本發(fā)明涉及醫(yī)藥
技術(shù)領(lǐng)域：
，具體涉及一種用于預(yù)防和治療缺血性腦卒中的藥物。
背景技術(shù)：
：腦血管疾病(腦卒中)為腦血管阻塞或破裂引起腦部血流受阻所致病癥，分缺血性腦卒中和出血性腦卒中。據(jù)報(bào)道我國(guó)城鎮(zhèn)和鄉(xiāng)村人群抽樣調(diào)查結(jié)果表明，年發(fā)病率分別為219/10萬和185/10萬，死亡率為116/10萬和141.8/10萬，且趨年輕化。我國(guó)每年新發(fā)腦卒中病人約150～200萬人，其中缺血性腦卒中約占腦卒中病例的60～80％。1992年我國(guó)城鄉(xiāng)人口死亡原因中，腦卒中均排在第二位，占死亡總?cè)藬?shù)的21.13％和16.18％。缺血性腦卒中又稱腦缺血，是最常見的腦卒中類型，是以腦循環(huán)血流量減少為主要病理特征的中樞神經(jīng)系統(tǒng)疾病，發(fā)病率高、致殘率高、死亡率高，對(duì)人類的健康造成嚴(yán)重威脅，特別是老年人的健康和生活質(zhì)量，已經(jīng)成為全球社會(huì)健康資源的巨大負(fù)擔(dān)。目前國(guó)內(nèi)外應(yīng)用于治療缺血性腦血管病的有效藥物較少。循證醫(yī)學(xué)已經(jīng)證實(shí)腦缺血發(fā)生后快速恢復(fù)腦血流量治療的有效性。超早期靜脈溶栓可以復(fù)通血管，恢復(fù)血供，從而達(dá)到限制梗死區(qū)域的擴(kuò)大和保護(hù)半暗帶區(qū)域的目的。然而，由于缺血性腦血管病發(fā)病機(jī)制復(fù)雜，臨床治療尚缺乏有效的藥物，現(xiàn)已成為當(dāng)今世界醫(yī)學(xué)界研究的重點(diǎn)，因此積極研發(fā)治療藥物具有重要的臨床意義。技術(shù)實(shí)現(xiàn)要素：本發(fā)明的目的在于克服現(xiàn)有技術(shù)缺陷，提供一種治療缺血性腦卒中的藥物。本發(fā)明提供了一種式I所示的化合物，或其藥學(xué)上可接受的鹽、對(duì)映異構(gòu)體、非對(duì)映異構(gòu)體、消旋混合物：其中：R1表示任選經(jīng)取代的(C1-6)烷基；R2、R3各自獨(dú)立地表示氫、任選經(jīng)取代的(C1-6)烷基、任選經(jīng)取代的(C6-C10)芳基(C1-2)烷基、任選經(jīng)取代的(C3-C10)雜芳基(C1-2)烷基；R4表示氫、羥基、氰基、硝基、氨基、(C1-4)烷氧基、(C1-4)烷基羰基、(C1-4)烷基磺?；?C1-4)烷氧基羰基；L表示-(CR5R6)s(CR7R8)t-，其中R5、R6、R7、R8各自獨(dú)立地選自氫或(C1-4)烷基，或者R5和R6與其所連接的碳原子共同形成任選經(jīng)取代的(C3-C7)環(huán)烷基；s表示0、1或2；t表示1、2、3、4、5、或6；n表示0、1、2或3。在一個(gè)實(shí)施方案中，R1表示經(jīng)取代的(C1-6)烷基，所述取代基選自鹵素、羥基、氧代、(C1-4)烷基、(C1-4)烷氧基、(C1-4)烷氧基羰基、(C1-4)烷基磺酰基、(C1-4)烷基磺酰氨基、(C3-C10)雜環(huán)烷基。在一個(gè)實(shí)施方案中，R2、R3各自獨(dú)立地表示是經(jīng)取代的(C1-6)烷基、經(jīng)取代的(C6-C10)芳基(C1-2)烷基、經(jīng)取代的(C6-C10)雜芳基(C1-2)烷基，所述取代基選自鹵素、羥基、(C1-4)烷基、(C1-4)烷氧基、(C1-4)烷氧基羰基。