本發(fā)明屬于微生物應(yīng)用技術(shù)領(lǐng)域，具體涉及一種混合培養(yǎng)鹽生紅胞藻的方法。

背景技術(shù)：

十八碳四烯酸(18:4n-3)(sa)是一種重要的ω-3系列多不飽和脂肪酸(δ6,9,12,15-全順式-十八碳四烯酸)，作為epa的前體物質(zhì)，sa在動物體內(nèi)的轉(zhuǎn)化效率比花生四烯酸高很多，具有輔助降低體內(nèi)膽固醇和甘油三酯的含量，促進體內(nèi)飽和脂肪酸代謝的作用，從而降低血液粘稠度，增進血液循環(huán)，提高組織供氧而消除疲勞。防止脂肪在血管壁的沉積，預(yù)防動脈粥樣硬化的形成和發(fā)展、預(yù)防腦血栓、腦溢血、高血壓等心血管疾病。目前sa主要來源于植物油(高sa大豆油)以及微藻。大豆來源主要存在sa相對含量低，受地域限制等諸多問題，從而導(dǎo)致氣味不良、純化成本高等。相反，微生物油脂(singlecelloils，sco)不但容易實現(xiàn)大規(guī)模生產(chǎn)，同時還克服了傳統(tǒng)高sa大豆存在受地域和氣候條件制約的問題，應(yīng)用前景廣闊。

鹽生紅胞藻(rhodomonassalinorr.salina)屬pyrenomonadaceae家族成員，為有鞭毛的單細胞紅藻。由于其富含長碳鏈多不飽和脂肪酸和天然色素-藻紅蛋白，r.salina已被視為一個極具潛力的資源藻種，在食品、化妝品、醫(yī)藥、科學(xué)研究以及水產(chǎn)養(yǎng)殖等方面應(yīng)用廣泛。r.salina合成的多不飽和脂肪酸十八碳四烯酸(sa,18:4n-3)和α-亞麻酸(ala18:3n-3)分別占胞內(nèi)總脂肪的20–30.2％和20.7–29.9％。

技術(shù)實現(xiàn)要素：

本部分的目的在于概述本發(fā)明的實施例的一些方面以及簡要介紹一些較佳實施例。在本部分以及本申請的說明書摘要和發(fā)明名稱中可能會做些簡化或省略以避免使本部分、說明書摘要和發(fā)明名稱的目的模糊，而這種簡化或省略不能用于限制本發(fā)明的范圍。

鑒于上述和/或現(xiàn)有混合培養(yǎng)鹽生紅胞藻的方法中存在的問題，提出了本發(fā)明。

因此，本發(fā)明的目的是提供一種混合培養(yǎng)鹽生紅胞藻的方法，大幅度提高了鹽生紅胞藻(r.salina)生產(chǎn)藻紅蛋白和多不飽和脂肪酸的效率，從而降低了生產(chǎn)成本。

為解決上述技術(shù)問題，本發(fā)明提供了如下技術(shù)方案：一種混合培養(yǎng)鹽生紅胞藻的方法，包括，利用種子培養(yǎng)基培養(yǎng)鹽生紅胞藻；利用甘油馴化培養(yǎng)；將馴化后的鹽生紅胞藻接種到甘油發(fā)酵培養(yǎng)基，利用不同波長和強度的光培養(yǎng)鹽生紅胞藻。

作為本發(fā)明所述混合培養(yǎng)鹽生紅胞藻的方法的一種優(yōu)選方案，其中：所述種子培養(yǎng)基包括甘油、na2edta、h3bo3、fecl3、mnso4、znso4、cocl2、hcl、hepesbufferph7.8、vitaminb12中的一種或幾種。

作為本發(fā)明所述混合培養(yǎng)鹽生紅胞藻的方法的一種優(yōu)選方案，其中：所述種子培養(yǎng)基包括占培養(yǎng)基質(zhì)量10％的甘油、na2edta·2h2o80mm、h3bo32mm、fecl3·6h2o5.02mm、mnso4·h2o0.01mm、znso4·7h2o0.001mm、cocl2·6h2o0.001mm、hcl0.1m、hepesbufferph7.8、vitaminb120.3g/l。

