1-二苯基-2-三硝基苯肼，從而表現(xiàn)出抗氧化活性，可用于制備抗氧化藥物或保健品、營(yíng)養(yǎng)食品。

本發(fā)明所述的薰衣草中的酚酸類化合物，可通過(guò)從植物中分離純化得到，也可以經(jīng)本領(lǐng)域技術(shù)人員熟知的化學(xué)修飾方法合成獲得。

本發(fā)明所述的薰衣草中的酚酸類化合物，采用高分辨質(zhì)譜、一維和二維核磁共振譜等現(xiàn)代波譜手段確定其結(jié)構(gòu)，結(jié)構(gòu)鑒定過(guò)程如下：

式(ⅰ)化合物α(s)-2-乙酰氧基-3-(3,4-二羥基苯基)-丙酸甲酯為黃色無(wú)定型粉末，[α]d²⁵-1.0°(c0.1,meoh)；uv(meoh)λmax(logε)280(3.33)nm；hr-esi-ms給出準(zhǔn)分子離子峰m/z253.0743[m-h]^-(計(jì)算值為c12h13o6253.0743)，確定其分子式為c12h14o6；根據(jù)¹h，¹³cnmr以及二維核磁共振數(shù)據(jù)確定其結(jié)構(gòu)為α(s)-2-乙酰氧基-3-(3,4-二羥基苯基)-丙酸甲酯，其¹h和¹³cnmr數(shù)據(jù)歸屬見(jiàn)表1[600mhz(¹h)，150mhz(¹³c)，溶劑：dmso]。

表1.式(ⅰ)化合物的¹h和¹³cnmr數(shù)據(jù)[δ(ppm),j(hz)]

式(ⅱ)化合物3-(7,8-二羥基二苯并[b,d]呋喃)丙烯酸-[α(r)-(1-甲氧羰基)-2-(3,4-二羥基)苯基乙醇]酯為黃色油狀物，[α]d²⁵+49.4°(c0.09,meoh)；uv(meoh)λmax(logε)354(4.02)nm；根據(jù)hr-esi-ms給出準(zhǔn)分子離子峰m/z463.1184[m-h]^-(計(jì)算值為c25h19o9463.1107)，確定其分子式為c25h20o9；根據(jù)¹h，¹³cnmr以及二維核磁共振數(shù)據(jù)確定其結(jié)構(gòu)為3-(7,8-二羥基二苯并[b,d]呋喃)丙烯酸-[α(r)-(1-甲氧羰基)-2-(3,4-二羥基)苯基乙醇]酯。其¹h和¹³cnmr數(shù)據(jù)歸屬見(jiàn)表2[400mhz(¹h)，100mhz(¹³c)，溶劑：dmso]。

式(ⅲ)化合物3-(6,7-二羥基-2-(9-芴酮)丙酸-[α(s)-(1-甲氧羰基)-2-(3,4-二羥基)苯基乙醇]酯為棕紅色油狀物，[α]d²⁵-7.0°(c0.1,meoh)；uv(meoh)λmax(logε)199(4.62)nm，280(4.28)nm；根據(jù)hr-esi-ms給出準(zhǔn)分子離子峰m/z477.1300[m-h]^-(計(jì)算值為c26h21o9477.1264)，確定其分子式為c26h22o9；根據(jù)¹h，¹³cnmr以及二維核磁共振數(shù)據(jù)確定其結(jié)構(gòu)為3-(6,7-二羥基-2-(9-芴酮)丙酸-[α(s)-(1-甲氧羰基)-2-(3,4-二羥基)苯基乙醇]酯。其¹h和¹³cnmr數(shù)據(jù)歸屬見(jiàn)表2[400mhz(¹h)，100mhz(¹³c)，溶劑：dmso]。

表2.式(ⅱ)、式(ⅲ)化合物的¹h和¹³cnmr數(shù)據(jù)[δ(ppm),j(hz)]

式(ⅳ)化合物3-(4-(3,4-二羥基聯(lián)二苯)丙烯酸-[α(r)-(1-甲氧羰基)-2-(3,4-二羥基)苯基乙醇]酯為黃色無(wú)定型粉末，[α]d²⁵+18.0°(c0.1,meoh)；uv(meoh)λmax(logε)283(3.89)nm，334(4.05)nm；根據(jù)hr-esi-ms給出準(zhǔn)分子離子峰m/z449.1409[m-h]^-(計(jì)算值為c25h21o8449.1315)，確定其分子式為c25h22o8；根據(jù)¹h，¹³cnmr以及二維核磁共振數(shù)據(jù)確定其結(jié)構(gòu)為3-(4-(3,4-二羥基聯(lián)二苯)丙烯酸-[α(r)-(1-甲氧羰基)-2-(3,4-二羥基)苯基乙醇]酯。其¹h和¹³cnmr歸屬見(jiàn)表2[400mhz(¹h)，100mhz(¹³c)，ddmso]。

