本發(fā)明涉及一種暗褐網(wǎng)柄牛肝菌液體菌種深層發(fā)酵新方法。屬食用真菌發(fā)酵領(lǐng)域。

背景技術(shù)：

暗褐網(wǎng)柄牛肝菌(phlebopusportentosus)，隸屬于牛肝菌目小牛肝菌科，是牛肝菌目中目前發(fā)現(xiàn)唯一能人工栽培的食用牛肝菌，廣泛分布于泛熱帶地區(qū)。其子實體個體肥大，味道鮮美，營養(yǎng)價值豐富，是云南南部及泰國東北部最受群眾喜愛的名貴食用菌之一。

目前暗褐網(wǎng)柄牛肝菌人工栽培基本采用固體菌種，栽培成本高，栽培周期長，出菇不整齊，嚴重制約著其產(chǎn)業(yè)化發(fā)展。

技術(shù)實現(xiàn)要素：

本發(fā)明提供了一種暗褐網(wǎng)柄牛肝菌液體菌種深層發(fā)酵新方法

本發(fā)明暗褐網(wǎng)柄牛肝菌液體菌種深層發(fā)酵新方法以發(fā)酵培養(yǎng)基配方為基礎(chǔ)，先將暗褐網(wǎng)柄牛肝菌原種進行一級深層發(fā)酵，讓液體菌種中的菌絲體進入快速增殖階段，得發(fā)酵種子液；隨后再將發(fā)酵種子液在無菌條件下迅速轉(zhuǎn)入二級發(fā)酵罐中擴大培養(yǎng)進行二級深層發(fā)酵，當發(fā)酵罐長滿菌絲體后，二級深層發(fā)酵結(jié)束。

按重量百分比計，所述液體菌種深層發(fā)酵培養(yǎng)基配方為：

所述發(fā)酵培養(yǎng)基配方中的碳源為葡萄糖、氮源為酵母膏。

所述將配制好的培養(yǎng)基用500ml的三角瓶分裝，然后用高壓鍋滅菌30min，冷卻后備用；

本發(fā)明一級深層發(fā)酵方法為在三角瓶中接入預先培養(yǎng)好的暗褐網(wǎng)柄牛肝菌原種，然后用回旋振蕩儀進行一級深層發(fā)酵培養(yǎng)，

培養(yǎng)條件為：培養(yǎng)基裝液量為容積的3/5-4/5；接種量為2-5％；

培養(yǎng)溫度：28-30℃；

光照條件：暗光培養(yǎng)；

培養(yǎng)轉(zhuǎn)速：120-150r/min；

發(fā)酵周期：5-6天；

ph:4.5-7，當菌絲體進入快速增殖階段一級發(fā)酵結(jié)束。

所述二級深層發(fā)酵方法為將一級深層發(fā)酵培養(yǎng)所的的發(fā)酵種子液在無菌條件下迅速轉(zhuǎn)入二級發(fā)酵罐中擴大培養(yǎng)，其培養(yǎng)設(shè)備為發(fā)酵罐，

培養(yǎng)條件為：培養(yǎng)基裝液量為發(fā)酵罐容積的3/5-4/5；

接種量為20-30％；

培養(yǎng)溫度：28-30℃；

光照條件：暗光培養(yǎng)；

攪拌速率：150-200r/min；

罐壓：0.02-0.05mpa；

發(fā)酵周期：7-9天；

ph:4.5-7,當發(fā)酵罐長滿菌絲體后深層發(fā)酵結(jié)束。

所述液體菌種深層發(fā)酵結(jié)束后，接種于暗褐網(wǎng)柄牛肝菌栽培基質(zhì)中既得栽培菌包。

所述碳源為葡萄糖，氮源為酵母膏。

本發(fā)明的優(yōu)點：

1、實現(xiàn)暗褐網(wǎng)柄牛肝菌液體菌種的工廠化生產(chǎn)，為暗褐網(wǎng)柄牛肝菌產(chǎn)業(yè)化人工栽培提供技術(shù)支持。

2、能縮短暗褐網(wǎng)柄牛肝菌栽培周期，提高栽培效率，降低暗褐網(wǎng)柄人工栽培成本，提高出菇整齊度。

具體實施方式

以下結(jié)合具體實施例，對本發(fā)明作進一步說明。

本發(fā)明首先提供了一種暗褐網(wǎng)柄牛肝菌液體菌種深層發(fā)酵培養(yǎng)基，按重量百分比計，所述液體菌種深層發(fā)酵培養(yǎng)基制備為：