作為本發(fā)明所述混合培養(yǎng)鹽生紅胞藻的方法的一種優(yōu)選方案，其中：所述甘油發(fā)酵培養(yǎng)基包括甘油、nacl、mgso4·7h2o、kcl、nano3、cacl2·2h2o、kh2po4、tricineph7.8、nh4cl、na2edta·2h2o、h3bo3、fecl3·6h2o、mnso4·h2o、znso4·7h2o、cocl2·6h2o、hcl、hepesbufferph7.8或vitaminb12中的一種或幾種。

作為本發(fā)明所述混合培養(yǎng)鹽生紅胞藻的方法的一種優(yōu)選方案，其中：所述利用種子培養(yǎng)基培養(yǎng)鹽生紅胞藻，其是將鹽生紅胞藻以10～50％的接種量接入種子培養(yǎng)基中，培養(yǎng)溫度為21～30℃、100～200rpm下培養(yǎng)40～50h。

作為本發(fā)明所述混合培養(yǎng)鹽生紅胞藻的方法的一種優(yōu)選方案，其中：所述利用不同波長和強度的光培養(yǎng)，其是利用不同波長和強度的光在溫度為21～30℃，ph值為5～9，通氣速率為0.01～10m³·min^-1，光照強度50～500為μmolm^-2s^-1的條件下，培養(yǎng)5～14天。

作為本發(fā)明所述混合培養(yǎng)鹽生紅胞藻的方法的一種優(yōu)選方案，其中：所述利用不同波長和強度的光，其中，所述光包括紅光、藍光、紅藍混合光，其與發(fā)酵培養(yǎng)基液面的距離為15～30cm。

作為本發(fā)明所述混合培養(yǎng)鹽生紅胞藻的方法的一種優(yōu)選方案，其中：所述利用甘油馴化培養(yǎng)，其是以5％～50％的接種量依次接入不同比例混合培養(yǎng)基中逐步馴化，每次培養(yǎng)的溫度為21～30℃，ph值為5～9，通氣速率為0.01～10m³·min，光照強度為50～500μmolm^-2s^-1，培養(yǎng)時間為2～15天。

作為本發(fā)明所述混合培養(yǎng)鹽生紅胞藻的方法的一種優(yōu)選方案，其中：所述紅藍混合光，其混合比例為藍光：紅光＝1:1～5。

作為本發(fā)明所述混合培養(yǎng)鹽生紅胞藻的方法的一種優(yōu)選方案，其中：所述紅光，其波長為590～670nm，波峰為640nm；所述藍光，其波長420～510nm，波峰為460nm。

本發(fā)明具有的有益效果：

本發(fā)明提升了鹽生紅胞藻(r.salina)發(fā)酵時菌體的底物利用率、生長速度、生物量、藻紅蛋白，總蛋白、多不飽和脂肪酸和總脂含量，減少了鹽生紅胞藻(r.salina)收獲的問題，降低了生物質(zhì)濃縮以及目的產(chǎn)物提取的前處理成本。

附圖說明

為了更清楚地說明本發(fā)明實施例的技術(shù)方案，下面將對實施例描述中所需要使用的附圖作簡單地介紹，顯而易見地，下面描述中的附圖僅僅是本發(fā)明的一些實施例，對于本領(lǐng)域普通技術(shù)人員來講，在不付出創(chuàng)造性勞動性的前提下，還可以根據(jù)這些附圖獲得其它的附圖。其中：