在一個(gè)實(shí)施方案中，R5和R6與其所連接的碳原子共同形成任選經(jīng)取代的(C3-C7)環(huán)烷基，所述取代基選自鹵素、羥基、氧代、(C1-4)烷基、(C1-4)烷氧基、(C1-4)烷氧基羰基、(C1-4)烷基磺酰基、(C1-4)烷基磺酰氨基、(C3-C10)雜環(huán)烷基。在一個(gè)實(shí)施方案中，L表示-(CH2)m-。在一個(gè)實(shí)施方案中，L表示在一個(gè)實(shí)施方案中，所述(C6-C10)芳基選自苯基和萘基。在一個(gè)實(shí)施方案中，所述(C3-C10)雜芳基選自吡咯基、咪唑基、吡唑基、噻吩基、呋喃基、異噁唑基、吡啶基、嘧啶基、吡嗪基和噠嗪基。在一個(gè)實(shí)施方案中，所述(C3-C10)雜環(huán)烷基選自四氫吡喃基、四氫呋喃基、哌啶基、哌嗪基、嗎啉基、硫代嗎啉基。在一個(gè)實(shí)施方案中，所述鹵素選自氟、氟、溴及碘。在一個(gè)實(shí)施方案中，所述(C1-6)烷基選自甲基、乙基、正丙基、異丙基、正丁基、異丁基、叔丁基、戊基、己基；所述(C1-4)烷基選自甲基、乙基、正丙基、異丙基、正丁基、異丁基、叔丁基。在一個(gè)實(shí)施方案中，所述化合物為：式I所示的化合物的藥學(xué)上可接受的鹽是指藥學(xué)上可接受的酸加成鹽，所述酸包括：鹽酸鹽、氫溴酸鹽、硫酸鹽、硝酸鹽、過氯酸鹽、富馬酸鹽、馬來酸鹽、磷酸鹽、乙醇酸鹽、乳酸鹽、水楊酸鹽、琥珀酸鹽、甲苯對(duì)硫酸鹽、酒石酸鹽、乙酸鹽、檸檬酸鹽、甲磺酸鹽、甲酸鹽、苯甲酸鹽、丙二酸鹽與苯磺酸鹽。式I所示的化合物可包含一個(gè)或多個(gè)不對(duì)稱碳原子。它們因此可以按對(duì)映異構(gòu)體或非對(duì)映異構(gòu)體的形式存在。這些對(duì)映異構(gòu)體和非對(duì)映異構(gòu)體以及它們的混合物(包括消旋混合物)，形成本發(fā)明的部分。本發(fā)明的另一個(gè)目的，在于提供一種藥物組合物，其包含式I所示的化合物、其藥學(xué)上可接受的鹽、對(duì)映異構(gòu)體、非對(duì)映異構(gòu)體、消旋混合物，以及藥學(xué)上可接受的載劑或賦形劑。術(shù)語“藥學(xué)上可接受的載體”是指對(duì)有機(jī)體無明顯刺激作用，而且不會(huì)損害該活性化合物的生物活性及性能的那些載體?！八帉W(xué)上可接受的賦形劑”是指與活性成分一同給藥的、有利于活性成分的給藥的惰性物質(zhì)?！八帉W(xué)上可接受的載體或賦形劑”包括但不限于可用于人或家畜動(dòng)物的任何載體、賦形劑、助流劑、增甜劑、稀釋劑、防腐劑、染料/著色劑、矯味增強(qiáng)劑、表面活性劑、潤(rùn)濕劑、分散劑、崩解劑、助懸劑、穩(wěn)定劑、等滲劑、溶劑或乳化劑。本發(fā)明的藥物組合物可通過將本發(fā)明式I所示的化合物與適宜的藥學(xué)上可接受的載劑或賦形劑組合而制備，且可配制成固態(tài)、半固態(tài)、液態(tài)或氣態(tài)制劑，如片劑、丸劑、膠囊劑、粉劑、顆粒劑、膏劑、懸浮劑、溶液劑、注射劑、吸入劑、凝膠劑、微球及氣溶膠等等。本發(fā)明的藥物組合物可以采用本領(lǐng)域眾所周知的方法制造，如常規(guī)的混合法、溶解法、制粒法、制糖衣藥丸法、磨細(xì)法、乳化法、冷凍干燥法等等。本發(fā)明的另一個(gè)目的，在于提供式I所示的化合物、其藥學(xué)上可接受的鹽、對(duì)映異構(gòu)體、非對(duì)映異構(gòu)體、消旋混合物在制備藥物中的應(yīng)用，所述藥物用于治療缺血性腦卒中。本發(fā)明另一個(gè)目的為提供一種制備式I所示的化合物的方法，其包括以下步驟：其中R1、R2、R3、R4、L、m、n如上文所述。