式(ⅴ)化合物3-(3-(3,4-二羥基聯(lián)二苯)丙烯酸-[α(r)-(1-甲氧羰基)-2-(3,4-二羥基)苯基乙醇]酯為黃色無(wú)定型粉末，[α]d²⁵+14.0°(c0.1,meoh)；uv(meoh)201(4.40)nm，276(4.12)nm；根據(jù)hr-esi-ms給出準(zhǔn)分子離子峰m/z449.1391[m-h]^-(計(jì)算值為c25h21o8449.1315)，確定其分子式為c25h22o8。根據(jù)¹h，¹³cnmr以及二維核磁共振數(shù)據(jù)確定其結(jié)構(gòu)為3-(3-(3,4-二羥基聯(lián)二苯)丙烯酸-[α(r)-(1-甲氧羰基)-2-(3,4-二羥基)苯基乙醇]酯；其¹h和¹³cnmr歸屬見(jiàn)表3[400mhz(¹h)，100mhz(¹³c)，dmso]。

表3.式(ⅳ)、式(ⅴ)化合物的¹h和¹³cnmr數(shù)據(jù)[δ(ppm),j(hz)]

式(ⅵ)化合物α(r)-2-羥基-3-(6,7-二羥基-3,4苯并香豆素)丙酸甲酯為褐色無(wú)定型粉末，[α]d²⁵+0.5°(c0.2,meoh)；uv(meoh)λmax(logε)236(4.17)nm，279(3.85)nm，321(3.84)nm；根據(jù)hr-esi-ms給出準(zhǔn)分子離子峰m/z329.0761[m-h]^-(計(jì)算值為c17h13o7329.0740)，確定其分子式為c17h14o7。根據(jù)¹h，¹³cnmr以及二維核磁共振數(shù)據(jù)確定其結(jié)構(gòu)為α(r)-2-羥基-3-(6,7-二羥基-3,4苯并香豆素)丙酸甲酯。其¹h和¹³cnmr數(shù)據(jù)歸屬見(jiàn)表4[400mhz(¹h)，100mhz(¹³c)，溶劑：dmso]。

表4.式(ⅵ)化合物的¹h和¹³cnmr數(shù)據(jù)[δ(ppm),j(hz)]

附圖說(shuō)明

圖1為本發(fā)明所述式(ⅰ)化合物的¹h核磁共振譜圖；

圖2為本發(fā)明所述式(ⅰ)化合物的¹³c核磁共振譜圖；

圖3為本發(fā)明所述式(ⅰ)化合物的高分辨質(zhì)譜圖；

圖4為本發(fā)明所述式(ⅱ)化合物的¹h核磁共振譜圖；

圖5為本發(fā)明所述式(ⅱ)化合物的¹³c核磁共振譜圖；

圖6為本發(fā)明所述式(ⅱ)化合物的高分辨質(zhì)譜圖；

圖7為本發(fā)明所述式(ⅲ)化合物的¹h核磁共振譜圖；

圖8為本發(fā)明所述式(ⅲ)化合物的¹³c核磁共振譜圖；

圖9為本發(fā)明所述式(ⅲ)化合物的高分辨質(zhì)譜圖；

圖10為本發(fā)明所述式(ⅳ)化合物的¹h核磁共振譜圖；

圖11為本發(fā)明所述式(ⅳ)化合物的¹³c核磁共振譜圖；

圖12為本發(fā)明所述式(ⅳ)化合物的高分辨質(zhì)譜圖；

圖13為本發(fā)明所述式(ⅴ)化合物的¹h核磁共振譜圖；

圖14為本發(fā)明所述式(ⅴ)化合物的¹³c核磁共振譜圖；

圖15為本發(fā)明所述式(ⅴ)化合物的高分辨質(zhì)譜圖；

圖16為本發(fā)明所述式(ⅵ)化合物的¹h核磁共振譜圖；

圖17為本發(fā)明所述式(ⅵ)化合物的¹³c核磁共振譜圖；

圖18為本發(fā)明所述式(ⅵ)化合物的高分辨質(zhì)譜圖。

具體實(shí)施方式

實(shí)施例1

a、以薰衣草的水蒸氣蒸餾提取精油后產(chǎn)生的殘?jiān)鼮樵?，將干燥的薰衣草殘?jiān)?3kg，粉碎后置入滲漉罐中，室溫環(huán)境下用130l體積濃度70％的乙醇水溶液進(jìn)行滲漉提取，將提取液減壓濃縮、烘干后得到薰衣草殘?jiān)偺崛∥铮?/p>