圖1是本發(fā)明中白光照射條件下不同濃度甘油混合培養(yǎng)鹽生紅胞藻(r.salina)生長情況示意圖；

圖2是本發(fā)明中白光照射條件下不同濃度甘油混合培養(yǎng)鹽生紅胞藻(r.salina)藻紅蛋白合成情況示意圖；

圖3是本發(fā)明中紅光照射條件下不同濃度甘油混合培養(yǎng)鹽生紅胞藻(r.salina)生長情況示意圖；

圖4是本發(fā)明中紅光照射條件下不同濃度甘油混合培養(yǎng)鹽生紅胞藻(r.salina)藻紅蛋白合成情況示意圖；

圖5是本發(fā)明中藍光照射條件下不同濃度甘油混合培養(yǎng)鹽生紅胞藻(r.salina)生長情況示意圖；

圖6是本發(fā)明中藍光照射條件下不同濃度甘油混合培養(yǎng)鹽生紅胞藻(r.salina)藻紅蛋白合成情況示意圖；

圖7是本發(fā)明中紅藍混合光照射條件下不同濃度甘油混合培養(yǎng)鹽生紅胞藻(r.salina)生長情況示意圖；

圖8是本發(fā)明中紅藍混合光照射條件下不同濃度甘油混合培養(yǎng)鹽生紅胞藻(r.salina)藻紅蛋白合成情況示意圖。

具體實施方式

為使本發(fā)明的上述目的、特征和優(yōu)點能夠更加明顯易懂，下面結(jié)合具體實施例對本發(fā)明的具體實施方式做詳細的說明。

在下面的描述中闡述了很多具體細節(jié)以便于充分理解本發(fā)明，但是本發(fā)明還可以采用其他不同于在此描述的其它方式來實施，本領(lǐng)域技術(shù)人員可以在不違背本發(fā)明內(nèi)涵的情況下做類似推廣，因此本發(fā)明不受下面公開的具體實施例的限制。

其次，此處所稱的“一個實施例”或“實施例”是指可包含于本發(fā)明至少一個實現(xiàn)方式中的特定特征、結(jié)構(gòu)或特性。在本說明書中不同地方出現(xiàn)的“在一個實施例中”并非均指同一個實施例，也不是單獨的或選擇性的與其他實施例互相排斥的實施例。

實施例1：

鹽生紅胞藻(r.salina)種子培養(yǎng)基：

鹽生紅胞藻來源海水、甘油10％、na2edta·2h2o80mm、h3bo32mm、fecl3·6h2o5.02mm、mnso4·h2o0.01mm、znso4·7h2o0.001mm、cocl2·6h2o0.001mm、na2edta·2h2o50mm、hcl0.1m、hepesbufferph7.810mm、vitaminb120.3g/l。

種子培養(yǎng)兩代，每代在裝液量50ml/250ml三角瓶中進行，接種量20％(v/v)，23℃、120rpm下?lián)u床培養(yǎng)48h。

然后將種子培養(yǎng)基和甘油發(fā)酵培養(yǎng)基分別按照10:1、9:1、8:1、7:1、6:1、5:1、4:1、3:1、2:1、1:1、1:2、1:3、1:4、1:5、1:6、1:7、1:8、1:9和1:10混合，將鹽生紅胞藻以20％(v/v)的的接種量依次接入種子培養(yǎng)基和甘油發(fā)酵培養(yǎng)基比例為10:1的混合培養(yǎng)基中，白光強度為150μmolm^-2s^-1，發(fā)酵條件為23℃、通氣速率為0.1m³·min。當(dāng)菌體數(shù)量達到1×10⁵個/ml后，接入下一個混合培養(yǎng)基(即9:1)，以此類推，每個培養(yǎng)基培養(yǎng)的周期約為2～15天。

待最后一組培養(yǎng)完畢后，以20％(v/v)的接種量接入裝液量400ml/600ml爆氣式反應(yīng)器中，反應(yīng)器中為甘油發(fā)酵培養(yǎng)基，白光強度150μmolm^-2s^-1，甘油為1～10g/l，發(fā)酵條件為23℃、通氣速率為0.1m³·min，發(fā)酵10天。

甘油發(fā)酵培養(yǎng)基成分為，甘油1～10g/l、nacl310mm、mgso4·7h2o10mm、kcl8mm、nano312mm、cacl2·2h2o2mm、kh2po40.37mm、tricineph7.825mm、nh4cl0.5mm、na2edta·2h2o0.27mm、h3bo31.84mm、fecl3·6h2o0.018mm、mnso4·h2o0.097mm、znso4·7h2o0.007mm、cocl2·6h2o0.002mm、hcl0.1mm、fecl3·6h2o3mm、hepesbufferph7.810mm、vitaminb120.13g/l。

實驗結(jié)果如圖1和圖2所示：

結(jié)果表明：

白光強度150μmolm^-2s^-1，甘油濃度1g/l混合培養(yǎng)鹽生紅胞藻(r.salina)，9天達最大生物量2.21×10⁷個/ml，藻紅蛋白達到52.66mg/l，底物利用率為65.1％。總脂占干重18.32％，sa占總脂肪酸28.15％。

