技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明屬于基因工程技術(shù)領(lǐng)域，具體涉及一種提高雙鏈DNA穩(wěn)定性的方法。

背景技術(shù)：

雙鏈DNA由于容易在體外受到損壞，而其又是科研活動(dòng)中非常重要的載體，使得如何避免其受到損壞而保持穩(wěn)定性成為重要的研究課題。

近幾年，利用氧化石墨烯作為雙鏈DNA穩(wěn)定劑受到了研究者的普遍關(guān)注，如《Nanoscale》刊載的“Adsorption of double-stranded DNA to graphene oxide preventing enzymatic digestion”和《Small》刊載的“Constraint of DNA on Functionalized Graphene Improves its Biostability and Specificity”均有所報(bào)道。

然而，上述方法所能提供的穩(wěn)定性還是有限的，如在高濃度內(nèi)切酶的情況下如何保持高度的穩(wěn)定性，現(xiàn)有的研究成果還沒(méi)有涉及。

技術(shù)實(shí)現(xiàn)要素：

針對(duì)現(xiàn)有技術(shù)的研究空白和缺點(diǎn)，本發(fā)明的目的在于提供一種提高雙鏈DNA穩(wěn)定性的方法，該方法包括步驟：

將雙鏈DNA保存于穩(wěn)定劑中，所述穩(wěn)定劑由如下組分組成：

聚乙酰亞胺納米粒，其粒徑為20~200 nm，分子量1800；

殼聚糖納米粒，其粒徑為20~200 nm，分子量7~8 KDa，脫乙酰度70~75%；

氧化石墨烯；

所述穩(wěn)定劑的溶液為水；

其中，聚乙酰亞胺納米粒、殼聚糖納米粒和氧化石墨烯的濃度分別為0.02~0.08 mg/ml、0.02~0.08 mg/ml和0.05~0.06μg/ml。

優(yōu)選的，所述聚乙酰亞胺納米粒的粒徑為150~180 nm。

優(yōu)選的，所述殼聚糖納米粒的粒徑為150~180 nm。

優(yōu)選的，所述聚乙酰亞胺納米粒的濃度為0.03 mg/ml。

優(yōu)選的，所述殼聚糖納米粒的濃度為0.03 mg/ml。

優(yōu)選的，所述氧化石墨烯的濃度為0.055μg/ml。

本發(fā)明的有益效果：

本發(fā)明可以使得雙鏈DNA在高濃度的內(nèi)切酶情況下保持高度的穩(wěn)定性，使得雙鏈DNA可以在更為復(fù)雜的環(huán)境下保存，利于相關(guān)科研工作和產(chǎn)業(yè)的發(fā)展。

附圖說(shuō)明

圖1為本發(fā)明瓊脂糖凝膠電泳結(jié)果圖，泳道1為實(shí)施例1穩(wěn)定劑對(duì)DNA保護(hù)結(jié)果，泳道2為實(shí)施例2穩(wěn)定劑對(duì)DNA保護(hù)結(jié)果，泳道3為實(shí)施例3穩(wěn)定劑對(duì)DNA保護(hù)結(jié)果，泳道4為對(duì)比實(shí)施例1穩(wěn)定劑對(duì)DNA保護(hù)結(jié)果，泳道5為對(duì)比實(shí)施例2穩(wěn)定劑對(duì)DNA保護(hù)結(jié)果，泳道6為對(duì)比實(shí)施例3穩(wěn)定劑對(duì)DNA保護(hù)結(jié)果。

具體實(shí)施方式

下面通過(guò)實(shí)施例對(duì)本發(fā)明進(jìn)行具體描述，有必要在此指出的是以下實(shí)施例只是用于對(duì)本發(fā)明進(jìn)行進(jìn)一步的說(shuō)明，不能理解為對(duì)本發(fā)明保護(hù)范圍的限制，該領(lǐng)域的技術(shù)熟練人員根據(jù)上述發(fā)明內(nèi)容所做出的一些非本質(zhì)的改進(jìn)和調(diào)整，仍屬于本發(fā)明的保護(hù)范圍。

下述實(shí)施例中的氧化石墨烯的制備方法參考如下文獻(xiàn)進(jìn)行：

Graphene and Graphene Oxide ：Synthesis， Properties， and Applications.Adv.Mater.2010，online。

實(shí)施例1

按下述配方制備穩(wěn)定劑：

聚乙酰亞胺納米粒，其粒徑為20~80 nm，分子量1800；

殼聚糖納米粒，其粒徑為20~80 nm，分子量7 KDa，脫乙酰度75%；

氧化石墨烯；

所述穩(wěn)定劑的溶液為水；

其中，聚乙酰亞胺納米粒、殼聚糖納米粒和氧化石墨烯的濃度分別為0.02 mg/ml、0.02 mg/ml和0.05μg/ml。

實(shí)施例2

按下述配方制備穩(wěn)定劑：

聚乙酰亞胺納米粒，其粒徑為150~180 nm，分子量1800；

殼聚糖納米粒，其粒徑為150~180nm，分子量8 KDa，脫乙酰度70%；

氧化石墨烯；

所述穩(wěn)定劑的溶液為水；

其中，聚乙酰亞胺納米粒、殼聚糖納米粒和氧化石墨烯的濃度分別為0.08 mg/ml、0.08 mg/ml和0.06μg/ml。

實(shí)施例3

按下述配方制備穩(wěn)定劑：

聚乙酰亞胺納米粒，其粒徑為160~200 nm，分子量1800；

殼聚糖納米粒，其粒徑為160~200 nm，分子量8 KDa，脫乙酰度75%；

氧化石墨烯；

所述穩(wěn)定劑的溶液為水；

其中，聚乙酰亞胺納米粒、殼聚糖納米粒和氧化石墨烯的濃度分別為0.03 mg/ml、0.03 mg/ml和0.055μg/ml。

對(duì)比實(shí)施例1

除了聚乙酰亞胺納米粒的粒徑為250 ~300 nm之外其余與實(shí)施例3一致。

對(duì)比實(shí)施例2

除了氧化石墨烯的濃度為0.1μg/ml之外其余與實(shí)施例3一致。

對(duì)比實(shí)施例3

僅利用濃度為0.1μg/ml的氧化石墨烯水溶液作為穩(wěn)定劑。

將DNA保存于實(shí)施例1-3和對(duì)比實(shí)施例1-3所得穩(wěn)定劑中，在20U DNase l 的情況下，37℃進(jìn)行酶切反應(yīng)。利用瓊脂糖凝膠電泳進(jìn)行DNA的檢測(cè)。

檢測(cè)結(jié)果如圖1所示，本發(fā)明所得穩(wěn)定劑可以對(duì)DNA具有保護(hù)作用，而對(duì)比實(shí)施例所得試劑不能起到搜需要的保護(hù)作用（條帶消失）。