b、將步驟a得到的粗提物用蒸餾水分散，依次加入二氯甲烷、乙酸乙酯分別萃取，各溶劑萃取3-5次，將乙酸乙酯萃取液濃縮，得到乙酸乙酯萃取物浸膏；

c、將步驟b得到的乙酸乙酯萃取物浸膏用正相硅膠柱分離，以體積比100:1-0:1二氯甲烷-甲醇體系進(jìn)行梯度洗脫，依次收集洗脫液減壓濃縮后，進(jìn)行硅膠薄層層析跟蹤分析，合并相同流分，最終得到12個(gè)組分(e1-e12)；將e7段組分用正相硅膠柱進(jìn)行分離，以體積比100:1-0:1的二氯甲烷-甲醇體系進(jìn)行梯度洗脫，依次收集洗脫液減壓濃縮后，進(jìn)行硅膠薄層層析跟蹤分析，合并相同流分，得到組分e7a-e7m；將e7b段組分用正相硅膠柱進(jìn)行分離，以體積比100:1-0:1的三氯甲烷-甲醇體系進(jìn)行梯度洗脫，硅膠薄層層析法實(shí)時(shí)分析，得到組分e7b1-e7b16；將e7b6段組分用正相硅膠柱進(jìn)行分離，以體積比100:1-0:1的正己烷-乙酸乙酯體系進(jìn)行梯度洗脫，硅膠薄層層析法實(shí)時(shí)分析，得到組分e7b6a-e7b6p；將e7b6i段組分減壓濃縮蒸干后，采用制備反相柱(c185μm10×150mm)進(jìn)行純化，以濃度為35％的甲醇-水溶液等度洗脫，得到式(ⅰ)化合物為α(s)-2-乙酰氧基-3-(3,4-二羥基苯基)-丙酸甲酯；將e7d段組分用正相硅膠柱進(jìn)行分離，以體積比100:1-0:1的三氯甲烷-甲醇體系進(jìn)行梯度洗脫，得到組分e7d1-e7d11；將e7d7段組分經(jīng)rp-18反相柱分離，以濃度為10％-99％的甲醇-水溶液梯度洗脫，采用紫外檢測(cè)分析，合并相同流分，得到組分e7d7a-e7d7o；將e7d7i段組分經(jīng)rp-18反相柱分離，以濃度為10％-45％的甲醇-水溶液梯度洗脫，采用紫外檢測(cè)分析，收集30％甲醇-水溶液的部分，得到式(ⅵ)化合物為α(r)-2-羥基-3-(6,7-二羥基-3,4苯并香豆素)丙酸甲酯；將e7d7n段組分用葡聚糖凝膠lh-20凝膠柱層析進(jìn)行純化，無(wú)水甲醇洗脫，得到式(ⅱ)化合物為3-(7,8-二羥基二苯并[b,d]呋喃)丙烯酸-[α(r)-(1-甲氧羰基)-2-(3,4-二羥基)苯基乙醇]酯和式(ⅲ)化合物為3-(6,7-二羥基-2-(9-芴酮)丙酸-[α(s)-(1-甲氧羰基)-2-(3,4-二羥基)苯基乙醇]酯；及4個(gè)組分(e7d7n1-e7d7n4)；將e7d7n4段組分采用制備反相柱(c185μm10×150mm)進(jìn)行純化，以濃度為63％的甲醇-水溶液等度洗脫，得到式(ⅳ)化合物為3-(4-(3,4-二羥基聯(lián)二苯)丙烯酸-[α(r)-(1-甲氧羰基)-2-(3,4-二羥基)苯基乙醇]酯和式(ⅴ)化合物為3-(3-(3,4-二羥基聯(lián)二苯)丙烯酸-[α(r)-(1-甲氧羰基)-2-(3,4-二羥基)苯基乙醇]酯。