其中，總脂肪酸及總脂的測定如下，

總脂肪酸的提取：將冷凍干燥后的細胞研磨均勻，精確稱取約1.00g加入7ml20％hcl，75℃水浴震蕩60min。然后用20ml正己烷分三次提取脂質(zhì)，旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)脫溶后，用氮氣吹除殘留溶劑。稱重并計算總脂含量。

總脂含量(％)＝m1/m2*100％

式中，m1代表稱重得到總脂質(zhì)量(g)，m2代表用于脂質(zhì)提取的凍干菌絲體質(zhì)量(g)。

脂肪酸組成的測定：毛細管柱(cpsil-88:50.0m×250μm×0.20μm)，氮氣作為載氣，fid為檢測器。進樣口的溫度為250℃，每次進樣體積為1μl。柱溫條件：80℃持續(xù)2min，然后以10℃/min速度升溫到120℃，再以5℃/min升溫到180℃，持續(xù)2min，以2℃/min升溫到230℃，最后230℃持續(xù)5min。以歸一化法計算總脂中各脂肪酸的百分含量。

白光強度150μmolm^-2s^-1時，甘油濃度高于4g/l抑制鹽生紅胞藻(r.salina)的生長。

實施例2：

鹽生紅胞藻(r.salina)種子培養(yǎng)基：

鹽生紅胞藻來源海水、甘油10％、na2edta·2h2o80mm、h3bo32mm、fecl3·6h2o5.02mm、mnso4·h2o0.01mm、znso4·7h2o0.001mm、cocl2·6h2o0.001mm、na2edta·2h2o50mm、hcl0.1m、hepesbufferph7.810mm、vitaminb120.3g/l。

種子培養(yǎng)兩代，每代在裝液量50ml/250ml三角瓶中進行，接種量20％(v/v)，23℃、120rpm下?lián)u床培養(yǎng)48h。

然后將種子培養(yǎng)基和甘油發(fā)酵培養(yǎng)基分別按照10:1、9:1、8:1、7:1、6:1、5:1、4:1、3:1、2:1、1:1、1:2、1:3、1:4、1:5、1:6、1:7、1:8、1:9和1:10混合，將鹽生紅胞藻以20％(v/v)的的接種量依次接入種子培養(yǎng)基和甘油發(fā)酵培養(yǎng)基比例為10:1的混合培養(yǎng)基中，紅光強度為250μmolm^-2s^-1，發(fā)酵條件為23℃、通氣速率為0.1m³·min。當(dāng)菌體數(shù)量達到1×10⁵個/ml后，接入下一個混合培養(yǎng)基(即9:1)，以此類推，每個培養(yǎng)基培養(yǎng)的周期約為2～15天。

待最后一組培養(yǎng)完畢后，以20％(v/v)的接種量接入裝液量400ml/600ml爆氣式反應(yīng)器中，反應(yīng)器中為甘油發(fā)酵培養(yǎng)基，紅光強度250μmolm^-2s^-1，甘油為1～10g/l，發(fā)酵條件為23℃、通氣速率為0.1m³·min，發(fā)酵10天。其中，紅光的波長為590～670nm，波峰為640nm。

甘油發(fā)酵培養(yǎng)基成分為，甘油1～10g/l、nacl310mm、mgso4·7h2o10mm、kcl8mm、nano312mm、cacl2·2h2o2mm、kh2po40.37mm、tricineph7.825mm、nh4cl0.5mm、na2edta·2h2o0.27mm、h3bo31.84mm、fecl3·6h2o0.018mm、mnso4·h2o0.097mm、znso4·7h2o0.007mm、cocl2·6h2o0.002mm、hcl0.1mm、fecl3·6h2o3mm、hepesbufferph7.810mm、vitaminb120.13g/l。

實驗結(jié)果如圖3和圖4所示：

結(jié)果表明：

紅光強度250μmolm^-2s^-1，甘油濃度4g/l混合培養(yǎng)發(fā)酵鹽生紅胞藻(r.salina)，10天達最大生物量2.82×10⁷個/ml，藻紅蛋白達到42.12mg/l，底物利用率為80.2％?？傊几芍?7.53％，sa占總脂肪酸32.41％左右。