所述碳源為葡萄糖，氮源為酵母膏。

本發(fā)明還提供一種暗褐網(wǎng)柄牛肝菌液體菌種深層發(fā)酵新方法，包括以下步驟：

(1)制備深層發(fā)酵培養(yǎng)基：以馬鈴薯10-20％(去皮、煮汁后用)，碳源1.5-2.0％，氮源0.2-0.4％，磷酸二氫鉀0.1-0.2％，硫酸鎂0.1-0.2％，ph值4.5-7，余量為水，

(2)將配制好的培養(yǎng)基用500ml的三角瓶分裝，然后用高壓鍋滅菌30min，冷卻后備用。

(3)在三角瓶中接入預先培養(yǎng)好的暗褐網(wǎng)柄牛肝菌原種，然后用回旋振蕩儀進行一級深層發(fā)酵培養(yǎng)，培養(yǎng)條件為：培養(yǎng)基裝液量為容積的3/5-4/5；接種量為2-5％；培養(yǎng)溫度：28-30℃；光照條件：暗光培養(yǎng)；培養(yǎng)轉(zhuǎn)速：120-150r/min；發(fā)酵周期：6-7天；ph:4.5-7，當菌絲體進入快速增殖階段一級發(fā)酵結(jié)束。

(4)二級深層發(fā)酵方法為將一級深層發(fā)酵培養(yǎng)所的的發(fā)酵種子液在無菌條件下迅速轉(zhuǎn)入二級發(fā)酵罐中擴大培養(yǎng)，其培養(yǎng)設(shè)備為發(fā)酵罐，培養(yǎng)條件為：培養(yǎng)基裝液量為發(fā)酵罐容積的3/5-4/5；接種量為20-30％；培養(yǎng)溫度：28-30℃；光照條件：暗光培養(yǎng)；攪拌速率：150-200r/min；罐壓：0.02-0.05mpa；發(fā)酵周期：7-9天；ph:4.5-7,當發(fā)酵罐長滿菌絲體后深層發(fā)酵結(jié)束。

以下例實施中的暗褐網(wǎng)柄牛肝菌菌種由云南省熱帶作物科學研究所在西雙版納野外分離并馴化所得，原種用pda固體培養(yǎng)基培養(yǎng)并保存。

實施例1一種暗褐網(wǎng)柄牛肝菌液體菌種深層發(fā)酵新方法

制備液體菌種深層發(fā)酵培養(yǎng)基：按重量百分比制備：以馬鈴薯20％(去皮煮汁)，碳源1.5％，氮源0.2％，磷酸二氫鉀0.1％，硫酸鎂0.1％，初始ph值6.0，余量為水。

將配制好的培養(yǎng)基用500ml的三角瓶分裝，然后用高壓鍋滅菌30min，冷卻后備用。

在三角瓶中接入預先培養(yǎng)好的暗褐網(wǎng)柄牛肝菌原種，然后用回旋振蕩儀進行一級深層發(fā)酵培養(yǎng)。

培養(yǎng)條件為：培養(yǎng)基裝液量為容積的3/5；接種量為2％；培養(yǎng)溫度：28℃；光照條件：暗光培養(yǎng)；培養(yǎng)轉(zhuǎn)速：120r/min；發(fā)酵周期：6-7天；初始ph值6.0，當菌絲體進入快速增殖階段一級發(fā)酵結(jié)束。

二級深層發(fā)酵方法為將一級深層發(fā)酵培養(yǎng)所的的發(fā)酵種子液在無菌條件下迅速轉(zhuǎn)入二級發(fā)酵罐中擴大培養(yǎng)，

培養(yǎng)條件為：培養(yǎng)基裝液量為發(fā)酵罐容積的4/5；接種量為20％；培養(yǎng)溫度：28℃；光照條件：暗光培養(yǎng)；攪拌速率：150r/min；罐壓：0.02-0.05mpa；發(fā)酵周期：7-9天；初始ph值6.0,當發(fā)酵罐長滿菌絲體后深層發(fā)酵結(jié)束。