實(shí)施例2

a、以薰衣草的水蒸氣蒸餾提取精油后產(chǎn)生的殘?jiān)鼮樵?，取干燥的薰衣草殘?jiān)?3kg，粉碎后，在室溫環(huán)境下分別用35l體積濃度為30％和35l體積濃度為70％乙醇水溶液進(jìn)行滲漉提取，將兩次提取液合并后減壓濃縮、烘干后得到薰衣草殘?jiān)偺崛∥铮?/p>

b、將步驟a得到的粗提物用蒸餾水分散，依次加入三氯甲烷、乙酸乙酯分別萃取，各溶劑萃取3-5次，將乙酸乙酯萃取液濃縮，得到乙酸乙酯萃取物浸膏；

c、將步驟b得到的乙酸乙酯萃取物浸膏用正相硅膠柱分離，按體積比100:1-0:1的三氯甲烷-甲醇體系進(jìn)行梯度洗脫，依次收集洗脫液減壓濃縮后，進(jìn)行硅膠薄層層析(tlc)跟蹤分析，合并相同流分，最終得到12個(gè)組分(e1-e12)；將e7段組分用正相硅膠柱進(jìn)行分離，以體積比100:1-0:1的三氯甲烷-甲醇體系進(jìn)行梯度洗脫，依次收集洗脫液減壓濃縮后，進(jìn)行硅膠薄層層析跟蹤分析，合并相同流分，得到組分e7a-e7m；將e7b段組分用正相硅膠柱進(jìn)行分離，以體積比100:1-0:1的二氯甲烷-甲醇體系進(jìn)行梯度洗脫，硅膠薄層層析法實(shí)時(shí)分析，得到組分e7b1-e7b16；將e7b6段組分用正相硅膠柱進(jìn)行分離，以體積比100:1-0:1的環(huán)己烷-乙酸乙酯體系進(jìn)行梯度洗脫，硅膠薄層層析法實(shí)時(shí)分析，得到組分e7b6a-e7b6p；將e7b6i段組分減壓濃縮蒸干后，采用制備反相柱(c185μm10×150mm)進(jìn)行純化，以濃度為35％的甲醇-水(0.1％甲酸)溶液等度洗脫，得到式(ⅰ)化合物為α(s)-2-乙酰氧基-3-(3,4-二羥基苯基)-丙酸甲酯；將e7d段組分用正相硅膠柱進(jìn)行分離，以體積比100:1-0:1的二氯甲烷-甲醇體系進(jìn)行梯度洗脫，得到組分e7d1-e7d11；將e7d7段組分經(jīng)rp-18反相柱分離，以濃度為10％-99％的甲醇-水(0.1％甲酸)溶液梯度洗脫，采用紫外檢測(cè)分析，合并相同流分，得到組分e7d7a-e7d7o；將e7d7i段組分用經(jīng)rp-18反相柱分離，以濃度為10％-45％的甲醇-水(0.1％甲酸)溶液梯度洗脫，采用紫外檢測(cè)分析，收集30％甲醇-水(0.1％甲酸)溶液的部分，得到式(ⅵ)化合物為α(r)-2-羥基-3-(6,7-二羥基-3,4苯并香豆素)丙酸甲酯；將e7d7n段組分用葡聚糖凝膠lh-20凝膠柱層析進(jìn)行純化，以體積比三氯甲烷-甲醇＝1:1的溶液洗脫，得到式(ⅱ)化合物為3-(7,8-二羥基二苯并[b,d]呋喃)丙烯酸-[α(r)-(1-甲氧羰基)-2-(3,4-二羥基)苯基乙醇]酯和式(ⅲ)化合物為3-(6,7-二羥基-2-(9-芴酮)丙酸-[α(s)-(1-甲氧羰基)-2-(3,4-二羥基)苯基乙醇]酯，及4個(gè)組分(e7d7n1-e7d7n4)；將e7d7n4段組分采用制備反相柱(c185μm10×150mm)進(jìn)行純化，以濃度為63％的甲醇-水(0.1％甲酸)溶液等度洗脫，得到式(ⅳ)化合物為3-(4-(3,4-二羥基聯(lián)二苯)丙烯酸-[α(r)-(1-甲氧羰基)-2-(3,4-二羥基)苯基乙醇]酯和式(ⅴ)化合物為3-(3-(3,4-二羥基聯(lián)二苯)丙烯酸-[α(r)-(1-甲氧羰基)-2-(3,4-二羥基)苯基乙醇]酯。

實(shí)施例3

a、以薰衣草的水蒸氣蒸餾提取精油后產(chǎn)生的殘?jiān)鼮樵希「稍锏霓挂虏輾堅(jiān)?3kg，粉碎后，在室溫環(huán)境下用70l體積濃度為70％乙醇水溶液進(jìn)行冷浸提取，將提取液減壓濃縮、烘干后得到薰衣草殘?jiān)痔嵛铮?/p>