其中，總脂肪酸及總脂的測定如下，

總脂肪酸的提取：將冷凍干燥后的細胞研磨均勻，精確稱取約1.00g加入7ml20％hcl，75℃水浴震蕩60min。然后用20ml正己烷分三次提取脂質(zhì)，旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)脫溶后，用氮氣吹除殘留溶劑。稱重并計算總脂含量。

總脂含量(％)＝m1/m2*100％

式中，m1代表稱重得到總脂質(zhì)量(g)，m2代表用于脂質(zhì)提取的凍干菌絲體質(zhì)量(g)。

脂肪酸組成的測定：毛細管柱(cpsil-88:50.0m×250μm×0.20μm)，氮氣作為載氣，fid為檢測器。進樣口的溫度為250℃，每次進樣體積為1μl。柱溫條件：80℃持續(xù)2min，然后以10℃/min速度升溫到120℃，再以5℃/min升溫到180℃，持續(xù)2min，以2℃/min升溫到230℃，最后230℃持續(xù)5min。以歸一化法計算總脂中各脂肪酸的百分含量。

紅光強度250μmolm^-2s^-1時，甘油濃度高于5g/l抑制鹽生紅胞藻(r.salina)的生長。

實施例3：

鹽生紅胞藻(r.salina)種子培養(yǎng)基：

鹽生紅胞藻來源海水、甘油10％、na2edta·2h2o80mm、h3bo32mm、fecl3·6h2o5.02mm、mnso4·h2o0.01mm、znso4·7h2o0.001mm、cocl2·6h2o0.001mm、na2edta·2h2o50mm、hcl0.1m、hepesbufferph7.810mm、vitaminb120.3g/l。

種子培養(yǎng)兩代，每代在裝液量50ml/250ml三角瓶中進行，接種量20％(v/v)，23℃、120rpm下?lián)u床培養(yǎng)48h。

然后將種子培養(yǎng)基和甘油發(fā)酵培養(yǎng)基分別按照10:1、9:1、8:1、7:1、6:1、5:1、4:1、3:1、2:1、1:1、1:2、1:3、1:4、1:5、1:6、1:7、1:8、1:9和1:10混合，將鹽生紅胞藻以20％(v/v)的的接種量依次接入種子培養(yǎng)基和甘油發(fā)酵培養(yǎng)基比例為10:1的混合培養(yǎng)基中，藍光強度為150μmolm^-2s^-1，發(fā)酵條件為23℃、通氣速率為0.1m³·min。當(dāng)菌體數(shù)量達到1×10⁵個/ml后，接入下一個混合培養(yǎng)基(即9:1)，以此類推，每個培養(yǎng)基培養(yǎng)的周期約為2～15天。

待最后一組培養(yǎng)完畢后，以20％(v/v)的接種量接入裝液量400ml/600ml爆氣式反應(yīng)器中，反應(yīng)器中為甘油發(fā)酵培養(yǎng)基，藍光強度250μmolm^-2s^-1，甘油為1～10g/l，發(fā)酵條件為23℃、通氣速率為0.1m³·min，發(fā)酵10天。其中，藍光的波長為420～510nm，波峰為460nm。

甘油發(fā)酵培養(yǎng)基成分為，甘油1～10g/l、nacl310mm、mgso4·7h2o10mm、kcl8mm、nano312mm、cacl2·2h2o2mm、kh2po40.37mm、tricineph7.825mm、nh4cl0.5mm、na2edta·2h2o0.27mm、h3bo31.84mm、fecl3·6h2o0.018mm、mnso4·h2o0.097mm、znso4·7h2o0.007mm、cocl2·6h2o0.002mm、hcl0.1mm、fecl3·6h2o3mm、hepesbufferph7.810mm、vitaminb120.13g/l。

實驗結(jié)果如圖5和圖6所示：

結(jié)果表明：

藍光對鹽生紅胞藻中的天線色素的激發(fā)更加有效，從而提升葉綠體的轉(zhuǎn)化效率，為細胞提供更多的能量。

藍光強度250μmolm^-2s^-1，甘油濃度2g/l混合培養(yǎng)發(fā)酵鹽生紅胞藻(r.salina)，10天達最大生物量2.53×10⁶個/ml，藻紅蛋白達到44.51mg/l，底物利用率為81.8％。總脂占干重12.28％，sa占總脂肪酸26.29％左右。