本發(fā)明式I所示的化合物在小鼠腦缺血再灌注模型中，能夠顯著降低行為評(píng)分、能夠顯著降低腦梗塞/全腦百分比、并且能夠顯著降低缺血再灌注損傷腦組織的含水量，減輕缺血側(cè)腦半球水腫程度，因此能夠用于預(yù)防和治療缺血性腦卒中。具體實(shí)施方式在下文中更詳細(xì)地描述了本發(fā)明以有助于對(duì)本發(fā)明的理解。實(shí)施例1：N-{3-[5，7-二羥基-2-(4-甲氧基苯基)-4-氧代色滿-3-基]丙基}丙烷-1-磺酰胺(化合物1)將N-(3-溴丙基)丙烷-1-磺酰胺(2.9g，12mmol)溶于100mL無水四氫呋喃，攪拌下滴入裝有新刨鎂屑(0.30g，12.5mmol)，1粒碘的燒瓶中，先滴少量，格氏反應(yīng)引發(fā)后再慢慢滴入，約20min滴完，然后攪拌回流至鎂屑基本全溶，停止加熱，待格氏試劑冷卻至30～40℃，加入催化劑二氯二茂鋯(0.15g，0.5mmol)和5，7-二羥基-2-(4-甲氧基苯基)-4H-色烯-4-酮(2.8g，10.0mmol)，再回流反應(yīng)2h，反應(yīng)結(jié)束后將反應(yīng)液冷卻至室溫，然后加入飽和NH4Cl水溶液(100mL)，用石油醚萃取(100mL×3)，無水Na2SO4干燥，減壓蒸干，硅膠柱層析(甲苯-二氯甲烷：1∶9)，收集含產(chǎn)品的餾分，蒸干溶劑后得到白色固體N-{3-[5，7-二羥基-2-(4-甲氧基苯基)-4-氧代色滿-3-基]丙基}丙烷-1-磺酰胺2.9g，產(chǎn)率65％。ESI-MS：450.15[M+H]+元素分析：理論值/實(shí)測(cè)值，C(58.78/58.61)，H(6.05/6.17)，N(3.12/3.15)，O(24.91/24.85)，S(7.13/7.22)1HNMR(400MHz，CDCl3)δ11.81(s，1H)，10.23(s，1H)，7.25(d，2H)，6.81(d，2H)，6.54(s，1H)，6.15(s，1H)，5.85(s，1H)，5.40(d，1H)，3.87(s，3H)，3.65(m，1H)，3.17(t，2H)，2.75(t，2H)，1.66(m，2H)，1.54(m，2H)，1.46(m，2H)，0.98(t，3H)。實(shí)施例2：N-[(5，7-二甲氧基-4-氧代-2-苯基色滿-3-基)甲基]-2-(吡咯啉-1-基)乙烷磺酰胺(化合物2)按照實(shí)施例1的方法，用N-(溴甲基)-2-(吡咯啉-1-基)乙烷磺酰胺代替N-(3-溴丙基)丙烷-1-磺酰胺，用5，7-二甲氧基-2-苯基-4H-色烯-4-酮代替5，7-二羥基-2-(4-甲氧基苯基)-4H-色烯-4-酮，得到淺黃色固體N-[(5，7-二甲氧基-4-氧代-2-苯基色滿-3-基)甲基]-2-(吡咯啉-1-基)乙烷磺酰胺，產(chǎn)率72％。ESI-MS：475.18[M+H]+元素分析：理論值/實(shí)測(cè)值，C(60.74/60.89)，H(6.37/6.27)，N(5.90/5.81)，O(20.23/20.33)，S(6.76/6.80)。實(shí)施例3：N-(2-{1-[5，7-雙(2-乙氧基乙氧基)-4-氧代-2-苯基色滿-3-基]環(huán)丙基}乙基)甲烷磺酰胺(化合物3)按照實(shí)施例1的方法，用N-[2-(1-溴環(huán)丙基)乙基]甲烷磺酰胺代替N-(3-溴丙基)丙烷-1-磺酰胺，用5，7-雙(2-乙氧基乙氧基)-2-苯基-4H-色烯-4-酮代替5，7-二羥基-2-(4-甲氧基苯基)-4H-色烯-4-酮，得到白色固體N-(2-{1-[5，7-雙(2-乙氧基乙氧基)-4-氧代-2-苯基色滿-3-基]環(huán)丙基}乙基)甲烷磺酰胺，產(chǎn)率52％。