b、將步驟a得到的粗提物用蒸餾水分散，依次加入二氯甲烷、乙酸乙酯分別萃取，各溶劑萃取3-5次，將乙酸乙酯萃取液濃縮，得到乙酸乙酯萃取物浸膏；

c、將步驟b得到的乙酸乙酯萃取物浸膏用正相硅膠柱分離，按體積比100:1-0:1的二氯甲烷-甲醇體系進(jìn)行梯度洗脫，依次收集洗脫液減壓濃縮后，進(jìn)行硅膠薄層層析(tlc)跟蹤分析，合并相同流分，最終得到12個(gè)組分(e1-e12)；將e7段組分用正相硅膠柱進(jìn)行分離，以體積比100:1-0:1的三氯甲烷-甲醇體系進(jìn)行梯度洗脫，依次收集洗脫液減壓濃縮后，進(jìn)行硅膠薄層層析跟蹤分析，合并相同流分，得到組分e7a-e7m；將e7b段組分用正相硅膠柱進(jìn)行分離，以體積比100:1-0:1的三氯甲烷-甲醇體系進(jìn)行梯度洗脫，硅膠薄層層析法實(shí)時(shí)分析，得到組分e7b1-e7b16；將e7b6段組分用正相硅膠柱進(jìn)行分離，以體積比100:1-0:1的正己烷-丙酮體系進(jìn)行梯度洗脫，硅膠薄層層析法實(shí)時(shí)分析，得到組分e7b6a-e7b6p；將e7b6i段組分減壓濃縮蒸干后，采用制備反相柱(c185μm10×150mm)進(jìn)行純化，以濃度為52％的乙腈-水溶液等度洗脫，得到式(ⅰ)化合物為α(s)-2-乙酰氧基-3-(3,4-二羥基苯基)-丙酸甲酯；將e7d段組分用正相硅膠柱進(jìn)行分離，以體積比100:1-0:1的二氯甲烷-甲醇體系進(jìn)行梯度洗脫，得到組分e7d1-e7d11；將e7d7段組分經(jīng)rp-18反相柱分離，以濃度為10％-99％的乙腈-水溶液梯度洗脫，采用紫外檢測(cè)分析，合并相同流分，得到組分e7d7a-e7d7j；將e7d7g段組分經(jīng)rp-18反相柱分離，以濃度為10％-65％的乙腈-水溶液梯度洗脫，采用紫外檢測(cè)分析，收集45％乙腈-水溶液的部分，得到式(ⅵ)化合物為α(r)-2-羥基-3-(6,7-二羥基-3,4苯并香豆素)丙酸甲酯；將e7d7i段組分用葡聚糖凝膠lh-20凝膠柱層析進(jìn)行純化，以體積比二氯甲烷-甲醇＝1:1的溶液洗脫，得到式(ⅱ)化合物為3-(7,8-二羥基二苯并[b,d]呋喃)丙烯酸-[α(r)-(1-甲氧羰基)-2-(3,4-二羥基)苯基乙醇]酯和式(ⅲ)化合物為3-(6,7-二羥基-2-(9-芴酮)丙酸-[α(s)-(1-甲氧羰基)-2-(3,4-二羥基)苯基乙醇]酯，及4個(gè)組分(e7d7i1-e7d7i4)；將e7d7i4段組分采用制備反相柱(c185μm10×150mm)進(jìn)行純化，以濃度為75％的乙腈-水溶液等度洗脫，得到式(ⅳ)化合物為3-(4-(3,4-二羥基聯(lián)二苯)丙烯酸-[α(r)-(1-甲氧羰基)-2-(3,4-二羥基)苯基乙醇]酯和式(ⅴ)化合物為3-(3-(3,4-二羥基聯(lián)二苯)丙烯酸-[α(r)-(1-甲氧羰基)-2-(3,4-二羥基)苯基乙醇]酯。

實(shí)施例4

a、以薰衣草的水蒸氣蒸餾提取精油后產(chǎn)生的殘?jiān)鼮樵?，取干燥的薰衣草殘?jiān)?3kg，粉碎后，在室溫環(huán)境下用90l體積濃度為50％乙醇水溶液進(jìn)行冷浸提取，將提取液減壓濃縮、烘干后得到薰衣草殘?jiān)痔崛∥铮?/p>