其中，總脂肪酸及總脂的測定如下，

總脂肪酸的提取：將冷凍干燥后的細胞研磨均勻，精確稱取約1.00g加入7ml20％hcl，75℃水浴震蕩60min。然后用20ml正己烷分三次提取脂質(zhì)，旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)脫溶后，用氮氣吹除殘留溶劑。稱重并計算總脂含量。

總脂含量(％)＝m1/m2*100％

式中，m1代表稱重得到總脂質(zhì)量(g)，m2代表用于脂質(zhì)提取的凍干菌絲體質(zhì)量(g)。

脂肪酸組成的測定：毛細管柱(cpsil-88:50.0m×250μm×0.20μm)，氮氣作為載氣，fid為檢測器。進樣口的溫度為250℃，每次進樣體積為1μl。柱溫條件：80℃持續(xù)2min，然后以10℃/min速度升溫到120℃，再以5℃/min升溫到180℃，持續(xù)2min，以2℃/min升溫到230℃，最后230℃持續(xù)5min。以歸一化法計算總脂中各脂肪酸的百分含量。

藍光強度250μmolm^-2s^-1時，甘油濃度高于3g/l抑制鹽生紅胞藻(r.salina)的生長。

實施例4：

鹽生紅胞藻(r.salina)種子培養(yǎng)基：

鹽生紅胞藻來源海水、甘油10％、na2edta·2h2o80mm、h3bo32mm、fecl3·6h2o5.02mm、mnso4·h2o0.01mm、znso4·7h2o0.001mm、cocl2·6h2o0.001mm、na2edta·2h2o50mm、hcl0.1m、hepesbufferph7.810mm、vitaminb120.3g/l。

種子培養(yǎng)兩代，每代在裝液量50ml/250ml三角瓶中進行，接種量20％(v/v)，23℃、120rpm下?lián)u床培養(yǎng)48h。

然后將種子培養(yǎng)基和甘油發(fā)酵培養(yǎng)基分別按照10:1、9:1、8:1、7:1、6:1、5:1、4:1、3:1、2:1、1:1、1:2、1:3、1:4、1:5、1:6、1:7、1:8、1:9和1:10混合，將鹽生紅胞藻以20％(v/v)的的接種量依次接入種子培養(yǎng)基和甘油發(fā)酵培養(yǎng)基比例為10:1的混合培養(yǎng)基中，紅藍混合光強度為150μmolm^-2s^-1，發(fā)酵條件為23℃、通氣速率為0.1m³·min。當(dāng)菌體數(shù)量達到1×10⁵個/ml后，接入下一個混合培養(yǎng)基(即9:1)，以此類推，每個培養(yǎng)基培養(yǎng)的周期約為2～15天。

待最后一組培養(yǎng)完畢后，以20％(v/v)的接種量接入裝液量400ml/600ml爆氣式反應(yīng)器中，反應(yīng)器中為甘油發(fā)酵培養(yǎng)基，紅藍混合光強度250μmolm^-2s^-1，甘油為1～10g/l，發(fā)酵條件為23℃、通氣速率為0.1m³·min，發(fā)酵10天。其中，藍光的波長為420～510nm，波峰為460nm。其中，紅光的波長為590～670nm，波峰為640nm。

甘油發(fā)酵培養(yǎng)基成分為，甘油1～10g/l、nacl310mm、mgso4·7h2o10mm、kcl8mm、nano312mm、cacl2·2h2o2mm、kh2po40.37mm、tricineph7.825mm、nh4cl0.5mm、na2edta·2h2o0.27mm、h3bo31.84mm、fecl3·6h2o0.018mm、mnso4·h2o0.097mm、znso4·7h2o0.007mm、cocl2·6h2o0.002mm、hcl0.1mm、fecl3·6h2o3mm、hepesbufferph7.810mm、vitaminb120.13g/l。

實驗結(jié)果如圖7和圖8所示：

通過研究發(fā)現(xiàn)，此組鹽生紅胞藻對甘油的同化效率高于葡萄糖，甘油在進入三羧酸循環(huán)的過程中可以比葡萄糖提供更多的nadph，從而為多不飽和脂肪酸的合成提供更多的還原力。