ESI-MS：562.24[M+H]+元素分析：理論值/實(shí)測(cè)值，C(62.01/62.12)，H(7.00/6.87)，N(2.49/2.58)，O(22.79/22.73)，S(5.71/5.60)。生物活性測(cè)定實(shí)施例：本發(fā)明式I所示的化合物用于治療缺血性腦卒中的動(dòng)物實(shí)驗(yàn)小鼠線栓法制作局灶性腦缺血模型的藥理實(shí)驗(yàn)是驗(yàn)證藥物具有防治缺血性腦卒中作用常用的動(dòng)物實(shí)驗(yàn)。用栓線法制備ICR小鼠腦缺血再灌注模型(制備方法詳見《西藥新藥臨床前研究指導(dǎo)原則匯編》的藥學(xué)藥理學(xué)毒理學(xué)部分，中華人民共和國(guó)衛(wèi)生部藥政管理局，1993：73；《藥理實(shí)驗(yàn)方法學(xué)》第二版，人民衛(wèi)生出版社，1982：830、1113)，除假手術(shù)組外，其余各組均用該模型鼠試驗(yàn)。1、動(dòng)物ICR小鼠，雄性，體重20～22g。每組20只，共分7組，化合物1低劑量組：0.5mg/kg；化合物1中劑量組：1mg/kg；化合物1高劑量組：2mg/kg；化合物2中劑量組：1mg/kg；化合物3中劑量組：1mg/kg；假手術(shù)組：給予與藥物實(shí)驗(yàn)組等量的生理鹽水進(jìn)行假手術(shù)；模型組：給予與藥物實(shí)驗(yàn)組等量的生理鹽水進(jìn)行腦缺血再灌注手術(shù)。2、實(shí)驗(yàn)方法將小鼠用10％水合氯醛腹腔注射麻醉，頸正中切口，分離、結(jié)扎右側(cè)頸總動(dòng)脈近心端、頸外動(dòng)脈及其分支動(dòng)脈。分離右側(cè)頸內(nèi)動(dòng)脈，沿頸內(nèi)動(dòng)脈向下分離翼顎動(dòng)脈，根部結(jié)扎該分枝。在頸內(nèi)動(dòng)脈近端備線、遠(yuǎn)端放置動(dòng)脈夾，頸總動(dòng)脈分叉處切口，插入尼龍線，栓線進(jìn)入頸內(nèi)動(dòng)脈，入顱至大腦前動(dòng)脈，阻斷大腦中動(dòng)脈所有血流來源。撤掉動(dòng)脈夾，扎緊備線，外留1cm長(zhǎng)線頭，縫合皮膚。缺血1小時(shí)后靜脈注射給藥。繼續(xù)缺血1小時(shí)后再灌注。再灌注8小時(shí)再次注射給藥。假手術(shù)組除不插線外，其余步驟同上。觀察再灌注24小時(shí)后存活鼠以下指標(biāo)：(1)觀察存活鼠24小時(shí)后行為變化，進(jìn)行行為學(xué)評(píng)分：參考ZeaLonga的5分制評(píng)分標(biāo)準(zhǔn)：0分為正常，無神經(jīng)損傷癥狀；1分為不能完全伸展對(duì)側(cè)前爪；2分為向外側(cè)轉(zhuǎn)圈；3分為向?qū)?cè)傾倒；4分為不能自發(fā)行走，意識(shí)喪失。(2)對(duì)腦梗塞體積的影響：每組取10只小鼠，處死取大腦，切下厚約2mm冠狀腦片，立刻置于2％TTC溶液中，37℃孵育30分鐘。梗塞區(qū)呈現(xiàn)白色，非梗塞區(qū)呈現(xiàn)紅色。數(shù)碼相機(jī)拍攝記錄，用計(jì)算機(jī)圖像處理測(cè)出各區(qū)面積，并計(jì)算梗塞區(qū)占整個(gè)腦組織的百分比(％)。(3)對(duì)腦組織含水量的影響：每組取10只小鼠快速斷頭取大腦，分別稱左右腦半球濕重，置100℃烤箱內(nèi)烘干，24小時(shí)后稱干重，按以下公式計(jì)算腦組織含水量：腦組織含水量(％)＝(濕重-干重)/濕重×100％。