本發(fā)明采用食用菌栽培中常用的液體菌種深層發(fā)酵方法，實現(xiàn)暗褐網(wǎng)柄牛肝菌液體菌種的工廠化生產(chǎn)，降低暗褐網(wǎng)柄牛肝菌人工栽培成本，提高人工栽培效率，縮短栽培周期。

實施例2一種暗褐網(wǎng)柄牛肝菌液體菌種深層發(fā)酵新方法

制備液體菌種深層發(fā)酵培養(yǎng)基：按重量百分比制備：以馬鈴薯20％(去皮煮汁)，碳源2.0％，氮源0.3％，磷酸二氫鉀0.2％，硫酸鎂0.1％，初始ph值6.5，余量為水。

將配制好的培養(yǎng)基用500ml的三角瓶分裝，然后用高壓鍋滅菌30min，冷卻后備用。

在三角瓶中接入預先培養(yǎng)好的暗褐網(wǎng)柄牛肝菌原種，然后用回旋振蕩儀進行一級深層發(fā)酵培養(yǎng)。

培養(yǎng)條件為：培養(yǎng)基裝液量為容積的4/5；接種量為3％；培養(yǎng)溫度：28℃；光照條件：暗光培養(yǎng)；培養(yǎng)轉(zhuǎn)速：130r/min；發(fā)酵周期：6-7天；初始ph值6.0，當菌絲體進入快速增殖階段一級發(fā)酵結(jié)束。

二級深層發(fā)酵方法為將一級深層發(fā)酵培養(yǎng)所的的發(fā)酵種子液在無菌條件下迅速轉(zhuǎn)入二級發(fā)酵罐中擴大培養(yǎng)，

培養(yǎng)條件為：培養(yǎng)基裝液量為發(fā)酵罐容積的4/5；接種量為20％；培養(yǎng)溫度：28℃；光照條件：暗光培養(yǎng)；攪拌速率：180r/min；罐壓：0.02-0.05mpa；發(fā)酵周期：7-9天；初始ph值6.0,當發(fā)酵罐長滿菌絲體后深層發(fā)酵結(jié)束。

實施例3一種暗褐網(wǎng)柄牛肝菌液體菌種深層發(fā)酵新方法

制備液體菌種深層發(fā)酵培養(yǎng)基：按重量百分比制備：以馬鈴薯10％(去皮煮汁)，碳源2.0％，氮源0.4％，磷酸二氫鉀0.1％，硫酸鎂0.2％，初始ph值6.0，余量為水。

將配制好的培養(yǎng)基用500ml的三角瓶分裝，然后用高壓鍋滅菌30min，冷卻后備用。

在三角瓶中接入預先培養(yǎng)好的暗褐網(wǎng)柄牛肝菌原種，然后用回旋振蕩儀進行一級深層發(fā)酵培養(yǎng)。

培養(yǎng)條件為：培養(yǎng)基裝液量為容積的3/5；接種量為4％；培養(yǎng)溫度：29℃；光照條件：暗光培養(yǎng)；培養(yǎng)轉(zhuǎn)速：140r/min；發(fā)酵周期：6-7天；初始ph值5.5，當菌絲體進入快速增殖階段一級發(fā)酵結(jié)束。

二級深層發(fā)酵方法為將一級深層發(fā)酵培養(yǎng)所的的發(fā)酵種子液在無菌條件下迅速轉(zhuǎn)入二級發(fā)酵罐中擴大培養(yǎng)，

培養(yǎng)條件為：培養(yǎng)基裝液量為發(fā)酵罐容積的4/5；接種量為30％；培養(yǎng)溫度：29℃；光照條件：暗光培養(yǎng)；攪拌速率：200r/min；罐壓：0.02-0.05mpa；發(fā)酵周期：7-9天；初始ph值6.0,當發(fā)酵罐長滿菌絲體后深層發(fā)酵結(jié)束。

最后，還需要注意的是，以上列舉的僅是本發(fā)明的三個具體實施例。顯然，本發(fā)明不限于以上實施例，還可以有許多變形。本領(lǐng)域的普通技術(shù)人員能從本發(fā)明公開的內(nèi)容直接導出或聯(lián)想到的所有變形，均應(yīng)認為是本發(fā)明的保護范圍。