結(jié)果表明：

紅藍混合光強度250μmolm^-2s^-1，甘油濃度1g/l混合培養(yǎng)發(fā)酵鹽生紅胞藻(r.salina)，10天達最大生物量6.60×10⁷個/ml，藻紅蛋白達到78.85mg/l，底物利用率為95.8％?？傊几芍?7.12％，sa占總脂肪酸32.04％左右。

其中，總脂肪酸及總脂的測定如下，

總脂肪酸的提取：將冷凍干燥后的細胞研磨均勻，精確稱取約1.00g加入7ml20％hcl，75℃水浴震蕩60min。然后用20ml正己烷分三次提取脂質(zhì)，旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)脫溶后，用氮氣吹除殘留溶劑。稱重并計算總脂含量。

總脂含量(％)＝m1/m2*100％

式中，m1代表稱重得到總脂質(zhì)量(g)，m2代表用于脂質(zhì)提取的凍干菌絲體質(zhì)量(g)。

脂肪酸組成的測定：毛細管柱(cpsil-88:50.0m×250μm×0.20μm)，氮氣作為載氣，fid為檢測器。進樣口的溫度為250℃，每次進樣體積為1μl。柱溫條件：80℃持續(xù)2min，然后以10℃/min速度升溫到120℃，再以5℃/min升溫到180℃，持續(xù)2min，以2℃/min升溫到230℃，最后230℃持續(xù)5min。以歸一化法計算總脂中各脂肪酸的百分含量。

紅藍混合光強度250μmolm^-2s^-1時，甘油濃度高于2g/l抑制鹽生紅胞藻(r.salina)的生長。

實施例5(對比實施例)

將布朗葡萄藻接種于同實施例1～4中的種子培養(yǎng)基中，培養(yǎng)兩代，每代在裝液量50ml/250ml三角瓶中進行，接種量20％(v/v)，23℃、120rpm下?lián)u床培養(yǎng)48h。

然后將種子培養(yǎng)基和甘油發(fā)酵培養(yǎng)基分別按照10:1、9:1、8:1、7:1、6:1、5:1、4:1、3:1、2:1、1:1、1:2、1:3、1:4、1:5、1:6、1:7、1:8、1:9和1:10混合，

將鹽生紅胞藻以20％(v/v)的的接種量依次接入種子培養(yǎng)基和甘油發(fā)酵培養(yǎng)基比例為10:1的混合培養(yǎng)基中，紅藍混合光強度為150μmolm^-2s^-1，發(fā)酵條件為23℃、通氣速率為0.1m³·min。當(dāng)菌體數(shù)量達到1×10⁵個/ml后，接入下一個混合培養(yǎng)基(即9:1)，以此類推，每個培養(yǎng)基培養(yǎng)的周期約為2～15天。

待最后一組培養(yǎng)完畢后，以20％(v/v)的接種量接入裝液量400ml/600ml爆氣式反應(yīng)器中，反應(yīng)器中為甘油發(fā)酵培養(yǎng)基，紅藍混合光強度250μmolm^-2s^-1，甘油為1～10g/l，發(fā)酵條件為23℃、通氣速率為0.1m³·min，發(fā)酵10天。其中，藍光的波長為420～510nm，波峰為460nm。其中，紅光的波長為590～670nm，波峰為640nm。

實驗結(jié)果為，布朗葡萄藻各組生長緩慢，在紅藍混合光下，只在甘油1～2g/l有少量產(chǎn)物，個別組幾乎不生長。

由此可見，本發(fā)明提升了鹽生紅胞藻(r.salina)發(fā)酵時菌體的底物利用率、生長速度、生物量、藻紅蛋白，總蛋白、多不飽和脂肪酸和總脂含量，減少了鹽生紅胞藻(r.salina)收獲的問題，降低了生物質(zhì)濃縮以及目的產(chǎn)物提取的前處理成本。

應(yīng)說明的是，以上實施例僅用以說明本發(fā)明的技術(shù)方案而非限制，盡管參照較佳實施例對本發(fā)明進行了詳細說明，本領(lǐng)域的普通技術(shù)人員應(yīng)當(dāng)理解，可以對本發(fā)明的技術(shù)方案進行修改或者等同替換，而不脫離本發(fā)明技術(shù)方案的精神和范圍，其均應(yīng)涵蓋在本發(fā)明的權(quán)利要求范圍當(dāng)中。