b、將步驟a得到的粗提物用蒸餾水分散，依次加入三氯甲烷、乙酸乙酯分別萃取，各溶劑萃取3-5次，將乙酸乙酯萃取液濃縮，得到乙酸乙酯萃取物浸膏；

c、將步驟b得到的乙酸乙酯萃取物浸膏用正相硅膠柱分離，按體積比100:1-0:1三氯甲烷-甲醇體系進(jìn)行梯度洗脫，依次收集洗脫液減壓濃縮后，進(jìn)行硅膠薄層層析(tlc)跟蹤分析，合并相同流分，最終得到12個(gè)組分(e1-e12)；將e7段組分用正相硅膠柱進(jìn)行分離，以體積比100:1-0:1的二氯甲烷-甲醇體系進(jìn)行梯度洗脫，依次收集洗脫液減壓濃縮后，進(jìn)行硅膠薄層層析跟蹤分析，合并相同流分，得到組分e7a-e7m；將e7b段組分用正相硅膠柱進(jìn)行分離，以體積比100:1-0:1的二氯甲烷-甲醇體系進(jìn)行梯度洗脫，硅膠薄層層析法實(shí)時(shí)分析，得到組分e7b1-e7b16；將e7b6段組分用正相硅膠柱進(jìn)行分離，以體積比100:1-0:1的環(huán)己烷-丙酮體系進(jìn)行梯度洗脫，硅膠薄層層析法實(shí)時(shí)分析，得到組分e7b6a-e7b6p；將e7b6i段組分減壓濃縮蒸干后，采用制備反相柱(c185μm10×150mm)進(jìn)行純化，以濃度為50％的乙腈-水(0.1％甲酸)溶液等度洗脫，得到式(ⅰ)化合物為α(s)-2-乙酰氧基-3-(3,4-二羥基苯基)-丙酸甲酯；將e7d段組分用正相硅膠柱進(jìn)行分離，以體積比100:1-0:1的三氯甲烷-甲醇體系進(jìn)行梯度洗脫，得到組分e7d1-e7d11；將e7d7段組分經(jīng)rp-18反相柱分離，以濃度為10％-99％的乙腈-水(0.1％甲酸)溶液梯度洗脫，采用紫外檢測(cè)分析，合并相同流分，得到組分e7d7a-e7d7j；將e7d7g段組分經(jīng)rp-18反相柱分離，以濃度為10％-65％的乙腈-水溶液梯度洗脫，采用紫外檢測(cè)分析，收集50％乙腈-水溶液的部分，得到式(ⅵ)化合物為α(r)-2-羥基-3-(6,7-二羥基-3,4苯并香豆素)丙酸甲酯；將e7d7i段組分用制備反相柱(c185μm10×150mm)進(jìn)行純化，以濃度為68％的甲醇-水溶液等度洗脫，得到式(ⅱ)化合物為3-(7,8-二羥基二苯并[b,d]呋喃)丙烯酸-[α(r)-(1-甲氧羰基)-2-(3,4-二羥基)苯基乙醇]酯，其他成分收集濃縮蒸干后再次用制備反相柱(c185μm10×150mm)進(jìn)行分離，以濃度為60％的甲醇-水(0.1％甲酸)溶液等度洗脫，得到式(ⅲ)化合物為3-(6,7-二羥基-2-(9-芴酮)丙酸-[α(s)-(1-甲氧羰基)-2-(3,4-二羥基)苯基乙醇]酯；式(ⅳ)化合物為3-(4-(3,4-二羥基聯(lián)二苯)丙烯酸-[α(r)-(1-甲氧羰基)-2-(3,4-二羥基)苯基乙醇]酯；式(ⅴ)化合物為3-(3-(3,4-二羥基聯(lián)二苯)丙烯酸-[α(r)-(1-甲氧羰基)-2-(3,4-二羥基)苯基乙醇]酯。

實(shí)施例5

a、以薰衣草的水蒸氣蒸餾提取精油后產(chǎn)生的殘?jiān)鼮樵?，取干燥的薰衣草殘?jiān)?3kg，粉碎后，用65l體積濃度為70％乙醇水溶液進(jìn)行加熱回流提取，溫度80℃，將提取液減壓濃縮、烘干后得到薰衣草殘?jiān)痔崛∥铮?/p>