3、實(shí)驗(yàn)結(jié)果(1)式I所示的化合物對(duì)小鼠腦缺血再灌注模型行為學(xué)評(píng)分的影響觀察結(jié)果表明：假手術(shù)組小鼠均無異常癥狀。模型組小鼠出現(xiàn)不能完全伸展對(duì)側(cè)前爪或向外側(cè)轉(zhuǎn)圈或向?qū)?cè)傾倒的神經(jīng)損傷癥狀。化合物1低、中、高劑量組均可顯著降低行為評(píng)分，降低程度與藥物有劑量依賴關(guān)系，化合物2和3也可顯著降低行為評(píng)分，同模型組比較有顯著性差異(P＜0.05，P＜0.01)。上述結(jié)果表明本發(fā)明式I所示的化合物可以明顯改善因缺血再灌注引起的神經(jīng)損傷癥狀。表1實(shí)驗(yàn)各組小鼠腦缺血再灌注后的行為學(xué)評(píng)分組別行為學(xué)評(píng)分(分)假手術(shù)組0模型組3.4±0.6化合物1低劑量組2.4±0.6＊化合物1中劑量組1.6±0.5＊＊化合物1高劑量組1.2±0.5＊＊化合物2中劑量組1.7±0.6＊＊化合物3中劑量組1.8±0.5＊＊與模型組相比，＊＊P＜0.01，＊P＜0.05(2)式I所示的化合物對(duì)小鼠腦缺血再灌注模型腦梗塞面積的影響試驗(yàn)結(jié)果表明：假手術(shù)組腦組織無梗塞，腦缺血再灌注小鼠缺血側(cè)腦組織有梗塞現(xiàn)象。模型組的腦梗塞/全腦(％)為42.5±3.6％，化合物1低、中、高劑量組均可顯著降低腦梗塞/全腦(％)，降低程度與藥物有劑量依賴關(guān)系，化合物2和3也可顯著降低腦梗塞/全腦(％)，同模型組比較有顯著性差異(P＜0.01)。上述結(jié)果表明本發(fā)明式I所示的化合物對(duì)小鼠腦缺血再灌注損傷引起的腦梗塞有顯著保護(hù)作用。表2實(shí)驗(yàn)各組小鼠腦缺血再灌注后的腦梗塞面積與模型組相比，＊＊P＜0.01(3)式I所示的化合物對(duì)小鼠腦缺血再灌注模型腦組織含水量的影響試驗(yàn)結(jié)果表明：模型組缺血側(cè)的腦組織含水量顯著高于假手術(shù)組，化合物1低、中、高劑量組缺血側(cè)的腦組織含水量顯著低于模型組，并顯示出一定的劑量依賴關(guān)系，化合物2和3也可顯著降低腦組織含水量，同模型組比較有顯著性差異(P＜0.05，P＜0.01)。說明本發(fā)明式I所示的化合物可顯著降低缺血再灌注損傷腦組織的含水量，減輕缺血側(cè)腦半球水腫程度。表3對(duì)小鼠缺血再灌注腦組織含水量的影響組別大腦左半球含水量(％)大腦右半球含水量(％)假手術(shù)組70.2±1.370.4±1.7模型組70.5±1.677.6±1.8化合物1低劑量組70.4±1.374.3±1.5＊化合物1中劑量組70.0±1.173.2±1.3＊＊化合物1高劑量組70.9±1.372.4±0.9＊＊化合物2中劑量組70.2±1.073.4±1.4＊＊化合物3中劑量組70.1±0.973.1±1.1＊＊與模型組相比，＊＊P＜0.01，＊P＜0.05綜上所述，本發(fā)明式I所示的化合物在小鼠腦缺血再灌注模型中，能夠顯著降低行為評(píng)分、能夠顯著降低腦梗塞/全腦百分比、并且能夠顯著降低缺血再灌注損傷腦組織的含水量，減輕缺血側(cè)腦半球水腫程度，因此能夠用于預(yù)防和治療缺血性腦卒中。以上描述了本發(fā)明優(yōu)選實(shí)施方式，然其并非用以限定本發(fā)明。本領(lǐng)域技術(shù)人員對(duì)在此公開的實(shí)施方案可進(jìn)行并不偏離本發(fā)明范疇和精神的改進(jìn)和變化。當(dāng)前第1頁1 2 3