本發(fā)明涉及一種魚蛋白肽的提取方法，特別涉及一種從復(fù)合低值海產(chǎn)魚中提取多肽液的方法。
背景技術(shù)：
由蛋白質(zhì)酶解得到的生物活性肽有著多種多樣的生理調(diào)節(jié)、維持健康、治療疾病的作用，特別是隨著人們越來越注重天然制品，其潛在的市場前景十分廣闊。浙江省具有豐富的海洋資源，每年都會(huì)產(chǎn)生大量的低值海產(chǎn)品及加工廢棄物。因此開展海產(chǎn)品綜合利用，變廢為寶，大大提高海產(chǎn)品的經(jīng)濟(jì)價(jià)值，對(duì)推動(dòng)海產(chǎn)品加工業(yè)的發(fā)展有著重要意義。近年來，國家將全民健身發(fā)展提到國家戰(zhàn)略水平，全民運(yùn)動(dòng)已經(jīng)深入人心，運(yùn)動(dòng)人群對(duì)安全有效的食品級(jí)抗疲勞補(bǔ)給劑的需求量不斷增大。若將這些低值海產(chǎn)魚類用來生產(chǎn)抗疲勞營養(yǎng)補(bǔ)給劑，可以拓寬低值海產(chǎn)魚類深加工途徑。
技術(shù)實(shí)現(xiàn)要素：
本發(fā)明的目的在于提供一種從復(fù)合低值海產(chǎn)魚中提取多肽液的方法，該方法以復(fù)合低值海產(chǎn)魚為原料生產(chǎn)高附加值的多肽液產(chǎn)品，制得的產(chǎn)品蛋白含量豐富、具有抗疲勞效果。
本發(fā)明解決其技術(shù)問題所采用的技術(shù)方案是：
一種從復(fù)合低值海產(chǎn)魚中提取多肽液的方法，其特征在于該方法包括如下步驟：
a)前處理：復(fù)合低值海產(chǎn)魚清洗干凈，切碎，得到魚糜；
b)復(fù)合酶酶解：將所得魚糜按1:4-10的質(zhì)量比例與水混合均勻，然后向混合物中加入復(fù)合酶，其中復(fù)合酶的用量為魚糜總質(zhì)量的2%-3.5%，將ph調(diào)節(jié)至6.0-8.0，然后在40-70℃溫度下酶解3-6小時(shí)，得到酶解液；
c)滅酶：將上述酶解液煮沸，保持沸騰狀態(tài)下10-20分鐘，使水解酶失活；
d)過濾：將滅酶后的酶解液用80-90目的絲網(wǎng)過濾，濾液在3000-4000rpm的轉(zhuǎn)速下離心15-25分鐘，得上清液；
e)濃縮滅菌：將上清液加熱濃縮，得到濃縮液，濃縮液滅菌后得到無菌的多肽液。使用復(fù)合酶可以使原料充分酶解，提高得率。上清液加熱濃縮時(shí)，一般濃縮至原來體積的二分之一至三分之一。
作為優(yōu)選，復(fù)合酶是由動(dòng)物蛋白酶、中性蛋白酶和堿性蛋白酶三者以2-6:1-2:1的重量比混合得到。發(fā)明人經(jīng)正交實(shí)驗(yàn)法比較得出結(jié)論，采用比例組合的復(fù)合酶最終多肽液得率高，酶解液的氨基態(tài)氮含量高，水解度較佳。
作為優(yōu)選，所述中性蛋白酶的活力為10萬、15萬或者20萬。
作為優(yōu)選，所述復(fù)合低值海產(chǎn)魚為鮐鲅魚或魷魚或兩者的組合，當(dāng)復(fù)合低值海產(chǎn)魚為鮐鲅魚和魷魚時(shí)，鮐鲅魚和魷魚的質(zhì)量比為5-1:1。
作為優(yōu)選，步驟e)中所述的滅菌是在102-105℃溫度下保溫15-30分鐘。
作為優(yōu)選，所述無菌的多肽液的水解度值為29.08%-35.89%，蛋白含量307.2856μg/mg—513.7012μg/mg。
本發(fā)明的有益效果是：本發(fā)明以海產(chǎn)品中價(jià)格比較低廉的鮐鲅魚、魷魚為原料，經(jīng)過多酶復(fù)合水解等一系列加工工藝得到蛋白肽液，本發(fā)明的提取工藝簡單、水解度高，蛋白含量豐富，經(jīng)動(dòng)物實(shí)驗(yàn)和人體試驗(yàn)證明抗疲勞效果比較顯著。
具體實(shí)施方式
下面通過具體實(shí)施例，對(duì)本發(fā)明的技術(shù)方案作進(jìn)一步的具體說明。應(yīng)當(dāng)理解，本發(fā)明的實(shí)施并不局限于下面的實(shí)施例，對(duì)本發(fā)明所做的任何形式上的變通和/或改變都將落入本發(fā)明保護(hù)范圍。