b、將步驟a得到的粗提物用蒸餾水分散，依次加入二氯甲烷、乙酸乙酯分別萃取，各溶劑萃取3-5次，將乙酸乙酯萃取液濃縮，得到乙酸乙酯萃取物浸膏；

c、將步驟b得到的乙酸乙酯萃取物浸膏用正相硅膠柱分離，按體積比100:1-0:1的二氯甲烷-甲醇體系進(jìn)行梯度洗脫，依次收集洗脫液減壓濃縮后，進(jìn)行硅膠薄層層析(tlc)跟蹤分析，合并相同流分，最終得到12個(gè)組分(e1-e12)；將e7段組分采用rp-18反相柱分離，以濃度為10％-99％的甲醇-水溶液梯度洗脫，采用紫外檢測(cè)分析，合并相同流分，得到組分e7a-e7j；將e7h段組分用正相硅膠柱進(jìn)行分離，以體積比100:1-0:1的三氯甲烷-甲醇體系進(jìn)行梯度洗脫，得到組分e7h1-e7h11；將e7h7段組分經(jīng)rp-18反相柱分離，以濃度為10％-99％的甲醇-水(0.1％甲酸)溶液梯度洗脫，采用紫外檢測(cè)分析，合并相同流分，得到組分e7h7a-e7h7o；將e7h7j段組分經(jīng)rp-18反相柱分離，以濃度為10％-45％的甲醇-水溶液梯度洗脫，采用紫外檢測(cè)分析，收集濃度為30％甲醇-水溶液的部分，得到式(ⅵ)化合物為α(r)-2-羥基-3-(6,7-二羥基-3,4苯并香豆素)丙酸甲酯；將e7h7n段組分用葡聚糖凝膠lh-20凝膠柱層析進(jìn)行純化，無(wú)水甲醇洗脫，得到式(ⅱ)化合物為3-(7,8-二羥基二苯并[b,d]呋喃)丙烯酸-[α(r)-(1-甲氧羰基)-2-(3,4-二羥基)苯基乙醇]酯和式(ⅲ)化合物為3-(6,7-二羥基-2-(9-芴酮)丙酸-[α(s)-(1-甲氧羰基)-2-(3,4-二羥基)苯基乙醇]酯，及4個(gè)組分(e7h7n1-e7h7n4)；將e7h7n4段組分采用制備反相柱(c185μm10×150mm)進(jìn)行純化，以濃度為63％的甲醇-水溶液等度洗脫，得到式(ⅳ)化合物為3-(4-(3,4-二羥基聯(lián)二苯)丙烯酸-[α(r)-(1-甲氧羰基)-2-(3,4-二羥基)苯基乙醇]酯和式(ⅴ)化合物為3-(3-(3,4-二羥基聯(lián)二苯)丙烯酸-[α(r)-(1-甲氧羰基)-2-(3,4-二羥基)苯基乙醇]酯；將e7i段組分用正相硅膠柱進(jìn)行分離，以體積比100:1-0:1的三氯甲烷-甲醇題系進(jìn)行梯度洗脫，硅膠薄層層析法實(shí)時(shí)分析，得到組分e7i1-e7i16；將e7i6段組分用正相硅膠柱進(jìn)行分離，以體積比100:1-0:1的正己烷-乙酸乙酯體系進(jìn)行梯度洗脫，硅膠薄層層析法實(shí)時(shí)分析，得到組分e7i6a-e7i6p；將e7i6i段組分減壓濃縮蒸干后，采用制備反相柱(c185μm10×150mm)進(jìn)行純化，以濃度為20-50％的甲醇-水溶液梯度洗脫，得到式(ⅰ)化合物為α(s)-2-乙酰氧基-3-(3,4-二羥基苯基)-丙酸甲酯。

實(shí)施例6

a、以薰衣草的水蒸氣蒸餾提取精油后產(chǎn)生的殘?jiān)鼮樵?，取干燥的薰衣草殘?jiān)?3kg，粉碎后用100l體積濃度為95％乙醇水溶液進(jìn)行加熱回流提取，溫度80℃，將提取液減壓濃縮、烘干后得到薰衣草殘?jiān)痔崛∥铮?/p>