在本發(fā)明中，若非特指，所有的份、百分比均為重量單位，所采用的設(shè)備和原料等均可從市場購得或是本領(lǐng)域常用的。下述實(shí)施例中的方法，如無特別說明，均為本領(lǐng)域的常規(guī)方法。
動(dòng)物蛋白酶，廣西南寧龐博生物工程有限公司；
中性蛋白酶，廣西南寧龐博生物工程有限公司；
堿性蛋白酶，廣西南寧龐博生物工程有限公司。
實(shí)施例1
一種從復(fù)合低值海產(chǎn)魚中提取多肽液的方法,該方法具體為：
a)前處理：50g鮐鲅魚和10g魷魚清洗干凈，切碎。
b)復(fù)合酶酶解：將上述魚的混合物60g加入去離子水240ml，加入占魚的混合物總質(zhì)量的2%的復(fù)合酶，其中復(fù)合酶是由動(dòng)物蛋白酶：中性蛋白酶：堿性蛋白酶以6:2:1的重量比混合而成（動(dòng)物蛋白酶0.80g，酶活10萬的中性蛋白酶0.27g，堿性蛋白酶0.13g），ph調(diào)節(jié)在6.0，然后混合物在40℃溫度下酶解3小時(shí)。
c)滅酶：將上述酶解液煮沸，保持沸騰狀態(tài)下10分鐘，使水解酶失活。
d)過濾：將上述酶解液用80目的絲網(wǎng)過濾，濾液在3000rpm離心15分鐘，得到上清液。
e)濃縮滅菌：將上述上清液加熱濃縮至120ml，得到濃縮液，濃縮液在滅菌鍋102℃溫度下滅菌15分鐘，即得到無菌的多肽液，經(jīng)檢測其水解度值為29.08%，蛋白含量為307.2856μg/mg。
實(shí)施例2
a)前處理：45g鮐鲅魚和15g魷魚清洗干凈，切碎。
b)復(fù)合酶酶解：將上述魚的混合物60g加入去離子水420ml，加入占魚的混合物總質(zhì)量的2.80%的復(fù)合酶，其中復(fù)合酶是由動(dòng)物蛋白酶：中性蛋白酶：堿性蛋白酶以4:2:1的重量比混合而成（動(dòng)物蛋白酶0.96g，酶活15萬的中性蛋白酶0.48g，堿性蛋白酶0.24g），ph調(diào)節(jié)在7.0，然后混合物在50℃溫度下酶解4.5小時(shí)。
c)滅酶：將上述酶解液煮沸，保持沸騰狀態(tài)下15分鐘，使水解酶失活。
d)過濾：將上述酶解液用80目的絲網(wǎng)過濾，濾液在3500rpm離心20分鐘，得到上清液。
e)濃縮滅菌：將上述上清液加熱濃縮至210ml，得到濃縮液，濃縮液在滅菌鍋104℃溫度下滅菌25分鐘，即得到無菌的多肽液，經(jīng)檢測其水解度值為35.89%，蛋白含量為513.7012μg/mg。
實(shí)施例3
a)前處理：30g鮐鲅魚和30g魷魚清洗干凈，切碎。
a)復(fù)合酶酶解：將上述魚的混合物加入去離子水600ml，按魚的混合物總質(zhì)量的3.5%加入復(fù)合酶，其中復(fù)合酶是由動(dòng)物蛋白酶：中性蛋白酶：堿性蛋白酶以2:1:1的重量比混合而成（動(dòng)物蛋白酶1.05g，酶活20萬的中性蛋白酶0.525g，堿性蛋白酶0.525g），ph調(diào)節(jié)在8.0，然后在70℃溫度下酶解6小時(shí)。
b)滅酶：將上述酶解液煮沸，保持沸騰狀態(tài)下20分鐘，使水解酶失活。
c)過濾：將上述酶解液用80目的絲網(wǎng)過濾，濾液在4000rpm離心25分鐘，得到上清液。
d)濃縮滅菌：將上述上清液加熱濃縮至300ml，得到濃縮液，濃縮液在滅菌鍋105℃溫度下滅菌30分鐘，即得到無菌的多肽液，經(jīng)檢測其水解度值為32.83%，蛋白含量為450.1935μg/mg。
經(jīng)發(fā)明人實(shí)驗(yàn)證明，本發(fā)明制得的低值海洋魚類酶解產(chǎn)物可以明顯延長小鼠轉(zhuǎn)棒時(shí)間、負(fù)重游泳時(shí)間，降低血乳酸濃度和血清尿素氮水平，提高肝糖原含量。結(jié)論：低值海洋魚類酶解產(chǎn)物具有一定的抗疲勞效果。
以上所述的實(shí)施例只是本發(fā)明的一種較佳的方案，并非對(duì)本發(fā)明作任何形式上的限制，在不超出權(quán)利要求所記載的技術(shù)方案的前提下還有其它的變體及改型。