b、將步驟a得到的粗提物用蒸餾水分散，依次加入三氯甲烷、乙酸乙酯分別萃取，各溶劑萃取3-5次，將乙酸乙酯萃取液濃縮，得到乙酸乙酯萃取物浸膏；

c、將步驟b得到的乙酸乙酯萃取物浸膏用正相硅膠柱分離，按體積比100:1-0:1的三氯甲烷-甲醇體系進(jìn)行梯度洗脫，依次收集洗脫液減壓濃縮后，進(jìn)行硅膠薄層層析(tlc)跟蹤分析，合并相同流分，最終得到12個(gè)組分(e1-e12)；將e7段組分采用rp-18反相柱分離，以濃度為20％-99％的乙腈-水溶液梯度洗脫，采用紫外檢測(cè)分析，合并相同流分，得到組分e7a-e7i；將e7f段組分用正相硅膠柱進(jìn)行分離，以體積比100:1-0:1的二氯甲烷-甲醇體系進(jìn)行梯度洗脫，得到組分e7f1-e7f11；將e7f7段組分經(jīng)rp-18反相柱分離，以濃度為10％-99％的甲醇-水溶液梯度洗脫，采用紫外檢測(cè)分析，合并相同流分，得到組分e7f7a-e7f7o；將e7f7i段組分經(jīng)rp-18反相柱分離，以濃度為10％-45％的甲醇-水(0.1％甲酸)溶液梯度洗脫，采用紫外檢測(cè)分析，收集濃度為30％甲醇-水(0.1％甲酸)溶液的部分，得到式(ⅵ)化合物為α(r)-2-羥基-3-(6,7-二羥基-3,4苯并香豆素)丙酸甲酯；將e7f7n段組分用葡聚糖凝膠lh-20凝膠柱層析進(jìn)行純化，以體積比1:1的二氯甲烷-無(wú)水甲醇溶液洗脫，得到式(ⅱ)化合物為3-(7,8-二羥基二苯并[b,d]呋喃)丙烯酸-[α(r)-(1-甲氧羰基)-2-(3,4-二羥基)苯基乙醇]酯和式(ⅲ)為3-(6,7-二羥基-2-(9-芴酮)丙酸-[α(s)-(1-甲氧羰基)-2-(3,4-二羥基)苯基乙醇]酯化合物及4個(gè)組分(e7f7n1-e7f7n4)；將e7f7n4段組分采用制備反相柱(c185μm10×150mm)進(jìn)行純化，以濃度為63％的甲醇-水溶液等度洗脫，得到式(ⅳ)化合物為3-(4-(3,4-二羥基聯(lián)二苯)丙烯酸-[α(r)-(1-甲氧羰基)-2-(3,4-二羥基)苯基乙醇]酯和式(ⅴ)化合物為3-(3-(3,4-二羥基聯(lián)二苯)丙烯酸-[α(r)-(1-甲氧羰基)-2-(3,4-二羥基)苯基乙醇]酯；將e7h段組分用正相硅膠柱進(jìn)行分離，以體積比100:1-0:1的二氯甲烷-甲醇體系進(jìn)行梯度洗脫，硅膠薄層層析法實(shí)時(shí)分析，得到組分e7h1-e7h16；將e7h6段組分用正相硅膠柱進(jìn)行分離，以體積比100:1-0:1的正己烷-丙酮體系進(jìn)行梯度洗脫，硅膠薄層層析法實(shí)時(shí)分析，得到組分e7h6a-e7h6m；將e7h6g段組分減壓濃縮蒸干后，采用制備反相柱(c185μm10×150mm)進(jìn)行純化，以濃度為48％的乙腈-水溶液等度洗脫，得到式(ⅰ)化合物為α(s)-2-乙酰氧基-3-(3,4-二羥基苯基)-丙酸甲酯。

實(shí)施例7

式(ⅰ)—式(ⅵ)化合物的抗氧化活性測(cè)試：

本實(shí)驗(yàn)選擇1,1-二苯基-2-三硝基苯肼(dpph)自由基清除實(shí)驗(yàn)，檢測(cè)式(ⅰ)—式(ⅵ)化合物的抗氧化活性。

實(shí)驗(yàn)方法：精密稱取7.8864mg1,1-二苯基-2-三硝基苯肼(dpph)，用無(wú)水乙醇溶解，定容至10ml，配制成2mm濃度的dpph溶液作為儲(chǔ)備液待用，避光放置；將1,1-二苯基-2-三硝基苯肼(dpph)儲(chǔ)備液稀釋10倍至2×10^-4mol/l濃度，測(cè)其在515nm波長(zhǎng)下的紫外吸光(od)值，并適當(dāng)調(diào)整溶液濃度使其od值約為0.7，得到1,1-二苯基-2-三硝基苯肼(dpph)工作液；式(ⅰ)—式(ⅵ)化合物用乙醇溶液溶解，作為樣品組；以維生素c作為陽(yáng)性對(duì)照；按表4配制反應(yīng)體系.樣品溶液與1,1-二苯基-2-三硝基苯肼(dpph)溶液室溫避光反應(yīng)30min后，測(cè)量其515nm處的光吸收值，平行測(cè)定3次；

表4dpph實(shí)驗(yàn)反應(yīng)體系配制

按以下公式進(jìn)行計(jì)算

清除率(％)＝【1-(at-b)/(a0-a調(diào))】×100％

半數(shù)抑制率ic50值即降低1,1-二苯基-2-三硝基苯肼(dpph)吸收50％時(shí)樣品的濃度，采用線性回歸分析得到；

實(shí)驗(yàn)結(jié)果：式(ⅰ)—式(ⅵ)化合物的半數(shù)抑制率(ic50)見(jiàn)表5；

表5式(ⅰ)—式(ⅵ)化合物的半數(shù)抑制率(ic50)

由表可知，與陽(yáng)性對(duì)照維生素c相比，式(ⅰ)—式(ⅵ)化合物的ic50顯著降低，即式(ⅰ)—式(ⅵ)化合物具有很強(qiáng)的抗氧化活性。